Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-07-11T18:08:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação- JOELMA PESSOA GONÇALVES.pdf: 1383537 bytes, checksum: 125450bea68880058f29778e9d89ead0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-11T18:08:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação- JOELMA PESSOA GONÇALVES.pdf: 1383537 bytes, checksum: 125450bea68880058f29778e9d89ead0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Capes / Os metabólitos secundários dos liquens são responsáveis pela maioria das suas atividades biológicas. Muitos destes compostos apresentam relevante atividade antineoplásica. O objetivo deste trabalho foi verificar as atividades citotóxica e genotóxica in vitro dos extratos orgânicos e do ácido barbático (BAR) purificado de Cladonia salzmannii Nyl. Os extratos orgânicos foram obtidos a partir do talo liquênico (22 g) previamente limpo e seco, com os solventes éter dietílico, clorofórmio e acetona, através do método de esgotamento a quente em aparelho de Soxhlet. O ácido barbático foi purificado a partir do extrato etéreo (1,3 g). A análise química dos extratos orgânicos e do BAR purificado foi realizada através de Cromatografia em Camada Delgada (CCD). A pureza do BAR purificado foi observada através de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). A atividade citotóxica dos extratos orgânicos e do BAR purificado foi determinada através do Método do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio] e do IPBC (Índice de Proliferação com Bloqueio da Citocinese). O potencial genotóxico dos extratos orgânicos e do BAR purificado foram determinados através do teste do micronúcleo e do ensaio cometa. O dimetilsulfoxido (DMSO) foi utilizado como solvente de diluição das amostras em todos os testes de atividade biológica. Os resultados referentes a CI50 demonstraram relevante potencial citotóxico para o extrato etéreo (Ext E) (50 μg/mL) frente as linhagens celulares NCI-H292 (CI50: 29,91 μg/mL), HEp-2 (CI50: 26,75 μg/mL) e HL-60 (CI50: 3,59 μg/mL), e para o BAR purificado (25 μg/mL) contra as linhagens HEp-2 (CI50: 15,79 μg/mL) e MCF-7 (CI50: 18,28 μg/mL). Porém, a avaliação da citotoxicidade considerando o Índice de Proliferação com Bloqueio de Citocinese (IPBC) demonstrou atividade citotóxica para o BAR purificado em todas as concentrações testadas (5, 10, 20 e 40 μg/mL) e para todos os extratos orgânicos (50 μg/mL) frente as células do Carcinoma de Ehrlich. Entretanto, para o Sarcoma 180 apenas o BAR purificado na concentração de 40 μg/mL e os extratos etéreo e clorofórmico (50 μg/mL) foram considerados citotóxicos. O teste do micronúcleo (MN) demonstrou que o BAR purificado na concentração de 5 μg/mL não apresentou potencial genotóxico em ambas as linhagens celulares tumorais. Além disso, o extrato clorofórmico e BAR purificado na concentração de 10 μg/mL não foram considerados genotóxicos para o Sarcoma 180. No ensaio cometa, todos os compostos testados induziram danos ao DNA em ambas as linhagens tumorais. Com base nos resultados, considera-se que os extratos orgânicos e o BAR purificado de C. salzmannii (Nyl). apresentam atividade citotóxica e genotóxica frente as linhagens celulares tumorais testadas. / The secondary metabolites of lichens are responsible for most of their biological activities. Many of these compounds exhibit significant antineoplastic activity. The objective of this study was to evaluate the in vitro cytotoxic and genotoxic activities of organic extracts and purified barbatic acid from Cladonia salzmannii Nyl. The organic extracts were obtained from liquenic thallus (22 g) previously cleaned and dried with the solvents diethyl ether, chloroform and acetone, through hot exhausted method in a Soxhlet apparatus. The barbatic acid was purified from the ether extract (1.3 g). Chemical analysis of the organic extracts and purified BAR was performed by Thin Layer Chromatography (TLC). The purity of purified BAR was observed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The cytotoxic activity of the organic extracts and purified BAR was determined by the MTT method [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide] and IPBC (Cytokinesis-Block Proliferation Index). The genotoxic potential of the organic extracts and purified BAR was determined by the micronucleus test and comet assay. Dimethyl sulfoxide (DMSO) was used as diluting solvent of the samples in all biological tests. The results for IC50 demonstrated significant cytotoxic potential to the ether extract (Ext E) (50 μg/mL) against the cell lines NCI-H292 (IC50: 29,91 μg/mL), HEp-2 (IC50: 26,75 μg/mL) and HL-60 (IC50: 3,59 μg/mL) and to the purified BAR (25 μg/mL) against the cell lines HEp-2 (IC50: 15,79 μg/mL) and MCF-7 (IC50: 18,28 μg/mL). However, the assessment of cytotoxicity considering the Cytokinesis-Block Proliferation Index (IPBC) showed cytotoxic activity for purified BAR at all concentrations tested (5, 10, 20 and 40 μg/mL) and for all organic extracts (50 μg/mL) against Ehrlich carcinoma cells. However, for Sarcoma 180 only BAR purified at a concentration of 40 μg/mL and ether and chloroform extracts (50 μg/mL) were considered cytotoxic. The micronucleus test (MN) showed that the purified BAR at a concentration of 5 μg/mL showed no genotoxic potential in both tumor cell lines. Furthermore, the chloroform extract and purified BAR at a concentration of 10 μg/mL were not considered genotoxic for Sarcoma 180. In the comet assay, all compounds tested induced DNA damage in both tumor lines. Based on the results, it is considered that the organic extracts and the BAR purified from C. salzmannii (Nyl). exhibit cytotoxic and genotoxic activity front of the tested tumor cell lines.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2881.pdf: 3532657 bytes, checksum: 5670ee3071139d4a77feaf760225b2f8 (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Universidade Federal de Minas Gerais / Studies about interaction between microorganisms and plants are focused mainly in the vegetal tissues like roots, steam and leaves. Fruits are a right target for microorganism attacks. Nevertheless, endophytic microorganisms isolated from fruits, seems to be not so explored in chemical point of view. Thus, in this work, it was developed the chemical study about the metabolism referred to endophytic microorganisms from edible fruits, commonly consumed in Brazil: banana, pear, apple and guava fruit. Through HPLC/UV analysis, it were realized and compared, the isolated microorganisms metabolic development, in different media cultures. It was included the media with the proper host fruits. The indolic alkaloid n-acetiltryptamine was isolated from a extract of the bacteria associated to the pear fruit (BP1). From the extracts of guava fruit endophytic fungus, Cladosporium uredinicola (FG1), it were isolated four new depsides in literature: 3-hidroxi-2,5-dimetilfenil 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoate (D1), 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenil 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoate(D2), 3-hidroxi-2,5- dimetilfenil 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi-2,4-dimetilbenzoate (D3) e 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenil 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6- hidroxi-2,4-dimetilbenzoate (D4). The identification of these metabolites was performed according to the respective data from RMN 1 D and 2D, and MS of high and low resolution. It was checked the MIC intervals of D1, D3 and D4 against five tested bacteria. It was realized the bactericide activity of D1 in a concentration of 25μg/mL against Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis. It was also verified the photosynthesis inhibitory activity of depsides D1 and D3 produced by the fungus. The fungus C.uredinicola, showed a great depsides production ability. However, this production showed signifcants alterations when fenolic substrates were given to the fungus, in a usual culture media. The estimative of D3 and D4 production curve was also established. The LC-MS/MS technique use, allowed the selective depsides D3 and D4 detection in guava fruit extract, in low concentration ranges. / Estudos envolvendo a interação entre micro-organismos e plantas enfocam predominantemente tecidos vegetais como raízes, caules e folhas. Embora os frutos sejam alvos fáceis de ataques microbianos, micro-organismos endofíticos de frutos parecem não ser tão explorados do ponto de vista químico. Sendo assim, neste trabalho, buscou-se enfatizar o estudo químico do metabolismo referente à microbiota endofítica de frutos comestíves popularmente consumidos no Brasil, a banana, a pêra, a maçã e a goiaba. Através de análises por HPLC/UV, foram verificados e comparados os desenvolvimentos metabólicos, em diferentes meios de cultura, dos micro-organismos isolados, incluindo àqueles constituídos com as próprias frutas hospedeiras. Foi isolado o alcalóide indólico Nacetiltriptamina a partir de um extrato da bactéria associada à pêra (BP1). Dos extratos do fungo Cladosporium uredinicola (FG1), associado à goiaba, foram isolados quatro novos depsídeos na literatura: 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,5- dimetilfenila (D1), 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenila (D2), 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi-2,4-dimetilbenzoato de 3- hidroxi-2,5-dimetilfenila (D3) e 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi- 2,4-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenila (D4). A identificação destes metabólitos foi realizada de acordo com os respectivos dados de RMN 1 D e 2D e EM de alta e baixa resolução. Foram verificados os intervalos de MIC para D1, D3 e D4, frente a cinco bactérias testadas, destacando-se a atividade bactericida de D1, a 25μg/mL, contra Pseudomonas aeruginosa e Bacillus subtilis. Verificou-se também a atividade inibitória da fotossíntese de D1 e D3. Contudo, o fungo C.uredinicola, mostrou-se como um potente produtor de depsídeos. Esta produção mostrou significativas alterações quando compostos fenólicos foram administrados ao fungo junto ao meio de cultura usual de crescimento. Foi também estabelecida a estimativa da curva de produção para os metabólitos D3 e D4 produzidos pelo fungo. A utilização da técnica LC-MS/MS permitiu a detecção seletiva dos depsídeos D3 e D4 em extrato da fruta goiaba em baixas faixas de concentração.