Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T18:13:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guzzo_GiovanniCarvalho_D.pdf: 1951061 bytes, checksum: eddc16b466ad966ac80f17737bb7d32d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Diidroergocristina (DHEC) é um fármaco semi-sintético, derivada do alcalóide do Ergot, principalmente utilizada para enxaqueca e estudada em distúrbios cognitivos relacionados ao envelhecimento. No presente estudo, o seu principal metabólito 8-hidroxidiidroergocristina (8'-OH-DHEC) foi produzido através de incubação de preparações enzimáticas de fígado de boi usando o Mesilato de Diidroergocristina como substrato. Foi feita uma avaliação de qual o melhor método de preparação enzimática a ser utilizado para produção do padrão do metabólito ativo em grande escala através da comparação de atividade enzimática entre microssomos e S12, ambos extraídos de heptócitos de fígado bovino. A purificação desse metabólito foi feita através da utilização de uma coluna cromatográfica clássica com sílica gel e cromatografia líquida de fase reversa. Sua identificação foi baseada em mensuração de sua massa molecular por espectro de fragmentação de massa e Ressonância Magnética (NMR - 1H/13C). Através da produção dessa substância in vitro, um método rápido, sensível e robusto de determinação da DHEC e seu principal metabólito foi desenvolvido e validado em LC-MS/MS a partir de análise de plasma humano. Bromocriptina foi utilizado com padrão interno e os limites de quantificação da DHEC e 8-OH-DHEC foram 10 pg/ml e 20 pg/ml, respectivamente. Os parâmetros farmacocinéticos foram investigados em 12 voluntários masculinos através da administração de uma dose única oral de 18mg de DHEC, via oral (Ikevert®). O Cmax de DHEC observado foi 0,28 ± 0,22 µg/l; o Tmax 0,46 ± 0.26h; a ASC 0,39 ± 0,41 µg/l.h; com meia-vida de 3,50 ± 2.27 h. O pico de concentração do 8-OH-DHEC foi 5,63 ± 3,34 µg/l; com Tmax de 1,04 ± 0,66 h; e ASC de 13,36 ± 5,82 µg/l.h; observando uma meia-vida de 3,90 ± 1,07 h. A administração de 18mg de DHEC foi bem tolerada, sem associação com qualquer reação adversa. Os resultados farmacocinéticos obtidos foram comparados com dados anteriores obtidos para a DHEC por meio de radioimunoensaio (RIA). Uma diferença nos parâmetros farmacocinéticos de Cmax e ASC é observada entre os métodos analíticos e sua possível relação na prática clínica é discutida / Abstract: Dihydroergocristine (DHEC) is a semi-synthetic drug mainly used for migraine and studied in age-related cognitive impairment. In this study, its major metabolite 8'-hydroxy-dihydroergocristine (8'-OH-DHEC) was produced in incubates of a bovine liver preparation using dihydroergocristine mesylate (DHECM) as substrate. An evaluation of the best enzymatic preparation method was done in order to verify the adequate process for massive production of the metabolite. A comparison between microssomes and S12 was performed, where both preparations were extracted from bovine hepatocytes. Purification was achieved by flash silica gel column and reverse phase liquid chromatographies, and identification was based on accurate molecular mass measurements, mass fragmentation spectra and NMR (1H/13C) chemical shifts. By using the substance produced in vitro, a fast, sensitive, specific and robust LC/MS/MS method for the simultaneous determination of DHEC and its major metabolite in human plasma was developed and validated. Bromocriptine was used as internal standard and limits of quantification for DHEC and 8'-OH-DHEC were 10 pg/ml and 20 pg/ml, respectively. Pharmacokinetic parameters were investigated on 12 male healthy volunteers to whom a single dose of 18 mg DHECM was administered in tablets (Iskevert®). The peak of DHEC was 0.28 ± 0.22 µg/l, the tmax 0.46 ± 0.26 h, the AUClast 0.39 ± 0.41 µg/l.h and the terminal elimination half-life 3.50 ± 2.27 h. The peak of 8'-OH-DHEC was 5.63 ± 3.34 µg/l, the tmax 1.04 ± 0.66 h, the AUClast 13.36 ± 5.82 µg/l.h and the terminal elimination half-life 3.90 ± 1.07 h. Dosing of 18 mg DHECM was well tolerated, causing no adverse events. The pharmacokinetics parameters observed on this study were compared to those obtained in DHEC analysis by radioimmunoassay (RIA). A difference in Cmax and AUC is observed between both methods and its clinical implications are discussed / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica