Se planteó la siguiente hipótesis de trabajo: la isquemia caliente que sufren los donantes a corazón parado altera negativamente la expresión de ciertos genes citoprotectores y de regeneración tisular. Con los siguientes objetivos: Determinar la expresión de genes citoprotectores durante el trasplante renal y a los cinco días postrasplante. Establecer el efecto de diferentes tiempos de isquemia caliente y del tratamiento inmunosupresor sobre la expresión estos genes.El modelo experimental de trasplante renal incluye cuarenta pares de cerdos en dos grupos de donantes a corazón parado y latiente. El período de isquemia fría es el mismo para todos los grupos, mientras que la isquemia caliente se divide en tres grupos: 30, 45 y 90 minutos. La terapia inmunosupresora consiste en ciclosporina, excepto en un grupo de donantes a corazón latiente que fue tratado con azatioprina. Los perfiles de expresión de TGF-beta 1, TSP-1, HIF-1, NOS2, NOS3, HO-1, y 18s rRNA se determinaron por PCR cuantitativa en las biopsias corticales recogidas tras la inducción anestésica, tras la isquemia caliente, tras la reperfusión en el receptor y al quinto día posterior al trasplante.Globalmente los resultados de la presente tesis muestran que tiempos cortos de isquemia caliente afectan a la expresión génica de factores implicados en la supervivencia celular, así como de factores parcialmente responsables de la regeneración tisular. Este estudio ayuda a explicar la mayor frecuencia de retraso de función del injerto que se observa en los pacientes con órganos de donantes a corazón parado. FUENTES:1. Expression of transforming growth factor-beta 1 and hypoxia-inducible factor-1beta in an experimental model of kidney trasplantation. Lario S, Mendes D, Bescós M, Iñigo P, Campos B, Alvarez R, Alcaraz A, Rivera-Fillat F, Campistol JM. Transplantation 2003; 75: 1647-1654.2. Thrombospondin-1 mRNA expression in experimental kidney transplantation with heart- and non-heart beating donors. Lario S, Bescós M, Campos B, Mur C, Luque P, Alvarez R, Campistol JM. J Nephrol 2007; 20: 588-595. / "Expression of cytoprotective genes during experimental kidney transplantation with heart- and non-heart beating donors."TEXT:Background: Ischemia-reperfusion (IR) is a risk factor for delayed graft function, a clinical syndrome more frequently observed in non-heart beating donors (NHBD). Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) activates transcription of several genes implicated in cell survival, such vascular endothelial growth factor (VEGF), and tissue repair, such transforming growth factor-beta (TGF-beta) isoforms. TGF-beta 1 has a central role in the restoration of renal function after ischemia-reperfussion. The aim of the present study was to characterize TGF-beta 1 and HIF-1 beta related genes during renal transplantation with heart (HBD) and non-heart beating donors (NHBD).Methods: The experimental pig model of kidney transplantation comprised heart beating donors (HBD, n=9) and NHBD (n=22). Cortical biopsies were collected after anesthetic induction (basal), after warm ischemia (WI), after cold ischemia (CI), after 1 hour of reperfusion (1R) and five days (5D) after transplantation. Immunosupressive therapy consisted of cyclosporine, except one HBD group treated with azathioprine. Thrombospondin-1, TGF-&#61538;1 and HIF-1beta controlled genes (VEGF, HO-1, NOS-2, NOS-3) mRNA expression was determined by real-time PCR. Results: TGF-beta 1 expression increased after the cold ischemia period in HBD and remained unaltered during surgical process in all NHBD groups. HIF-1 beta and VEGF expression were not greatly modified in biopsies obtained during surgery in neither HBD nor NHBD groups. All groups showed a significantly increase in TGF-beta 1 and HIF-1beta expression and a down-regulation of VEGF five days after transplantation, independently of the immunosupressive treatment. There were no statistically differences among the groups at five days, although the increase of TGF-beta 1 was more pronounced in HBD groups, especially in those animals treated with azathioprine. TSP-1 mRNA was significantly increased at 5D in NHBD animals but was unchanged in the HBD group. HO-1 was upregulated in HBD (p<0.05) and NOS2 mRNA was significantly increased in both groups. No difference in NOS3 expression was observed at 5D.Conclusions: The initial up-regulation of TGF-beta 1 observed in HBD just after cold ischemia could have a positive action on epithelial tubular regeneration. Warm ischemia has a detrimental effect on TGF-beta 1 expression during the early phases of renal transplantation, having no effect on VEGF and HIF-1&#61537; expression. The up-regulation of TGF-&#61538;1 and HIF-1&#61537; observed in the days after transplantation could have a positive effect on tubular repair. TGF-&#61538;1 expression was lower in animals treated with cyclosporine, probably related to cellular toxicity or arteriolar vasoconstriction, explaining in part the frequent and severe delayed graft function observed in non-heart beating renal transplantation. The increased TSP-1 expression in NHBD may indicate a compensatory response to the reported diminished TGF-beta1 expression. The augmented NOS2 and HO-1 expression in HBD could have a positive effect on the recovery of kidney function.

El trasplante hepático es el tratamiento definitivo de las enfermedades hepáticas terminales; existe un desequilibrio crónico entre la oferta de donantes y la demanda de órganos. El donante a corazón parado es una alternativa para incrementar el pool de donantes. Nuestro modelo experimental consiste en realizar un trasplante de hígado introduciendo un periodo de recirculación normotérmica (RN) entre la parada cardíaca (fallecimiento del animal donante) y la extracción del órgano en el donante. Ello permite revertir o evitar las lesiones hepáticas producidas tras la isquemia caliente. Si se administran sustancias citoprotectoras (L-arginina, S-adenosil metionina y glicina) de la lesión por isquemia-reperfusión (IR) durante dicho periodo de RN, aumenta el efecto beneficioso. Dichas sustancias actúan a través de distintos mecanismos, y nuestra hipótesis es conocer si administradas conjuntamente son capaces de mejorar todavía más la viabilidad del injerto hepático tras un periodo prolongado de isquemia caliente (60 minutos).El diseño del estudio consiste en un grupo control o grupo 1 (periodo de RN de 30 minutos sin adición de sustancias) y 4 grupos de estudio: grupo 2 (periodo de RN de 30´ mas ARG), grupo 3 (periodo de RN de 30´ mas ARG-GLI), grupo 4 (periodo de RN 30´ mas ARG-SAMe) y grupo 5 (periodo de RN 30´ mas ARG-SAMe-GLI). Nuestros objetivos fueron: Evaluar si el empleo conjunto de sustancias citoprotectoras de la lesión por isquemia-reperfusión, después de 60 minutos de isquemia caliente, tienen acción aditiva sobre la viabilidad del injerto hepático en términos de:1- Flujos hepáticos y extracción hepática de oxígeno.2- Recuperación de la carga energética y el acúmulo de purinas en tejido hepático. 3- Función hepática: preservación de la célula endotelial y del hepatocito. 4- Cambios histológicos: necrosis de la vía biliarLas conclusiones del estudio son:1.- Se confirma que, independientemente del tiempo de isquemia caliente, el flujo sanguíneo hepático y la extracción hepática de oxígeno se correlacionan de forma evidente con la viabilidad del órgano obtenido.La arginina se ha mostrado como la sustancia más eficaz a añadir durante el proceso de obtención del órgano, puesto que:2.- Es capaz de mejorar la carga energética, así como de reducir la acumulación de purinas.3.- Reduce la lesión tisular a nivel endotelial y hepatocelular con intensidad parecida, tanto por sí sola como asociada a otras sustancias citoprotectoras.4.- Todo ello se traduce en una necrosis biliar que, aunque existe en todos los grupos de estudio, es de menor intensidad cuando se utiliza la arginina.