No description available.

No description available.

<p> The estimation of physiological parameters that characterize electrical signal propagation in the heart is an important component of the inverse problem in electrocardiography. Recent studies show that some patterns in cardiac electrical signals (e.g. spiral waves) are associated with the re-entrance phenomenon seen in cardiac arrhythmia. Therefore, further research in this field will lead to improved detection and diagnosis of cardiac diseases and conditions. </p> <p> Electrical activity in the heart is initiated at the SA node and an electrical impulse propagates to the atria causing their mechanical contraction. Subsequent contraction of the ventricles (systole) followed by relaxation (diastole) completes the heart cycle. Evidence of electrical activity in cardiac cells is shown by a potential difference across the cell membrane that changes when ·ionic currents flow through the membrane's channels. This electrical activation of the heart can be modeled using a diffusion model in which the physiological parameters (e.g., conductivity) govern the resulting spatiatemporal process. </p> <p> In this thesis we derive an inverse model for the electrical activation of the heart using the Fitzhugh-N agumo diffusion equations which account for the dynamics of spiral waves in excitable media such as, in our case, cardiac cells. The electric potential is expressed through activator and inhibitor variables and we simulate the measurements of the electromagnetic field are on the torso surface. A signal processing model is derived where the physiological parameters are deterministic or stochastic, and the resulting physiological measurements are a function of space, time, and the parameters. </p> <p> We estimate these unknown parameters using an optimization algorithm that minimizes the cost function of the model. For our estimation we use Least Squares and we derive the Maximum Likelihood Estimator. We measure the performance using mean square error, and we compute the Cramer-Rao Lower Bound, which shows the minimum variance attainable. </p> <p> In our simulations we use a finite element mesh of a human torso to describe a realistic geometry to generate the potentials on the surface. Our results indicate that estimating the physiological parameters of a diffusion equation from the measurements taken outside the torso are feasible. This further suggests that ECG/MCG signals can be used to provide detailed information about the physiological properties of the electrical impulse generated in the heart and aid in diagnosis of various pathological conditions including arrhythmia. </p> / Thesis / Master of Applied Science (MASc)

D'une manière générale, la biométrie a pour objectif d'identifier des individus, notamment à partir de leurs caractéristiques biologiques. Cette pratique tend à remplacer les méthodes traditionnelles de vérification d'identité des individus ; entre autres, les mots de passe et les codes de sécurité. Au quotidien, la biométrie trouve de vastes applications et la recherche de nouvelles méthodes biométriques est d'actualité. L'objectif de notre thèse consiste à développer et d'évaluer de nouvelles modalités biométriques basées sur des caractéristiques infalsifiables, ne pouvant être modifiées volontairement. Dans ce contexte, les signaux physiologiques sont pris en considération. Ainsi, nous avons proposé trois méthodes d'identification biométriques. La première méthode utilise l'électrocardiogramme (ECG) comme signature individuelle, alors que la deuxième est basée sur l'utilisation des signaux électromyographiques (EMG) de surface en réponse à une force d'intensité fixe. Enfin, la dernière technique explorée, utilise les réponses motrices obtenues suite à une stimulation électrique. Ces méthodes consistent d'abord à acquérir les signaux physiologiques chez des personnes saines. Ces signaux sont modélisés par des réseaux d'ondelettes afin d'en extraire des caractéristiques pertinentes. La phase d'identification automatique est effectuée par des réseaux de neurones. D'après les résultats obtenus suite à des expériences effectuées, les méthodes proposées conduisent à des performances d'identification intéressantes. La première méthode, utilisant le signal électro- cardiographique, permet d'obtenir un taux de reconnaissance de 92%, alors que l'identification par les signaux EMG, en réponse à une force d'une intensité fixe, permet une identification correcte à 80%. Enfin, une performance de 95% est obtenue par l'identification par réponse motrice. Pour ces trois techniques explorées, la robustesse par rapport au bruit à été étudiée / In general, biometrics aims to identify individuals from their biological characteristics. This practice tends to replace the traditional methods of identity verification of individuals, among others, passwords and security codes. Nowadays, biometrics found wide application and research of new biometric methods is topical. The objective of this thesis is to develop and evaluate new biometric methods based on tamper-proof characteristics that can not be changed voluntarily. In this context, the physiological signals are considered. Thus, we proposed three methods of biometric identification. The first method uses the electrocardiogram (ECG) as individual signature, while the second is based on the use of surface electromyography signals (EMG) in response to a force of fixed intensity. The final technique explored, uses the motor responses obtained after electrical stimulation. These methods consist first to acquire the physiological signals in healthy people. These signals are modeled by wavelets networks to extract relevant features. The identification phase is performed automatically by neural networks. According to the results obtained from experiments performed, the proposed methods lead to interesting performance identification. The first method, using the electro-cardiographic signal, achieves a recognition rate of 92%, while the identification by EMG signals, in response to a force of a fixed intensity, allows a correct identification of 80 %. Finally, a performance of 95% is obtained by identification by motor response. For these three techniques explored, the robustness to noise ratio was studied

Biotécnicas aplicadas à reprodução animal são empregadas com o intuito de melhorar qualitativa e quantitativamente os rebanhos. A superovulação assim como a estimulação do folículo dominante utilizando-se doses suprafisiológicas de eCG (gonadotrofina coriônica eqüina) são empregadas em bovinos e bubalinos, mas nem sempre alcançam os resultados esperados. Entretanto, foram relatadas alterações morfofuncionais em corpos lúteos (CL) de animais submetidos a estes tratamentos, o que implica, necessariamente, em levantamento de hipóteses relativas ao(s) mecanismo(s) pelo(s) qual(is) as gonadotrofinas exógenas alteram as funções celulares nos folículos e corpos lúteos resultantes. Com o intuito de melhor compreensão do papel exercido pelo eCG sobre a célula luteínica bovina, 16 vacas foram sincronizadas e submetidas (grupos tratados) ou não (grupo controle) ao tratamento com eCG. O tratamento foi realizado previamente (superovulação) ou posteriormente (estimulação do folículo dominante) ao desvio folicular. No dia 6 após a ovulação, estes animais foram abatidos e os CL coletados para realização de análises histológicas e ultra-estruturais, assim como o sangue coletado para dosagem de progesterona. Para comparação dos dados obtidos entre os diferentes grupos utilizou-se o programa GraphPrism e as médias foram consideradas diferentes quando p < 0.05. Em relação à densidade de mitocôndrias e densidade numérica das mitocôndrias elipsóides não houve diferença significativa entre os grupos estudados. Quando se calculou o volume total das mitocôndrias no CL bovino, houve diferença significativa do grupo superovulado em relação aos outros grupos. Já para as mitocôndrias esferóides observou-se diferença significativa do grupo estimulado comparado aos grupos controle e superovulado. À imunofluorescência os animais do grupo superovulado apresentaram visualmente uma marcação mais fluorescente intensa para mitocôndrias quando comparados aos grupos controle e estimulado; e o grupo estimulado apresentou uma marcação mais intensa em relação ao grupo controle. Houve diferença significativa entre os três grupos em relação à quantidade das células luteínicas grandes. Quando se corrigiu o número de células luteínicas grandes pelo volume do CL, os mesmos resultados foram encontrados. Quanto às medidas do maior diâmetro das células luteínicas grandes houve uma diferença significativa quando comparado o grupo estimulado com os demais. Aspectos qualitativos da microvascularização do CL em animais controle e superovulados revelam vascularização mais abundante no grupo tratado. Estes dados apontam para modificações morfológicas da célula luteínica e do CL bovino direcionadas à maior produção hormonal após tratamento com eCG e indicam que doses diferentes aplicadas em momentos diferentes do ciclo estral levam à respostas diversas da célula luteínica e do próprio CL. / Biotechnologies applied to animal reproduction are employed in order to improve livestock quality and quantity. Superovulation and the stimulation of the dominant follicle using supraphysiological doses of eCG (equine chorionic gonadotropin) are used in cattle and buffaloes, but not always achieve the expected results. However, morphofunctional changes in corpora lutea (CL) derived from animals submitted to these treatments were reported, which necessarily implies a survey of hypotheses regarding the mechanism(s) by which exogenous gonadotrophins result in altered cellular functions in the follicles and corpora lutea. In order to better understand the role played by eCG on bovine luteal cells, 16 cows were synchronized and submitted (treated groups) or not (control group) to treatment with eCG. The treatment was performed previously (superovulation) or after (stimulation of the dominant follicle) follicular deviation. At 6 days after ovulation, animals were slaughtered and the CL collected for histological and ultrastructural analysis, as well as blood for determining plasmaprogesterone.For statistical analysis the program Graph Prism was used and mean considered significant different when p < 0.05. In relation to mitochondria number and volume density there were no differences among the studied groups. Values of mitochondria total volume in CL were different if stimulated was compared to the other groups. Imunofluoresce for mitochondria showed a more intensive signal for animals from the superovulated group, followed by animals belonging to the stimulated group. The number of large luteal cells was different among all groups. Even though this number was corrected by CL volume, the same results were found. The biggest diameter of large luteal cells was compared among the groups and stimulated group showed higher values. Qualitative aspects of CL microvascularization in control and superovulated animals reveal more abundant vascularization in treated group. These data point towards morphological modification of bovine CL and luteal cell directed to increased hormonal production after eCG treatment. Moreover, results indicate that different eCG dosis applied in different time points of estrous cycle lead to different responses from CL and luteal cells.

Protocolos hormonais amplamente utilizados no Brasil em reprodução animal melhoram qualitativa e quantitativamente os rebanhos. Os protocolos de estimulação do folículo dominante e superovulação que utilizam a aplicação dos hormônios folículo-estimulante (FSH) e/ou gonadotrofina coriônica equina (eCG) tem se mostrado eficientes para aumentar a taxa de prenhez e o número de descendentes de alto valor genético, respectivamente. Neste contexto o útero é um órgão essencial para a reprodução em mamíferos e provavelmente alvo destes protocolos. Vários fatores regulam o seu desenvolvimento, como por exemplo, a angiogênese inerente aos órgãos genitais femininos, a implantação e o desenvolvimento da placenta e as ações da progesterona (P4) plasmática. O Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF-A) é uma proteína que tem uma função dinâmica de regulação do crescimento vascular endotelial, angiogênese e permeabilidade vascular. Entre os fatores que aumentam a sua expressão, podemos citar os hormônios esteróides ovarianos, as prostaglandinas, o FSH e o próprio eCG. Em geral, estas ações em conjunto estão relacionadas à preparação do ambiente uterino para uma futura prenhez. Deste modo, o objetivo deste trabalho é analisar a expressão do sistema VEGF-A (VEGF-A e seus recpetores FLT-1 e KDR) no útero bovino após o tratamento com diferentes doses de eCG e quantificar as glândulas uterinas presentes nos animais dos diferentes grupos. Para tanto, os animais foram divididos em três grupos: controle, estimulado e superovulado, os quais foram sincronizados e receberam 400 UI (grupo estimulado), 2000 UI (grupo superovulado) ou não receberam eCG (grupo controle). Aos 6 dias após a ovulação, os animais foram abatidos e as amostras coletadas destinadas aos protocolos de imunoistoquímica e PCR em tempo real. Para a estimativa das glândulas uterinas foi utilizado o método morfométrico de contagem. O sistema VEGF-A foi localizado por meio da imunoistoquímica em diferentes tipos celulares, como nos epitélios uterinos e glandulares sem diferenças qualitativas em relação aos locais de expressão ou intensidade do sinal positivo. A expressão do mRNA do sistema VEGF-A não apresentou diferença significativa (P>0,05) entre os diferentes grupos. No que se refere à contagem do número de glândulas uterinas, o grupo superovulado apresentou maior quantidade em relação aos grupos controle e estimulado (P<0,05). A correlação entre o mRNA do sistema VEGF-A, a concentração de progesterona plasmática (P4) e o número de glândulas uterinas foi positiva para o Flt-1 com o KDR (r=0,60 p=0,0045) e para P4 com as glândulas uterinas (r=0.74 p=0,0078). Assim, podemos inferir que o tratamento com eCG não aumenta a expressão do sistema VEGF-A no útero no dia 6 após a ovulação, mas tem influência no aumento da quantidade de glândulas uterinas. / Hormonal protocols are widely employed in Brazil in the field of animal reproduction improving the herds qualitative and quantitatively. Protocols for timulation of the dominant follicle and superovulation, which use the application of follicle-stimulating hormone (FSH) and/or equine chorionic gonadotropin (eCG) are efficient methods to increase pregnancy rates and the number of genetically superior descendents, respectively. In this context, the uterus plays an essential role in mammals reproduction and is probably a target of hormonal protocols. Many factors regulate its development, such as angiogenesis, intrinsec to feminine genital organs, implantation and placental development as well as progesterone (P4) actions. The Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF-A) is a protein that plays a dynamic role in regulating the vascular endothelial growth, angiogenesis and vascular permeability. Among the factors that increase its expression, the ovarian steroid hormones, prostaglandins, FSH and eCG are of importance. In general, these actions are related and directed to prepare the uterine environment for a future pregnancy. Thus, the objective of this study is to analyze the expression of VEGF-A system (VEGF-A and its receptors FLT-1 and KDR) in bovine uterus after treatment with different doses of eCG and to quantify the uterine glands in the uterus of different groups. For this purpose, animals were divided into three groups: control, stimulated and superovulated, which underwent estrous synchronization and received 400 IU (stimulated group), 2000 IU (superovulated group) or no eCG (control group). On day 6 post ovulation animals were slaughtered and samples collected and then assigned to immunohistochemistry (IHC) and qPCR. For quantification of the uterine glands the morphometric method of counting was used. VEGF-A system was localized through IHC in different cellular types, as the uterine and glandular epithelia, showing no qualitative differences in relation to site of expression and intensity of the positive signal among the groups. Messenger RNA expression of VEGF-A system was not significantly different (P> 0.05) either. Regarding the counting of uterine glands, the superovulated group showed increased number compared to stimulated and control groups (P <0.05). The correlation among the mRNA of VEGF-A system, plasma progesterone concentrations and the number of uterine glands was positive when Flt-1 and the KDR (r = 0.60 p = 0.0045) were correlated and also when P4 and the uterine glands (r = 0.74 p = 0.0078) were correlated. Thus, we can infer that treatment with eCG did not increase the expression of VEGF-A system in the uterus on day 6 post ovulation, but influences the number of uterine glands.

Foram comparadas diferentes doses de eCG e hCG associadas a dispositivos intravaginais de progesterona (DIV), para avaliar o crescimento folicular e a ovulação, bem como a taxa de prenhez após a IATF e a funcionalidade do CL 12 dias após a sincronização em búfalas, durante a estação reprodutiva desfavorável. Para tanto, foram realizados cinco experimentos. Nos experimentos 1, 2 e 4, os grupos foram estabelecidos em função da ciclicidade dos animais, avaliada pelas concentrações plasmáticas de progesterona mediante colheita de sangue por punção da veia jugular no D-10 e no D0. Nos experimentos 3 e 5, os grupos foram estabelecidos em função da condição corporal e da ordem de parto. Em todos os experimentos as búfalas receberam um DIV associado a 2mg de Benzoato de Estradiol (BE) no D0. No D9 o DIV foi retirado, e procedeu-se à administração de 0,150mg de prostaglandina (PGF). No experimento 1, as búfalas do G1 (Controle, n=9) e do G2 (eCG, n=10) receberam 1500UI de hCG no D11; o G2 recebeu também 500UI de eCG no D-9; a IATF foi realizada no D12. Nesse experimento, o diâmetro máximo do folículo dominante (DMFD) foi de 12,6 ± 3,0 e 13,4 ± 1,7mm para o G1 e o G2, respectivamente (P>0,05); o diâmetro do folículo ovulatório (DFO) foi de 14,9 ± 2,9 (G1) e de 14,0 ± 1,6mm (G2; P>0,05); o intervalo entre a retirada do DIV e a ovulação (IROV) foi de 78,0 ± 12 (G1) e 68,0 ± 9,0h (G2; P>0,05); a taxa de ovulação (TO) foi de 44,4 (G1) e 70,0% (G2; P> 0,05). A área do CL (ACL) foi de 31,6 ± 19,9 (G1) e de 29,9 ± 9,7mm2 (G2; P>0,05); a concentração plasmática de P4 (P4) foi de 1,3 ± 1,4 (G1) e 2,0 ± 1,6ng/ml (G2; P>0,05); a taxa de prenhez (TP) foi de 22,2 (G1) e 60% (G2; P=0,11). No experimento 2, as búfalas do G1 (1500 UI de hCG; n=21) e do G2 (1000UI de hCG; n=21) receberam 500UI de eCG no D9; no D11, o G1 recebeu 1500UI de hCG e o G2 1000UI de hCG. Os resultados desse experimento são relatados a seguir: DMFD de 12,4 ± 2,3 (G1) e 12,2 ± 2,5mm (G2; P>0,05); DFO de 12,6 ± 2,3 (G1) e 12,5 ± 2,7mm (G2; P>0,05); IROV de 67,7 ± 18,1 (G1) e 72,8 ± 16,7h (G2; P>0,05); TO de 67,7 (G1) e 67,7% (G2; P>0,05); ACL de 24,8 ± 9,2 (G1) e 28,3 ± 17,2mm2 (G2; P>0,05); P4 de 2,3 ± 1,4 (G1) e 2,4 ± 1,3ng/ml (G2; P>0,05). No experimento 3, os animais foram tratados de forma idêntica àqueles do experimento 2, porém as búfalas do G1 (n=83) e do G2 (n=91) receberam a IATF no D12. Nesse experimento, foi obtida TP de 53 (G1) e de 53,8% (G2; P>0,05). No Experimento 4, as búfalas do G1 (n=10) receberam 500UI e as do G2 (n=11) 400UI de eCG; os dois grupos receberam 1000UI de hCG no D11. Esse experimento teve como resultados: DMFD de 13,2 ± 1,4 (G1) e 13,8 ± 1,8mm (G2; P>0,05); DFO de 13,7 ± 1,1 (G1) e 14,2 ± 1,5mm (G2; P>0,05); IROV de 71,1 ± 11,7 (G1) e 75,0 ± 5,5h (G2; P>0,05); TO de 70,0 (G1) e 72,7% (G2; P>0,05); ACL de 28,4 ± 8,6 (G1) e 31,6 ± 10,3mm2 (G2; P>0,05); P4 de 2,7 ± 1,2 (G1) e 3,3 ± 2,9ng/ml (G2; P>0,05). No experimento 5 (G1/n=54; G2/n=51) foi adotado o mesmo protocolo do experimento 4, porém as búfalas receberam a IATF no D12. Esse experimento resultou em TP de 42,6 (G1) e 43,1% (G2; P>0,05). Assim, foi possível concluir que as concentrações de 400UI de eCG e de 1000UI de hCG, associadas ao DIV, foram suficientes para induzir o crescimento folicular, a ovulação e a prenhez em búfalas durante o período reprodutivo desfavorável. / Different dosage of eCG and hCG were compared in association to progesterone intravaginal device (IVD) in female buffalo during the off breeding season with the purpose of evaluating the follicular growing and ovulation as well as the pregnancy rate after FTAI and functionality of the CL, twelve days after the synchronization. For this, 5 experiments were done. For the establishments of the groups in the experiments 1,2 and 4 blood samples were collected for the analysis of plasmatic concentrations of P4 on D -10 and D0 to verify the cyclicity. In the experiments 3 and 5 the groups were established due body condition score and number of calving. In all the experiments the buffaloes received a IVD associated with 2mg of estradiol benzoate (EB) on D0. On D9 the IVD was extracted and it was followed by the administration of 0,150mg of prostaglandin (PGF). In the exp. 1 the buffaloes of G1 (control, n=9) and G2 (eCG, n=10) received 1500IU of hCG on D11. On G2 was administrated 500IU of eCG on D9. The FTAI was done on D12. The maximun diameter of dominant follicle (MDDF) was 12.6 ± 3.0 and 13.4 ± 1.7mm to the G1 and G2, respectively (P>0,05). The diameter of the ovulatory follicle (DOF) was 14.9 ± 2.9 (G1) and 14.0 ± 1.6mm (G2; P>0,05). The interval between the device withdrawn and ovulation (DWO) was 78.0 ± 12.0 (G1) and 68.0 ± 9.0h (G2; P>0,05). The ovulation rate (OR) was 44.4 (G1) and 70.0% (G2; P>0,05). The CL area (CLA) was 31.6 ± 19.9 (G1) and 29.9 ± 9.7mm2 (G2; P>0,05). The plasmatic concentration of P4 (P4) was 1.3 ± 1.4 (G1) and 2.0 ± 1.6ng/ml (G2; P>0,05). The pregnancy rate (PR) was 22.2 (G1) and 60% (G2; P=0,11). In the exp. 2 the buffalo females of G1 (1500IU of hCG; n=21) and G2 (1000IU of hCG; n=21) received 500IU of eCG on D9. On D11, G1 received 1500IU of hCG and G2 1000IU of hCG. The MDDF was 12.4 ± 2.3 (G1) and 12.2 ± 2.5mm (G2; P>0,05), the DOF was 12.6 ± 2.3 (G1) and 12.5 ± 2.7mm (G2; P>0,05), DWO was 67.7 ± 18.1 (G1) and 72.8 ± 16.7h (G2; P>0,05), the OR was 67.7 (G1) and 67.7% (G2; P>0,05), the CLA was 24.8 ± 9.2 (G1) and 28.3 ± 17.2mm2 (G2; P>0,05) and the P4 was 2.3 ± 1.4 (G1) and 2.4 ± 1.3ng/ml (G2; P>0,05). The exp. 3 was identical to exp.2, although the animals of G1 (n=83) and G2 (n=91) received the FTAI on D12. The PR was 53.0 (G1) and 53,8% (G2; P>0,05). In exp. 4, the animals of G1 (n=10) received 500IU and G2 (n=11) 400IU of eCG. Both groups received 1000IU of hCG on D11. The MDDF was 13.2 ± 1.4 (G1) and 13.8 ± 1.8mm (G2; P>0,05), the DOF was 13.7 ± 1.1 (G1) and 14.2 ± 1.5mm (G2; P>0,05), the DWO was 71.1 ± 11.7 (G1) and 75.0 ± 5.5h (G2; P>0,05), the OR was 70.0 (G1) and 72.7% (G2; P>0,05), the CLA was 28.4 ± 8.6 (G1) and 31.6 ± 10.3mm2 (G2; P>0,05) and the P4 was 2.7 ± 1.2 (G1) and 3.3 ± 2.9ng/ml (G2; P>0,05). In exp. 5 (G1/n=54; G2/n=51) was done the same protocol in the exp. 4, although the animals received the FTAI on D12. The PR was 42.6 (G1) and 43.1% (G2; P>0,05). Dosage of 400IU of eCG and 1000IU of hCG, associated to IVD for FTAI were enough to induce follicular growing, ovulation and pregnancy in buffalo females during the off breeding season.

O uso da gonadotrofina coriônica equina (eCG) tem sido considerado uma potencial ferramenta nos protocolos de estimulação e superovulação para melhorarem o desempenho reprodutivo dos rebanhos. Este fato levou a hipótese de que o tratamento com eCG altera as vias de sinalização intracelular no corpo lúteo (CL) formado. Para testá-la, 18 vacas mestiças de Nelore (Bos indicus) foram divididas em três grupos: controle, estimulado e superovulado. O protocolo de sincronização da ovulação com o uso do dispositivo de P4 foi descrito anteriormente (FÁTIMA et al., 2013). O grupo estimulado recebeu 400 UI de eCG no dia da remoção do dispositivo de P4 e o superovulado recebeu 2000 UI de eCG 4 dias antes. Os animais dos grupos controle e estimulado receberam GnRH no dia 10, enquanto os animais superovulados receberam no dia 8. No sétimo dia após após a administração do GnRH, todos os animais foram abatidos e os CL foram coletados. Foi realizada análise de microarranjo, a partir da qual foram eleitos genes envolvidos na sinalização da esteroidogênese (ADM, MMP9, NOS2), da ativação das metaloproteinases da matriz e do receptor ativado de protease que regula a homeostase e inflamação (PRSS2, PLAU) e da angiogênese (ANG e ANGPT1) e validados por qPCR, western blotting e imuno-histoquímica. A expressão gênica e proteica do PRSS2 e MMP9 foi menor e as células luteínicas grandes e pequenas positivas apresentaram marcação menos intensa nos grupos estimulado e superovulado (P <0,05). A expressão proteica da ANG foi maior no estimulado (P=0,01) e superovulado (P=0,03) e da proteína ANGPT1 foi maior no estimulado (P=0,008). O número de células luteínicas grandes e pequenas positivas para ANG e ANGPT1 foram maiores nos grupos tratados (P <0,05). No estimulado, houve correlação negativa entre os níveis de progesterona e o MMP9 (r = -0,66 e P = 0,03) e com a proteína do PRSS2 (r = -0,63 e P = 0,04). No entanto, houve correlação positiva com a proteína ANG (r = 0,69 e P = 0,03). No superovulado, houve correlação positiva entre a ANG e ANGPT1 (r = 0,96 e P = 0,001). Não houve diferença na expressão de ADM, NOS2 e PLAU nos grupos tratados em relação ao controle. Em resumo, os resultados obtidos são indicativos de que a eCG altera a expressão relativa de genes e proteínas envolvidas nas vias de sinalização de inflamação e a modelação da membrana celular com uma diminuição na expressão do MMP9 e da PRSS2 e na via da angiogênese com maior expressão de ANG em ambos os tratamentos e ANGPT1 em vacas estimuladas. / The use of equine chorionic gonadotropin (eCG) have been considered a potential tool in stimulation and superovulation protocols to improve the reproductive performance of the herd. This fact led to the hypothesis that eCG treatment alters the intracellular signaling pathways in the formed CL. To test that, 18 crossbred Nellore (Bos indicus) cows were divided into three groups: control, stimulated and superovulated. The synchronization protocol with the use of P4 device was previously described (FÁTIMA et al., 2013). The stimulated group received 400 IU eCG at the P4 device removal and superovulated received 2000 IU eCG 4 days before it. Both control and stimulated animals received GnRH on day 10, while superovulated ones received it on day 8. On the seventh day after GnRH administration, CL were collected by slaughter. Microarray analysis was preformed, from which were selected genes involved in the signaling of steroidogenesis (ADM, MMP9, NOS2), activation of matrix metalloproteinases and protease activated receptor that regulates homeostasis and inflammation (PRSS2, PLAU), and angiogenesis (ANG and ANGPT1). They were evaluated by qPCR, western blot and immunohistochemistry. The gene and protein expression of MMP9 and PRSS2 decreased and large and small luteal cells showed weaker staining in stimulated and superovulated groups related to the control group (P <0.05). ANG protein expression was higher on superovulated (P=0.01) and stimulated (P=0.03) and ANGPT1 protein was higher only in stimulated (P=0.008). The number of positive large and small luteal cells for ANG and ANGPT1 were higher in treated groups (P<0.05). In stimulated, there were a negative correlation between progesterone levels and MMP9 (r = 0.03 and P = -0.66) and the PRSS2 protein expression (r = 0.04 and P = -0.63). However, there were a positive correlation with ANG protein expression (r = 0.69 and P = 0.03). In superovulated, there were a positive correlation between ANG and ANGPT1 (r = 0.96 and P = 0.001) and PRSS2 protein expression was negatively correlated with the ANG protein (r = 0.04 and P = -0.96). There was no difference in ADM, NOS2 and PLAU expression in treated groups compared to control. In summary, these findings indicate that eCG alters the relative expression of genes and proteins involved in inflammation and cell modeling signaling pathways by decreasing MMP9 and PRSS2 expression, and on angiogenesis pathway, increasing ANG expression in both stimulated and superovulated animals and ANGPT1 in stimulated cows.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:44:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roberta Martins Rosa.pdf: 1375205 bytes, checksum: a8d1eed4f0dc08a9f12cad32c1a7c305 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / The objective of this study was to analyze the histological aspects of tuvira testes (Gymnotus spp.) subjected to reproduction by different hormonal inducers. Sixty tuviras were captured, approximately 40g ± 10g and transported to fish sector of PUC -Goiás. The fish were placed during the period from December 2013 to February 2014, in a period of adaptation to 90 days. Using a randomized design, has defined four treatments with ten repetitions or ten animals per box, each animal being a repeat. For induction of tuvira, three hormones were tested. The control group, used saline at 2%, the others group used: the extract of carp pituitary (EBHC), equine chorionic gonadotropin (ECG) and synthetic analogue of gonadotropin-releasing hormone (GnRH-a). The three hormones were applied in two doses, the first one (preparatory) in order to promote full maturation of gametes and the second for the purpose of releasing the gametes. For histological analysis, were killed five males per treatment, the testicles were removed and evaluated by the ventral section of the coelomic cavity and quickly stored in Bouin s fixative solution for twenty-four hours. After fixation of the testicles, slides were prepared and photographed at the Molecular Systematics Laboratory of the Federal University of Viçosa. Were photographed 15 frames per fish in light microscope, where these ten images were analyzed using the software Image- Pro Plus ®. The volume ratio occupied by the components of testicular parenchyma (seminiferous tubules and intertubular tissue) was determined by counting 2660 points projected on ten images obtained at random, with 266 points in each image. Populations were quantified spermatogonia type A, type B, primary spermatocytes, secondary spermatocytes, spermatids and Sertoli cells (S) and the proportion of the lumen. Data were analyzed by comparison of means by Tukey test, performed by the Statistical Analysis System software - SAS. The results indicate that the GnRHhormone showed a greater ability to promote final maturation in the testes, followed by ECG hormone. The EBHC hormone failed to promote the final maturation induced tuviras, suggesting a longer duration than other hormones used. One possible explanation for the greater induction of the GnRH-hormone would be the ability to produce endogenous gonadotropins. Other hormones have justified their answers in the specificity of membrane receptors on Sertoli cells and Leydig. Researching the tuviras response to hormonal inductors, are required. / O objetivo deste trabalho foi analisar os aspectos histológicos de testículos de tuvira (Gymnotus spp.) submetida a reprodução por diferentes indutores hormonais. Foram capturadas sessenta tuviras, de aproximadamente 40g±10g e transportadas para o setor de piscicultura da PUC - Goiás. Os peixes foram acondicionados durante o período de dezembro de 2013 a fevereiro de 2014, passando por um período de adaptação ao cativeiro de 90 dias. Utilizando delineamento inteiramente casualizado, foram definidos quatro tratamentos com dez repetições ou seja, dez animais por caixa, sendo cada animal uma repetição. Para indução a reprodução da tuvira, foram testados três hormônios e para o grupo controle, solução salina a 2%. Os utilizados foram: o extrato bruto de hipófise de carpa (EBHC), a gonadotropina coriônica equina (ECG) e análogo sintético do hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH-a). Os três hormônios foram aplicados em duas dosagens, sendo a primeira (preparatória) com a finalidade de promover a maturação total dos gametas e a segunda com a finalidade de liberação dos gametas. Para as análises histológicas, foram eutanasiados cinco machos de cada tratamento, os testículos foram avaliados e retirados através de secção ventral da cavidade celomática e armazenados rapidamente em solução fixadora de Bouin por vinte e quatro horas. Após a fixação dos testículos, lâminas foram confeccionadas e fotografadas no Laboratório de Sistemática Molecular da Universidade Federal de Viçosa. Foram fotografadas 15 imagens por peixe em fotomicroscópio, onde destas, dez imagens foram analisadas utilizando o software Image-Pro Plus ®. A proporção volumétrica ocupada pelos componentes do parênquima testicular (túbulos seminíferos e tecido intertubular) foi determinada a partir da contagem de 2660 pontos projetados sobre dez imagens obtidas ao acaso, sendo 266 pontos em cada imagem. Foram quantificadas as populações de espermatogônias do tipo A, do tipo B, espermatócitos primários, espermatócitos secundários, espermátides e células de Sertoli (S) e proporção de Lúmen. Os dados obtidos foram analisados pela comparação de médias através do teste de TUKEY, executado pelo software Statistical Analysis Sistem - SAS. Os resultados indicaram que o hormônio GnRH-a apresentou uma maior capacidade para promover a maturação final nos testículos, seguido pelo hormônio eCG. O hormônio EBHC não conseguiu promover a maturação final nas tuviras induzidas, sugerindo um maior tempo de ação que os demais hormônios utilizados. Uma possível explicação para a maior indução do hormônio GnRH-a seria na capacidade de produzir gonadotrofinas endógenas. Os demais hormônios teriam suas respostas justificadas na especificidade dos receptores de membrana das células de Sertoli e Leydig. Maiores estudos sobre a resposta de tuviras a indutores hormonais, se fazem necessárias.

A dinâmica folicular, bem como a preparação do endométrio para a gestação, é dependente do estabelecimento de vascularização adequada. Alguns estudos apontam para a importância do tratamento com eCG após o emprego de protocolos de IATF, de forma a aumentar as taxas de ovulação e prenhez, e para a uma possível propriedade angiogênica, influenciando o fluxo sanguíneo e a vascularização. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência do eCG na espessura e área do endométrio e miométrio, calibre e área da artéria uterina do corno ipsilateral e também na densidade vascular do endométrio e miométrio de vacas submetidas a tratamentos de sincronização (grupo controle), estimulação do folículo dominante e superovulação. Para tal, foram utilizadas 16 vacas mestiças de Nelore ciclando com escore corporal entre 2 e 3 que foram divididas em 3 grupos de acordo com tratamento hormonal: o grupo controle foi submetido apenas ao protocolo de sincronização da ovulação (n=5), o grupo estimulado recebeu 400 UI de eCG no dia 4 após início do protocolo (n=6) e o grupo superovulado recebeu 2000UI de eCG no dia 8 após início do tratamento (n=5). No dia 5 após a ovulação (p.o) foram realizados exames ultrasonográficos para mensuração do miométrio e endométrio dos cornos uterinos, bem como para análise do calibre da artéria uterina. Os animais foram abatidos, os úteros coletados no dia 6 p.o. e imediatamente fixados em paraformaldeido a 4%. Para análise da densidade vascular, foi realizada imunohistoquímica para o KDR com o intuito de marcação das células endoteliais e contagem dos vasos por estereologia. As espessuras e áreas, tanto do miométrio quanto do endométrio, não foram influenciadas pelos tratamentos. A artéria uterina nos animais superovulados apresentou maior calibre do que nos animais do grupo controle (p< 0,05). A densidade vascular do endométrio nos animais estimulados foi menor quando comparada à dos animais do grupo controle (p<0,05), e no grupo superovulado, a densidade vascular apresentou-se diminuída (p<0,05) no miométrio. Os resultados obtidos sugerem que o aumento de vascularização do endométrio após tratamentos com ECG, relatado em outros trabalhos, seja provavelmente influenciado pelo concepto e não exclusivamente pelo tratamento. Além disso, a influência do eCG no útero pode ser dependente tanto da dose quanto do estágio do ciclo estral. / Follicle dynamic, as well as the uterus preparation for gestation, is dependent of an adequate vascularization establishment. Currently, many studies point towards the importance of eCG treatment following fixed-time artificial insemination (FTAI), in a manner to improve ovulation and gestational rates. Moreover, eCG have been implicated in angiogenesis, leading to important changes in uterine blood flow and vascularization. Thus, the present study was designed to investigate the influence of eCG on the endometrial and myometrial thickness and area; on the caliber and area of the uterine artery of the ipsilateral horn; and, on endometrial and myometrial uterine vascular density of cows submitted to sincronization (control group), stimulation (stimulated group), and superovulatory (superovulated group) treatments. For that, we used 16 cows with body score between 2 and 3, randomly distributed into the 3 above described groups: the cows of the control group (n = 5) did not receive eCG, while the cows of the stimulated group (n = 6) and superovulated group 3 (n = 5) received, respectively, 400 UI and 2000 UI of eCG at days 4 and 8 after the protocol beginning. For endometrial and myometrial measurements, as well as for uterine artery caliber and area analysis, ultrasonographic evaluations were done at day 5 after ovulation. At day 6, the animals were slaughtered, the uterus were harvested and fixed in 4% paraformaldehyde. In order to analyze the vascular density, immunohistochemistry for KDR detection and blood vessels counting by stereology were performed. In all studied groups, treatments did not influence either uterine wall thickness or area. In the superovulated animals, the uterine artery presented higher caliber than in the control ones (P<0.05). Endometrial vascular density of stimulated animals in the ipsilateral uterine horn was lower when compared to that of the control (P<0.05),and in the superovulated, vascular density was lower in the myometrium (P<0.05). These results suggest that the endometrial vascularization increase following eCG treatment, described by other groups, is probably influenced by the concept, not only by the treatment. Moreover, the influence of eCG in the uterus could be dependent of both the hormonal dosis and the estrous cycle phase.