Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-06-19T13:08:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1210163 bytes, checksum: 95611e42b2fda44b48bbe7fdec603f37 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T13:08:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1210163 bytes, checksum: 95611e42b2fda44b48bbe7fdec603f37 (MD5) Previous issue date: 2005-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O estudo detalhado do processo de formação dos embriões somáticos e sua comparação morfológica com embriões zigóticos pode fornecer informações relevantes para o aumento ou a manipulação da resposta embriogênica e uma melhor conversão dos embriões somáticos em plantas, uma vez que a análise comparativa da estrutura e morfologia dos embriões somático e zigótico podem apontar falhas do processo da embriogênese somática. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo o estudo morfoanatômico e histoquímico dos embriões somáticos e zigóticos de jabuticaba- branca, a fim de determinar as possíveis causas da baixa conversão em plântulas de embriões somáticos de jabuticabeiras. Foram coletados frutos maduros de jabuticaba- branca, sendo as sementes retiradas manualmente. Depois de retirada a mucilagem, parte das sementes foi utilizada para extração do embrião zigótico para o estudo morfoanatômico e histoquímico e parte para obtenção de embriões somáticos. Estes embriões foram obtidos “in vitro”, a partir de cotilédones de embriões zigóticos. Para o estudo anatômico e histoquímico, o material vegetal foi fixado em FAA50% e estocado em etanol 70%. O material vegetal foi incluído em glicol-metacrilato e seccionado transversal e longitudinalmente, em micrótomo rotativo, com 6 μm de espessura. As lâminas com os cortes foram submetidas ao azul-de-toluidina para metacromasia e ao regente de lugol, para detecção de amido, e montadas em resina sintética. Os cortes foram analisados e fotografados em fotomicroscópio com sistema U-photo, câmera e microcomputador com o software Spot-Basic. Para a microscopia eletrônica de varredura, embriões somáticos foram fixados em glutaraldeído 3%, em tampão cocodilato de sódio 0,1 M a 4 oC, desidratados em série etanólica, seguida de secagem em ponto crítico de CO2 líquido. As amostras foram preparadas nos suportes, cobertas com ouro, observadas e fotografadas em microscópio eletrônico de varredura. Análises histológicas apontaram desenvolvimento dos pró-embriões, os quais dão origem a embriões somáticos morfologicamente semelhantes a embriões zigóticos, porém os embriões zigóticos apresentam um procâmbio bem mais desenvolvido e grande quantidade de material de reserva e tamanho 10 vezes maior que os embriões somáticos. Nas análises histológicas dos embriões somáticos, observaram-se diversas anomalias, o que impediu a conversão desses embriões em plântulas. Além dessas anomalias, a falta de meristema apical e o procâmbio bem menos desenvolvido do que nos embriões zigóticos também colaboraram com a baixa conversão em plântulas. As análises histoquímicas dos embriões somáticos e zigóticos comprovaram que o material de reserva de ambos é o amido, porém, nos embriões somáticos, a quantidade de amido é menor e de ocorrência esporádica, sendo uma das causas da baixa conversão em plântulas. Através das análises histológicas, observou-se que os embriões somáticos passam pelos diferentes estádios de desenvolvimento globular, cordiforme, torpedo e cotiledonar, à semelhança dos embriões zigóticos. Existem semelhanças na morfologia dos embriões somáticos e zigóticos, ambos com desenvolvimento de um par de cotilédones e eixo embrionário reduzido. / The detailed study of somatic embryo formation and its morphological comparison with zygotic embryos can elicit relevant information to the increase or manipulation of the embryogenic response and a better conversion of somatic embryos to plants, once the comparative analysis of the structure and morphology of the somatic and zygotic embryos can show defects in somatic embryogenesis. Therefore, the objective of the present work was the morphoanatomical and histochemical study of somatic and zygotic embryos of white-jaboticaba, in order to determine the possible causes of the low conversion of jaboticaba somatic embryos to plantlets. Ripe fruits were collected from white-jaboticaba trees, with seeds removed by hand. After removing the mucilage, part of the seeds was used for zygotic embryo extraction for morphoanatomical and histochemical studies, and part for obtaining somatic embryos. "In vitro" somatic embryos were obtained from cotyledons of zygotic embryos. The material was fixed in FAA50% and stored in 70% ethanol for anatomical and histochemical studies. The material was embedded in glycol methacrylate and 6 μm- thick sections were transverse and longitudinally cut using a rotating microtome. The sections collected on glass slides and stained in toluidine blue, and lugol for starch detection, were mounted in synthetic resin. The sections were analyzed and photographed in a U-photo system light microscope, camera and microcomputer with the Spot-Basic software. For scanning electron microscopy, somatic embryos were fixed in 3% glutaraldehyde in 0.1 M sodium cacodylate buffer at 4 oC, dehydrated through a graded ethanol series, followed by liquid CO2 critical point drying. The samples were mounted on the supports, coated with gold, observed and photographed in a scanning electronic microscope. The histological examination confirmed the development of pro- embryos, from which somatic embryos morphologically similar to zygotic embryos were produced, however the zygotic embryos presented a well developed procambium, a large amount of storage reserves and were tenfold larger than the somatic embryos. Histological analyses of somatic embryos showed several anomalies, which hindered the conversion of those embryos to plantlets. Besides the anomalies, the lack of apical meristem and the much less procambium developed than in the zygotic embryos also contribute to the low conversion to plantlets. The histochemical analyses of somatic and zygotic embryos proved that the storage reserves in both is starch, however, in somatic embryos, the amount of starch is smaller and of sporadic occurrence, being one of the causes of the low conversion to plantlets. Histological analyses showed that somatic embryos progress through different stages of development such as globular, heart shape, torpedo and cotyledonary, similar to zygotic embryos. The morphology of somatic and zygotic embryos is similar, both developing a pair of cotyledons and reduced embryonic axis.

The conservation of the coconut palm has been investigated in recent years by research organizations, public and private. These studies have concentrated on obtaining conservation protocols in vitro using slow growth and cryopreservation. Storage as a means of maintaining the viability of pollen, it is important for the preservation of genetic variability, facilitates the exchange of germplasm and contributes greatly to the generation of variability obtained from artificial crosses increasing the efficiency of breeding programs. The objective of this work was to study the effect of mannitol and abscisic acid (ABA) on growth of seedlings of coconut dwarf accessions for conservation purposes, and in vivo studies of the viability and storage conditions of pollen grains. For the study of conservation by slow growth were used mature zygotic embryos of Gramame Red Dwarf (AVG) and Malayan Yellow Dwarf (AAM). The coconut embryos were inoculated in culture medium Y3 (Eeuwens, 1976) supplemented with 30 g L-1 sucrose, gelled with 0.7% agar in presence of 2.5 g L-1 of activated charcoal. Were tested the following concentrations of mannitol: 0; 0.1; 0.2, 0.3 and 0.4 M. In other experiment was tested the following ABA concentrations: 0, 10, 20, 30 and 40 mM. The 0.1 and 0.2 M mannitol reduced the plantlets length of AAM and AVG accessions, respectively at 180 and 270 days of cultivation. Concentrations above 20 μM ABA were viable to inhibit the plantlets growth to 180 and 270 days. The ABA concentrations tested not inhibit the access AVG growth. For the study of determining the culture medium in germination of pollen grains, it was evaluated four culture media: Brewbaker and Kwack (1983) modified by Sousa et al. (2010); Lora et al. (2006); Sousa et al. (1998) and Sousa et al. (1998) modified by the author, in different times: 0, 24, 48 and 72 hours. The Lora culture medium promoted the major in vitro germination of AVeJBr pollen grains. Pollen grains of AVeJBr access showed viability up to 72 hours (3 days). The condition of storage at -20°C and -80°C promotes more viable pollen germination of AVC access up to 60 days. The condition of storage at -196°C promotes greater availability of pollen germination by AVeJBr access up to 60 days. / A conservação do coqueiro tem sido alvo de estudos nos últimos anos por organizações de pesquisa pública e privada. Essas pesquisas têm se concentrado na obtenção de protocolos por crescimento lento ou criopreservação. O armazenamento, como meio de manutenção da viabilidade do pólen, é importante para a preservação da variabilidade genética, facilita o intercâmbio de germoplasma e contribui muito na geração de variabilidade obtida através de cruzamentos artificiais aumentando a eficiência dos programas de melhoramento genético. O objetivo do trabalho foi de estudar o efeito do manitol e do ácido abscísico (ABA) no crescimento de plântulas de acessos de coqueiro anão para fins de conservação, além de estudos da viabilidade in vivo e condições de armazenamento de grãos de pólen. Para o estudo de conservação por crescimento lento foram utilizados embriões zigóticos maduros de acessos de coqueiro anão vermelho de Gramame (AVG) e anão amarelo da Malásia (AAM) e para estudos da viabilidade in vivo e condições de armazenamento de grãos de pólen o acesso anão verde de Jiqui do Brasil (AVeJBr). Os embriões foram inoculados em meio de cultura Y3 com 30 g L-1 de sacarose, geleificado com 0,7% de ágar na presença de 2,5 g L-1 de carvão ativado. Foram testadas as seguintes concentrações de manitol: 0; 0,1; 0,2; 0,3 e 0,4 M. Em outro ensaio o ABA foi adicionado ao meio de cultura nas concentrações de 0; 10; 20; 30 e 40 μM. As concentrações de 0,1 e 0,2 M de manitol reduziram o comprimento da parte aérea para os acessos AAM e AVG, respectivamente aos 180 e 270 dias de cultivo. Concentrações acima de 20μM do ABA foram viáveis para inibir o crescimento de plântulas aos 180 e 270 dias. O acesso AVG não sofreu inibição do comprimento da parte aérea, quando concentrações de ABA foram adicionadas ao meio de cultura. Foram avaliados quatro meios de cultura para germinação in vitro do acesso AVeJBr: Brewbaker & Kwack (1983) modificado por Sousa et al. (2010); Lora et al. (2006); Sousa et al. (1998) e Sousa et al. (1998) modificado pelo autor, em diferentes tempos: 0, 24, 48 e 72 horas. O meio de cultura de Lora promoveu a maior germinação de grãos de pólen do acesso AVeJBr. Grãos de pólen de coqueiro AVeJBr apresentaram viabilidade média, sob temperatura ambiente, até 72 horas (3 dias). A condição de armazenamento a -20°C e -80°C promove maior viabilidade de grãos de pólen por germinação do acesso AVC até os 60 dias. A condição de armazenamento a -196°C promove maior viabilidade de grãos de pólen por germinação do acesso AVeJBr até os 60 dias.

The conservation of the coconut palm has been investigated in recent years by research organizations, public and private. These studies have concentrated on obtaining conservation protocols in vitro using slow growth and cryopreservation. Storage as a means of maintaining the viability of pollen, it is important for the preservation of genetic variability, facilitates the exchange of germplasm and contributes greatly to the generation of variability obtained from artificial crosses increasing the efficiency of breeding programs. The objective of this work was to study the effect of mannitol and abscisic acid (ABA) on growth of seedlings of coconut dwarf accessions for conservation purposes, and in vivo studies of the viability and storage conditions of pollen grains. For the study of conservation by slow growth were used mature zygotic embryos of Gramame Red Dwarf (AVG) and Malayan Yellow Dwarf (AAM). The coconut embryos were inoculated in culture medium Y3 (Eeuwens, 1976) supplemented with 30 g L-1 sucrose, gelled with 0.7% agar in presence of 2.5 g L-1 of activated charcoal. Were tested the following concentrations of mannitol: 0; 0.1; 0.2, 0.3 and 0.4 M. In other experiment was tested the following ABA concentrations: 0, 10, 20, 30 and 40 mM. The 0.1 and 0.2 M mannitol reduced the plantlets length of AAM and AVG accessions, respectively at 180 and 270 days of cultivation. Concentrations above 20 μM ABA were viable to inhibit the plantlets growth to 180 and 270 days. The ABA concentrations tested not inhibit the access AVG growth. For the study of determining the culture medium in germination of pollen grains, it was evaluated four culture media: Brewbaker and Kwack (1983) modified by Sousa et al. (2010); Lora et al. (2006); Sousa et al. (1998) and Sousa et al. (1998) modified by the author, in different times: 0, 24, 48 and 72 hours. The Lora culture medium promoted the major in vitro germination of AVeJBr pollen grains. Pollen grains of AVeJBr access showed viability up to 72 hours (3 days). The condition of storage at -20°C and -80°C promotes more viable pollen germination of AVC access up to 60 days. The condition of storage at -196°C promotes greater availability of pollen germination by AVeJBr access up to 60 days. / A conservação do coqueiro tem sido alvo de estudos nos últimos anos por organizações de pesquisa pública e privada. Essas pesquisas têm se concentrado na obtenção de protocolos por crescimento lento ou criopreservação. O armazenamento, como meio de manutenção da viabilidade do pólen, é importante para a preservação da variabilidade genética, facilita o intercâmbio de germoplasma e contribui muito na geração de variabilidade obtida através de cruzamentos artificiais aumentando a eficiência dos programas de melhoramento genético. O objetivo do trabalho foi de estudar o efeito do manitol e do ácido abscísico (ABA) no crescimento de plântulas de acessos de coqueiro anão para fins de conservação, além de estudos da viabilidade in vivo e condições de armazenamento de grãos de pólen. Para o estudo de conservação por crescimento lento foram utilizados embriões zigóticos maduros de acessos de coqueiro anão vermelho de Gramame (AVG) e anão amarelo da Malásia (AAM) e para estudos da viabilidade in vivo e condições de armazenamento de grãos de pólen o acesso anão verde de Jiqui do Brasil (AVeJBr). Os embriões foram inoculados em meio de cultura Y3 com 30 g L-1 de sacarose, geleificado com 0,7% de ágar na presença de 2,5 g L-1 de carvão ativado. Foram testadas as seguintes concentrações de manitol: 0; 0,1; 0,2; 0,3 e 0,4 M. Em outro ensaio o ABA foi adicionado ao meio de cultura nas concentrações de 0; 10; 20; 30 e 40 μM. As concentrações de 0,1 e 0,2 M de manitol reduziram o comprimento da parte aérea para os acessos AAM e AVG, respectivamente aos 180 e 270 dias de cultivo. Concentrações acima de 20μM do ABA foram viáveis para inibir o crescimento de plântulas aos 180 e 270 dias. O acesso AVG não sofreu inibição do comprimento da parte aérea, quando concentrações de ABA foram adicionadas ao meio de cultura. Foram avaliados quatro meios de cultura para germinação in vitro do acesso AVeJBr: Brewbaker & Kwack (1983) modificado por Sousa et al. (2010); Lora et al. (2006); Sousa et al. (1998) e Sousa et al. (1998) modificado pelo autor, em diferentes tempos: 0, 24, 48 e 72 horas. O meio de cultura de Lora promoveu a maior germinação de grãos de pólen do acesso AVeJBr. Grãos de pólen de coqueiro AVeJBr apresentaram viabilidade média, sob temperatura ambiente, até 72 horas (3 dias). A condição de armazenamento a -20°C e -80°C promove maior viabilidade de grãos de pólen por germinação do acesso AVC até os 60 dias. A condição de armazenamento a -196°C promove maior viabilidade de grãos de pólen por germinação do acesso AVeJBr até os 60 dias.