Orientador: Carla Raquel Fontana Mendonça / Resumo: O presente estudo tem como objetivo avaliar a fototoxicidade do azul de metileno (AM), clorina-e6 (Ce-6) e curcumina (CUR) associados a irradiações com diferentes intensidades de luz para a terapia fotodinâmica (TFD) contra cepas de Enterococcus faecalis e Cutibacterium acnes, em suspensão e em biofilme. As fontes de luz utilizadas na TFD foram LEDs no comprimento de onda azul (450 nm) e vermelho (660 nm) de acordo com cada fotossensibilizador testado. Como resultado observamos que, em E. faecalis a TFDa mediada por AM e Ce6 foi mais eficiente quando exposta a intensidade de luz de 153 mW/cm², porém com a CUR os melhores resultados foram obtidos com a intensidade de luz de 103 mW/cm². Para C. acnes em suspensão, a Ce6 e a CUR submetidas às diferentes intensidades de luz, causaram reduções bacterianas similares. Em biofilme, a Ce6 associada a intensidade de 122 mW/cm² de luz foi mais eficiente, no entanto, a CUR não proporcionou morte de biofilmes de C. acnes independente das intensidades testadas. O AM, independente da fase, apresentou os melhores resultados com a intensidade de luz de 153 mW/cm². Considerando a quantificação de espécies reativas de oxigênio, a concentração de AM foi determinante na produção de EROs. Na concentração de 100 μg/mL de AM na dose de 120 J/cm2 radicais hidroxila foram mais evidentes em relação a quantidade de oxigênio singleto formado. Na concentração de 50 μg/mL, a intensidade de 61 mW/cm² gerou similarmente as espécies testadas, quanto que a int... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Uppsala universitet, 2005. / Härtill 3 uppsatser.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4543_1.pdf: 1690700 bytes, checksum: da5dc337c7de1a577ea7ee10118fbca6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cerca de 490.000 novos casos de câncer cervical têm ocorrido entre mulheres do mundo todo a cada ano. No Brasil, a estimativa de incidência aponta o câncer de colo do útero como o terceiro mais comum entre as mulheres no ano de 2006, com estimativa de 19.260 novos casos em todo o país. Segundo o INCA (2006), no estado de Pernambuco, estima-se que ocorram 22,16 novos casos para cada 100.000 mulheres. O papilomavirus humano (HPV) é o principal agente envolvido em lesões benignas e malignas, sendo caracterizados como baixo-risco e alto-risco, respectivamente. Os HPVs de alto-risco, como os sorotipos 16 e 18, são capazes de produzir as oncoproteínas E6 e E7 que alteraram as funções das proteínas regulatórias do ciclo, como as proteínas p53 e retinoblastoma, respectivamente. Devido à dificuldade de cultivo do HPV em cultura de tecidos, a clonagem destes genes representa uma possibilidade de estudos mais avançados. Entre os novos sistemas de expressão de proteínas heterólogas, pode-se destacar Pichia pastoris que é facilmente manipulada, e possui a capacidade de expressar a proteína de interesse em altos níveis e também realizar modificações pós-transducionais. Assim, o objetivo do presente trabalho é clonar o gene E6 do HPV 16 em P. pastoris. Para tanto, o gene E6 do HPV 16 (477 bp) foi clonado diretamente no vetor pPICZA (3.300 bp), amplificado em Escherichia coli DH5α e linearizado com SacI para ser integrado ao genoma da levedura por recombinação. Todos os clones obtidos foram submetidos à PCR com primers específicos, linearizações com enzimas e seqüenciamento. O resultado obtido com o PCR da P. pastoris transformante apresentou tamanho correspondente ao gene E6. A seqüência gênica dos nucleotídeos apresentou um score de 93% quando alinhado com a seqüência gênica da E6 do HPV 16 depositada nos bancos de dados gênicos. Os clones obtidos permitirão a expressão desta oncoproteína por P. pastoris, e desta forma, o desenvolvimento de vacinas terapêuticas ou medicamentos sítio-específico capazes de erradicar a doença

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:07:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo768_1.pdf: 2124568 bytes, checksum: 406686ffa8bab1f85f50c826f2d4d9f4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O papilomavírus humano (HPV) apresenta a capacidade de provocar infecção clínica ou subclínica em mulheres e homens após a transmissão por via sexual. Estudos confirmam a relação entre a infecção com alguns tipos de HPV e a etiologia do câncer cervical, tido como a segunda maior causa de morte entre as mulheres no mundo. Os genes E6 e E7 são os principais oncogenes dos papilomavírus humanos de alto risco. Os produtos desses genes inibem a p53 e pRb, respectivamente, contribuindo para a transformação celular. Tem sido descrito um polimorfismo comum do gene supressor de tumor TP53, localizado no códon 72 do éxon 4, resultando em prolina (p53Pro) ou arginina (p53Arg). O genótipo Arg/Arg versus Arg/Pro ou Pro/Pro para o códon 72 do gene TP53 tem sido discutido como um importante fator de risco para as neoplasias cervicais. Estudos evidenciam uma diversidade de variantes de tipos de HPV. As diferenças nas sequências nucleotídicas entre os variantes HPV podem resultar em alterações nos aminoácidos codificados, podendo levar a potenciais oncogênicos distintos. Neste trabalho foi proposta a análise da variabilidade genética das regiões genômicas E6 e E7, dos HPVs 18 e 31, bem como a análise do polimorfismo do gene supressor tumoral TP53, códon 72 éxon 4, em amostras cervicais de mulheres da região metropolitana do Recife. Para a análise da variabilidade, amostras de DNA positivas para os HPVs 18 e 31 foram amplificadas, clonadas e sequenciadas quanto às regiões genômicas E6 e E7. As sequências obtidas foram alinhadas com sequência referência do GenBank para avaliar possíveis polimorfismos. A detecção do polimorfismo no gene TP53 foi realizada por meio de PCR alelo específica. Foi possível identificar alterações gênicas nas sequências de E6 e E7 dos HPVs 18 e 31 em relação à sequência de referência depositada do GenBank. Três alterações nucleotídicas em E6 de HPV-31 estão sendo descritas pela primeira vez neste estudo. Algumas alterações nucleotídicas ocasionaram mutações não sinônimas. As alterações nas amostras de HPV-31 da região metropolitana do Recife podem estar relacionadas com a diferença encontrada na distribuição do HPV-31 entre as regiões Sudeste e Nordeste do Brasil. Na análise do polimorfismo do códon 72 do gene TP53, o presente estudo mostrou frequências similares dos genótipos Arg/Arg entre casos e controles, reforçando a hipótese de que este polimorfismo não é um fator de risco para a predisposição ao desenvolvimento de lesões cervicais pré-malignas e malignas quando associado ao HPV

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The thermal conductivities of polystyrene in benzene solutions at concentrations of 0.l to 15 weight percent were measured at 25° C and atmospheric pressure. Osmotic pressure measurements and information supplied by the manufacturer indicated number average molecular weights (M̅_N) of 21,000, 264,000, and 660,000 for the three polystyrene polymers studied. The following equation was obtained by regression analysis of the results and predicts the measured thermal conductivity within ± 2 percent in the range of variables studied. K = 0.1088 - 0.1311 C + 0.57629 C² - 6.40 x 10⁻⁵ (M̅_N x 10⁻⁵)² - 4.2 x 10⁻³ C(M̅_N x 10⁻⁵) where: K = thermal conductivity of solution, Btu/hr-ft-°F C = weight fraction polymer M̅_N = number average molecular weight The conductivities were measured in a steady-state concentric cylinder apparatus developed for measuring the thermal conductivity of viscous liquids. The annular gap was 0.052 inches and guard heaters were employed to minimize end losses and distortion of the steady-state temperature distribution at the ends. The apparatus was calibrated with three liquids of known thermal conductivity, water, cyclohexanol and ethylene glycol. The calibration factor was found to be constant to within experimental error (± 3 percent) over the range of measurements. / Master of Science

A infecção por tipos de HPV de alto risco oncogênico é o principal fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma do colo uterino, uma das neoplasias mais frequentes em mulheres de todo o mundo. Este grupo de vírus também está associados a uma proporção importante de outros cânceres anogenitais e de tumores de cabeça e pescoço. Os HPVs de alto risco expressam duas oncoproteínas, E6 e E7, que agem sobre fatores celulares específicos alterando diferentes vias de vinalização. A oncoproteína E6 é capaz de unir-se à proteína supressora de tumor p53, alterar a sua capacidade funcional e promover sua degradação pela via de proteólise dependente de ubiquitina. Mais ainda, a interação da proteína E6 com várias proteínas celulares por exemplo, E6AP, TNFR1, Bak e caspase 8 confere resistência a apoptose; hADA3, p300, CARM1 e SET7 a remodulação da cromatina; NFX1-91 a ativação da telomerase; STAT-1 e TLR-9 a evasão imune, ATR, BCRA1, MCM7, MGMT. XRCC1 a estabilidade genômica; DLG1, MAGI1-3, SCRIBBLE, paxilina e fibulina a perda de polaridade celular e indução de hiperplasia. No entanto, as consequências de muitas dessas interações não têm sido bem estudadas em queratinócitos primários humanos, a célula alvo natural do HPV. No presente estudo analizamos o efeito da proteína E6 de HPV16 (alto risco) e HPV11 (baixo risco) na expressão e na atividade de fatores envolvidos na regulação/execução de apoptose induzida pelas citocinas TNF e TRAIL e pelo quimioterápico Rapamicina. Através de ensaios de proliferação/viabilidade observamos que as células que expressam E6 de ambos os tipos virais apresentam resistência às citocinas e à rapamicina, quando comparadas a culturas controle. Além disso, observamos que as células que expressam E6 apresentam diferenças no padrão de expressão de proteínas envolvidas na regulação das vias extrínseca e intrínseca da apoptose. / The infection with oncogenic HPV types is the main risk factor for the development of cervical cancer, one of the most common malignancies in women worldwide. This group of viruses is also associated with a significant proportion of other anogenital cancer and head and neck tumor. High-risk HPV express two oncoproteins, E6 and E7, which act on specific cellular factors altering difefferent signaling pathways. For instance E6 oncoprotein is able to bind the p53 tumor suppressor protein and promote its degradation by the ubiquitin dependent proteolysis pathway. Furthermore, the interaction of E6 with various cellular proteins for example, E6AP, TNFR1, caspase 8 Bak and confers resistance to apoptosis; hADA3, p300, and CARM1 SET7 the reshaping of chromatin; NFX1-91 telomerase activation; STAT-1 and TLR-9 immune evasion, ATR, BCRA1, MCM7, MGMT. XRCC1 genomic stability; Dlg1, MAGI1-3, scribble, paxillin and fibulin loss of cell polarity and hyperplasia of induction. In the present study we analyzed the effect of the E6 protein of HPV (highrisk) and HPV11 (low-risk) on the expression and activity of factors involved in the regulation/execution of apoptosis induced by the cytokines TNF and TRAIL and the chemotherapeutic agent Ramaycin. Using proliferation/viability assays we observed that cells expressing E6 from either viral cytokines and Rapamycin when compared with control cells. Besides, we observed that cells expressing E6 exhibit differences in the expression pattern of protein involved in the regulation of apoptosis extrinsic and intrinsic pathways.

Submitted by MAÍRA TERRA GARCIA null (maa.terra@hotmail.com) on 2018-05-18T19:56:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final.pdf: 2946838 bytes, checksum: ea178be5bf5fe9de6d90f99275e65044 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-05-21T17:11:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 garcia_mt_me_sjc.pdf: 2946838 bytes, checksum: ea178be5bf5fe9de6d90f99275e65044 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-21T17:11:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 garcia_mt_me_sjc.pdf: 2946838 bytes, checksum: ea178be5bf5fe9de6d90f99275e65044 (MD5) Previous issue date: 2018-05-04 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A terapia fotodinâmica (TFD) vem se mostrando eficaz na redução de patógenos bucais e diferentes fotossensibilizadores têm sido investigados. O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia da TFD sobre Streptococcus mutans usando dois fotossensibilizadores derivados da Clorina, Photoditazine (PDZ) e Fotoenticine (FTC), associados à irradiação Laser (660nm, 50 mw/cm²). Esses fotossensibilizadores também foram comparados com o Azul de Metileno (AM) que já tem seus efeitos comprovados contra S. mutans. Para realização desse trabalho, foram isoladas 11 amostras clínicas de S. mutans a partir de pacientes com lesões de cáries ativas. Essas amostras foram identificadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), seguida por confirmação em sequenciamento automático. Também foi incluída no estudo uma cepa padrão de referência (S. mutans UA159). Os efeitos da TFD foram testados sobre S. mutans em culturas planctônicas e sobre biofilmes formados em dentes bovinos. Os resultados foram avaliados pela contagem de células viáveis e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A capacidade dos fotossensibilizadores em penetrar nas células de S. mutans foi avaliada por meio da absorbância em espectrofotômetro. Os dados foram analisados por ANOVA e teste de Tukey. Na identificação das amostras, verificou-se que todas apresentaram o fragmento de 517 pb específico para S. mutans e que o sequenciamento demonstrou similaridade de 87% com a cepa de referência. Em culturas planctônicas, todos os fotossensibilizadores reduziram as células de S. mutans com diferença significante em relação ao grupo sem tratamento. O FTC conseguiu atingir 100% de redução tanto para a cepa de referência como para as cepas clínicas. Nos testes em biofilmes, houve redução bacteriana de 4 log para o AM, 6 log para o PDZ e de 5 a 8 log para o FTC. Na cepa padrão de referência, o FTC levou a eliminação total das células de S. mutans. Além disso, verificou-se que o FTC foi o fotossensibilizador com maior capacidade de desestruturar o biofilme e penetrar nas células de S. mutans. Concluiu-se que os fotossensibilizadores derivados da clorina demonstraram maior atividade antimicrobiana na TFD contra S. mutans em relação ao AM, sendo esse efeito mais significativo para o FTC. / A terapia fotodinâmica (TFD) vem se mostrando eficaz na redução de patógenos bucais e diferentes fotossensibilizadores têm sido investigados. O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia da TFD sobre Streptococcus mutans usando dois fotossensibilizadores derivados da Clorina, Photoditazine (PDZ) e Fotoenticine (FTC), associados à irradiação Laser (660nm, 50 mw/cm²). Esses fotossensibilizadores também foram comparados com o Azul de Metileno (AM) que já tem seus efeitos comprovados contra S. mutans. Para realização desse trabalho, foram isoladas 11 amostras clínicas de S. mutans a partir de pacientes com lesões de cáries ativas. Essas amostras foram identificadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), seguida por confirmação em sequenciamento automático. Também foi incluída no estudo uma cepa padrão de referência (S. mutans UA159). Os efeitos da TFD foram testados sobre S. mutans em culturas planctônicas e sobre biofilmes formados em dentes bovinos. Os resultados foram avaliados pela contagem de células viáveis e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A capacidade dos fotossensibilizadores em penetrar nas células de S. mutans foi avaliada por meio da absorbância em espectrofotômetro. Os dados foram analisados por ANOVA e teste de Tukey. Na identificação das amostras, verificou-se que todas apresentaram o fragmento de 517 pb específico para S. mutans e que o sequenciamento demonstrou similaridade de 87% com a cepa de referência. Em culturas planctônicas, todos os fotossensibilizadores reduziram as células de S. mutans com diferença significante em relação ao grupo sem tratamento. O FTC conseguiu atingir 100% de redução tanto para a cepa de referência como para as cepas clínicas. Nos testes em biofilmes, houve redução bacteriana de 4 log para o AM, 6 log para o PDZ e de 5 a 8 log para o FTC. Na cepa padrão de referência, o FTC levou a eliminação total das células de S. mutans. Além disso, verificou-se que o FTC foi o fotossensibilizador com maior capacidade de desestruturar o biofilme e penetrar nas células de S. mutans. Concluiu-se que os fotossensibilizadores derivados da clorina demonstraram maior atividade antimicrobiana na TFD contra S. mutans em relação ao AM, sendo esse efeito mais significativo para o FTC. / Photodynamic therapy (PDT) has been shown to be effective in reducing oral pathogens and different photosensitizers have been investigated. The objective of this study was to evaluate the efficacy of PDT on Streptococcus mutans using two photosensitizers derived from Chlorine, Photoditazine (PDZ) and Fotoenticine (FTC) associated with Laser irradiation (660 nm, 50 mw / cm²). These photosensitizers were also compared to Methylene Blue (AM) that already has its proven effects against S. mutans. To perform this work, 11 clinical samples of S. mutans were isolated from patients with active caries lesions. These samples were identified by the Polymerase Chain Reaction (PCR), for confirmation in automatic sequencing. Also included in the study was a standard standard (S. mutans UA159). The effects of PDT were tested on S. mutans in planktonic cultures and on biofilms formed in bovine teeth. Results of viable cell and Scanning Electron Microscopy (SEM) tests. The ability of the photosensitizers to penetrate the S. mutans cells was evaluated by spectrophotometer absorption. Data were analyzed by ANOVA and Tukey's test. In the identification of the samples, all the presentations of the 517 bp fragment specific for S. mutans and that the sequencing demonstrate similarity of 87% with a reference strain were found. In planktonic cultures, all photosensitizers reduced as S. mutans cells with a significant difference in relation to the untreated group. The FTC achieved a 100% reduction for both the reference strain and the clinical strains. In biofilm tests, there was a 4 log reduction for AM, 6 log for PDZ and 5 to 8 log for FTC. In the standard reference strain, FTC led to the complete elimination of S. mutans cells. In addition, it was found that FTC was the photosensitizer with the greatest capacity to de-structure the biofilm and penetrate S. mutans cells. It was concluded that the photosensitizers derived from chlorine showed a greater antimicrobial activity in PDT against S. mutans in relation to AM, being this effect more significant for the FTC. / 2016/09296-8