Ilex paraguariensis (erva mate) é uma planta amplamente usada na América Latina sob a forma de infusão aquosa. Dentre as propriedades atribuídas a esta planta encontra-se a atividade antioxidante que sugere um papel importante desta droga vegetal na prevenção e tratamento de doenças associadas ao estresse oxidativo como a aterosclerose, fotocarcinogênese e fotoenvelhecimento, entre outras. No entanto alguns compostos presentes nesta planta se encontram sob a forma esterificada, o que poderia dificultar a sua adequada absorção. Uma maneira de aumentar a biodisponibilidade de antioxidantes em extratos vegetais é promover a sua hidrólise visando à liberação dos compostos ativos. O objetivo deste trabalho foi estudar comparativamente o extrato hidroetanólico de Ilex paraguariensis antes e após hidrólise enzimática quanto à composição fitoquímica, atividade antioxidante in vitro e in vivo, biodisponibilidade de compostos antioxidantes e distribuição tecidual destes compostos em animais de experimentação. Para tanto o extrato foi obtido por percolação etanol:água (50% v/v) e sua hidrólise realizada por reação enzimática. A caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectrofotometria e a atividade antioxidante dos extratos pelos métodos de DPPH e ORAC. Para os ensaios in vivo os extratos (hidrolisado e não hidrolisado) foram administrados oralmente (por gavage) a ratos Wistar machos em sistema de dose única ou doses repetidas (30 dias). Coletou-se o sangue, pele, fígado e cérebro, analisando-se a concentração dos compostos de interesse e a atividade antioxidante destes tecidos pelo método de ORAC. O extrato apresentou boa atividade antioxidante e conteúdo fenólico, sendo que estes valores não foram significativamente alterados pela hidrólise. No entanto, a hidrólise possibilitou uma maior absorção dos compostos de interesse, aumentando a atividade antioxidante plasmática. / Ilex paraguariensis (yerba mate) is a plant broadly used in Latin America as an aqueous infusion. Among its biological properties is the antioxidant activity, which suggests a important role in prevention and treatment of oxidative stress associated diseases, such as atheroclerosis, photocarcinogenesis and photoaging among other. However some of the compounds responsible for that activity are, in crude plant extract, under esterified form, which could make absorption more difficult. An approach to increase the bioavailability of antioxidants from plant extracts is to submit the extract to hydrolysis in order to release the active compounds. The goal of this work was comparatively evaluate the hydroethanolic extract of Ilex paraguariensis before and after enzimatic hydrolysis concerning phytochemical composition, in vivo and in vitro antioxidant activity, bioavailability and tissue distribution of antioxidant compounds in rats. The extract was obtained by percolation with ethanol:water (50% v/v) and the hydrolysis performed by enzymatic reaction. The phytochemical characterization was performed by high performance liquid chromatography (HPLC) and spectrophotometry and the antioxidant activity by DPPH and ORAC methods. Hydrolyzed and non hydrolyzed extracts were given orally (by gavage) to male Wistar rats in single and multiple dose (30 days) regimen. Blood, skin, liver and brain were removed, and the concentration of antioxidant compounds and antioxidant activity by ORAC method were evaluated. The crude hydroethanolic extract showed antioxidant activity and phenolic content, but these values were not significantly changed by hydrolysis. However the hydrolysis increased the absorption of the compounds and the plasma antioxidant activity.

Objetivos: Desenvolver modelo de malária experiemtnal em ratos Wistar e avaliar a influência da infecção noperfil farmacocinético e na distirbuição tecidual da quinha (QN) Metodologia: No desenvolvimento da infecção exerimental de ratos Wistar por Plasmodium berghei foram testados diferente inóculos pela via i.v. e i.p. em diferentes idades. A adequabilidade do protocolo proposto foi avaliada utilizando cloroquina. Neste modelo, as doses efetivas da QN foram estabelecidas após administração oral, utilizando protocolo de tratamento padronizado. Os perfis famacocinéticos da QN após administração i.v. de 50 mg/kg a ratos sadios e oral de 250 mg/kg a ratos sadios e infectados por P. berghei, com baixa e alta parasitemia, foram avaliados após quantificação da QN através de metodologia por cromatografia em líquido de alta eficiência validada. A distribuição hepática e muscular do fármaco emr atos sadios e com alta parasitemia foi avaliada por microdiálise. Resultados e Discussão: O protocolo para desenvolver malária experimental em ratos Wistar utiliando inoculação i.v. de 10ª hemáceas parasitas por P. berghei em animais de 5 semanas mostrou-se adequado quando testado com cloroquina. As doses de QN de 50 e 250 mg/kg foram efetivas na cura da malária experimental. Após adminsitração i.v. de QN a ratos sadios, obteve-se volume dee distribuição (Vd) de 11.6 4.1 L.Kg , clearencece (CI) de 5,8 2,2 L.Kg .h e meia-vida de 2,1 1,2h. Após administração oral, uma tendência de redução do CI e aumento do Vd. proporcional ao nível parasitêmico, foi observada. As frações livres teciduais da QN em ratos infectados foram inferiores às obtidas em ratos sadios, observando-se maiores concentrações musculares do que hepáticas. Conclusões: As alterações famacocinéticas da QN causadas pelos diferentes níveis de parasitemia observadas na evolução da malária devem ser levadas em consideração quando da deeerminação do esquema posológico do fármaco, visando garantir o sucesso terapêutico e principalmente, a segurança para o indivíduo infectado.

Objetivos: Desenvolver modelo de malária experiemtnal em ratos Wistar e avaliar a influência da infecção noperfil farmacocinético e na distirbuição tecidual da quinha (QN) Metodologia: No desenvolvimento da infecção exerimental de ratos Wistar por Plasmodium berghei foram testados diferente inóculos pela via i.v. e i.p. em diferentes idades. A adequabilidade do protocolo proposto foi avaliada utilizando cloroquina. Neste modelo, as doses efetivas da QN foram estabelecidas após administração oral, utilizando protocolo de tratamento padronizado. Os perfis famacocinéticos da QN após administração i.v. de 50 mg/kg a ratos sadios e oral de 250 mg/kg a ratos sadios e infectados por P. berghei, com baixa e alta parasitemia, foram avaliados após quantificação da QN através de metodologia por cromatografia em líquido de alta eficiência validada. A distribuição hepática e muscular do fármaco emr atos sadios e com alta parasitemia foi avaliada por microdiálise. Resultados e Discussão: O protocolo para desenvolver malária experimental em ratos Wistar utiliando inoculação i.v. de 10ª hemáceas parasitas por P. berghei em animais de 5 semanas mostrou-se adequado quando testado com cloroquina. As doses de QN de 50 e 250 mg/kg foram efetivas na cura da malária experimental. Após adminsitração i.v. de QN a ratos sadios, obteve-se volume dee distribuição (Vd) de 11.6 4.1 L.Kg , clearencece (CI) de 5,8 2,2 L.Kg .h e meia-vida de 2,1 1,2h. Após administração oral, uma tendência de redução do CI e aumento do Vd. proporcional ao nível parasitêmico, foi observada. As frações livres teciduais da QN em ratos infectados foram inferiores às obtidas em ratos sadios, observando-se maiores concentrações musculares do que hepáticas. Conclusões: As alterações famacocinéticas da QN causadas pelos diferentes níveis de parasitemia observadas na evolução da malária devem ser levadas em consideração quando da deeerminação do esquema posológico do fármaco, visando garantir o sucesso terapêutico e principalmente, a segurança para o indivíduo infectado.

Objetivos: Desenvolver modelo de malária experiemtnal em ratos Wistar e avaliar a influência da infecção noperfil farmacocinético e na distirbuição tecidual da quinha (QN) Metodologia: No desenvolvimento da infecção exerimental de ratos Wistar por Plasmodium berghei foram testados diferente inóculos pela via i.v. e i.p. em diferentes idades. A adequabilidade do protocolo proposto foi avaliada utilizando cloroquina. Neste modelo, as doses efetivas da QN foram estabelecidas após administração oral, utilizando protocolo de tratamento padronizado. Os perfis famacocinéticos da QN após administração i.v. de 50 mg/kg a ratos sadios e oral de 250 mg/kg a ratos sadios e infectados por P. berghei, com baixa e alta parasitemia, foram avaliados após quantificação da QN através de metodologia por cromatografia em líquido de alta eficiência validada. A distribuição hepática e muscular do fármaco emr atos sadios e com alta parasitemia foi avaliada por microdiálise. Resultados e Discussão: O protocolo para desenvolver malária experimental em ratos Wistar utiliando inoculação i.v. de 10ª hemáceas parasitas por P. berghei em animais de 5 semanas mostrou-se adequado quando testado com cloroquina. As doses de QN de 50 e 250 mg/kg foram efetivas na cura da malária experimental. Após adminsitração i.v. de QN a ratos sadios, obteve-se volume dee distribuição (Vd) de 11.6 4.1 L.Kg , clearencece (CI) de 5,8 2,2 L.Kg .h e meia-vida de 2,1 1,2h. Após administração oral, uma tendência de redução do CI e aumento do Vd. proporcional ao nível parasitêmico, foi observada. As frações livres teciduais da QN em ratos infectados foram inferiores às obtidas em ratos sadios, observando-se maiores concentrações musculares do que hepáticas. Conclusões: As alterações famacocinéticas da QN causadas pelos diferentes níveis de parasitemia observadas na evolução da malária devem ser levadas em consideração quando da deeerminação do esquema posológico do fármaco, visando garantir o sucesso terapêutico e principalmente, a segurança para o indivíduo infectado.

Ilex paraguariensis (erva mate) é uma planta amplamente usada na América Latina sob a forma de infusão aquosa. Dentre as propriedades atribuídas a esta planta encontra-se a atividade antioxidante que sugere um papel importante desta droga vegetal na prevenção e tratamento de doenças associadas ao estresse oxidativo como a aterosclerose, fotocarcinogênese e fotoenvelhecimento, entre outras. No entanto alguns compostos presentes nesta planta se encontram sob a forma esterificada, o que poderia dificultar a sua adequada absorção. Uma maneira de aumentar a biodisponibilidade de antioxidantes em extratos vegetais é promover a sua hidrólise visando à liberação dos compostos ativos. O objetivo deste trabalho foi estudar comparativamente o extrato hidroetanólico de Ilex paraguariensis antes e após hidrólise enzimática quanto à composição fitoquímica, atividade antioxidante in vitro e in vivo, biodisponibilidade de compostos antioxidantes e distribuição tecidual destes compostos em animais de experimentação. Para tanto o extrato foi obtido por percolação etanol:água (50% v/v) e sua hidrólise realizada por reação enzimática. A caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectrofotometria e a atividade antioxidante dos extratos pelos métodos de DPPH e ORAC. Para os ensaios in vivo os extratos (hidrolisado e não hidrolisado) foram administrados oralmente (por gavage) a ratos Wistar machos em sistema de dose única ou doses repetidas (30 dias). Coletou-se o sangue, pele, fígado e cérebro, analisando-se a concentração dos compostos de interesse e a atividade antioxidante destes tecidos pelo método de ORAC. O extrato apresentou boa atividade antioxidante e conteúdo fenólico, sendo que estes valores não foram significativamente alterados pela hidrólise. No entanto, a hidrólise possibilitou uma maior absorção dos compostos de interesse, aumentando a atividade antioxidante plasmática. / Ilex paraguariensis (yerba mate) is a plant broadly used in Latin America as an aqueous infusion. Among its biological properties is the antioxidant activity, which suggests a important role in prevention and treatment of oxidative stress associated diseases, such as atheroclerosis, photocarcinogenesis and photoaging among other. However some of the compounds responsible for that activity are, in crude plant extract, under esterified form, which could make absorption more difficult. An approach to increase the bioavailability of antioxidants from plant extracts is to submit the extract to hydrolysis in order to release the active compounds. The goal of this work was comparatively evaluate the hydroethanolic extract of Ilex paraguariensis before and after enzimatic hydrolysis concerning phytochemical composition, in vivo and in vitro antioxidant activity, bioavailability and tissue distribution of antioxidant compounds in rats. The extract was obtained by percolation with ethanol:water (50% v/v) and the hydrolysis performed by enzymatic reaction. The phytochemical characterization was performed by high performance liquid chromatography (HPLC) and spectrophotometry and the antioxidant activity by DPPH and ORAC methods. Hydrolyzed and non hydrolyzed extracts were given orally (by gavage) to male Wistar rats in single and multiple dose (30 days) regimen. Blood, skin, liver and brain were removed, and the concentration of antioxidant compounds and antioxidant activity by ORAC method were evaluated. The crude hydroethanolic extract showed antioxidant activity and phenolic content, but these values were not significantly changed by hydrolysis. However the hydrolysis increased the absorption of the compounds and the plasma antioxidant activity.

The neosporosis is a disease of great economic importance, is distributed worldwide and is considered today one of the major causes of abortion and neonatal deaths in cattle. The pathogenesis of Neospora caninum infection is not fully understood and some issues in this regard are important in determining the most efficient measures of control and prophylaxis of a flock. The exclusive use of animals in these studies are expensive and time consuming so, some species of animals, such as, the rodents, can be used to make it possible. The gerbils (Meriones unguiculatus) mimic infection in cattle and are considered highly sensitive to replication of the protozoan. This study evaluated the responses of these animal models, at different moments of infection, especially in the amount and severity of acute and chronic/persistent infections by N. caninum. In addition, the research sheds light the tissues preferred location/replication the protozoan in these rodent at different conditions depending on disease progresses. The results are presented in two articles. In chapter one, the aim was to characterize the acute infection by the protozoan for to determine the major tissue sites of replication in experimental models of M. unguiculatus. Thus we have demonstrated that, initially the protozoan made a replication, but there is a distribution in virtually all tissues of the host. In addition, we observed that without an effective action of the immune system to combat agent, the infection progresses to death of animals with characteristic signs rapidity detected between 3 and 5 days after initiation of infection. The second chapter, sought to establish in rodents (M. unguiculatus) chronically infected, which places the N. caninum prefers to develops chronic evolutive form bradyzoites that are characteristic of a phase of persistent disease, especially in regions of the CNS. Furthermore, we note that the dose inoculated interfere significantly in the induction of acute and chronic infection and this is reflected in the amount of detection of nucleic acids in different tissues, above all in the CNS. In this context, it was observed that the emergence of clinical signs was milder without the induction of severe and lethal infections in most chronically infected animals. Thus, through this study we can conclude that highly sensitive techniques are necessary to detect nucleic acids from N. caninum, especially in the CNS tissues in animals chronically infected. / A neosporose é uma enfermidade de grande importância econômica, encontra-se distribuída em todo o mundo e pode ser considerada atualmente, umas das maiores causas de aborto e perdas neonatais em bovinos. A patogenia da infecção pelo Neospora caninum não está totalmente esclarecida e algumas questões a este respeito são importantes para determinar medidas mais eficientes de controle e profilaxia de um rebanho. A utilização exclusiva de bovinos nestes estudos é dispendiosa e demorada, com isso, algumas espécies de animais, como os roedores, podem ser utilizadas para torna-la possível. Os gerbils (Meriones unguiculatus) mimetizam a infecção em bovinos e são considerados altamente sensíveis a replicação do protozoário. Neste estudo foram avaliados as respostas destes modelos animais, em momentos de infecção diferentes, principalmente em relação a quantidade e severidade da infecção aguda e crônica/persistente pelo N. caninum. Além disso, a pesquisa esclarece os tecidos preferenciais de localização/replicação do protozoário nestes roedores em diferentes condições conforme a evolução da doença. Os resultados estão apresentados em dois artigos. No capítulo um, o objetivo foi caracterizar a infecção aguda pelo protozoário, a fim de determinar os principais sítios teciduais de replicação em modelos experimentais de M. unguiculatus. Desta forma conseguimos demonstrar que, inicialmente o protozoário fez uma replicação, mas que há uma distribuição em praticamente todos os tecidos do hospedeiro. Além disso, foi possível observar que sem uma atuação efetiva do sistema imune no combate ao agente, esta infecção evolui para a morte dos animais com sinais característicos rapidamente detectados, entre 3 a 5 dias após o inicio da infecção. Já o segundo capítulo, buscou estabelecer em roedores (M. unguiculatus) cronicamente infectados, quais os locais onde preferencialmente o N. caninum desenvolve a sua forma evolutiva crônica de bradizoitos que são características de uma etapa persistente da doença, principalmente em regiões do SNC. Além disso, observamos que a dose inoculada interfere significativamente na indução de infecção aguda e crônica e isso se reflete na quantidade de detecção de acidos nucléicos nos diferentes tecidos, sobretudo no SNC. Neste contexto, foi possível observar que o aparecimento de sinais clínicos foram mais brandos sem a indução de infecções letais e severas na maioria dos animais cronicamente infectados. Assim, através desse estudo podemos concluir que são necessárias técnicas altamente sensíveis para detectar ácidos nucléicos do N. caninum, especialmente em tecidos do SNC em animais infectados crônicamente.