Made available in DSpace on 2016-05-11T12:48:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Mestrado_Carmen-Rocha.pdf: 731130 bytes, checksum: 29e960d43071e471b2297aea9814048e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. / O ensaio de esterilidade é utilizado para avaliar a qualidade microbiológica de produtos farmacêuticos que requeiram esta característica. A Farmacopéia Brasileira recomenda a realização de até três testes para este ensaio e a caracterização dos contaminantes dos testes e do ambiente onde estes são realizados. Nesse estudo utilizamos a análise do perfil de fragmentação do DNA genômico por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) para avaliar 72 amostras bacterianas provenientes de testes de esterilidade de dois imunobiológicos (A e B) e do controle ambiental da área limpa onde os testes são realizados. Vinte e quatro 24 amostras de Enterobacter cloaceae provenientes de ensaios de esterilidade de 10 lotes do imunobiológico A analisados no período de 1998 a 2007 apresentaram três grupos clonais a, b, c. Dois lotes foram considerados insatisfatórios segundo a interpretação do ensaio de esterilidade recomendada pela Farmacopéia Brasileira. O grupo clonal a foi encontrado na maioria dos lotes analisados e considerados satisfatórios e em um dos lotes considerados insatisfatórios pela Farmacopéia Brasileira. A espécie E. cloaceae não foi isolada do controle ambiental das áreas limpas onde são realizadas as análises. Os bastonetes Gram positivos esporulados (BGPE) analisados foram provenientes de testes de esterilidade do imunobiológico B e de áreas limpas identificados no período de 2005 a 2007. A análise das amostras de BGPE mostrou que apenas três grupos clonais estavam presentes em lotes diferentes. O grupo clonal 3 foi encontrado em dois lotes considerados insatisfatórios no ano de 2006 e o grupo clonal 14 nos lotes 22 e 23 produzidos no ano de 2007 e considerados satisfatórios. Apenas um grupo clonal, o 10 foi encontrado em amostras bacterianas provenientes do imunobiológico B e no controle ambiental. / The sterility test is applied to evaluate the microbiological quality of pharmaceutical products. The Brazilian Pharmacopoeia recommends up to three tests for this assay and the characterization of contaminants eventually isolated from the tests and the environment where the assay was performed. In this study, we used pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) to evaluate 72 bacterial isolates from sterility tests of two imunobiologicals (A and B) and from clean room environments where the tests were carried out. Twenty four Enterobacter cloacae isolates from sterility tests of 10 batches of the immunobiological A, carried out on the period from 1998 to 2007, showed three clonal groups a, b and c. Two batches were considered unsatisfactory in according to interpretation of the sterility test recommended by Brazilian Pharmacopoeia. The clonal group a was found in the majority of the analyzed batches and one of the batch considered unsatisfactory by Brazilian Pharmacopoeia. This bacterial species was never isolated from clean room environments where tests are performed. Endospore-forming Gram positive rods (BGPE) were isolated from sterility tests of the immunobiological B and from clean room environments identified during 2005 to 2007. The analysis of the BGPE isolates showed only three clonal groups were present in different batches. The clonal group 3 was found in two batches considered unsatisfactory in 2006 and the clonal group 14, in the batches 22 and 23 produced in 2007 which were considered satisfactory. Only one clonal group, 10, was found in bacterial samples from immunobiological B and in clean room environmental. The PFGE analysis seems to be a valuable tool to assist the interpretation of sterility tests and to evaluate batches of products analyzed at INCQS/FIOCRUZ, allowing the release of safer results to support the procedures of the sanitary surveillance.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-14T17:52:45Z No. of bitstreams: 1 luiz-antonio-da-cunha.pdf: 2013128 bytes, checksum: 0e5dc52de1e8d6ce612c04c856313ff7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-14T17:52:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luiz-antonio-da-cunha.pdf: 2013128 bytes, checksum: 0e5dc52de1e8d6ce612c04c856313ff7 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Um acordo internacional de transferência de tecnologia, firmado em 2003, entre a FIOCRUZ e a GlaxoSmithKline permitiu o acesso de Bio-Manguinhos a um moderno processo produtivo da vacina tríplice viral (TVV) contra o sarampo, a caxumba e a rubéola. A produção dessa vacina é parte do compromisso de Bio-Manguinhos com o programa nacional de auto-suficiência em imunobiológicos, tido como uma meta prioritária da política de saúde pública do governobrasileiro. A tecnologia aplicada para a produção da TVV envolve o uso de células MRC-5 como substrato celular para a produção de vírus vacinais da rubéola, particularmente da cepa Wistar RA27/3. A estirpe MRC-5 é reconhecida como um dos mais importantes substratos celulares para a produção de vacinas virais, e também tem sido adotada como modelo de estudo para senescência celular in vitro. A senescência celular é um estágio fisiológico complexo pelo qual, invariavelmente, qualquer população de células somáticas normais passa após atingir um determinado número de mitoses. Esseestágio fisiológico é caracterizado nas células diplóides pela contenção da capacidade de se multiplicar e pelo desenvolvimento de alterações morfológicas peculiares, especialmente quando cultivadas in vitro. Com o objetivo de aprimorar omonitoramento de estirpes de células diplóides humanas (HDCS – do inglês Human Diplóide Cells Strains) e contribuir para o estabelecimento da base de conhecimento necessário para a futura aplicação no processo de produção de TVV em Bio-Manguinhos, nós avaliamos culturas de células MRC-5 condicionadas com carnosina, em três diferentes aspectos: cinética de crescimento, propagação da cepa vacinal, Wistar RA27/3, do vírus da rubéola e a expressão do marcador biológico de senescência, a enzima β-galactosidase AS (β-gal AS). A avaliação do potencial antioxidante e antisenescente atribuído a carnosina, um dipeptídeo ubíquo à fisiologia de todos os animais superiores, sobre as células MRC-5 pode contribuir para aprimorar os procedimentos de qualificação e controle de células diplóides associados à produção de vacinas, e aindaservir para o desenvolvimento de novos produtos e a pesquisa científica. Aspectos dacinética de crescimento da cultura de células condicionadas com carnosina, observados neste estudo, são discutidos sob o ponto de vista da teoria do compromisso celular com a senescência. Todas as culturas de células MRC-5 avaliadas demonstraram a expressão da β-gal AS através do uso de X-Gal ou ONPG como substrato. Não encontramos variações no perfil de propagação de cepas vacinais do vírus da rubéola que possam ser associadas ao condicionamento das células MRC-5 com carnosina, nas condições testadas. / An international technology transfer agreement established between FIOCRUZ and GlaxoSmithKline in 2003, will provide Bio-Manguinhos with access to a modern manufacturing process for the production of the triple viral vaccine against measles, mumps and rubella (TVV). The production of TVV forms part of the Bio-Manguinhos commitment to the self-sufficiency national programin immunobiologicals, within the Brazilian government public health prioritized policies. The TVV technology employs diploid cells derived from normal human lung tissue(MRC-5) as the substrate for production of the attenuated rubella vaccine virus,Wistar RA27/3. The MRC-5 strain is one of the most important cellular substrates for viral vaccine manufacturing and in addition is widely used as a model for in vitrostudies of cell senescence. Cellular senescence is a physiological stage which normal somatic cells beyond certain duplication level go through, invariably. Such physiological stage is characterized by growth arrest and specific morphological changes, commonly, observed in diploid cells under in vitroculture environment. Aiming to contribute with the human diploid cells strains (HDCS) monitoring study and line up with the establishment of the necessaryknowledge base for the conduction of the TVV production process in Bio-Manguinhos, weevaluated MRC-5 cell cultures conditioned with carnosine under three different aspects: growth kinetics, propagation of the attenuated strain of rubella virus Wistar RA27/3 and the expression of the senescence bio-marker, SA β-Galactosidase. An evaluation of the antioxidant and antisenescence features attributed to carnosine, a dipeptide, ubiquitous to the physiology of all superior animals, over MRC-5 may contribute to the improvement of the qualification and control procedures in production of vaccines, product development and scientific research. Aspects of the growth kineticsof MRC-5 cells conditioned with carnosine observed in this study are discussed in relation to the cellular commitment theory. All MRC-5 tested demonstrated SA β-Galactosidase activity, as verified by enzyme processing of X-Gal or ONPG used as substrate. Additionally, no variations in the propagation profile of the attenuated rubella virus by treating cells with carnosine could be characterized in this study.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_leandro_nizoli.pdf: 538110 bytes, checksum: 770c97bed302c0714288a9278ce94694 (MD5) Previous issue date: 2009-03-18 / Equine theileriosis is considered to be one of the most important parasitic diseases that affect horses, and has great economic impact on the equine industry. The disease is caused by the etiologic agent Theileria equi, which is classified as a hematozoan. The losses associated with equine theileriosis are related to clinical manifestation as well as restriction to international travel to positive horses. Chronic infected equines suffer the risk of the disease relapse which leads to losses in reproduction performance and are potentially disseminators of the disease. In the last years, studies on the immunologic diagnosis and vaccination against T. equi have focused to obtain distinct antigenic proteins. On the outer membrane of this protozoan, major surface proteins has been characterized and named as EMAs (equi merozoite antigen). Of these, EMA-1 has been used as antigen for diagnosis due to its conservation in diverse isolates. Its role as a potential immunogen has been well documented due its ability to stimulate a humoral response with production of specific antibodies in infected animals. Through this antibodies one can used as tool for immune diagnostic of this disease. EMA-1 is also a strong candidate to be use as a vaccine in the control of equine theileriosis. In this study we used the Pichia pastoris yeast as expression system for the production of the EMA-1 protein of T. equi and evaluated its antigenicity and immunogenicity. When tested for antigenicity, the recombinant protein was recognized by antibodies form chronic T. equi infected horses, suggesting that epitopes of the native were conserved in the recombinant protein. Also we were able to observe that this protein was immunogenic in mice. The data obtained in this study demonstrated that the yeast P. pastoris is an expression system of heterologous protein suitable for the production of EMA-1 from T. equi. / A Theileriose eqüina é considerada uma das principais doenças parasitárias que acometem os eqüinos, acarretando grande impacto econômico na equinocultura. A doença é causada pelo hematozoário Theileria equi. As perdas econômicas associadas à theileriose eqüina estão relacionadas tanto aos fatores clínicos, quanto à restrição ao trânsito internacional de animais soropositivos, já que animais portadores crônicos são passíveis de reagudizações, gerando perda de performance física e reprodutiva, e são potencialmente disseminadores da enfermidade. Nos últimos anos, os estudos sobre o diagnóstico imunológico e vacinação contra T. equi concentram-se na obtenção de frações antigênicas. Na membrana externa deste protozoário foram caracterizadas proteínas principais de superfície denominadas de EMAs (equi merozoite antigen). Dentre estas, a EMA-1 destaca-se como antígeno para diagnóstico em função de sua conservação entre diversos isolados. Seu papel também tem sido caracterizado como imunógeno por estimular forte resposta humoral com produção de anticorpos em animais infectados, podendo ser usado como ferramenta para imunodiagnóstico dessa doença. EMA-1 é também um potencial candidato como antígeno vacinal no controle da theileriose equina. Neste estudo utilizou-se o sistema eucariótico de expressão baseado na levedura metilotrófica Pichia pastoris, para a produção da proteína EMA-1 de T. equi e a avaliação quanto a sua antigenicidade e imunogenicidade. Quanto a sua antigenicidade, a proteína recombinante foi reconhecida por anticorpos de animais portadores crônicos de T. equi, sugerindo que epítopos nativos foram conservados na proteína recombinante. Também foi observado que a proteína recombinante foi capaz de gerar resposta imune em camundongos vacinados com esta proteína. Os dados obtidos neste estudo demonstram que a levedura P. pastoris é um sistema de expressão heterólogo adequado para a produção da proteína EMA-1 de T. equi, podendo ser utilizada como imunobiológico no desenvolvimento de testes diagnósticos e vacina recombinante.

Made available in DSpace on 2015-08-19T13:52:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 16.pdf: 932960 bytes, checksum: b1d8e89ad8512d3f98cec245642f5d48 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos/Farmanguinhos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Um dos maiores problemas ambientais é a preocupação mundial com a manutenção da qualidade da água para o uso humano. O seu uso intensivo nos setores agrícolas e industriais tem reduzido a sua disponibilidade para o uso doméstico. Uma das alternativas para a redução da extração de água e da poluição hídrica é a prática do reúso. Embora o Brasil não possua uma legislação específica que incentive essa prática, algumas indústrias já possuem em sua política interna o reúso e/ou recuperação de água para a redução de seus custos de fornecimento e de descarte de águas residuárias. Este trabalho estudou a viabilidade de reúso direto das águas residuárias industriais provenientes do processo de produção de água purificada por osmose reversa do Centro Tecnológico de Vacinas (CTV) de Bio-Manguinhos/FIOCRUZ. Foi realizado um levantamento do consumo, da qualidade e do custo da água que abastece os diferentes setores do CTV bem como a qualidade e a quantidade dos rejeitos do sistema de osmose reversa (P1), do analisador de COT (P2) e do gerador de ozônio (P3). Embora esse assunto seja importante no âmbito ambiental, econômico e social, poucos artigos científicos foram encontrados nos principais bancos de dados consultados, principalmente nos termos de reúso direto no setor industrial farmacêutico. A produção de água purificada é a atividade que demanda maior quantidade de água seguida pelas torres de resfriamento e pela produção de vapor industrial. A qualidade dos rejeitos da osmose reversa foi superior a água que abastece os sistemas de refrigeração, além disso, o volume descartado equivale ao necessário para atender às necessidades desses sistemas.A redução no consumo estimado com a aplicação deste projeto poderá ser de até17% de toda água consumida pelo CTV correspondendo a uma economia bruta direta em torno de R$ 500.000,00 por ano. / The great environmental problem is a worldwide preoccupation with maintaining the water quality for human use. Its intensive use in the agricultural and industrial sectors has reduced its availability for domestic use. An alternative to reduce of water extraction and pollution is the reuse practice. Although Brazil has no specific legislation that encourages this practice, some industries already have in their internal politics for water reuse and/or recovery t o reduce their costs of supply and disposal of wastewater. This work studied the feasibility of direct reuse of industries wastewater from the water purified production process by reverse osmosis of the Technological Centre Vaccines (TCV) in Bio-Manguinhos/FIOCRUZ. A survey of consumption, quality and cost of water supplied to different sectors of the CTV and the quality and quantity of the wastewater of Reverse Osmosis System (P1), the TOC analyzer (P2) and the ozone generator (P3). Although this issue is important in environmental, economic and social context, few articles were found in the main banks of data consulted, especially in terms of direct reuse in the pharmaceutical industry. The production of purified water is the activity that demands more water followed by cooling towers and the production of industrial steam. The quality of the wastewater from the reverse osmosis was superior to that water that supplies cooling systems, furthermore, the volume discarded equal to that necessary to meet the needs of these systems. The reduction in the estima ted consumption with the application of this project may be up to 17% of all water consumed by CTV corresponding to a direct gross savings of around R$ 500,000.00 per year.