Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_leandro_nizoli.pdf: 538110 bytes, checksum: 770c97bed302c0714288a9278ce94694 (MD5) Previous issue date: 2009-03-18 / Equine theileriosis is considered to be one of the most important parasitic diseases that affect horses, and has great economic impact on the equine industry. The disease is caused by the etiologic agent Theileria equi, which is classified as a hematozoan. The losses associated with equine theileriosis are related to clinical manifestation as well as restriction to international travel to positive horses. Chronic infected equines suffer the risk of the disease relapse which leads to losses in reproduction performance and are potentially disseminators of the disease. In the last years, studies on the immunologic diagnosis and vaccination against T. equi have focused to obtain distinct antigenic proteins. On the outer membrane of this protozoan, major surface proteins has been characterized and named as EMAs (equi merozoite antigen). Of these, EMA-1 has been used as antigen for diagnosis due to its conservation in diverse isolates. Its role as a potential immunogen has been well documented due its ability to stimulate a humoral response with production of specific antibodies in infected animals. Through this antibodies one can used as tool for immune diagnostic of this disease. EMA-1 is also a strong candidate to be use as a vaccine in the control of equine theileriosis. In this study we used the Pichia pastoris yeast as expression system for the production of the EMA-1 protein of T. equi and evaluated its antigenicity and immunogenicity. When tested for antigenicity, the recombinant protein was recognized by antibodies form chronic T. equi infected horses, suggesting that epitopes of the native were conserved in the recombinant protein. Also we were able to observe that this protein was immunogenic in mice. The data obtained in this study demonstrated that the yeast P. pastoris is an expression system of heterologous protein suitable for the production of EMA-1 from T. equi. / A Theileriose eqüina é considerada uma das principais doenças parasitárias que acometem os eqüinos, acarretando grande impacto econômico na equinocultura. A doença é causada pelo hematozoário Theileria equi. As perdas econômicas associadas à theileriose eqüina estão relacionadas tanto aos fatores clínicos, quanto à restrição ao trânsito internacional de animais soropositivos, já que animais portadores crônicos são passíveis de reagudizações, gerando perda de performance física e reprodutiva, e são potencialmente disseminadores da enfermidade. Nos últimos anos, os estudos sobre o diagnóstico imunológico e vacinação contra T. equi concentram-se na obtenção de frações antigênicas. Na membrana externa deste protozoário foram caracterizadas proteínas principais de superfície denominadas de EMAs (equi merozoite antigen). Dentre estas, a EMA-1 destaca-se como antígeno para diagnóstico em função de sua conservação entre diversos isolados. Seu papel também tem sido caracterizado como imunógeno por estimular forte resposta humoral com produção de anticorpos em animais infectados, podendo ser usado como ferramenta para imunodiagnóstico dessa doença. EMA-1 é também um potencial candidato como antígeno vacinal no controle da theileriose equina. Neste estudo utilizou-se o sistema eucariótico de expressão baseado na levedura metilotrófica Pichia pastoris, para a produção da proteína EMA-1 de T. equi e a avaliação quanto a sua antigenicidade e imunogenicidade. Quanto a sua antigenicidade, a proteína recombinante foi reconhecida por anticorpos de animais portadores crônicos de T. equi, sugerindo que epítopos nativos foram conservados na proteína recombinante. Também foi observado que a proteína recombinante foi capaz de gerar resposta imune em camundongos vacinados com esta proteína. Os dados obtidos neste estudo demonstram que a levedura P. pastoris é um sistema de expressão heterólogo adequado para a produção da proteína EMA-1 de T. equi, podendo ser utilizada como imunobiológico no desenvolvimento de testes diagnósticos e vacina recombinante.