Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The double-strand DNA breaks are considered one of the most lethal forms of damage that can compromise the ability of stem cells self-renew and differentiate. Therefore, additional studies are necessary to identify genome damage biomarkers that help the researchers to choice the better cell line to apply in clinical use. Here, we evaluated the potential use of DNA Comet Assay, DNA fragmentation fluorimetric assay using Picogreen dye and reactive oxygen species (ROS) level by DCFH-DA fluorimetric assay as potential biomarkers to identify the genome conditions of dental stem cells (DSCs) isolated from dog´s canine teeth. The results showed important differences among the three initial DSCs passage when compared to > 4th passages. In general, the initial DSCs passages presented higher cell proliferation, lower DNA damage and ROS. However, we noticed a large number of nucleus with some level of DNA damage (30 to 40% in the initial DSCs passage and > 50% in the late passage) that indicates an in vitro DSCs genomic fragility. The results suggest that these relatively simple and inexpensive approaches as Comet, DNA fragmentation could to help for sorting stem cell with less DNA damage used to research or therapeutic use. / Quebras na dupla-fita do DNA são consideradas uma das formas mais letais de dano que podem comprometer a capacidade das células-tronco de se autorenovarem ou de se diferenciarem. Portanto, estudos adicionais são necessários para identificar biomarcadores de danos genômicos que possam ajudar os pesquisadores a escolher as melhores linhagens celulares para estudos e seu uso clínico veterinário. Para tanto o presente estudo teve como objetivo implantar uma técnica de obtenção de células-tronco a partir de polpa de dente (dental stem-cells, DSCs) de cães avaliando a taxa de proliferação celular, a morfologia das células e a qualidade celular através de indicadores de dano de DNA e estresse oxidativo em oito diferentes passagens de cultura em fase indiferenciada. A escolha de obtenção de células-tronco a partir da polpa dentária se deu por ser de fácil acesso, as células possuírem crescimento rápido e ótimo potencial de diferenciação celular. Para avaliar a qualidade das células em oito diferentes passagens foi feita análise da taxa de proliferação celular, de danos no DNA por duas técnicas complementares (Ensaio do DNA Cometa e Fragmentação do DNA por análise fluorimétrica utilizando-se o corante Picogreen) e dos níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) que causam estresse oxidativo via ensaio fluorimétrico do DCFH-DA. Os resultados mostraram importantes diferenças entre as passagens iniciais em relação as mais tardias. Em geral até terceira passagem a taxa de proliferação celular foi mais alta, com menor dano genômico e produção de EROs, sendo a segunda passagem a que apresentou melhor qualidade. Entretanto outra questão observada foi o grande número de células com DNA danificado observado em todas as passagens. Os resultados sugerem que testes relativamente simples e baratos como o DNA cometa e a análise de fragmentação do DNA podem ajudar na escolher a passagem celular em que as células apresentam melhor qualidade genômica e funcional tanto para as pesquisas quanto na aplicação clínica regenerativa.