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Efecto de la Neomicina B sobre la transcripción y replicación del Rotavirus tipo A

Manchego Sayan, Alberto Gustavo January 2009 (has links)
Se ha demostrado que los antibióticos aminoglucósidos interactúan con varias moléculas de ARN al unirse a regiones con estructuras secundarias. Varios reportes indican que la neomicina B puede inhibir la replicación del VIH y otros virus ARN. El genoma rotaviral consiste de 11 segmentos de ARN de doble hebra, la replicación viral emplea ARN cadena positiva (ARNm) como templado para la síntesis de ARN de cadena negativa. Se ha determinado que señales existentes en cis del ARNm son necesarias para la replicación al involucrar secuencias y conformaciones esenciales para el reconocimiento de la polimerasa viral. Debido a que se requieren dos pasos para la síntesis de ARN para la morfogénesis del virus, se ha estudiado los efectos de neomicina B y otros aminoglucósidos en la transcripción y/o replicación del genoma viral. Los resultados demuestran que neomicina B a concentraciones de 3mM inhiben la replicación in vivo de rotavirus en células MA104. Se determinó que neomicina B a concentraciones de 125μM logra casi 100% de inhibición en los “open core” donde se observa tanto transcripción y síntesis de cadenas negativas (síntesis de ARN de doble hebra). El estudio de la naturaleza de la inhibición mostró que los 11 segmentos del genoma viral tenían una sensibilidad diferencial a la droga, siendo los segmentos 2, 3 y 4 más sensibles. El sistema “open core” permitió la síntesis de cadenas negativas usando ARNm de rotavirus exógeno como templado. En experimentos donde se adicionó neomicina, se obtuvo una inhibición total de la síntesis de cadenas negativas dependientes del templado exógeno sobre la síntesis endógena. Se estudió el efecto de neomicina en la transcripción (síntesis de cadena positiva) en un sistema in vitro; donde concentraciones de 12mM resultaron completamente inhibitorias afectando el inicio y elongación de los 11 segmentos genómicos, observado mediante una estrategia de pulso y cacería (“pulse and hunting”) y electroforesis en gel de poliacrilamida-urea al 30%. Una prueba de protección del RNA a la acción de enzimas nucleasas permitió determinar la interacción neomicina-ARNm viral. Estos resultados indican que la neomicina B interactúa tanto con ARN una hebra como con ARN doble hebra de los rotavirus, pero tiene mayor afinidad por ARN una hebra produciendo inhibición de la replicación. La afinidad diferencial para ambos ARN podría explicarse mediante la presencia de ARNm rotaviral en el sitio de unión a neomicina, similar a la presente en TAR RNA del VIH, uniéndose a secuencias y/o estructuras secundarias en el ARNm previniendo que el ARN viral polimerice la síntesis de ARN hebra simple. -- Palabras claves: Rotavirus, aminoglucósidos, neomicina, transcripción viral, replicación viral. / -- The aminoglycosides antibiotics have been shown to interact with various RNA molecules binding to regions with secondary structure. Reports indicate that neomycin B may inhibit the replication of HIV and other RNA viruses. The rotavirus genome consists of 11 segments of double-stranded RNA, viral replication uses as template the plus-strand RNA (mRNA) for minus-strand RNA synthesis. Has been determinate that existent signals in cis in the mRNA necessaries for the replication that involvement sequences and conformations essential for the recognition the polymerase viral. Since two different RNA synthesis step are involve in the morphogenesis of the virus the effect of neomycin B and other aminoglycosides was studied in both transcription and/or replication of the viral genome. The results show that concentrations of 3 mM of neomycin B inhibited the rotavirus replication in vivo on MA104 cells. In open cores where both transcription and minus strand synthesis (double stranded RNA synthesis) could be observed, it was determined that near a 100% inhibition was obtained with concentration 125 μM neomycin B. The study of the nature of the inhibition showed that the 11 segments of viral genome had a differential sensibility to the drug, segment 2, 3, 4 and 5 were more sensitive. The open core system allowed minus strand synthesis using as template exogenous rotavirus mRNA. In experiments where neomycin B was added, a total inhibition of the minus strand synthesis dependant of the exogenous template was obtained over the endogenous synthesis. The effect of neomycin in transcription (plus strand synthesis) was studied in vitro system; concentrations of 12 mM were fully inhibitory affecting the start and elongation of 11 genomic segments, observed by pulse and hunting strategy and poliacrylamide –urea gel 30% electrophoresis. Protection a nuclease test allowed to determined interaction neomycin –viral mRNA. These results indicate that the neomycin B interacts with single strand RNA as well as double strand RNA of rotavirus, but has highest affinity for single strand RNA producing inhibition of replication. The differential affinity for both RNA could be explain by the presence in rotavirus mRNA of a neomycin binding site, similar to the one present in TAR RNA of HIV, binding to a sequence and/or secondary structure in the mRNA preventing than the viral RNA polymerize synthesis of minusstrand RNA. -- Key words: Rotavirus, viral transcripción, viral replicación, aminoglycósides, neomycin / Tesis
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Seroprevalencia de los virus : parainfluenza 3, respiratorio sincitial, diarrea viral bovina, en un rebaño mixto de una comunidad campensina de la provincia de Calca, Cusco

Cabellos Rojas, Karina Olinda January 2006 (has links)
El presente estudio tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia de los agentes neumotrópicos como los virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB), Respiratorio Sincitial (VRS) y Parainfluenza 3 (VPI3) en rumiantes de la comunidad de Chahuaytiri, provincia de Calca, Cusco, a través de la detección de anticuerpos en el suero sanguíneo de alpacas (n igual 21), bovinos (n igual 66) y ovinos (n igual 152) mediante la prueba de neutralización viral (NV). El 15.8±16.4% (3/21), 4.8 ± 9.1% (1/21) y el 23.8±18.2% (5/21) de las alpacas presentaron anticuerpos neutralizantes contra los virus: DVB, RS y PI3. El 90.9±6.9% (60/66), 87.88±7.9% (58/66) y el 81.8 ± 9.3% (54/66) de los bovinos y el 28.29±7.1% (43/152), 49.34 ±7.9% (75/152) y 50.0 ±7.9% (76/152) de los ovinos presentaron anticuerpos contra la DVB, RS y PI3, respectivamente. Estos resultados confirman la presencia de infecciones virales en rumiantes bajo sistema de crianza mixto de la comunidad campesina del Cusco. / The seroprevalence of Bovine Viral Diarrhoea Virus (BVDV), Parainfluenza Virus Type 3 (PI3V) and Respiratory Syncytial Virus (RSV) in serum samples of alpacas (n igual 21), bovine (n igual 66) and sheep (n igual 152) of a rural community of Cusco, Peru. It was carried out by virus-neutralization test. The 15.8±16.4% (3/21), 4.8 ±9.1% (1/21) and 23.8±18.2% (5/21) of alpacas had neutralizing antibodies against BVD, RS and PI3 virus. The 90.9±6.9% (60/66), 87.88±7.9% (58/66) and 81.8 ±9.3% (54/66) of bovine and the 28.29±7.1% (43/152), 49.34 ±7.9% (75/152) and 50.0 ±7.9% (76/152) of sheep had antibodies to BVDV, RSV and PI3V respectively. These results confirm the presence of viral infections in ruminants of mixed breeding system of a rural community.
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Seroprevalencia de los virus : parainfluenza 3, respiratorio sincitial, diarrea viral bovina, en un rebaño mixto de una comunidad campensina de la provincia de Calca, Cusco

Cabellos Rojas, Karina Olinda January 2006 (has links)
El presente estudio tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia de los agentes neumotrópicos como los virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB), Respiratorio Sincitial (VRS) y Parainfluenza 3 (VPI3) en rumiantes de la comunidad de Chahuaytiri, provincia de Calca, Cusco, a través de la detección de anticuerpos en el suero sanguíneo de alpacas (n igual 21), bovinos (n igual 66) y ovinos (n igual 152) mediante la prueba de neutralización viral (NV). El 15.8±16.4% (3/21), 4.8 ± 9.1% (1/21) y el 23.8±18.2% (5/21) de las alpacas presentaron anticuerpos neutralizantes contra los virus: DVB, RS y PI3. El 90.9±6.9% (60/66), 87.88±7.9% (58/66) y el 81.8 ± 9.3% (54/66) de los bovinos y el 28.29±7.1% (43/152), 49.34 ±7.9% (75/152) y 50.0 ±7.9% (76/152) de los ovinos presentaron anticuerpos contra la DVB, RS y PI3, respectivamente. Estos resultados confirman la presencia de infecciones virales en rumiantes bajo sistema de crianza mixto de la comunidad campesina del Cusco. / --- The seroprevalence of Bovine Viral Diarrhoea Virus (BVDV), Parainfluenza Virus Type 3 (PI3V) and Respiratory Syncytial Virus (RSV) in serum samples of alpacas (n igual 21), bovine (n igual 66) and sheep (n igual 152) of a rural community of Cusco, Peru. It was carried out by virus-neutralization test. The 15.8±16.4% (3/21), 4.8 ±9.1% (1/21) and 23.8±18.2% (5/21) of alpacas had neutralizing antibodies against BVD, RS and PI3 virus. The 90.9±6.9% (60/66), 87.88±7.9% (58/66) and 81.8 ±9.3% (54/66) of bovine and the 28.29±7.1% (43/152), 49.34 ±7.9% (75/152) and 50.0 ±7.9% (76/152) of sheep had antibodies to BVDV, RSV and PI3V respectively. These results confirm the presence of viral infections in ruminants of mixed breeding system of a rural community.
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Identificación de grupos filogenéticos de Escherichia coli aislado de crías de alpacas (Vicugna pacos) con diarrea

Sicha Romero, Francisco Josimar January 2016 (has links)
Identifica grupos filogenéticos de Escherichia coli aislados a partir de hisopados rectales de neonatos alpacas (Vicugna pacos) con diarrea. El muestreo se realiza con hisopos estériles y es transportado en medio Stuard, el aislamiento en agar Mc Conkey y la identificación por pruebas bioquímicas convencionales. E. coli es aislada de 119 muestras de un total 150 colectadas. La determinación de los grupos filogenéticos se realiza mediante la utilización del método de PCR triplex descrito por Clermont et al. (2000), para clasificar a E. coli en 4 grupos filogenéticos A, B1, B2 y D, basándose en 3 marcadores genéticos chuA, yjaA y TSPE4.C2. Determina que los grupos filogenéticos B1 y D tienen mayor frecuencia con 65.55% y 19.33 %, respectivamente; el grupo filogenético menos frecuente es el B2 con 1.68%. Cabe resaltar que esta es la primera investigación realizada en el Perú para agrupar cepas patógenas de E. coli basado en la agrupación filogenética.
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Evaluación de la madre positiva A Cryptosporidium parvum como factor de riesgo para la presentación de Cryptosporidium parvum en cría de alpacas con diarrea en la provincia de Canchis departamento de Cusco

Aguilar Jáuregui, Rafael Vladimir January 2009 (has links)
La criptosporidiosis es una enfermedad ocasionada por varias especies del género Cryptosporidium, se caracteriza por producir diarrea, sobre todo en neonatos y, dependiendo de la especie involucrada, puede ser zoonótica, llegándose a considerar un problema de salud pública. Diversos estudios fueron realizados en el Perú para poder determinar la prevalencia del Criptosporidium sp. encontrándose los mayores casos en los lugares que contaban con la mayor cantidad de animales. / Cryptosporidiosis is a disease caused by different species of the Cryptosporidium genus it overall produces diarrhea in newborns and depending on the specie involved, these can be involved in a problem of public health. Many studies were performed in Peru to determine the prevalence of Cryptosporidium and they showed that a major number of cases were in an area with a higher number of animals. The aim of this study was to establish if presence of Cryptosporidium parvum in mothers is a risk factor for presentation of Cryptosporidium parvum in offsprings.
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Caracterización molecular de fosfolipasa A de Campylobacter jejuni aislado de pollos de carne

Jiménez Aliaga, Karim Lizeth January 2007 (has links)
Con el objetivo de caracterizar la fosfolipasa A de la membrana externa (OMPLA E.C. 3.1.1.32) de Campylobacter jejuni aislado de pollos de carne, se estandarizaron métodos para el aislamiento e identificación de la bacteria a partir de hisopados rectales de aves comerciales. Para ello, primero se analizó la presencia de C. jejuni en hisopados cloacales mediante técnicas bacteriológicas y la reacción en cadena de la polimerasa anidada en base a los genes ribosómicos 16S e hipO, las cuales permitierón detectar Campylobacter jejuni en 29/50 (58%) y 48/50 (96%) de las muestras respectivamente. Después, se determinó la secuencia nucleotídica de los genes ribosómicos 16S y flaA del aislado MP4 con la finalidad de tener una cepa nativa de C. jejuni bien caracterizada que se utilice como modelo de estudio para la fosfolipasa A, las secuencias nucleotídicas de estos dos genes mostraron 98% y 92% de similiitud nucleotídica con las de Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. Las actividades hemolítica y de fosfolipasa A de C. jejuni MP4 fue dependiente de calcio, cuando este ión se reemplazó con EDTA, las actividades disminuyeron de 4119.4 a 44.78 U/mg de proteína. Utilizando cebadores específicos se amplificó y secuenció la parte central del gen pldA de C. jejuni MP4, se obtuvo 225 nucleótidos y 75 aminoácidos. La comparación de la secuencia aminoácidica por el ClustalW mostró 99% y 98% de identidad con las proteínas OMPLA de las cepas de Campylobacter jejuni RM1221 y C.jejuni subsp. jejuni ATCC 33560 respectivamente; esta alta conservación de secuencia aminoacídica de la fosfolipasa A la convierte en una candidata potencial para el diseño de vacunas y pruebas diagnósticas. / In order to characterize the Campylobacter jejuni’s outer membrane phospholipase A (OMPLA E.C. 3.1.1.32) from broiler chickens, it was standarized suitable methods for isolation and identification of this bacterium from cloacal swabs of commercial chickens. To that end, first it was analized the presence of C. jejuni in cloacal swabs by using bacteriological techniques and nested-PCR based on 16S ribosomal and hipO genes. The approaches used detected C. jejuni in the 29/50 (58%) and 48/50 (96%) of the samples respectively. Then, it was determined the nucleotidic sequence of 16S ribosomal gene to have a well-characterized native strain for using it as a model in the study of phospholipase A. The nucleotidic sequence of both genes showed 98% and 92% of similarity with Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. The haemolytic and phospholipase A enzymatic activities of the C. jejuni MP4 strain was calcium-depended, when calcium was replaced by EDTA both activities significantly decreased of 4119.4 to 44.78 U/mg protein. It was amplified and sequenced the central side from pldA gen of C. jejuni MP4 using specific primers. By means of that, it was obtained 225 nucleotides and 75 aminoacids. The comparison of aminoacidic sequences by CLUSTALW showed 99% and 98% of identity with OMPLA proteins from C. jejuni RM1221 and C. jejuni subsp. jejuni ATCC 33560. This high conservation of the aminoacidic sequence of phospholipase A become it into a potential target to design vaccines and diagnostic tests.
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Serotipificación de cepas de Escherichia coli aisladas de neonatos de alpacas (Vicugna pacos) con diarrea en Cerro de Pasco

Llamosas Alván, María del Pilar January 2016 (has links)
Identifica los serotipos de Escherichia coli presentes en muestras diarreicas de crías de alpacas provenientes de Cerro de Pasco. Para lo cual se toman hisopados rectales a 150 animales que se encontraban padeciendo de dicho cuadro clínico. Aisla Escherichia coli identificada a través de pruebas bioquímicas convencionales en el 78% (117/150) de animales muestreados; utiliza el método de serotipificación por aglutinación en placas. Del total de muestras evaluadas encuentra 33.3% (39/117) serogrupos y 60.68% (71/117) serotipos. Los serogrupos con mayor frecuencia son O8 (9.4%), ONT (8.55%), O118 (7.69%) y O24 (7.69%), en lo que respecta a serotipos los más frecuentes son O118:H21 (7.69%), O24:H18 (6.84%) y O74:H39 (6.84%). El 42.25% (30/71) de los serotipos encontrados posee reportes en la literatura y/o tienen relación con cepas patógenas para las especies animales incluyendo el humano. Concluye que el cuadro diarreogénico en crías de alpacas se encuentra relacionado con una gama de serotipos con potencial patógeno tanto para los animales como para el ser humano.
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Evaluación de la madre positiva A Cryptosporidium parvum como factor de riesgo para la presentación de Cryptosporidium parvum en cría de alpacas con diarrea en la provincia de Canchis departamento de Cusco

Aguilar Jáuregui, Rafael Vladimir January 2009 (has links)
La criptosporidiosis es una enfermedad ocasionada por varias especies del género Cryptosporidium, se caracteriza por producir diarrea, sobre todo en neonatos y, dependiendo de la especie involucrada, puede ser zoonótica, llegándose a considerar un problema de salud pública. Diversos estudios fueron realizados en el Perú para poder determinar la prevalencia del Criptosporidium sp. encontrándose los mayores casos en los lugares que contaban con la mayor cantidad de animales. / Cryptosporidiosis is a disease caused by different species of the Cryptosporidium genus it overall produces diarrhea in newborns and depending on the specie involved, these can be involved in a problem of public health. Many studies were performed in Peru to determine the prevalence of Cryptosporidium and they showed that a major number of cases were in an area with a higher number of animals. The aim of this study was to establish if presence of Cryptosporidium parvum in mothers is a risk factor for presentation of Cryptosporidium parvum in offsprings.
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Caracterización molecular de fosfolipasa A de Campylobacter jejuni aislado de pollos de carne

Jiménez Aliaga, Karim Lizeth January 2007 (has links)
Con el objetivo de caracterizar la fosfolipasa A de la membrana externa (OMPLA E.C. 3.1.1.32) de Campylobacter jejuni aislado de pollos de carne, se estandarizaron métodos para el aislamiento e identificación de la bacteria a partir de hisopados rectales de aves comerciales. Para ello, primero se analizó la presencia de C. jejuni en hisopados cloacales mediante técnicas bacteriológicas y la reacción en cadena de la polimerasa anidada en base a los genes ribosómicos 16S e hipO, las cuales permitierón detectar Campylobacter jejuni en 29/50 (58%) y 48/50 (96%) de las muestras respectivamente. Después, se determinó la secuencia nucleotídica de los genes ribosómicos 16S y flaA del aislado MP4 con la finalidad de tener una cepa nativa de C. jejuni bien caracterizada que se utilice como modelo de estudio para la fosfolipasa A, las secuencias nucleotídicas de estos dos genes mostraron 98% y 92% de similiitud nucleotídica con las de Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. Las actividades hemolítica y de fosfolipasa A de C. jejuni MP4 fue dependiente de calcio, cuando este ión se reemplazó con EDTA, las actividades disminuyeron de 4119.4 a 44.78 U/mg de proteína. Utilizando cebadores específicos se amplificó y secuenció la parte central del gen pldA de C. jejuni MP4, se obtuvo 225 nucleótidos y 75 aminoácidos. La comparación de la secuencia aminoácidica por el ClustalW mostró 99% y 98% de identidad con las proteínas OMPLA de las cepas de Campylobacter jejuni RM1221 y C.jejuni subsp. jejuni ATCC 33560 respectivamente; esta alta conservación de secuencia aminoacídica de la fosfolipasa A la convierte en una candidata potencial para el diseño de vacunas y pruebas diagnósticas. / --- In order to characterize the Campylobacter jejuni’s outer membrane phospholipase A (OMPLA E.C. 3.1.1.32) from broiler chickens, it was standarized suitable methods for isolation and identification of this bacterium from cloacal swabs of commercial chickens. To that end, first it was analized the presence of C. jejuni in cloacal swabs by using bacteriological techniques and nested-PCR based on 16S ribosomal and hipO genes. The approaches used detected C. jejuni in the 29/50 (58%) and 48/50 (96%) of the samples respectively. Then, it was determined the nucleotidic sequence of 16S ribosomal gene to have a well-characterized native strain for using it as a model in the study of phospholipase A. The nucleotidic sequence of both genes showed 98% and 92% of similarity with Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. The haemolytic and phospholipase A enzymatic activities of the C. jejuni MP4 strain was calcium-depended, when calcium was replaced by EDTA both activities significantly decreased of 4119.4 to 44.78 U/mg protein. It was amplified and sequenced the central side from pldA gen of C. jejuni MP4 using specific primers. By means of that, it was obtained 225 nucleotides and 75 aminoacids. The comparison of aminoacidic sequences by CLUSTALW showed 99% and 98% of identity with OMPLA proteins from C. jejuni RM1221 and C. jejuni subsp. jejuni ATCC 33560. This high conservation of the aminoacidic sequence of phospholipase A become it into a potential target to design vaccines and diagnostic tests.
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Evaluación de Cryptosporidium parvum como factor de riesgo en la presentación de diarrea neonatal en alpacas en el departamento de Puno

Molina Meza, Daniel Antonio January 2007 (has links)
El documento digital no refiere asesor / Manifiesta que la criptosporidiosis es una enfermedad parasitaria de distribución cosmopolita que es causante de severos brotes de diarrea en los rumiantes domésticos neonatales. El presente estudio evaluó por primera vez en campo el papel del Cryptosporidium parvum como factor de riesgo en la presentación de diarrea neonatal empleando el diseño epidemiológico de Caso-Control en alpacas del departamento de Puno. El muestreo se realizó entre los meses de Febrero y Marzo del 2006. Se recolectaron muestras fecales (n=487) directamente del recto de crías de alpacas entre 1 a 15 días de edad procedentes de las localidades de Antacalla, La Raya, Quimsachata y Macusani. Los frotis fecales fijados previamente en metanol, fueron procesados según la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen Modificado. Se encontró que de los animales diarreicos, el 39 % (130/336) resultaron positivos a la infección por C. parvum. Por otro lado, el 23 % (35/151) de las alpacas sin diarrea estaban infectadas. El análisis de regresión logística demostró que el parásito no representó un factor de riesgo para diarrea neonatal en los animales estudiados (OR: 1.5, IC 95%: 0.9-2.4). Otras variables fueron también evaluadas junto a C. parvum, determinándose que la localidad de La Raya fue estadísticamente significativa (P < 0.05), representando un factor de riesgo para la presentación de diarrea neonatal (OR: 2.5, IC 95%: 1.1-6.1). / Tesis

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