Reproduction de : Thèse doctorat : Psychopathologie et psychologie cliniques : Lyon 2 : 2006. / Annexes en français et en espagnol. Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine. Médecine Physique et Réadaptation : Nantes : 2008. / Bibliogr.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine. Anesthésie Réanimation : Nantes : 2008. / Bibliogr.

Reproduction de : Thèse d' exercice : Médecine générale : Nancy 1 : 2002. / Thèse : 2002NAN11059. Titre provenant de l'écran-titre.

La chimiokine monocyte-chemoattractant protein-1 (MCP-1 ou CCL2) est un neuromodulateur de l'influx nociceptif au sein du système nerveux. Son activité biologique est attribuée à l'activation du récepteur couplé aux protéines G, CCR2. Le couple CCL2/CCR2 joue un rôle important dans la genèse et le maintien de la transmission nociceptive en contidition de douleur chronique. L'ARN interférent est un outil de recherche grandement utilisé dans la découverte de nouvelle cible thérapeutique touchant les désordres du système nerveux. Son potentiel thérapeutique a aussi été investigué dans diverses études cliniques et demeure controversé. Les Dicer-substrate siRNA (DsiRNA) sont des molécules synthétiques d'ARNi qui ont été développées afin d'améliorer les paramètres pharmacologiques des siRNA. Ils ont une meilleure efficacité in vitro et in vivo à faible dose ce qui limite les effets indésirables. Ces performances s'expliquent par la longueur des DsiRNA; un duplex linéaire asymétrique de 27 nucléotides de long plutôt que de 21 mers pour les siRNA classiques. Ce mémoire présente les résultats de recherche du développement des DsiRNA sélectifs pour la cible de l'ARN messager du récepteur rCCR2 et de leur application dans la prévention de la douleur aiguë. Pour cette étude, dix DsiRNA ayant des séquences différentes ont été synthétisées puis validées in vitro. Basés sur leur performance à taire l'expression du récepteur CCR2, deux duplex ont été retenus (933 & 1049). Leur propriété a été optimisée par l'ajout de deux motifs de méthylation (2'OMe) distincts nommés M7 et Evader le long de leur séquence. Les DsiRNA anti-CCR2 ont ensuite été testés in vivo dans un modèle de douleur aiguë induit par l'injection spinale de CCL2 exogène (1µg). Pour cette étude, deux injections de DsiRNA (5µg, i.t.) couplé à l'agent de transfection peptidique Transductin ont été administrées à 24h d'intervalle à des rats sains. Au troisième jour, le modèle allodynique aiguë a été induit. Les résultats du von fry dynamique ont montré que les DsiRNA anti-CCR2 testés ont prévenu 100 % de l'allodynie mécanique induit par le modèle. Aussi, les résultats de qPCR ont montré que 72 h suivant la première administration des DsiRNA, l'effet d'interférence de l'ARNm était toujours observable dans les structures des ganglions de la racine dorsale. Les niveaux d'expression de rCCR2 étaient 50 % plus bas chez les animaux traités au DsiRNA (933 et 1049) que chez les animaux en douleur aigu non traités. Les niveaux de CCL2 étaient également abaissés, suggérant ainsi que l'effet anti-allodynique des DsiRNA passe par le blocage de la boucle d'autorégulation du couple CCL2/CCR2 en condition douloureuse.

La douleur est un phénomène complexe qui peut être modulé par des mécanismes endogènes de contrôle de la douleur lesquels peuvent être facilitateurs ou inhibiteurs. Ces mécanismes de modulation peuvent modifier la perception de la douleur suite à une stimulation douloureuse. La modulation de la douleur effectuée par les mécanismes inhibiteurs peut se réaliser à tous les niveaux du système nerveux central, c'est-à-dire au niveau de la moelle épinière, du tronc cérébral et des centres supérieurs. Les contrôles inhibiteurs diffus nociceptifs (CIDN), un mécanisme de modulation situé au niveau du tronc cérébral, sont capables d'inhiber un message nociceptif ascendant et ainsi produire une analgésie diffuse à l'ensemble du corps, réduisant ainsi la perception douloureuse suite à une stimulation. Les écrits scientifiques suggèrent qu'un déficit de ce mécanisme pourrait être à l'origine de l'apparition et du maintien de certaines douleurs chroniques. L'activation des CIDN dépend de trois caractéristiques du stimulus conditionnant, soit l'intensité, la superficie et la durée de la stimulation conditionnante. Aucune étude n'a été réalisée pour savoir quelle est la durée minimale du stimulus conditionnant nécessaire pour activer les CIDN et aucun consensus n'existe à ce sujet. Le but de cette étude est donc de vérifier quelle est la durée minimale d'immersion (stimulus conditionnant) nécessaire pour l'activation des CIDN en plus de vérifier l'effet de la durée de l'immersion sur leur efficacité et leur durée d'action. Pour ce faire, deux tests de douleur, réalisés à l'aide de stimulations thermiques localisées (thermode) et d'un bain d'eau froide, ont été effectués chez 30 sujets sains lors de 4 rencontres. Au cours de chacune des rencontres, différentes durées d'immersion ont été expérimentées de même que différentes intensités douloureuses réalisées à l'aide de la thermode. Les résultats de notre étude indiquent qu'il y a eu diminution de la perception douloureuse thermique au test de la thermode post-immersion lors de chacune des rencontres. Ainsi, nous avons constaté qu'il y avait une activation des CIDN dès l'immersion d'une durée de 30 secondes. Nous avons également constaté que la durée d'action des CIDN varie selon l'intensité douloureuse de la stimulation à la thermode. En effet, les CIDN sont plus longuement efficaces pour les stimulations de faibles intensités. De plus, la durée d'immersion n'a pas d'effet sur l'efficacité et la durée d'action des CIDN, qui sont similaires pour chacun des temps d'immersion. Les résultats de la présente étude permettent d'envisager l'ajustement de la durée d'immersion selon les populations étudiées en laboratoire. Une immersion de 30 secondes s'avère suffisante pour permettre une activation des CIDN et ainsi produire une diminution significative de la douleur.

Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) font partie de la plus importante famille de récepteurs membranaires. Leur implication dans une grande majorité de processus physiologiques et pathologiques en fait une cible pharmaceutique de choix. Parmi les RCPG, nous avons déjà démontré que le récepteur de la neurotensine NTS2 joue un rôle important dans la régulation de la transmission de l'information nociceptive. Cependant, des études ont révélé que le récepteur NTS2 est principalement localisé dans des compartiments intracellulaires et est notamment stocké dans l'appareil de Golgi. Par conséquent, les processus de transport et de trafic du récepteur vers la membrane plasmique sont critiques pour son activation par des agonistes exogènes. Dans le but d'étudier les mécanismes qui conduisent à l’insertion du récepteur NTS2 à la surface cellulaire, nous avons procédé à un criblage en double hybride chez la levure pour identifier des protéines potentiellement impliquées dans la régulation du trafic de NTS2. Nous avons utilisé le fragment correspondant à la troisième boucle intracellulaire du récepteur NTS2 comme appât pour cribler une banque d'ADNc de cerveau de rat. Cet essai a permis d'identifier la sécrétogranine III (SCG3), une protéine de la voie de sécrétion régulée, comme partenaire d'interaction du récepteur NTS2. Pour mieux caractériser cette association, les protéines taguées HA-NTS2 et YFP-SCG3 ont été co-exprimées dans les cellules HEK-293 et immunoprécipitées. L'analyse par immunobuvardage de type Western a révélé la présence de bandes à 45 et 80 KDa, correspondant au récepteur HA-NTS2 et à la protéine YFP-SCG3 respectivement, démontrant l'interaction par la co-immunoprécipitation des protéines. Des études de microscopie confocale effectuées sur des cellules HEK-293 coexprimant CFP-NTS2 et YFP-SCG3, ont également montré que les deux protéines colocalisent à l’échelle subcellulaire. Des analyses de transfert d'énergie entre molécules fluorescentes (frT) ont été réalisées afin de confirmer l'interaction moléculaire NTS2-SCG3. Enfin, dans le but de déterminer l'impact physiologique de la régulation de l'adressage à la membrane plasmique du récepteur NTS2 par la SCG3, nous avons développé deux DsiRNA afin de réduire l'expression de SCG3. Ces DsiRNA dirigés contre SCG3 validés in vitro seront prochainement utilisés in vivo chez le rat adulte afin d'examiner leurs effets sur le rôle du récepteur NTS2 dans le contrôle de la douleur. Ainsi, nos résultats suggèrent que la SCG3 pourrait servir de protéine escorte pour NTS2 dans son adressage vers la membrane plasmique. Aussi, nos résultats renforcent l'idée que les RCPG ne sont pas seulement adressés à la surface cellulaire par la voie constitutive mais qu'ils peuvent être transportés via la voie de sécrétion régulée. Finalement, ces résultats suggèrent que l'interaction physique entre NTS2 et SCG3 pourrait affecter la fonction physiologique du récepteur NTS2, y compris son rôle dans le contrôle de la douleur.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2005. / Titre de l'écran-titre (visionné le 13 févr. 2008). Bibliogr.

Thesis--Albert Ludwigs University, Freiburg im Breisgau, 1998. / Includes index.

Thesis (doctoral)--Karolinska Institutet, Stockholm, 1988. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.