A classe Chondrichthyes é representada por animais de esqueleto cartilaginoso e calcificação prismática. Eles são divididos em duas subclasses, Elasmobranchii (tubarões e raias) e Holocephali (quimeras), que têm uma história evolutiva de mais de 400 milhões de anos. Devido à grande adaptabilidade destes animais em diferentes habitats, eles desenvolveram sofisticadas habilidades sensoriais, como os sistemas mecanorreceptor da linha lateral e eletrossensorial. A maior ordem de tubarões, a Carcharhiniformes tem a maioria dos representantes ocorrendo no Brasil. Entre eles, destacamos o tubarão-azul (Prionace glauca), pelágico oceânico, espécie de grande porte e cosmopolita, e um pequeno tubarão pelágico costeiro, o tubarão-frango (Rhizoprionodon lalandii), representantes dessa ordem com grande importância econômica pela sua pesca. Dada a diversidade morfológica e funcional dos sistemas sensoriais, em resposta a variações ecológicas e filogenéticas, o objetivo deste estudo foi descrever as estruturas morfológicas da linha lateral e das ampolas de Lorenzini, os dentículos dérmicos e os nervos associados à elas, em P. glauca e R. lalandii, utilizando documentação textual e fotográfica de estruturas macroscópicas, e métodos de microscopia, como microscopias de luz, eletrônica e imunofluorescência. Histologicamente, o neuromasto, principal unidade celular da linha lateral mostrou-se semelhante em ambas as espécies, e em P. glauca, esta célula foi encontrada desde o período intra-uterino. Em P. glauca, foi relatado um novo tipo de canal sensorial associado à linha lateral. A ampola de Lorenzini de R. lalandii revelou-se mais organizada do que em P. glauca, devido à quantidade e estruturação dos alvéolos. Os dentículos dérmicos de R. lalandii são mais especializados em várias regiões, particularmente as que envolvem os poros sensoriais. Em relação às características microscópicas dos nervos, eles se assemelham estruturalmente aos dos vertebrados superiores. Para a imunofluorescência, a colocalização foi realizada por tripla marcação dos núcleos dos nervos (DAPI), com receptor de membrana (P2X7), fibras inibidoras (NOS) e células gliais (GFAP), nos nervos da linha lateral e oftálmico superficial. Em ambas as espécies, a distribuição dos nervos foi uniforme. Em suma, as características estudadas em P. glauca são muito semelhantes às encontradas em R. lalandii, no entanto, devido ao hábito da vida oceânica, outras estratégias sensoriais seriam mais relevantes para a sua sobrevivência neste ambiente. As características microscópicas de R. lalandii demonstraram a relação adaptativa com a ecologia da espécie. Seu estilo de vida costeiro demonstrou maior especialização em certos sistemas sensoriais, contribuindo para melhor adaptação em determinados ambientes, uma vez que a morfologia e a organização dos sistemas sensoriais estão diretamente ligadas ao estilo de vida dos indivíduos. / The class of Chondrichthyes is represented by animals with cartilaginous skeleton with prismatic calcification. They are divided into two subclasses, Elasmobranchii (sharks, skates and rays) and Holocephali (chimaeras), which have an evolutionary history of more than 400 million years. Due to their great adaptability in different habitats, they have developed sophisticated sensorial abilities, such as mechanosensory lateral line and electrosensory systems. The largest order of sharks, the Carcharhiniformes has most of the representatives in Brazil. Among them, we highlight the blue shark (Prionace glauca), oceanic pelagic, large and cosmopolitan specie, and a small coastal pelagic shark, the sharpnose shark (Rhizoprionodon lalandii), species with economical importance. Given the morphological and functional diversity of sensory systems, in response to ecological and phylogenetic variations, the aims of this study is to describe the morphological structures of the lateral line and ampullae of Lorenzini, the dermal denticles and nerves associated with them, in P. glauca and R. lalandii, using textual and photographic documentation of macroscopic structures, and microscopic methods, such as light and electronic microscopies and immunofluorescence. Histologically, the neuromast, main cell unit of lateral line system was similar in both species, and in P. glauca, this cell was found since the intrauterine period. In P. glauca, a new type of sensorial canal associated with the lateral line was reported. The ampullae of Lorenzini of R. lalandii proved to be more organized than in P. glauca, because of the amount and structure of the alveoli. The dermal denticles in R. lalandii were more specialized in various regions, particularly those involving sensory pores. Regarding the microscopic characteristics of the nerves, they resemble structurally to the superior vertebrates. For immunofluorescence, the colocalization was performed by triple labeling the nuclei (DAPI) of the nerves, with a membrane receptor (P2X7), inhibitory fibers (NOS) and glial cells (GFAP) in lateral line and superficial ophthalmic nerves. In both species, the distribution of nerves was uniform. In short, the characteristics studied in P. glauca are very similar to those found in R. lalandii, however, due to the habit of oceanic life, other sensory strategies are most relevant to their survival in this environment. Microscopic features of R. lalandii demonstrated the adaptive relationship with the ecology of the species. Its coastal way of life showed greater specialization in certain sensory and attachments systems, contributing to better adapt in certain environments, since the morphology and organization of sensory systems are directly linked to the lifestyle of individuals.

A matriz démica acelular, MDA, figura dentre os biomateriais que têm por objetivo restaurar defeitos mucogengivais. A correção de defeitos mucogengivais a partir de constituintes autógenos são os procedimentos mais comumente usados, no entanto, em decorrência da quantidade insuficiente de tecido doador, esses procedimentos se tornam limitados. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar, in vitro, diferentes aspectos relacionados ao cultivo prévio de fibroblastos gengivais humanos em MDA. Fibroblastos gengivais humanos foram cultivados pela técnica do explante a partir de amostras de tecido gengival queratinizado removido de três pacientes saudáveis. A MDA foi cultivada com esses fibroblastos por períodos de 14 e 21 dias para posterior análise dos eventos de: adesão celular, proliferação e viabilidade. Os resultados mostraram que em 7 dias, os fibroblastos estavam aderidos, espraiados e dispersos sobre a superfície externa da MDA, em 14 dias formavam monocamada de células de morfologia alongada e quiescentes (Ki-67 negativos) em sua maioria, sendo apenas ocasionalmente observadas no interior da MDA. Em 21 dias a monocamada exibia menor densidade celular. Os resultados sugerem que o cultivo de fibroblastos em MDA em períodos de 14 dias permite boas condições de adesão e espraiamento das células sobre a matriz, porém, a alta densidade de fibras colágenas parece ser um fator limitante à migração celular. / Acellular Dermal Matrix, ADM, is a biomaterial that has been used in periodontal procedures to treat mucogingival defects. Mucogingival defects can be corrected by autogenous grafts that are the most common procedure used in periodontology, however, because of the limited source of donor\'s tissue this procedure became limited. The aim of this investigation was to verify, in vitro, different aspects related to human gingival fibroblasts seeding on to the ADM. Human gingival fibroblasts were established from explant cultures from the connective tissue of keratinized gingiva collected from three healthy patients. ADM was seeded with gingival fibroblasts for 14 and 21 days, and then cell adherence, proliferation and viability were analyzed. Results revealed that, at day 7, fibroblasts were adherent and spreading on the ADM surface, and were unevenly distributed, forming a discontinuous single cell layer, at day 14, a confluent fibroblastic monolayer lining ADM surface was noticed. At day 21, the cell monolayer exhibited a reduction in cell density. The results suggests that fibroblasts seeding on the ADM for 14 days can allow good conditions for cell adhesion and spread on the matrix, however, because of the high collagen fiber bundle density cell, migration inside the matrix was limited.

Objetivo: O presente estudo avaliou, clinica e histomorfometricamente, a matriz dérmica acelular (MDA) como barreira física na regeneração óssea guiada. Materiais e Métodos: Inicialmente foram extraídos, em seis cães, os quatro prémolares mandibulares bilateralmente. Após um período de seis semanas, foram analisadas a quantidade e qualidade de mucosa ceratinizada (Exame Clínico 1). Duas semanas depois, os animais foram submetidos a um segundo procedimento cirúrgico (Confecção do defeito e Regeneração Óssea Guiada ROG), no qual foi criado um defeito ósseo padronizado em cada lado da mandíbula. Sobre o defeito de um hemiarco, escolhido aleatoriamente, foi posicionada e fixada a membrana absorvível de copolímeros de ácido polilático e poliglicólico e carbonato trimetileno (Grupo Controle - GC) e no defeito do hemiarco oposto, a matriz dérmica acelular - MDA (Grupo Teste - GT). Imediatamente após a sutura, foram feitas tomadas radiográficas padronizadas através de raio-X digital, as quais foram novamente realizadas 8 e 16 semanas após a cirurgia de colocação das membranas. Após quatorze semanas de cicatrização, a quantidade e qualidade da mucosa ceratinizada foram novamente avaliadas (Exame Clínico 2). Dezesseis semanas depois da ROG os animais foram sacrificados e foi então realizado o preparo histológico das peças. A análise histomorfométrica, em microscopia óptica, avaliou a quantidade e qualidade de osso neoformado. A neoformação óssea também foi quantificada através das imagens radiográficas. Resultados: Em relação aos parâmetros clínicos, o GT e o GC apresentaram aumento na EMQ e redução na AMQ. Na análise radiográfica, após o período de 16 semanas, as radiografias de subtração apresentaram ganho médio de área radiopaca em relação ao defeito inicial de 83,38 % para o GT e de 83,68% para o GC. Houve um aumento progressivo da densidade radiográfica para ambos os grupos, sem diferenças estatisticamente significantes. Histologicamente, após 16 semanas o tecido ósseo apresentou características de um osso predominantemente maduro. Histomorfometricamente, a ANO correspondeu a 58,99% da ANT no GT e a 61 % da ANT no GC. A altura óssea máxima no GT foi de 7,21 ± 0,80 mm e no GC de 7,70 ± 1,21 mm. A porcentagem de osso cortical na ANO foi de 42,47 % no GT e 38,08 % no GC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos para nenhum destes parâmetros. Conclusão: A MDA atuou como barreira mecânica na ROG com resultados clínicos, radiográficos e histomorfométricos similares aos obtidos com a membrana absorvível. / Objective: The purpose of this study was to evaluate the acellular dermal matrix (ADM) as membrane for guided bone regeneration (GBR), comparing it to a bioabsorbable membrane. Material and Methods: In six dogs, the mandibular premolars were extracted. After 8 weeks, bone defects were surgically created bilaterally and the GBR was performed. Each side was randomly assigned to the control group (CG: bioabsorbable membrane made of glycolide and lactide copolymer) or test group (TG: ADM as a membrane). Immediately following GBR, standardized digital X-Ray radiographs were taken, and were repeated at 8 and 16 weeks post-operatively. Previously to the GBR and to euthanasia, clinical measurements of the width and thickness of the keratinized tissue (WKT and TKT, respectively) were performed. The dogs were sacrificed 16 weeks following GBR, and histomorphometric analysis was made. Area measurements of new tissue and new bone, and linear measurements of bone height were performed. Results: There were no statistically significant differences between groups for any histomorphometric measurement. Clinically, both groups showed an increase in the TKT and reduction program in the WKT. Radiographically, it could be observed an image suggestive of new bone formation in both groups 8 and 16 weeks following GBR. Conclusion: ADM acted as a mechanical barrier in GBR, with clinical, radiographic and histomorphometric results similar to those obtained with the bioabsorbable membrane.

A presença de uma faixa adequada de mucosa ceratinizada (MC) é essencial para manutenção da homeostasia periodontal. Existem várias técnicas cirúrgicas com a finalidade de corrigir alterações mucogengivais, criando uma faixa de MC adequada nos casos em que está ausente ou insuficiente. O enxerto gengival livre (EGL) é uma das técnicas indicadas para criação de gengiva em áreas não estéticas. Outra opção é o uso de substitutos teciduais dentre eles, a matriz dérmica acelular (MDA), considerada uma alternativa para a criação de gengiva. O objetivo desse estudo foi analisar longitudinalmente (após 13 anos) os resultados obtidos após procedimentos cirúrgicos de EGL e MDA para a criação da faixa de MC. Foram comparados os dados intra e inter-grupos. Os dados iniciais e de 6 meses foram obtidos de um estudo prévio realizado na Disciplina de Periodontia da FOB-USP, em 2004. Vinte e dois pacientes foram incluídos e avaliados originalmente, sendo que 12 aceitaram participar desta avaliação longitudinal. Os parâmetros clínicos avaliados foram: recessão gengival (RG), profundidade de sondagem (PS); nível clínico de inserção (NCI); largura da mucosa ceratinizada (LMC) e espessura da mucosa ceratinizada (EMC). Além desses parâmetros, também foi feita uma análise atual da percepção estética pelos pacientes e por um profissional calibrado das áreas tratadas. Após 13 anos, ambos os tratamentos resultaram em aumento significante LMC e EMC, porém com resultados superiores para o grupo que recebeu EGL (p<0,05). Não houve diferenças entre os grupos para os parâmetros PS e NCI, contudo no grupo MDA, a profundidade da RG foi significantemente maior comparado ao EGL em longo prazo. No entanto, o grupo MDA apresentou resultados superiores em relação à percepção estética do profissional. / The presence of an adequate width of keratinized tissue (KT) is essential for the maintenance of periodontal homeostasis. There are several surgical techniques with the purpose of correcting mucogingival changes, creating a suitable KT width in cases where it is absent or insufficient. Free gingival graft (FGG) is one of the techniques used to create gingiva in non-esthetic areas. Another option is the use of tissue substitutes, the acellular dermal matrix (ADM) that is considered an alternative for the gingiva augmentation. The aim of this study was to longitudinally analyze (after 13 years) the outcomes obtained after surgical procedures of FGG and ADM for the KT augmentation. Intra and intergroup data were compared. Initial and 6- month data were obtained from a previous study conducted at the Discipline of Periodontics of Bauru School of Dentistry-University of São Paulo in 2004. Twentytwo patients were originally included and evaluated, and 12 accepted to participate in this longitudinal evaluation. Clinical parameters evaluated were: gingival recession (GR), probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), keratinized tissue width (KTW), soft tissue thickness (TT). In addition, esthetic perception was evaluated by patients and by a calibrated periodontist. After 13 years, both treatments resulted in a significant increase in KWT and TT, but with superior results for the FGG group (p <0.05). There were no differences between groups for PD and CAL, however in the ADM group, the depth of GR was significantly higher compared to FGG in long-term. However, esthetics perception by professional evaluation demonstrated superior outcomes for ADM group.

Atualmente a ordem Dendrochirotida é composta por 800 espécies, sendo que metade destas estão entre as famílias Sclerodactylidae e Phyllophoridae. Todavia, a maior parte das informações acerca dos seus táxons é proveniente de revisões morfológicas muito antigas (Phyllophoridae em 1954, e Sclerodactylidae não revisada). Este estudo, portanto, se configura como o primeiro teste formal da monofilia das famílias Sclerodactylidae e Phylllophoridae e suas subfamílias. O presente trabalho constitui um estudo morfológico minucioso das estruturas que compõem o endoesqueleto dos Holothuroidea que são os ossículos dérmicos e anel calcário, vislumbrando alcançar através de uma análise cladística os objetivos descritos a seguir: (i) testar a monofilia de Phyllophoridae; (ii) testar a monofilia de Sclerodactylidae; (iii) testar a monofilia das subfamílias de Phyllophoridae e (iv) testar a monofilia das subfamílias de Sclerodactylidae. O material estudado foi obtido a partir de visitas e/ou empréstimos de museus nacionais e internacionais. Foram estudados espécimes de todas as ordens de Holothuroidea, à exceção de Elasipodida, totalizando 956 espécimes pertencentes a 78 espécies, das quais quatro foram delimitadas como grupo externo (i.e. Aspidochirotida, Apodida e Dendrochirotida [Cucumariidae e Psolidae]) e 44 delimitadas como grupo interno (todas as espécies tipo foram analisadas). Setenta e dois caracteres foram descritos e ilustrados através de fotografias ou microscopia eletrônica de varredura. As análises foram realizadas com o programa PAUP (v. 4.0), através do algoritmo de parcimônia Tree Bissection and Reconnection (TBR) de branch-swapping, com 5000 réplicas. O estudo morfológico detalhado permitiu elencar novos caracteres, bem como reinterpretar caracteres já estabelecidos, além de fornecer correções de interpretações equivocadas acerca de tais estruturas. Sclerodactylidae foi recuperada como monofilética e está composta por três subfamílias (todas foram recuperadas como monofiléticas), Clado I, Sclerodactylinae e Thyoninae. Phyllophoridae foi recuperada como monofilética e está composta por três subfamílias (todas foram recuperadas como monofiléticas), Cladolabinae, Phyllophorinae e Semperiellinae. / Currently, the order Dendrochirotida comprises about 800 species, half of these being within the families Sclerodactylidae and Phyllophoridae. Regardless, most information about these families is from old morphological revisions (Phyllophoridae in 1954 and Sclerodactylidae not reviewed). This study appears as the first formal test of the monophyly of the families Sclerodactylidae and Phylllophoridae and their respective subfamilies. The present work constituted a detailed morphological study of the structures that compose the Holothuroidea endoskeleton which are the dermal ossicles and calcareous ring to achieve through a cladistic analysis the following objectives: (i) to test the monophyly of Phyllophoridae; (ii) to test the monophyly of Sclerodactylidae; (iii) to test the monophyly of the Phyllophoridae subfamilies and iv) to test the monophyly of the subfamilies of Sclerodactylidae. The material studied was obtained from visits and/or loans from the national and international museums. Specimens of all orders of Holothuroidea were analyzed with the exception of Elasipodida, yielding 956 specimens belonging to 78 species, of which four were delimited as outgroups (i.e. Aspidochirotida, Apodida and Dendrochirotida [Cucumariidae and Psolidae]) and 44 delimited as internal groups (all type specimens were analyzed). A total of 72 morphological characters were described and illustrated through photographs or scanning electron microscopy images. The analyses were conducted with the aid of PAUP (v.4.0) using a parsimony algorithm Tree Bisection and Reconnection (TBR) branch-swapping (5000 replicates). This detailed morphological study allowed us to list new characters, to reinterpret. already established ones as well as providing corrections of misinterpretations about such structures. Sclerodactylidae was recovered as monophyletic and is composed of three subfamilies (all were recovered as monophyletic), Clade I, Sclerodactylinae and Thyoninae. Phyllophoridae was recovered as monophyletic and consists of three subfamilies (all were recovered as monophyletic), Cladolabinae, Phyllophorinae and Semperiellinae.

Este trabalho de tese de doutorado baseia-se em um desenvolvimento científico amplamente multidisciplinar combinando-se protocolos, técnicas e ensaios experimentais da área de tecnologia farmacêutica, nanotecnologia, engenharia tecidual e fotobiologia. O trabalho foi realizado em duas etapas subsequentes. Primeiramente realizaram-se os estudos de desenvolvimento e caracterização de um sistema de veiculação de fármacos, o qual foi amplamente avaliado a partir de testes físico-químicos e ensaios de citotoxidade in vitro em cultura de fibroblastos humanos. Na sequencia realizaram-se estudos fotobiológicos combinando-se a aplicação de luz laser de baixa potência e fármaco fotossensível nanoestruturado com modelos teciduais, para avaliação da resposta biológica ao fotoestímulo. Para se mimetizar ao máximo as condições in vivo, construiu-se com sucesso um modelo tridimensional in vitro de pele humana, o qual se apresentou como uma ferramenta ideal para se avaliar a resposta fotobiológica após a indução de processos fotodinâmicos. Avaliou-se também o emprego dos equivalentes dermais como sistemas alternativos em testes de permeação e retenção cutânea in vitro. Os resultados obtidos foram promissores, auxiliando na compreensão dos mecanismos de interação dos processos fotodinâmicos com a matriz extracelular em combinação com a engenharia tecidual, mimetizando assim as condições in vivo da pele humana. Foi possível estabelecer também as bases para novos protocolos disponíveis para testes dermatológicos envolvendo produtos do segmento farmacêutico, cosmecêutico e áreas correlatas. / This work of doctorate thesis bases on a scientific development thoroughly multidiscipline combining protocols, techniques and experimental assays of the pharmaceutical technology, nanotechnology, tissue engineering and photobiology. The work was accomplished in three subsequent stages. Firstly were carried out studies and characterization of a drug delivery system with nanotechnology, which was evaluated thoroughly starting from physical-chemical tests and assays of cytotoxicity in human fibroblast culture. In the sequence were carried photobiological studies combining the application of low-intensity laser and nanosized photosensitizers with tissue models, for evaluation of the biological photostimulation. In mimetic conditions it was developed an in vitro three-dimensional human skin model, as tool to evaluate the photobiological response after the induction of the photodynamic processes and also as alternative for in vitro assays of drug permeation/retention. Results were promising, aiding in the understanding of interaction of extracellular matrix with photodynamic processes. Therefore, the work was based in combination of techniques with application in dermatology, pharmaceutical process, cosmetics and correlate areas.

Com o crescente aumento do mercado cosmético e com o consequente aumento da exposição da população às diversas moléculas que os compõem, se faz fundamental os cuidados no desenvolvimento e na avaliação da segurança de produtos cosméticos. Diferentes ferramentas estão disponíveis para compor a estratégia de avaliação de segurança, sendo uma delas a avaliação da retenção e permeação cutânea in vitro, técnica que não apenas fornece dados para a avaliação da eficácia de princípios ativos, como também permite um aprofundamento na avaliação toxicológica dos ingredientes e produtos cosméticos. Assim como cresce o interesse da população por produtos cosméticos, observa-se também um aumento considerável na procura por produtos contendo ingredientes botânicos, o que torna ainda mais desafiadora a avaliação de segurança. Sendo as isoflavonas de soja bastante consumidas na alimentação e, em alguns casos, aplicadas a cosméticos, e tendo elas propriedades dérmicas interessantes, este trabalho teve como objetivo estudar o perfil de retenção e permeação cutânea in vitro da daidzeína, umas das mais importantes isoflavonas já descritas e estudadas. Para tal, desenvolveu-se uma nanoemulsão cosmética e aplicou-se um extrato botânico de soja rico em daidzeína. Desenvolveu-se e validou-se um método analítico por cromatografia líquida acoplada a detector de arranjo de diodos, e ainda procedeu-se a caracterização da nanoemulsão, a avaliação teórica de segurança de todos os seus ingredientes, além dos estudos de retenção e permeação cutânea in vitro, foco central deste trabalho. Como resultados, teve-se que a técnica de emulsificação à quente seguida de sonicação adotada para o preparo da nanoemulsão foi eficiente, possibilitando a obtenção de uma nanoemulsão pouco polidispersa e com tamanho de partícula médio abaixo de 200 nm. A retenção e permeação cutânea foram dependentes do tempo de aplicação, sendo que a nanoemulsão proporcionou uma maior retenção e menor permeação cutâneas da daidzeína comparado com solução controle no tempo de 6 h. A nanoemulsão desenvolvida mostrou-se adequada para a liberação tópica da daidzeína presente em extrato vegetal. Os testes in vitro de retenção e permeação cutânea são cruciais para esta etapa de desenvolvimento das formulações, quando os aspectos liberação tópica e possível toxicidade sistêmica são avaliados. / With the continuous growth of the cosmetic market, and so the increase in the exposure of the population to the different molecules present on these products, the care in the development and the safety assessment of cosmetics plays an important role. Different tools are available to compose the safety assessment strategy, one of which is the dermal absorption in vitro assay. This technique does not only give information regarding the efficacy of active ingredients, but also allow a deep toxicological evaluation of cosmetic ingredients and products. As the interest of the population on cosmetic products grows, also grows people\'s search for products containing botanical ingredients, fact that turns the safety assessment more challenger. As the soy isoflavones are part of the diet and sometimes used in cosmetic products, and as they present interesting dermal properties, this work aimed to study the profile of skin retention and dermal absorption of the daidzein, one of the most important isoflavones ever described and studied. For that, a cosmetic nanoemulsion was developed, in which a soy botanical extract rich in daidzein was added. An analytical method was developed and validated, based in liquid chromatography coupled with a diode array detector. Besides the in vitro studies of skin retention and dermal absorption, main focus of this project, the characterization of the nanoemulsion and the theoretical safety assessment of all of its ingredients were also performed. Regarding the results, the technique of hot emulsification followed by sonication used for the preparation of the nanoemulsion could be considered efficient based on the fact that it was less polidisperse and with a medium particle size below 200 nm. The skin retention and permeation were dependent on the time of application, and, it was observed that the nanoemulsion has led to greater retention and lesser skin permeation of daidzein incorporated into the nanoemulsion when compared to the control solution after 6 h of application. The nanoemulsion developed showed to be adequate to topical delivery of daidzein that is present in plant extract. In vitro skin retention and skin permeation are critical for this stage of development of the formulations, considering that aspects of topical delivery and systemic toxicity are evaluated.

Objetivo: O presente estudo avaliou, clinica e histomorfometricamente, a matriz dérmica acelular (MDA) como barreira física na regeneração óssea guiada. Materiais e Métodos: Inicialmente foram extraídos, em seis cães, os quatro prémolares mandibulares bilateralmente. Após um período de seis semanas, foram analisadas a quantidade e qualidade de mucosa ceratinizada (Exame Clínico 1). Duas semanas depois, os animais foram submetidos a um segundo procedimento cirúrgico (Confecção do defeito e Regeneração Óssea Guiada ROG), no qual foi criado um defeito ósseo padronizado em cada lado da mandíbula. Sobre o defeito de um hemiarco, escolhido aleatoriamente, foi posicionada e fixada a membrana absorvível de copolímeros de ácido polilático e poliglicólico e carbonato trimetileno (Grupo Controle - GC) e no defeito do hemiarco oposto, a matriz dérmica acelular - MDA (Grupo Teste - GT). Imediatamente após a sutura, foram feitas tomadas radiográficas padronizadas através de raio-X digital, as quais foram novamente realizadas 8 e 16 semanas após a cirurgia de colocação das membranas. Após quatorze semanas de cicatrização, a quantidade e qualidade da mucosa ceratinizada foram novamente avaliadas (Exame Clínico 2). Dezesseis semanas depois da ROG os animais foram sacrificados e foi então realizado o preparo histológico das peças. A análise histomorfométrica, em microscopia óptica, avaliou a quantidade e qualidade de osso neoformado. A neoformação óssea também foi quantificada através das imagens radiográficas. Resultados: Em relação aos parâmetros clínicos, o GT e o GC apresentaram aumento na EMQ e redução na AMQ. Na análise radiográfica, após o período de 16 semanas, as radiografias de subtração apresentaram ganho médio de área radiopaca em relação ao defeito inicial de 83,38 % para o GT e de 83,68% para o GC. Houve um aumento progressivo da densidade radiográfica para ambos os grupos, sem diferenças estatisticamente significantes. Histologicamente, após 16 semanas o tecido ósseo apresentou características de um osso predominantemente maduro. Histomorfometricamente, a ANO correspondeu a 58,99% da ANT no GT e a 61 % da ANT no GC. A altura óssea máxima no GT foi de 7,21 ± 0,80 mm e no GC de 7,70 ± 1,21 mm. A porcentagem de osso cortical na ANO foi de 42,47 % no GT e 38,08 % no GC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos para nenhum destes parâmetros. Conclusão: A MDA atuou como barreira mecânica na ROG com resultados clínicos, radiográficos e histomorfométricos similares aos obtidos com a membrana absorvível. / Objective: The purpose of this study was to evaluate the acellular dermal matrix (ADM) as membrane for guided bone regeneration (GBR), comparing it to a bioabsorbable membrane. Material and Methods: In six dogs, the mandibular premolars were extracted. After 8 weeks, bone defects were surgically created bilaterally and the GBR was performed. Each side was randomly assigned to the control group (CG: bioabsorbable membrane made of glycolide and lactide copolymer) or test group (TG: ADM as a membrane). Immediately following GBR, standardized digital X-Ray radiographs were taken, and were repeated at 8 and 16 weeks post-operatively. Previously to the GBR and to euthanasia, clinical measurements of the width and thickness of the keratinized tissue (WKT and TKT, respectively) were performed. The dogs were sacrificed 16 weeks following GBR, and histomorphometric analysis was made. Area measurements of new tissue and new bone, and linear measurements of bone height were performed. Results: There were no statistically significant differences between groups for any histomorphometric measurement. Clinically, both groups showed an increase in the TKT and reduction program in the WKT. Radiographically, it could be observed an image suggestive of new bone formation in both groups 8 and 16 weeks following GBR. Conclusion: ADM acted as a mechanical barrier in GBR, with clinical, radiographic and histomorphometric results similar to those obtained with the bioabsorbable membrane.

A matriz démica acelular, MDA, figura dentre os biomateriais que têm por objetivo restaurar defeitos mucogengivais. A correção de defeitos mucogengivais a partir de constituintes autógenos são os procedimentos mais comumente usados, no entanto, em decorrência da quantidade insuficiente de tecido doador, esses procedimentos se tornam limitados. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar, in vitro, diferentes aspectos relacionados ao cultivo prévio de fibroblastos gengivais humanos em MDA. Fibroblastos gengivais humanos foram cultivados pela técnica do explante a partir de amostras de tecido gengival queratinizado removido de três pacientes saudáveis. A MDA foi cultivada com esses fibroblastos por períodos de 14 e 21 dias para posterior análise dos eventos de: adesão celular, proliferação e viabilidade. Os resultados mostraram que em 7 dias, os fibroblastos estavam aderidos, espraiados e dispersos sobre a superfície externa da MDA, em 14 dias formavam monocamada de células de morfologia alongada e quiescentes (Ki-67 negativos) em sua maioria, sendo apenas ocasionalmente observadas no interior da MDA. Em 21 dias a monocamada exibia menor densidade celular. Os resultados sugerem que o cultivo de fibroblastos em MDA em períodos de 14 dias permite boas condições de adesão e espraiamento das células sobre a matriz, porém, a alta densidade de fibras colágenas parece ser um fator limitante à migração celular. / Acellular Dermal Matrix, ADM, is a biomaterial that has been used in periodontal procedures to treat mucogingival defects. Mucogingival defects can be corrected by autogenous grafts that are the most common procedure used in periodontology, however, because of the limited source of donor\'s tissue this procedure became limited. The aim of this investigation was to verify, in vitro, different aspects related to human gingival fibroblasts seeding on to the ADM. Human gingival fibroblasts were established from explant cultures from the connective tissue of keratinized gingiva collected from three healthy patients. ADM was seeded with gingival fibroblasts for 14 and 21 days, and then cell adherence, proliferation and viability were analyzed. Results revealed that, at day 7, fibroblasts were adherent and spreading on the ADM surface, and were unevenly distributed, forming a discontinuous single cell layer, at day 14, a confluent fibroblastic monolayer lining ADM surface was noticed. At day 21, the cell monolayer exhibited a reduction in cell density. The results suggests that fibroblasts seeding on the ADM for 14 days can allow good conditions for cell adhesion and spread on the matrix, however, because of the high collagen fiber bundle density cell, migration inside the matrix was limited.

En cancérologie cervico-faciale, la couverture d’éléments nobles ou de pertes de substance profondes fait souvent appel à l’utilisation de lambeaux locaux, locorégionaux ou libres. La réalisation de lambeaux autologues nécessite de sacrifier une structure indemne au profit de la structure lésée. Lorsque la réalisation d’un lambeau n’est pas envisageable, l’utilisation de substitut dermique peut être une alternative.L’ingénierie tissulaire permet de cultiver presque tous les types cellulaires (cellules différenciées, cellules souches) seuls ou en association (pe peau totale reconstruite) avec des matrices telles que le collagène pour obtenir des cultures tridimensionnelles. Utilisées in vivo en tant que substrat dermique, les matrices de collagène vont servir de guide aux cellules de l’hôte qui vont la coloniser, synthétiser leur propre matrice extra-cellulaire et développer un réseau vasculaire.Les tissus reconstruits se comportent comme des greffes : leur nutrition se fait d’abord par imbibition à partir du site receveur, puis par recolonisation vasculaire à partir du lit de la greffe. L’épaisseur du tissu greffable est donc limitée.Une revue de la littérature sur la peau reconstruite par ingénierie tissulaire et des différentes stratégies de vascularisation d’un tissu reconstruit est présentée. Le but de notre travail était d’évaluer les capacités des substituts dermiques comme vecteur de cellules souches pour la régénération tissulaire in vivo et comme support au développement d’une neovascularisation à partir d’un vaisseau sanguin ouvrant la voie au lambeau microanastomosable reconstruit in vitro. / In head and neck cancer, coverage of noble elements or deep wounds often requires the use of local, locoregional or free flaps. Autologous flaps consist of transferring the patient’s own tissues, but require sacrifice of the healthy structure to replace the damaged structure. When performing a flap is not an option, the use of dermal substitute may be an alternative.Tissue engineering is a rapidly growing discipline comprising multiple fields of research. Almost all cell types can be cultured alone or in combination (e.g. reconstructed full-thickness skin) with matrices such as collagen to obtain three dimensional cultures. Collagen matrices, used in vivo as dermal substrates, are used to guide the growth of host cells (fibroblasts, endothelial cells, etc.) that colonize the matrix, synthesize their own extracellular matrix and develop a vascular network.Reconstructed tissues behave like tissue grafts: nutrition of these tissues is initially based on diffusion from the recipient site and then by vascular recolonization from the bed of the graft. The thickness of graftable tissue is therefore limited.A review of the literature on skin tissue engineering and current strategies to create vascularized tissue is presented. The aim of our study was to evaluate the capacity of dermal substitutes as a carrier of stem cells for tissue regeneration in vivo and as a support to the development of neovascularization from a blood vessel opening the way to flap suitable for microvascular transplantation reconstructed in vitro.