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Caracterização funcional de HTRA1 em linhagens celulares HPV positiva e HPV negativa

Stuqui, Bruna [UNESP] 28 February 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2014-12-02T11:21:23Z : No. of bitstreams: 1 000799483.pdf: 5907887 bytes, checksum: 10be7c238cdd808e25bb62408e42fe13 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Papilomavirus humano (HPV) é um dos vírus mais prevalentes entre as infecções sexualmente transmissíveis e está associado com doenças malignas. Os HPVs de alto risco possuem proteínas, denominadas de E6 e E7, caracterizadas como oncoproteínas devido aos seus papéis na transformação celular e na inativação de supressores de tumor. Um dos mecanismos usados na transformação celular pela proteína E6 do HPV de alto risco é a interação do seu domínio carboxi-terminal, PDZ, com domínios PDZs presentes em algumas proteínas celulares, destinando-as à degradação. Uma proteína que está associada com várias condições patológicas e tem domínio PDZ é a protease HtrA1. Esta proteína é pouco expressa em alguns cânceres, sugerindo um papel supressor de tumor. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da superexpressão de HTRA1 em linhagem celular HPV16 positiva (HF698) e HPV negativa (C33). As linhagens celulares foram transfectadas com vetor contendo a ORF de HTRA1 ou vetor vazio. A superexpressão do mRNA e proteína foi confirmada por qPCR e imuno-histoquímica, respectivamente. As linhagens celulares transfectadas foram submetidas a ensaio de formação de colônia, de viabilidade celular, de apoptose e ciclo celular. As células C33 superexpressando HtrA1 formaram significantemente menos colônias e apresentaram redução de viabilidade celular comparadas as células sem expressão de HtrA1. Diferentemente, na linhagem HPV positiva ocorreu aumento no número de colônias nas células superexpressando HtrA1 e não houve diferença no ensaio de viabilidade celular. Esses resultados sugerem que os diferentes padrões observados nas duas linhagens celulares são decorrentes da presença do HPV na HF698 e da ausência na C33. A fim de confirmar se o aumento do número de colônias nas células HF698 superexpressando HtrA1 é decorrente da interação dessa proteína com E6, foi produzida linhagem estável de C33 com ... / The Human Papillomavirus (HPV) is one of the most prevalent virus among sexually transmitted infections and it is associated with some malignancies. High risk HPVs contain proteins, E6 and E7, characterized by oncoproteins due to their roles in cellular transformation and suppressor tumor inactivation. One of the mechanisms used in cell transformation by E6 protein from high-risk HPVs is the interaction of its carboxy-terminal domain, known as PDZ, with PDZs domains present in some cellular proteins, triggering them to degradation. A protein that is associated with various pathological conditions and has PDZ domain is the protease HtrA1. This protein is poorly expressed in some cancers, suggesting its tumor suppressor role. The aim of this study was to evaluate the effect of the HtrA1 overexpression in HPV 16 positive (HF698) and HPV negative (C33) cell lines. The cell lines were transfected with vector containing the HTRA1 ORF or empty vector. The mRNA and protein overexpression were confirmed by qPCR and immunohistochemical, respectively. The cell lines transfected were subjected to cell proliferation, viability, apoptosis and cell cycle assays. C33 cells expressing HtrA1 presented significantly fewer colonies and showed reduced viability than cells without HtrA1 expression. On the other hand, in HPV-positive cell line there was an increase in the number of colonies in cells expressing HtrA1 and there was no difference in the cell viability assay. These results suggest that the different patterns observed between the two cell lines studied may be due to the HPV presence in HF698 and its absence in C33 cells. To confirm if the increase in the number of colonies in HPV positive cells (HF698) overexpressing HtrA1 arises from the interaction of this protein with E6, stable lines of C33 containing gene E6 were produced and subsequently performed cell proliferation assay. C33 cells overexpressing E6 and HTRA1 showed an increased number of ...
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Análise do gene E6 de HPV de baixo risco em papilomatose de laringe

Matos, Renata Prandini Adum de [UNESP] 26 June 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2014-06-13T19:35:17Z : No. of bitstreams: 1 matos_rpa_me_sjrp_parcial.pdf: 383851 bytes, checksum: 3c576084c4efddd486e9b74decec3dfd (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-01T12:51:13Z: matos_rpa_me_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-04-01T12:51:47Z : No. of bitstreams: 1 000714307.pdf: 713319 bytes, checksum: f56b3217968c59297b03b085e207b381 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Papilomatose Respiratória Recorrente (PRR) é uma doença caracterizada pela presença de tumores benignos no trato respiratório superior, sendo a laringe o sítio de lesão mais comum. Esta doença tem uma distribuição de idade bimodal, permitindo sua classificação em papilomatose juvenil ou adulta. O principal agente etiológico da PRR é o Papilomavírus Humano (HPV), um grupo de vírus de DNA, dos quais mais de 150 tipos já foram identificados. HPV-6 e HPV-11 são os tipos mais encontrados em PRR. Há poucos estudos sobre a distribuição das variantes moleculares de HPV de baixo risco. Desta maneira, o objetivo deste estudo foi avaliar a variabilidade genética do gene E6 entre isolados de HPV-6 e HPV-11 detectados em amostras de papilomatose respiratória recorrente (PRR) obtidas em uma coorte de pacientes brasileiros. A fim de comparar as sequências de nucleotídeos identificados em nosso estudo com isolados previamente reportados provenientes de outras partes do mundo, e de diferentes sítios anatômicos (papilomatose de laringe, verrugas genitais, câncer cervical e esfregaço anal), foi realizada a análise filogenética para determinar as relações filogenéticas das variantes detectadas no Brasil com as variantes isoladas em outras regiões do mundo. A região codificante completa do gene E6 de 25 amostras foi clonada e sequenciada. Em 18 isolados foi detectado o DNA do HPV-6 (72%), e em 7 isolados o DNA do HPV-11 (28%). Um total de quatro variantes genômicas diferentes de HPV-6 e duas variantes genômicas de HPV-11 foram identificadas e nenhuma variante pode ser associada com o quadro clínico do paciente. Para a reconstrução filogenética foram utilizadas as sequências de E6 detectadas neste estudo adicionalmente às sequências anteriormente publicadas originárias da Eslovênia e da África do Sul. Devido ao pequeno... / Recurrent respiratory papillomatosis (RRP) is a disease characterized by benign neoplasms and can occur anywhere within the upper respiratory tract, but the most common lesion site is the larynx. This disease has a bimodal age distribution which forms the basis of its classification as juvenile or adult. The main etiological agent of RRP is Human Papillomavirus virus (HPV), a group of DNA virus with more than 150 identified types. HPV-6 and 11 are the most common types identified in RRP. There are few studies about the distribution of natural molecular variants of low-risk HPVs. So, the aim of this study was to evaluate the E6 early gene variability among HPV-6 and HPV-11 isolates detected in recurrent respiratory papillomatosis (RRP) samples obtained in a cohort of Brazilian patients. In order to compare nucleotide sequences identified in our study with previously reported sequences isolates from different anatomic sites (laryngeal papillomas, genital warts, cervical cancer and anal swabs) obtained from other parts of the world was performed phylogenetic analysis to determine the phylogenetic relationships of variants detected in Brazil with variants isolated in others regions of world. The complete coding region of the E6 gene of 25 samples were cloned and sequenced. HPV-6 DNA was detect in 18 isolates (72%) and HPV-11 DNA in 7 isolates (28%). A total of four different HPV-6 genomic variants and two HPV-11 genomic variants were identified and any variant could not be associated with the clinical outcome. Phylogenetic trees for both HPV types were reconstructed enclosing E6 sequences detected in our study in addition to formerly published sequences from Slovenia and South Africa. The small number of samples analyzed prevents the evaluation of the association between specific molecular variants and the... (Complete abstract click electronic access below)
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Pesquisa do DNA viral de papilomavirus equino em lesões de placa aural / Equine papillomavirus DNA research in aural plaque lesions

Hernández, Juliana Mira [UNESP] 16 November 2015 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-16. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:17:10Z : No. of bitstreams: 1 000858237.pdf: 888025 bytes, checksum: d82f069da30c3aa2f77928f4e52d3f9c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A placa aural é uma doença que acomete uma ou ambas as orelhas dos equinos, caracterizada por lesões bem demarcadas, despigmentadas e geralmente cobertas por uma crosta queratinosa branca. O objetivo deste estudo foi pesquisar a presença de DNA viral dos Equus caballus papilomavirus (EcPV) 1-7 utilizando a técnica de PCR em tecidos de placas aurais de equinos de diferentes regiões do Brasil. Foram coletadas 108 biópsias e informações das características da lesão. Foi detectada a presença de DNA dos EcPVs em 97,22% (105/108) das amostras testadas. Nenhuma amostra foi positiva para os EcPV-2 e 7. Dentre as amostras, o vírus mais frequente foi o EcPV 4 (86,67%, 91/105), seguido do EcPV 3 (42,86%, 45/105), EcPV 1 (35,24%, 37/105), EcPV 6 (18,10%, 19/105) e do EcPV 5 (1,90%, 2/105). Quando avaliada a existência de coinfecção dos diferentes vírus, 59,05% (62/105) das amostras foram positivas para mais de um tipo viral, sendo as coinfecções mais frequentes EcPV 3+4, EcPV 3+1 e EcPV 3+4+1. Nenhuma associação foi encontrada quando avaliada a lesão (tipo e distribuição) com o tipo de papilomavirus detectado e a presença de coinfecção. Os resultados indicam que além dos tipos já detectados em lesões da placa aural em outros estudos (EcPV 3 e 4) no Brasil, também foi confirmada a participação dos EcPV 1, 5 e 6 nas lesões de placa aural em equinos. Além disso, os resultados sugerem a coinfecção como um possível fator na etiologia da placa aural equina. Portanto, conclui-se que o EcPV 4 é o vírus mais detectado isoladamente ou em coinfecção, mas que outros vírus também participam da etiologia da placa aural em equinos no Brasil / Aural plaque is a disease that affects one or both equine ears characterized by well-demarcated depigmented lesions, generally cover by a whitish keratinose crust. The aim of this study was to research the presence of Equus caballus papillomavirus (EcPV) DNA in aural plaque lesions of horses from different regions of Brazil by PCR. One hundred eight biopsies and information about the lesion were collected. Was detected EcPVs DNA in 97.22% (105/108) of the tested samples. None of the samples were positive for EcPV 2 and 7. From all samples, EcPV 4 (86.67%, 91/105) was the most frequently found, followed by EcPV 3 (42.86%, 45/105), EcPV 1 (35.24%, 37/105), EcPV 6 (18.10%, 19/105) and EcPV 5 (1.90%, 2/105). When co-infection was assessed, 59.05% (62/105) of the samples were positive for more than one virus type and EcPV 3+4, EcPV 3+1 and EcPV 3+4+1, were the most frequently co-infections. No association was found between the lesion (type and distribution) and the type of papillomavirus and presence of co-infection. These results indicate that in addition to the types (EcPV 4 and 3) already detected in Brazil, was also confirmed the presence of the types 1, 5 and 6 in aural plaque lesions of equines. The results suggest the co-infection as a possible factor involved in aural plaque etiology. The EcPV 4 was the virus most detected alone or in coinfection, besides the other types also participate of equine aural plaque's etiology in Brazil / CNPq: 190237/2013-9

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