INTRODUÇÃO: O uso da laserterapia concernente ao estímulo da formação óssea e da revascularização tem tornado objeto de estudo na área de saúde. OBJETIVO: O presente trabalho in vivo teve como objetivo avaliar quantitativamente os efeitos do laser de baixa potência (LBP) na remodelação óssea após a expansão rápida da maxila (ERM) em ratos jovens, através da expressão do RNAm dos genes RANK, RANK-L, Osteoprotegerina (OPG), e o Fator do Crescimento do Endotélio Vascular (VEGF) bem como a análise histológica. MATERIAL E MÉTODO: Utilizou-se 105 ratos Wistar (Rattus norvegicus, albinus), machos, divididos em 4 grupos: Grupo Controle (n=10) animais não tratados (sem ERM e sem aplicação do LBP; Grupo Experimental I (n=40) animais que tiveram apenas a ERM; sendo 25 animais sacrificados nos dias 1, 2, 3, 7, e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting e 15 animais foram sacrificados nos dias 0, 7 e 10 dias para análise histológica; Grupo Experimental II (n=40) animais que tiveram ERM + LBP com diodo de Ga-Al-As (Gálio-Alumínio-Arsênio:160J/cm2) no primeiro dia do experimento; os animais foram sacrificados nos mesmos períodos que o Grupo Experimental I; Experimental III (n=15) animais que receberam 3 aplicações de LBP após ERM, totalizando 480J/cm2. Os animais foram sacrificados nos dias 3, 7 e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting. A extração do RNAt da maxila foi feita com trizol. A síntese da fita de DNA complementar (cDNA) foi feita a partir de 1&#181;g de RNA, por meio de uma reação de transcrição reversa, com a utilização da enzima transcriptase reversa, e a análise da expressão gênica foi realizada pela reação em cadeia pela polimerase em tempo real (qRT-PCR) no sistema TaqMan®. A análise protéica do VEGF, RANK, RANK-L e OPG foi realizada por meio da técnica western blotting. O teste de variância (ANOVA) foi usado comparando os grupos entre si e inter-grupos seguida pelo teste complementar de Tukey, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: A separação dos incisivos induzida pela ERM foi semelhante nos grupos experimentais I e II, o espaço entre os incisivos foi mantido durante toda a fase experimental, e não houve diferença significativa entre os grupos laser e não-laser (p<0,05), demostramdo a eficiência da metodologia usada para abertura da sutura palatina mediana. Para o grau de abertura da sutura, foi quantificada, a área de abertura sutural em todos os grupos após a ERM, e observou-se aumentou significativo comparado com o grupo controle, sendo que no grupo de laser o grau de abertura final foi significativamente menor no grupo laser do que não-laser aos 7 e 14 dias, mostrando que a formação óssea no grupo laser foi mais acelerada, o que pode ser comprovado com os dados histológicos, demonstrando que o laser acelerou o processo de formação óssea. Em relação à expressão relativa dos genes RANK/RANK-L/OPG tanto o grupo com laser quanto o sem-laser mostraram um aumento significativo da expressão comparado ao grupo controle (p < 0,05), principalmente nos períodos iniciais e quando comparou-se o grupo irradiado com o não irradiado observou-se que no grupo com laser houve uma maior expressão desses genes do que no grupo sem laser. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a formação óssea após a ERM foi observada dentro da sutura palatina e o uso do LBP influenciou a formação óssea acelerando o processo de osteogênese durante a fase inicial do experimento. / BACKGROUND: The use of low-level laser terapy with bone stimulation has been studied in the health science field. OBJECTIVE: The aim of the present in vivo study was to quantitatively evaluate the effects of low-level laser therapy (LLLT) on bone healing after rapid maxillary expansion (RME) in young rats, and the RANK, RANK-L, OPG and VEGF gene expressions; and histological analyses. MATERIALS and METHODS: A total of 105 rats Wistar (Rattus norvegicus, albinus), male were assigned tofour groups: Control Group (n=10) with no treatment (no RME and no LLLT); Experimental I (n=40) with RME without LLLT: 25 animals were euthanized at days 1, 2, 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis and 15 animals were euthanized at days 0, 7 and 10 after RME for histological evaluation; Experimental II (n=40) with RME and LLLT (160J/cm2): animals were euthanized at the same periods described for Experimental I. Experimental III (n=15) with RME and 3 aplication of LLLT (480J/cm2): animals were euthanized at days 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis. Part of the sample was kept at -80&#176;C for genes expression and protein production, and another for histological analysis. The total RNA was extracted using trizol. Complementary DNA (cDNA) was synthesized using 1&#181;g of RNA in a reverse transcription reaction and for genes expression we used RT-PCR in the TaqMan® system. The RANK, RANK-L, OPG, and VEGF and proteins analysis was made using western blotting. The ANOVA and Tukey tests were used and significance level was set at 5%. RESULTS: The expansion-induced opening of the incisors was similar among the groups, the space between the incisors was kept during all the experimental phase and there was no difference between laser and no laser therapy groups (p<0,05) showing that this methodology was efficient to open the palatine suture. The the opened along the suture was quantified, the area in all RME groups significantly increased compared with control group. Following laser therapy, the palatal suture opening decreased at 7 and 14 days, showing that bone formation in laser group was accelerate, and it was proved with histological analysis, that showed that LLLT accelerated bone formation. Regarding RANK/RANK-L/OPG gene expression, both laser and no-laser therapy groups showed a significant increased in these genes expression, compared to the control group, mainly at the initial periods of healing. Laser therapy group showed a higher expression of these genes than no laser group. CONCLUSIONS: The results suggest that bone formation after RME was observed within palatal suture and the application of the LLLT influenced bone formation accelerating the process of bone mineralization during the initial experimental phase.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O propósito deste estudo foi analisar o comportamento do osso alveolar na remodelação óssea sob carga fisiológica e ortopédica após a disjunção rápida da sutura palatina mediana durante 14 dias, com e sem aplicação de laser de baixa potência e comparar imagens obtidas por técnica radiográfica convencional com microtomografias computadorizadas. O aparelho de laser utilizado foi de diodo de arsenieto de gálio-alumínio (AlGaAs) (830&#61544;m; 100mW, onda contínua, 126J/cm2, 29 segundos) aplicado à sutura palatina mediana de ratos Wistar, machos, de 6 semanas de vida. Foram utilizados 65 ratos divididos em um grupo controle (GC) contendo 5 ratos e dois experimentais I e II (GE I e GE II), com 30 ratos cada, ambos GE submetidos à disjunção imediata, sendo que o GE II foi irradiado imediatamente após a disjunção. Os GE I e II foram subdivididos em períodos de disjunção imediata, 6, 24, 48 horas, 7 e 14 dias. Dois amostras de cada período dos GC e GE foram radiografadas (convencional) e processadas para captura de imagens em scanner micro-CT (Scanco Medical, Zurik, Suíça), com 24KV de energia e 3,8&#956;m de resolução espacial e o restante foram processadas para serem analisadas histologicamente coradas com hematoxilina e eosina e tricrômico de Masson. Os resultados foram avaliados histológica e radiograficamente. O trabeculado ósseo recém-formado a partir dos bordos ósseos da sutura foi observado nos períodos de 2, 7 e 14 dias do GE II, 7 e 14 dias do GE I. O presente experimento demonstrou que a atividade osteoblástica aumenta a atividade da osteosíntese de modo mais expressivo após aplicação do laser de baixa potência, porem é necessários mais estudos em biologia molecular para desvendar os seus efeitos ao nível celular. As microtomografias computadorizadas mostraram maior riqueza de detalhes para analisar o rompimento da sutura palatina mediana e seu reparo com o depósito de tecido ósseo do que as radiografias convencionais. / The purpose of this study was to evaluate the behavior of the alveolar bone on bone remodeling under physiological load and on after rapid midpalatal suture expansion during a 14-day period, with and without low-level laser irradiation and to compare images obtained by conventional radiographic technique with microtomografias computed. The laser device was a gallium-aluminum-arsenide (GaAlAs) diode laser (830 &#61544;m; 100 mW, continuous wave, 126 J/cm2, 29 seconds) applied to the midpalatal suture of 6-week-old male Wistar rats. Sixty-five rats were assigned in a control group (CG) containing 5 rats and two experimental I and II (EG I and EG II), with 30 rats each, both EG submitted to expansion immediately, while the EG II was irradiated pos expansion immediately. The EG I and II were divided into periods of immediate midpalatal suture expansion, 6 hours, 1, 2, 7 and 14 days). . Two samples of each period of CG and EG were radiographed (conventional) and processed to capture images in micro-CT scanner (Scancem Medical, Zurik, Switzerland) with 24kV of energy and 3.8 mm in spatial resolution and the rest were processed for are analyzed histologically stained with hematoxylin and eosin and Masson's trichrome.The results were evaluated histologically and radiographically. Bone trabeculae recently formed from the bone borders of the suture were observed in the periods of 2, 7 and 14 days of EG II, and 7 and 14 days of EG I. The present experiment demonstrated that the osteoblastic activity increases the osteosynthesis activity in a more manner after low-level laser irradiation. However, more studies in the field of molecular biology are necessary to determine its effects at cellular level. The computed microtomographs provided a more detailed analysis of midpalatal suture opening and its repair by bone tissue deposition than conventional radiographs.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O propósito deste estudo foi analisar o comportamento do osso alveolar na remodelação óssea sob carga fisiológica e ortopédica após a disjunção rápida da sutura palatina mediana durante 14 dias, com e sem aplicação de laser de baixa potência e comparar imagens obtidas por técnica radiográfica convencional com microtomografias computadorizadas. O aparelho de laser utilizado foi de diodo de arsenieto de gálio-alumínio (AlGaAs) (830&#61544;m; 100mW, onda contínua, 126J/cm2, 29 segundos) aplicado à sutura palatina mediana de ratos Wistar, machos, de 6 semanas de vida. Foram utilizados 65 ratos divididos em um grupo controle (GC) contendo 5 ratos e dois experimentais I e II (GE I e GE II), com 30 ratos cada, ambos GE submetidos à disjunção imediata, sendo que o GE II foi irradiado imediatamente após a disjunção. Os GE I e II foram subdivididos em períodos de disjunção imediata, 6, 24, 48 horas, 7 e 14 dias. Dois amostras de cada período dos GC e GE foram radiografadas (convencional) e processadas para captura de imagens em scanner micro-CT (Scanco Medical, Zurik, Suíça), com 24KV de energia e 3,8&#956;m de resolução espacial e o restante foram processadas para serem analisadas histologicamente coradas com hematoxilina e eosina e tricrômico de Masson. Os resultados foram avaliados histológica e radiograficamente. O trabeculado ósseo recém-formado a partir dos bordos ósseos da sutura foi observado nos períodos de 2, 7 e 14 dias do GE II, 7 e 14 dias do GE I. O presente experimento demonstrou que a atividade osteoblástica aumenta a atividade da osteosíntese de modo mais expressivo após aplicação do laser de baixa potência, porem é necessários mais estudos em biologia molecular para desvendar os seus efeitos ao nível celular. As microtomografias computadorizadas mostraram maior riqueza de detalhes para analisar o rompimento da sutura palatina mediana e seu reparo com o depósito de tecido ósseo do que as radiografias convencionais. / The purpose of this study was to evaluate the behavior of the alveolar bone on bone remodeling under physiological load and on after rapid midpalatal suture expansion during a 14-day period, with and without low-level laser irradiation and to compare images obtained by conventional radiographic technique with microtomografias computed. The laser device was a gallium-aluminum-arsenide (GaAlAs) diode laser (830 &#61544;m; 100 mW, continuous wave, 126 J/cm2, 29 seconds) applied to the midpalatal suture of 6-week-old male Wistar rats. Sixty-five rats were assigned in a control group (CG) containing 5 rats and two experimental I and II (EG I and EG II), with 30 rats each, both EG submitted to expansion immediately, while the EG II was irradiated pos expansion immediately. The EG I and II were divided into periods of immediate midpalatal suture expansion, 6 hours, 1, 2, 7 and 14 days). . Two samples of each period of CG and EG were radiographed (conventional) and processed to capture images in micro-CT scanner (Scancem Medical, Zurik, Switzerland) with 24kV of energy and 3.8 mm in spatial resolution and the rest were processed for are analyzed histologically stained with hematoxylin and eosin and Masson's trichrome.The results were evaluated histologically and radiographically. Bone trabeculae recently formed from the bone borders of the suture were observed in the periods of 2, 7 and 14 days of EG II, and 7 and 14 days of EG I. The present experiment demonstrated that the osteoblastic activity increases the osteosynthesis activity in a more manner after low-level laser irradiation. However, more studies in the field of molecular biology are necessary to determine its effects at cellular level. The computed microtomographs provided a more detailed analysis of midpalatal suture opening and its repair by bone tissue deposition than conventional radiographs.

INTRODUÇÃO: O uso da laserterapia concernente ao estímulo da formação óssea e da revascularização tem tornado objeto de estudo na área de saúde. OBJETIVO: O presente trabalho in vivo teve como objetivo avaliar quantitativamente os efeitos do laser de baixa potência (LBP) na remodelação óssea após a expansão rápida da maxila (ERM) em ratos jovens, através da expressão do RNAm dos genes RANK, RANK-L, Osteoprotegerina (OPG), e o Fator do Crescimento do Endotélio Vascular (VEGF) bem como a análise histológica. MATERIAL E MÉTODO: Utilizou-se 105 ratos Wistar (Rattus norvegicus, albinus), machos, divididos em 4 grupos: Grupo Controle (n=10) animais não tratados (sem ERM e sem aplicação do LBP; Grupo Experimental I (n=40) animais que tiveram apenas a ERM; sendo 25 animais sacrificados nos dias 1, 2, 3, 7, e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting e 15 animais foram sacrificados nos dias 0, 7 e 10 dias para análise histológica; Grupo Experimental II (n=40) animais que tiveram ERM + LBP com diodo de Ga-Al-As (Gálio-Alumínio-Arsênio:160J/cm2) no primeiro dia do experimento; os animais foram sacrificados nos mesmos períodos que o Grupo Experimental I; Experimental III (n=15) animais que receberam 3 aplicações de LBP após ERM, totalizando 480J/cm2. Os animais foram sacrificados nos dias 3, 7 e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting. A extração do RNAt da maxila foi feita com trizol. A síntese da fita de DNA complementar (cDNA) foi feita a partir de 1&#181;g de RNA, por meio de uma reação de transcrição reversa, com a utilização da enzima transcriptase reversa, e a análise da expressão gênica foi realizada pela reação em cadeia pela polimerase em tempo real (qRT-PCR) no sistema TaqMan®. A análise protéica do VEGF, RANK, RANK-L e OPG foi realizada por meio da técnica western blotting. O teste de variância (ANOVA) foi usado comparando os grupos entre si e inter-grupos seguida pelo teste complementar de Tukey, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: A separação dos incisivos induzida pela ERM foi semelhante nos grupos experimentais I e II, o espaço entre os incisivos foi mantido durante toda a fase experimental, e não houve diferença significativa entre os grupos laser e não-laser (p<0,05), demostramdo a eficiência da metodologia usada para abertura da sutura palatina mediana. Para o grau de abertura da sutura, foi quantificada, a área de abertura sutural em todos os grupos após a ERM, e observou-se aumentou significativo comparado com o grupo controle, sendo que no grupo de laser o grau de abertura final foi significativamente menor no grupo laser do que não-laser aos 7 e 14 dias, mostrando que a formação óssea no grupo laser foi mais acelerada, o que pode ser comprovado com os dados histológicos, demonstrando que o laser acelerou o processo de formação óssea. Em relação à expressão relativa dos genes RANK/RANK-L/OPG tanto o grupo com laser quanto o sem-laser mostraram um aumento significativo da expressão comparado ao grupo controle (p < 0,05), principalmente nos períodos iniciais e quando comparou-se o grupo irradiado com o não irradiado observou-se que no grupo com laser houve uma maior expressão desses genes do que no grupo sem laser. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a formação óssea após a ERM foi observada dentro da sutura palatina e o uso do LBP influenciou a formação óssea acelerando o processo de osteogênese durante a fase inicial do experimento. / BACKGROUND: The use of low-level laser terapy with bone stimulation has been studied in the health science field. OBJECTIVE: The aim of the present in vivo study was to quantitatively evaluate the effects of low-level laser therapy (LLLT) on bone healing after rapid maxillary expansion (RME) in young rats, and the RANK, RANK-L, OPG and VEGF gene expressions; and histological analyses. MATERIALS and METHODS: A total of 105 rats Wistar (Rattus norvegicus, albinus), male were assigned tofour groups: Control Group (n=10) with no treatment (no RME and no LLLT); Experimental I (n=40) with RME without LLLT: 25 animals were euthanized at days 1, 2, 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis and 15 animals were euthanized at days 0, 7 and 10 after RME for histological evaluation; Experimental II (n=40) with RME and LLLT (160J/cm2): animals were euthanized at the same periods described for Experimental I. Experimental III (n=15) with RME and 3 aplication of LLLT (480J/cm2): animals were euthanized at days 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis. Part of the sample was kept at -80&#176;C for genes expression and protein production, and another for histological analysis. The total RNA was extracted using trizol. Complementary DNA (cDNA) was synthesized using 1&#181;g of RNA in a reverse transcription reaction and for genes expression we used RT-PCR in the TaqMan® system. The RANK, RANK-L, OPG, and VEGF and proteins analysis was made using western blotting. The ANOVA and Tukey tests were used and significance level was set at 5%. RESULTS: The expansion-induced opening of the incisors was similar among the groups, the space between the incisors was kept during all the experimental phase and there was no difference between laser and no laser therapy groups (p<0,05) showing that this methodology was efficient to open the palatine suture. The the opened along the suture was quantified, the area in all RME groups significantly increased compared with control group. Following laser therapy, the palatal suture opening decreased at 7 and 14 days, showing that bone formation in laser group was accelerate, and it was proved with histological analysis, that showed that LLLT accelerated bone formation. Regarding RANK/RANK-L/OPG gene expression, both laser and no-laser therapy groups showed a significant increased in these genes expression, compared to the control group, mainly at the initial periods of healing. Laser therapy group showed a higher expression of these genes than no laser group. CONCLUSIONS: The results suggest that bone formation after RME was observed within palatal suture and the application of the LLLT influenced bone formation accelerating the process of bone mineralization during the initial experimental phase.