Submitted by Natalie Mendes (nataliermendes@gmail.com) on 2015-07-28T23:56:29Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o_?ngara Keisle S?o Paulo Barretto Miranda.pdf: 984548 bytes, checksum: 4e0290fe54977157fb35593ccdb7ef99 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-28T23:56:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o_?ngara Keisle S?o Paulo Barretto Miranda.pdf: 984548 bytes, checksum: 4e0290fe54977157fb35593ccdb7ef99 (MD5) Previous issue date: 2014-03-25 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Bromelain is an enzyme complex with great therapeutic importance attributed both to it?s proteolytic activity, as the non-proteolytic components in the extract. Thus, the enzyme was extracted from different parts of Ananas comosus var comosus, from two pineapple with different codes: BGA 771 and BGA 772. The proteolytic and specific activities of bromelain from each part (stem, crown, peel, pulp and leaves) were investigated as well as their kinetic characteristics by measuring the optimum temperature and the optimum pH, and finally was studied it?s effect in vitro on murine melanoma B16F10 cells. In BGA 771, the highest proteolytic activity was found in the stem (81.10 mg/mL/min), while the highest specific activity was found in the pulp and peel (1983.44 and 1822.33 UA/mg of bromelain, respectively). In general, the optimum temperature varied between of 50 to 80 ?C and pH between 6 and 8. Bromelain all parts were effective more than 50% in inhibiting the melanoma B16F10 cells proliferation after 48 hours. The most significant inhibition was find on crown bromelain with 72.86%, and a time-dependent effect was observed on crown bromelain. At BGA 772 the higher activity was find in the pulp (35.58 mg/mL/min and 1446.60 UA/mg bromelain). The optimum temperature in the extracts ranged between 40 and 90 ?C, while the pH 6 was the best for all parties, while the leaf bromelain had two great points: 6 and 8. Only the bromelain peel was able to inhibit the melanoma B16F10 proliferation of, being 66.37% after 48 hours of contact, and a dose-dependent activity was observed. / A bromelina ? um complexo enzim?tico de grande import?ncia terap?utica, atribu?da tanto ? sua atividade proteol?tica, como aos componentes n?o proteol?ticos contidos no extrato. Dessa forma, a enzima foi extra?da de diferentes partes de Ananas comosus var comosus, a partir de dois abacaxizeiros com identifica??es distintas: BGA 771 e BGA 772. Foram investigadas as atividades proteol?tica e espec?fica da bromelina de cada parte (caule, coroa, casca, polpa e folha), bem como suas caracter?sticas cin?ticas atrav?s da medida da temperatura e do pH ?timos, investigando-se, por fim, o seu efeito in vitro sobre c?lulas tumorais de melanoma murino B16F10. No BGA 771, a maior atividade proteol?tica foi encontrada no caule (81,10 ?g/mL/min), enquanto a maior atividade espec?fica foi encontrada na polpa e na casca (1983,44 e 1822,33 UA/mg de bromelina, respectivamente). De um modo geral, a temperatura ?tima variou entre as partes de 50 a 80 ?C e o pH ?timo entre 6 e 8. A bromelina de todas as partes foi eficaz em inibir a prolifera??o das c?lulas de melanoma B16F10 ap?s 48 horas em mais de 50%, sendo a da coroa a mais significativa, com 72,86% de inibi??o, tendo sido observada uma atividade tempo-dependente. No BGA 772, as maiores atividade foram encontradas na polpa (35,58 ?g/mL/min e 1446,60 UA/mg de bromelina). A temperatura ?tima nos extratos variou entre 40 e 90?C, enquanto o pH 6 foi o melhor para todas as partes, exceto para a folha que teve dois pontos ?timos: 6 e 8. Somente a bromelina da casca foi capaz de inibir a prolifera??o do melanoma B16F10, sendo de 66,37% ap?s 48 horas de contato, tendo sido observada uma atividade dose-dependente.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Brazil has got a great economic potential with regard to native medicinal species. The conservation of the plant genetic diversity available is, therefore, of paramount importance. However, the greater part of these species has not been sufficiently studied, mainly in terms of their cytotoxic and mutagenic potential. Among the Brazilian native medicinal plants that have been little studied is Peltodon longipes Kunth ex Benth. a plant popularly known in Brazil as hortelã-do-campo , which is used as stimulant, emmenagogue, antiseptic and anti-inflammatory. To encourage the use of native medicinal resources of a country are necessary studies of characterization of germplasm of species and also provide that they are included in a breeding program, while optimizing the use in folk medicine through cytotoxicity and genotoxicity studies. Thus, the purpose of this study was to estimate the pollen viability of P. longipes, to evaluate the genotoxicity of the aqueous extracts of this species as well to determine phenolic compounds these extracts using chromatographic analysis. The pollen viability of 15 P. longipes accessions collected in 5 municipalities in the state of Rio Grande do Sul, Brazil, was evaluated by using 3 staining methods: 2% acetic orcein, 2% acetic carmine, and Alexander s stain. The genotoxicity of the aqueous extracts of two accessions, i.e., one collected in Santa Maria and the other one in Tupanciretã, was determined by the Allium cepa L. test, whereas the analysis of the phenolic compounds was carried out by high-performance liquid chromatography. Of the 15 accessions of P. longipes, 13 showed high pollen viability, with values above 75% and the methods using 2% acetic carmine and Alexander reactive were more efficient for technical in species. All extracts presented antiproliferative potential, even though this effect was significantly higher in the extracts of the accession collected in Tupanciretã. This accession also showed a higher amount of rosmarinic acid and kaempferol, which may be linked to the effects observed in these extracts. Only the extracts of the accession collected in Santa Maria showed genotoxic potential. / O Brasil possui um imenso potencial econômico relacionado a espécies medicinais nativas, por isso é de extrema importância a conservação da diversidade genética vegetal disponível. No entanto, a grande maioria dessas espécies não foi suficientemente estudada no que se refere ao seu potencial citotóxico e mutagênico. Dentre as plantas medicinais nativas do Brasil, ainda pouco estudadas, está Peltodon longipes Kunth ex Benth. (hortelã-do-campo) utilizada como estimulante, emenagoga, antiséptica e antinflamatória. Para potencializar a utilização dos recursos medicinais nativos de um país são indispensáveis estudos de caracterização do germoplasma das espécies e também propiciar que as mesmas sejam incluídas em um programa de melhoramento genético, além de otimizar o uso na medicina popular através de estudos de citotoxicidade e genotoxicidade. Dentro desse contexto, o objetivo deste estudo foi estimar a viabilidade polínica de P. longipes, avaliar a genotoxicidade dos extratos aquosos da espécie, bem como determinar os compostos fenólicos desses extratos por meio de análise cromatográfica. Para tanto, a viabilidade polínica de 15 acessos de P. longipes, coletados em cinco municípios do Rio Grande do Sul, Brasil, foi estimada a partir de três métodos colorímetros: orceína acética 2%, carmim acético 2% e reativo de Alexander. A genotoxicidade dos extratos aquosos de dois acessos, um de Santa Maria e outro de Tupanciretã (RS), foi determinada através do teste de Allium cepa L., enquanto a análise dos compostos fenólicos foi realizada por meio de cromatográfica líquida de alta eficiência. Dos 15 acessos de P. longipes, 13 apresentaram alta viabilidade polínica, com valores acima de 75% e os métodos utilizando carmim acético 2% e reativo de Alexander foram mais eficientes para a técnica na espécie. Todos os extratos de P. longipes demonstraram potencial antiproliferativo, embora o efeito tenha sido significativamente maior nos extratos do acesso de Tupanciretã. Esse acesso também apresentou maior quantidade de ácido rosmarínico e canferol, o que pode estar relacionado com os efeitos observados nesses extratos. Somente os extratos do acesso de Santa Maria demonstraram potencial genotóxico.