Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7199_Micheli Sossai Spadeto.pdf: 1074523 bytes, checksum: 2ccb0312d06bd6cb23fd34afb8d8d8c0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-28 / CAPES / As técnicas de cultura de tecidos in vitro podem gerar subsídios à propagação e manutenção do germoplasma de espécies florestais de interesse, como Myrsine coriacea (Sw.) R.Br. ex Roem. & Schult. (Primulaceae). Essa espécie vem se destacando na indústria farmacêutica por produzir substâncias como o ácido mirsinóico B, de efeito antinociceptivo e a proteína lectina, com ação potencial na cura do câncer. Além disso, o estabelecimento in vitro de M. coriacea, é importante no fornecimento de material vegetal (folhas e raízes) para análises citogenéticas e de citometria de fluxo, que podem ser utilizadas para a caracterização cariotípica da espécie. Com base no exposto, o presente trabalho teve como objetivos: estabelecer um protocolo de propagação in vitro para M. coriacea, mensurar o conteúdo de DNA nuclear e determinar o número cromossômico dessa espécie. Desse modo, plântulas de M. coriacea foram obtidas por duas vias de propagação in vitro: germinação de sementes maduras e regeneração a partir de embriões zigóticos imaturos. A maior frequência de germinação (100%) foi observada para sementes previamente tratadas com HCl 10% e inoculadas em meio MS suplementado com 10.74 µM de ácido giberélico, no qual, as primeiras plântulas foram geradas após 41 dias de cultivo. Na embriogênese somática, utilizando embriões zigóticos imaturos, calos friáveis e embriões somáticos foram obtidos em meio MS suplementado com 4.44 µM de 6-benzilaminopurina, sendo que as plântulas foram regeneradas após 120 dias de cultivo. Folhas e raízes das plântulas obtidas in vitro foram utilizadas nas análises de citometria de fluxo, as quais revelaram uma variação intraespecífica no conteúdo de DNA nuclear de M. coriacea. Tal variação se confirmou nas análises citogenéticas, onde alguns indivíduos apresentaram 2n = 45 e outros 2n = 46 cromossomos. Tendo em vista a dioicia em M. coriacea, os dados sugerem que essa variação esteja relacionada à presença de cromossomos sexuais. Além disso, grupos de pares de cromossomos morfologicamente idênticos também foram observados indicando uma possível origem poliploide da espécie. Os resultados obtidos nesse estudo contribuem com estudos sobre determinação do sistema sexual, evolução e cultivo in vitro do gênero Myrsine. / In vitro tissue culture techniques can generate subsidies for the propagation and germplasm maintenance of forest species of interest such as Myrsine coriacea (Sw.) R. Br. Ex Roem. & Schult. (Primulaceae). This species has been highlighted in the pharmaceutical industry for producing substances like mirsinoic acid B, showing analgesic effects, and the lectin protein, with potential câncer - healing action. Thus, the establishment and in vitro culture of M. cor iacea is a potential alternative for the production of these substances and the generation of seedlings for reforestation programs. Besides the economic relevance, M. coriacea is a dioecious species with male and female representatives clearly defined in the reproductive period. Based on the above, this study aimed to establish a protocol for in vitro propagation of M. coriacea, measure the nuclear DNA content and determine the chromosome number of the species. M. coriacea seedlings were obtained by in vitro propagation thro ugh two routes: mature seed germination and regeneration from immature zygotic embryos. The highest frequency of germination (100%) was observed for seeds previously treated with 10% HCl and inoculated in medium MS (Murashige and Skoog) supplemented with 10.74 mM of gibberellic acid, in which the first seedlings were generated after 41 days of culture. In somatic embryogenesis using immature zygotic embryos, friable calli and somatic embryos were obtained in medium MS s upplemented with 4.44 μM of 6 - benzylaminopurine, and the plantlets were regenerated after 120 days of cultivation. Leaves and roots of the seedlings obtained in vitro were used in flow cytometric analysis, which revealed an intraspecific variation in nucle ar DNA content in M. coriacea. This variation was confirmed by cytogenetic analysis, xv where some individuals showed 2n = 45 and others 2n = 46 chromosomes. Given the dioecy of M. coriacea, the data suggest that this variation is related to the presence of sex chromosomes. Furthermore , groups of morphologically identical chromosome pairs were also observed indicating a possible polyploidy origin of the specie. The establishment of the in vitro culture protocol for M. coriacea enabled the mass propagation of the species and is useful for the large - scale production of plants with reduced time and space. The flow cytometry and cytogenetic data showed for the first time that the male and female individuals of M. coriacea differ in DNA content and chromosome number

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-17T12:36:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2648713 bytes, checksum: fd5018dff4d49561871e7d27e6ba1e9f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-17T12:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2648713 bytes, checksum: fd5018dff4d49561871e7d27e6ba1e9f (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A propagação do E. grandiflorum ocorre de forma sexuada e assexuada. Sendo que, a propagação por sementes apresenta ampla variabilidade genética com relação a muitas características importantes, incluindo ciclo de desenvolvimento, taxa de crescimento, formato da folha, coloração das flores, morfologia da inflorescência, sensibilidade ao etileno e indução ao florescimento que é influenciado pelo comprimento do dia e pela temperatura. A exposição de cultivares de lisianthus a temperaturas elevadas, durante e após a germinação das sementes pode levar à indução da formação da planta em roseta, inibindo o florescimento. Uma das técnicas utilizadas para evitar este distúrbio fisiológico é a exposição das sementes ou mudas a determinados períodos de frio, permite o crescimento e desenvolvimento normal das plantas, bem como diferenciação da gema vegetativa em reprodutiva. Por outro lado, programas de melhoramento também são direcionados no sentido de aumentar a tolerância da planta a temperaturas elevadas, bem como às doenças, à germinação das sementes e vigor das mudas, indução e uniformidade de floração e vida pós-colheita, tornando-se dessa forma necessário mais estudos na área de propagação sexuada e assexuada. Objetivou-se propor um protocolo eficiente de embriogênese somática a partir de explantes foliares e radiculares de E. grandifloru, caracterização morfo-anatômica e molecular do processo. Assim como, avaliar o efeito da vernalização das sementes na produção de mudas e no florescimento das cultivares Mariachi, Echo e Excalibur. Após os estudos de embriogênese somática realizados, recomenda-se o uso de 10 μM de 2,4-D na fase de indução embriogênica de explantes foliares e radiculares com permanência de 30 e 40 dias, respetivamente. Para a fase de diferenciação e maturação de embriões somáticos, recomenda-se o uso de 2 μM de BA no meio. Os estudos anatômicos realizados comprovaram que a origem de calos embriogênicos está associada às intensas divisões anticlinais e periclinais de células do sistema vascular. Após a transferência dos embriões somáticos para o meio de diferenciação e maturação observou-se germinação assincrônica e regeneração de vitroplantas. Os testes histoquímicos indicaram a presença e mobilização de compostos de reserva ao longo da embriogênese somática nas células. Foram isoladas duas sequências parciais de SERK, as quais constituem possíveis homólogos de SERK1 e SERK3, provavelmente associados com aquisição de competência embriogênica das células somáticas. O sinal de expressão de SERK somente foi observado com o início das divisões célulares e estendeu-se ao longo do desenvolvimento embriogênico sendo mais intenso nos pró-embriões. Os dados obtidos no presente trabalho podem auxiliar em futuras pesquisas para transformação genética, bem como, para identificação de outros genes marcadores da embriogênese somática, assim como dos fatores envolvidos na transição embriogênica. Para os tratamentos de vernalização de sementes de E. grandiflorum conclui-se que o uso de temperaturas de 5 e 10 °C levou à maior eficiência na indução do florescimento e redução do ciclo de cultivo. Recomenda-se vernalizar as sementes por 24 d a 5 °C para as cultivares Mariachi e Echo e para a cultivar Excalibur recomenda-se a vernalização das sementes por 36 d a 5 °C para a produção de mudas de lisianthus de alta qualidade. / The spread of E. grandiflorum occurs by sexual and asexual form. Propagation by seeds has great variability in many important features, including development cycle, growth rate, leaf shape, color of flowers, inflorescence morphology, ethylene sensitivity and induction of flowering which is influenced by day length and temperature. Exposure of lysianthus cultivars to high temperatures during and after seeds germination can lead to plant rosette formation and inhibition of flowering. One of the techniques used to avoid this physiological disorder is the exposure of the seeds or seedlings to periods of cold temperatures, allowing normal growth and development of plants, as well as differentiation of vegetative bud in reproductive one. On the other hand, breeding programs aimed to increase plant tolerance to high temperatures as well as to diseases, seed germination and seedling vigor, flowering induction and uniformity, and post-harvest life, leading to the need of more studies in the sexual and asexual propagation. This work aims to develop an efficient protocol of somatic embryogenesis from leaf and root explants of E. grandiflorum, by studying the cytological and molecular changes at different stages of embryogenic cultures. The study also evaluates the vernalization seeds effect in the production of seedlings and flowering of Mariachi, Echo and Excalibur cultivars. Our results suggest the use of 10 μM of 2,4-D in embryo induction phase of leaf and root explants for the period of 30 and 40 days, respectively. For the differentiation and maturation phase of somatic embryos we recommend the use of 2 μM BA. The anatomical studies performed showed that the origin of somatic embryogenesis is associated with intense anticlinal and peryclinal divisions of vascular system cells. We observed asynchronous germination and seedling regeneration after transferring the somatic embryos to the differentiation and maturation medium. The histochemical analysis indicated the presence and mobilization of storage compounds along the somatic embryogenesis in cells. Two partial sequences of potential homologs of SERK1 and SERK3 were isolated, and probably associated with acquisition of embryogenic competence of somatic cells. The SERK expression signal was only observed with the beginning of cell divisions and increased gradually along the embryonic induction with a strong signal in the pro-embryos. The results obtained in this study can be useful for future research in genetic transformation, as well as for the identification of other marker genes of somatic embryogenesis, and factors involved in embryogenic transition. For vernalization of lysianthus seeds treatments greater flowering induction efficiency and a reduction in crops lifecycle was obtained when using we conclude that the use of 5 or 10 °C temperatures. For Mariachi and Echo cultivars is recommended seed vernalization at 5 °C for 24 days f and for cv. Mariachi is recommended to vernalized at 5 °C for 36 day in order to obtain high quality lisianthus seedlings.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-03-10T17:17:55Z No. of bitstreams: 1 2016_PatríciaMonahCunhaBartos_Parcial.pdf: 450830 bytes, checksum: dd052eba7cbb7314b7b1801a4a1eed38 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-06T22:32:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_PatríciaMonahCunhaBartos_Parcial.pdf: 450830 bytes, checksum: dd052eba7cbb7314b7b1801a4a1eed38 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T22:32:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_PatríciaMonahCunhaBartos_Parcial.pdf: 450830 bytes, checksum: dd052eba7cbb7314b7b1801a4a1eed38 (MD5) / O objetivo do presente trabalho foi aperfeiçoar e avaliar estruturalmente e bioquimicamente as etapas de indução e multiplicação de linhagens embriogênicas de dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) originadas a partir de folhas imaturas de plantas adultas de alto rendimento. Para a indução, segmentos de folhas da variedade B35-17-29 foram inoculadas em meio de cultura de MS, contendo cinco concentrações (0, 225, 450, 675 e 900 μM) de ANA, 2,4-D e Picloram. Em seguida foram avaliadas duas regiões do palmito (apical e basal) na indução de calos em seis variedades (B35-29-32, B35-29-33, B35-17-33, B35-17-29, A25-15-11 e A25-14- 28). Para a multiplicação, duas consistências de meio (líquido e sólido) e dois tipos de explantes (calo primário e embriogênico) da variedade B35-17-29 foram testados. A caracterização morfoanatômica e a extração e quantificação dos açúcares, amido, ácidos graxos, aminoácidos, proteínas e a análise do perfil metabólico contidos em explantes foliares aos zero dias de cultivo, com raízes, com calos e que não reagiaram, além de calo primário, calo embriogênico e calo embriogênico formado, a partir de calo primário, foi realizada utilizando-se materiais do genótipo B35-17-33. Verificou-se que as melhores taxas de indução de calos da variedade B35-17-29 foram obtidas com a utilização de 2,4-D (900 μM) e Picloram (225 μM). Analisando os genótipos e as posições das folhas verificou-se que as melhores taxas foram observadas com a inoculação da parte apical em todos os genótipos testados. Na multiplicação, verificou-se que o maior ganho de biomassa fresca foi observado com a multiplicação de calos embriogênicos em meio líquido sob agitação. Anatomicamente, verificou-se que os explantes foliares utilizados para a indução de calos apresentavam epiderme unisseriada, com estômatos apenas na face abaxial da folha, presença de hipoderme bi-estratificada, em ambas as faces, com mesofilo dorsiventral. Foi possível observar o desenvolvimento inicial dos calos associados aos feixes vasculares em 100% dos propágulos analisados. Na formação do calo primário, as divisões celulares começam próximo aos feixes vasculares. Foi observado que calos primários são constituídos por células meristemáticas apenas em sua região mais interna, enquanto que calos embriogênicos são compostos inteiramente por este tipo celular. A partir do calo embriogênico, é verificada a formação de embriões somáticos. Com relação às análises bioquímicas, verificou-se que não há diferenças significativas entre as concentrações de açúcares nos segmentos foliares que se mostraram responsivos ou não à indução da embriogênese somática. Em contrapartida, folhas com calos apresentaram níveis inferiores de frutose, e maiores concentrações de amido, quando comparadas àquelas que não reagiram. Verificou-se que calos primários apresentaram maiores concentrações de açúcares e amido quando comparados com calos embriogênicos, diferindo também por apresentarem concentrações mais elevadas de sacarose. Com relação à concentração dos ácidos graxos, não houve diferença significativa entre explantes foliares com calos e aqueles que não reagiram. Os teores de aminoácidos apresentam um acúmulo gradativo durante a etapa da indução de calos. Em todo o cultivo, apenas calos embriogênicos apresentaram as maiores concentrações de prolina. Explantes foliares com zero dias de cultivo e aqueles que não reagiram apresentaram níveis intermediários de proteínas, sendo observada a redução das taxas com a formação dos calos primários e aumento quando no caso de tratarse de calos embriogênicos. / The main goal of the current project was enhancing and evaluating biochemically and structurally the induction and multiplication steps of the African oil palm tree’s (Elaeis guineensis Jacq.) embryogenic lineage spread originally from high performance adult plant’s half-grown leaves. In order to induct, leave’s cantle from the variety B35-17-29 were inoculated in MS cultivation environment, containing 5 concentrations (0, 225, 450, 675 e 900 μM) of NAA, 2,4-D and Picloram. Subsequently, two heart of palm’s zones were evaluated (apical and basal) during calluses induction in 6 varieties (B35-29-32, B35-29-33, B35-17-33, B35-17-29, A25-15- 11 e A25-14-28). For the multiplication, two media consistencies (solid and liquid) and two sorts of explant (primary and embryogenic callus) from B35-17-29’s variety were tested. The morphoanatomic characterization and the extraction and quantification of the sugars, starch, fatty acids, amino acids and proteins and the metabolic profile analysis contained in foliar explants on zero days of cultivation with roots, with callus and which did not react, besides primary callus, embryogenic callus and full-grown embryogenic callus, from primary callus, was carried out using materials from the genotype B35-17-33. It has been observed that the best calluses induction rates from the variety B35-17-29 were obtained with the use of 2,4-D (900 μM) and Picloram (225 μM). Analyzing the genotypes and the position of the leaves it’s been found that the best rates were observed with the inoculation of the apical part in all tested genotypes. On the multiplication, it was verified that the best fresh biomass gain was seen with embryogenic calluses multiplication in stirring liquid media. Anatomically, it was verified that the foliar explants used for calluses induction presented uniseriate epidermis, with stomas only on the abaxial face, bi-stratified hypodermis presence, on both faces, with dorsiventral mesophilic. It could be observed the initial development of the calluses associated to vascular bundles in 100% out of the propagating material analyzed. On the primary callus formation, the cell divisions begin around the vascular bundles. It’s been observed that the primary calluses are only made up of meristematic cells in its more internal area, whilst embryogenic calluses are fully made up of these cells. From the embryogenic callus, the somatic embryos formation is seen. Regarding the biochemical analysis, it’s verified that there are no considerable differences between the sugar content in the foliar segments which was proved to be responsive or not to the somatic embryogenic induction. On the other hand, leaves with calluses presented lower fructose levels and higher starch concentration when compared with those that didn’t react. It was found that primary calluses presented higher concentration of sugar compared with embryogenic calluses, which also differs for presenting higher sucrose concentration. In regard to fatty acids concentration, there wasn’t a major difference between foliar explants with calluses and those that didn’t react. The amino acids content presented gradual increase during the calluses induction step. In every cultivation, only embryogenic calluses presented higher proline concentration. Foliar explants with zero cultivation days and those that didn’t react presented intermediate protein levels, being noticed a reduction of the rates with the formation of primary calluses and enhancement in case of embryogenic calluses.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, 2013. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-01-05T15:26:42Z No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2016-01-06T14:44:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-06T14:44:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / O presente trabalho objetivou avaliar aspectos morfo-fisiológicos envolvidos na embriogênese somática e regeneração de plantas de dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) a partir do uso de meios de consistência líquida e de cultivos em suspensão. Embriões zigóticos obtidos das variedades C 2501, C 2528 e C 7201 foram induzidos em meio de MS com 450 μM de Picloram, 30 g.L-1 de sacarose, 0,5 g.L-1 de glutamina, 2,5 g.L-1 de carvão ativado e 2,5 g.L-1 de Phytagel, sendo subcultivados ou não a cada 30 dias. Foi avaliado o efeito da passagem de calos embriogênicos por meios de cultura líquido e o estabelecimento de cultivos em suspensão sobre o processo de embriogênese somática e regeneração de plantas, porções embriogênicas foram transferidas para dois meios liquido: MeA (MS com 5 μM de Picloram) e MeB (MS com 5 μM de 2,4-D). Nessa fase foi possível separar dois tipos de propágulos: aqueles que não desagregaram completamente e aqueles considerados estabelecidos em suspensão. Num primeiro experimento, porções embriogênicas não desagregadas em meio líquido sob agitação (calos embriogênicos) foram transferidas para três meios de diferenciação: M1: ½ MS; M2: MS com 40 μM de Picloram e; M3: MS com 12,3 μM de 2iP e 0,6 μM de ANA. A partir dos embriões somáticos diferenciados, a regeneração de plantas foi realizada em meio de MS desprovido de reguladores de crescimento. Posteriormente, as plantas foram individualizadas e transferidas para meio de MS dupla-fase com 57 μM de AIB para induzir a formação de raízes, antes de serem aclimatizadas e transferidas para casa de vegetação. As plantas foram analisadas por citometria de fluxo para verificar possíveis alterações no conteúdo genômico. Os resultados revelaram que a condição de subcultivar a cada 30 dias foi determinante para estimular a formação de calos embriogênicos (20,8%). Verificou-se que a passagem de calos embriogênicos por meio líquido na presença de 2,4-D (MeB) proporcionou aumentos significativos na percentagem de calos com embriões somáticos diferenciados. Entre os meios testados, o M1 foi o que proporcionou os melhores resultados, com até 58,2% dos calos com embriões somáticos diferenciados. A variedade C 2528 no meio M3 apresentou os maiores índices de calos com embriões somáticos (80,2%), embora tenha sido no meio M1 que essa variedade apresentou o maior número de embriões tipo torpedo por calo (8,3). Embriões somáticos oriundos dos meios M1 e M3 também foram os que apresentaram as maiores frequências de regeneração, com 29,5% e 31,7% respectivamente. Na fase de aclimatização a percentagem de sobrevivência das mudas foi de 95,2%, ao final de 90 dias. Nas plantas regeneradas, a citometria de fluxo não evidenciou diferenças significativas no conteúdo médio de DNA nuclear quando comparadas com as plantas controle, tendo sido observado valores na ordem de 2C = 3,89±0,16 pg. Num segundo experimento, calos embriogênicos da variedade C 2528, estabelecidos e multiplicados em meio líquido MeB por um período de 210 dias, sob forma de agregados celulares, foram utilizados para diferenciação de embriões somáticos. Para tanto, os agregados foram transferidos para meio líquido de MS com 0,1 mg.L-1 de 2,4-D onde permaneceram por 0, 30 e 60 dias. Após os respectivos tempos, os agregados foram plaqueados em meio semissólido com a mesma constituição do meio anterior e acondicionados na ausência e presença de luz por até 90 dias. Para avaliar a influência do tamanho dos agregados na formação de embriões somáticos e regeneração de plantas durante o plaqueamento, os agregados foram divididos em duas classes: classe 1 e classe 2 (2 mm e 4 mm, respectivamente). Após 120 dias em meio semissólido, embriões somáticos foram transferidos para meio de MS para regeneração de plantas. Neste experimento, análises anatômicas foram realizadas para caracterizar e descrever as etapas envolvidas na diferenciação dos agregados celulares. Verificou-se que acima de 90% de ambas as classes de propágulos produzidos progrediram após serem plaqueados em meio semissólido. Quanto a taxa de embriões somáticos diferenciados, não foram observadas diferenças significativas entre as classes 1 e classe 2 de agregados (18,8% e 13,1%, respectivamente). No entanto, quando se avaliou agregados da classe 1, após 30 dias de diferenciação em meio sob suspensão, verificou-se que até 33,3% dos explantes apresentaram diferenciação de embriões somáticos, com a maior quantidade de embriões somáticos no estádio torpedo (8,3 por explante). ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study is to evaluate morpho-physiological aspects involved in somatic embryogenesis and plant regeneration of the African oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) based on the use of liquid consistency media and cultures in suspension. Zygotic embryos of the varieties C 2501, C 2528 and C 7201 were induced in an MS medium with 450 μM Picloram, 30 g.L-1 sucrose, 0.5 g.L-1 glutamine, 2.5 g.L-1 activated charcoal and 2.5 g.L-1 Phytagel, being subcultured (or not) every 30 days. The effect of the passage of embryogenic calluses through a liquid culture media and the establishment of cultures in suspension on the processes of somatic embryogenesis and plant regeneration was evaluated. The embryogenic portions were transferred to two liquid media: MeA (MS with 5 μM Picloram) and MeB (MS with 5 μ2,4-D). In this stage it was possible to separate two types of propagules: those that did not completely disaggregate and those considered as established in suspension. In the first experiment, embryogenic portions that were not disaggregated in a liquid medium under agitation (embryogenic callus) were transferred to three differentiation media: M1 - ½ MS; M2 - MS with 40 μM Picloram and; M3 - MS with 12.3 μM 2iP and 0.6 μM NAA. Based on the differentiated somatic embryos, plant regeneration was performed in an MS medium devoid of growth regulators. Subsequently, the plants were individualized and transferred to a double-phase MS medium with 57 μM IBA to induce rooting, before being acclimatized and transferred to greenhouse. The plants were analyzed by flow cytometry to verify changes in genomic content. The results showed that the condition of subculturing every 30 days was a determining factor to stimulate the formation of embryogenic callus (20.8%). It was found that the passage of embryogenic calluses through a liquid medium in the presence of 2,4-D (MeB) provided significant increases in the percentage of calluses with differentiated somatic embryos. Among the media tested, M1 was the one that provided the best results, with up to 58.2% of the calluses with differentiated somatic embryos. The C 2528 variety in M3 medium showed the highest rates of calluses with somatic embryos (80.2%), although it was in the M1 medium that this variety exhibited the highest number of embryos per torpedo-shaped callus (8.3). Somatic embryos originating from M1 and M3 media were also the ones that showed the highest frequency of regeneration, with 29.5% and 31.7% respectively. During the acclimatization phase, the seedling survival percentage was 95.2% at the end of 90 days. In regenerated plants, flow cytometry showed no significant differences in the average nuclear DNA content when compared with control plants; values in the range of 2C = 3.89±0.16 pg were observed. In the second experiment, calluses of the C 2528 variety, established and multiplied in MeB liquid medium for a period of 210 days, in the form of cell aggregates, were used for the differentiation of somatic embryos. For both, the aggregates were transferred to liquid MS medium with 0.1 mg.L-1 2,4-D, where they remained for 0, 30 and 60 days. After the respective periods, the aggregates were plated in a semi-solid medium with the same constitution as the previous medium and placed in the absence and presence of light for up to 90 days. To assess the influence of the size of the aggregates on the formation of somatic embryos and regeneration of plants during plating, the aggregates were divided into two classes: Class 1 and Class 2 (2 mm and 4 mm, respectively). After 120 days in a semi-solid medium, the somatic embryos were transferred to an MS medium for plant regeneration. In this experiment, anatomical analyses were performed to characterize and describe the steps involved in the differentiation of the cell aggregates. It was found that over 90% of both classes of propagules produced progressed after being plated in a semi-solid medium. Regarding the rate of differentiated somatic embryos, no significant differences were observed between class 1 and class 2 of aggregates (18.8% and 13.1%, respectively). However, when the class 1 aggregates were evaluated, after 30 days of differentiation in a medium under suspension, it was found that 33.3% of the explants displayed differentiation of somatic embryos, with the highest number of embryos in the torpedo stage (8.3 per explant).

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:57:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9996_Dissertação de mestrado_Cristiana Torres Leite.pdf: 1087059 bytes, checksum: a830621e53c2439402a16faf39da62b8 (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / Assim como para outros taxa, diferente respostas morfogênicas in vitro (organogênese direta / indireta ou embriogênese) foram relatadas para as espécies de Passiflora, utilizando as mesmas condições ambientais in vitro. O número de cromossomos distintos entre algumas espécies do gênero Passiflora tem sido apontado como um possível fator genético relacionado com as diferentes respostas in vitro. Com base nesta hipótese, o presente estudo teve como objetivo avaliar as respostas in vitro de espécies de Passiflora que exibem diferentes números cromossômicos, níveis de ploidia e conteúdo de DNA nuclear para responder a seguinte pergunta: estes aspectos genômicos influenciam à resposta in vitro? Para isso, embriões zigóticos maduros (MZE) de cinco espécies, pertencentes a quatro subgêneros de Passiflora, foram inoculados em meio MS suplementado com 4.4 μM de benzilaminopurina (BAP) e nove concentrações de 2,4-ácido diclorofenoxiacético (4.53 - 144.96 μM 2,4-D). Corroborando com os estudos anteriores, diferentes respostas morfogênicas foram observadas sob as mesmas condições in vitro. Apenas calos friáveis (FC) foram obtidos a partir MZE de Passiflora coriacea Juss (2n = 12 cromossomos, 2C = 1,00 pg), Passiflora lindeniana TR & Planch (2n = 24, 2C = 2.42 pg) e Passiflora contracta Vitta (2n = 48 cromossomos, 2C = 4.78 pg). Plântulas foram recuperadas a partir de MZE de Passiflora foetida L. (2n = 20, 2C = 1.04 pg) e Passiflora miniata Vanderpl. (2n = 18, 2C = 3,40 pg) via organogênese indireta e embriogênese, respectivamente. Como em outros estudos, as plântulas foram regeneradas a partir de embriogênese somática indireta somente para as espécies de Passiflora com 2n = 18 cromossomos (P. 12 miniata). Apesar do número de cromossomos e do nível de ploidia relativamente mais baixo do que em outros taxa de Passiflora, o tamanho do genoma nuclear das espécies com 2n = 18 é relativamente mais elevado. Assim, as mudanças no cariótipo (poliploidia, hibridização e disploidia) que amplamente ocorrem durante a evolução de Passiflora, provavelmente resultaram em número de cópias distintas dos genes relacionados ao processo morfogênico em plantas. Portanto, para o gênero Passiflora é importante olhar simultaneamente algumas características genômicas para compreender as respostas in vitro.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, Programa de Pós-Graduação em Ciências Florestais, 2014. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: capítulos 1 e 2. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-02-11T19:43:44Z No. of bitstreams: 1 2014_ElineadeOliveiraFreitas_Parcial.pdf: 700810 bytes, checksum: 1d12f8a837e8db083a11cc3d70ac0c4c (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2015-02-12T17:30:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ElineadeOliveiraFreitas_Parcial.pdf: 700810 bytes, checksum: 1d12f8a837e8db083a11cc3d70ac0c4c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-12T17:30:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ElineadeOliveiraFreitas_Parcial.pdf: 700810 bytes, checksum: 1d12f8a837e8db083a11cc3d70ac0c4c (MD5) / O presente trabalho objetivou desenvolver e otimizar o protocolo de embriogênese somática em açaizeiro (Euterpe oleracea Mart.), a partir do uso de propágulos formados por embriões zigóticos (EZ) oriundos de sementes em diferentes estádios de maturação, além de folhas e inflorescências imaturas provenientes de plantas adultas. Adicionalmente, análises morfo-anatômicas e por citometria de fluxo foram realizadas para melhor caracterizar e entender as etapas do processo. Na primeira parte deste trabalho, a embriogênese somática em EZ maduros e imaturos foi obtida, inicialmente a partir da indução de calos embriogênicos em meio de Murashige e Skoog (MS), suplementado com 2,5 g.L-1 de carvão ativado e com a auxina picloram nas concentrações de 225 e 450 μM. Uma vez obtidos, calos embriogênicos com embriões somáticos em início de diferenciação foram transferidos para meio de cultura com 12,3 μM de 2iP e 0,6 μM de ANA, visando a diferenciação e maturação de embriões somáticos. A regeneração de plantas foi realizada em meio de cultura com 1,0 μM BAP e 0,5 μM AG3. Em meio de indução foi possível observar a formação de calos embriogênicos em todos os tratamentos, independentemente do estádio de desenvolvimento dos EZ testados. O picloram na concentração de 450 μM proporcionou os melhores resultados para a formação de calos embriogênicos (84,7%). Na fase de diferenciação e maturação 100% dos explantes que apresentavam formação de calo embriogênico formaram embriões somáticos. A maior frequência de regeneração de plantas (58,7%) foi observada no tratamento em que se utilizou o meio de indução constituído por 450 μM de picloram e em embriões somáticos obtidos de explantes oriundos de EZ imaturos. A partir de análises morfoanatômicas comprovou-se que a indução da embriogênese somática apresentou estádios característicos do tipo indireto. As plantas regeneradas apresentaram desenvolvimento normal, com crescimento de raízes e parte aérea. Os calos, embriões somáticos e as plantas obtidas foram analisados por citometria de fluxo para verificar possíveis alterações no DNA, fato que não foi observado. A segunda parte deste trabalho utilizou explantes provenientes de inflorescências e folhas imaturas para a indução da embriogênese somática. Os explantes provenientes de plantas adultas, uma vez obtidos, foram colocados em meio de cultura de MS, suplementado com 2,5 g.L-1 de carvão ativado e as auxinas picloram e 2,4-D na concentração de 450 μM para a indução de calos. Foram testadas inflorescências imaturas em diferentes estádios de desenvolvimento (estádios I= 6 cm; II= 8 cm e III= 12 cm), e folhas imaturas de diferentes regiões foliares do palmito (basal, mediano e apical). Para a diferenciação de embriões somáticos, calos embriogênicos e embriões somáticos foram transferidos para meio de cultura com as concentrações de picloram e 2,4-D reduzidas para 0,1 mg.L-1. Embriões somáticos em início de diferenciação foram transferidos para meio de cultura com 12,3 μM de 2iP e 0,6 μM de ANA para a maturação de embriões somáticos. Verificou-se que a auxina picloram proporcionou os melhores resultados na indução de calos embriogênicos, tanto para inflorescências como para as folhas imaturas. Os diferentes estádios de desenvolvimento das inflorescências não apresentaram diferenças significativas nas respostas, enquanto que nas folhas imaturas resultados superiores na etapa de indução para a formação de calos foram observados quando os explantes eram provenientes das regiões basal e mediana do palmito. Na etapa de diferenciação, calos embriogênicos provenientes de inflorescências imaturas em meio de cultura com picloram apresentaram até 100% dos explantes diferenciando embriões somáticos, que progrediram lentamente para estádios de torpedo em meio de maturação. Já em calos embriogênicos provenientes de folhas imaturas a diferenciação de embriões somáticos foi observada somente em explantes cultivados originalmente em meio suplementado com picloram em porcentagens que atingiram até 50% dos explantes da região mediana do palmito, embora, esses embriões somáticos não tenham apresentado progressão para estádios mais tardios de desenvolvimento. Os resultados obtidos sugerem que tanto os explantes provenientes de inflorescências como de folhas imaturas podem ser utilizados como fontes de explantes para a embriogênese somática em açaizeiro. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study had the aim of developing and optimizing the protocol for somatic embryogenesis in açaí palm (Euterpe oleracea) using explants from zygotic embryos removed from seeds at different stages of maturation and from leaf and immature inflorescences from adult plants. Moreover, morphological, anatomical and citometry of flux analyses were achieved to a better characterization and comprehension of the process phases. At the first part of this work, somatic embryos (SE) were obtained from mature and immature zygotic embryos (ZE). Initially, embryogenic calli were induced on Murashige & Skoog (MS) medium supplemented with 2.5 g.L-1 of activated charcoal and the auxin picloram at the concentration of 225 or 450 μM. Once developed, embryogenic calli carrying SE at the begin of differentiation were transferred to culture medium containing 12.3 μM of 2iP and 0.6 μM of NAA, in order to induce the differentiation and maturation of the somatic embryos. Plant regeneration occurred at culture medium supplemented with 1.0 μM BAP and 0.5 μM GA3. At the induction medium, embryogenic calli were formed in all treatments, independently of the maturation state of the ZE used as explant, however, the medium with 450 μM picloram showed the best results for the formation of embryogenic calli (84.7%). At the differentiation and maturation phase, 100% of the explants containing embryogenic callus allowed the development of somatic embryos. The higher frequency of plant regeneration (58.7%) was obtained at the induction medium with 450 μM picloram and using the immature ZE explants. Through the morpho-anatomical analysis it could be proved that the induction of the somatic embryogenesis showed characteristics stages of the indirect development. The plants regenerated from the embryos showed a normal development, with a normal growing of roots and aerial part. At the end, the calli, SE and plants regenerated were analyzed by flow cytometry to quantify the amount of DNA, which showed no differences between the samples. At the second part of this work, explants from inflorescences and immature leaves were used to induce somatic embryogenesis. Those explants, from adult plants, were inoculated at culture medium MS supplemented with 2.5 g.L-1 of activated charcoal and two auxins, picloram or 2,4-D, at the concentration of 450 μM for the callus induction. Immature inflorescences at three developmental states (I = 6 cm; II = 8 cm and III = 12 cm) and immature leaves from different regions (basal, median and apical) of the heart of palm were tested. To the differentiation of the somatic embryos, embryogenic calli and SE were transferred to a culture medium containing the same original auxin, picloram or 2,4-D, with the concentration reduced to 0.1 mg.L-1. Somatic embryos at the beginning of differentiation were transferred to a culture medium containing 12.3 μM of 2iP and 0.6 μM of NAA for the maturation of the somatic embryos. The auxin picloram showed best results at embryogenic callus induction in both inflorescences and immature leaves. The inflorescences at different stage of development did not show significant differences at the end, while for the immature leaves, explants from the portions basal and median of the heart of palm gave rise to the best results at the induction of callus phase. At the differentiation phase, embryogenic calli from the immature inflorescences grown at medium containing picloram showed 100% of differentiation to somatic embryos, and these developed slowly to torpedo stage under the maturation medium. While considering the embryogenic calli from the immature leaves, the differentiation of somatic embryos occurred only on explants cultivated originally at medium supplemented with picloram, reaching the percentage of 50% for the explants from the median region, although, those somatic embryos did not developed to later stages of development. The results allow suggesting that explants from both immature inflorescences and leaves from adult plants of açaí palm can be used as explant sources to somatic embryogenesis.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-04T17:09:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 959621 bytes, checksum: b9f1836b49126b502e5e1c3e07143a67 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T17:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 959621 bytes, checksum: b9f1836b49126b502e5e1c3e07143a67 (MD5) Previous issue date: 1998-10-01 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Esta pesquisa foi conduzida com o objetivo de verificar a exeqüibilidade da fusão protoplástica interespecífica como ferramenta no melhoramento parassexual em Coffea. Para tanto, pretendeu-se a introgressão das resistências aos nematóides Meloidogyne incognita e M. exigua, do cultivar canéfora Apoatã, nos genótipos arábicas diplóide DH 3 e tetraplóides Catimor e Catuaí Amarelo. Com vistas à obtenção dos protoplastos, foi dado início a suspensões celulares embriogênicas a partir de calos friáveis embriogênicos induzidos de explantes foliares. Posteriormente foram estudadas, nas suspensões celulares Apoatã e DH 3 , as cinéticas do crescimento e do rendimento protoplástico em função do tempo pós-subcultura, bem como as condições de digestão enzimática da parede celular de seus agregados celulares. Foram realizados, ainda, estudos para a seleção dos heterofusionados. Embora todos os genótipos testados tenham reagido favoravelmente à formação de tecido embriogênico friável, apenas os arábicas DH 3 e Catuaí Vermelho requereram a ação conjunta de auxina e citocinina. Os demais Apoatã, Catimor e Catuaí Amarelo reagiram mais favoravelmente quando o regulador de crescimento foi apenas a citocinina BAP. As maiores freqüências de explantes com calos friáveis verificadas para os genótipos canéfora Apoatã e arábicas DH 3 , Catimor, Catuaí Amarelo e Catuaí Vermelho foram, respectivamente, 80, 60, 40, 40 e 20%. A diferenciação embriogênica dos agregados celulares, em cultura líquida, rendeu cerca de 241.000, 72.870 e 121.760 embriões g -1 MF de agregados celulares Apoatã, Catimor e DH 3 , respectivamente. As suspensões celulares Apoatã e DH 3 revelaram, imediatamente após a subcultura, uma fase exponencial de crescimento celular até um ponto de inflexão, a partir do qual as taxas de crescimento reduziram progressivamente para atingir um peso de matéria fresca dos agregados celulares assintótico. Coincidentemente, os menores rendimentos protoplásticos foram observados para tempos pós-subcultura superiores àquele do ponto de inflexão. A pré-plasmólise, a seleção dos agregados celulares de diâmetro inferior a 1 mm e a adição de cisteína 0,83 mM, durante a digestão enzimática, não interferiram no rendimento protoplástico das suspensões celulares Apoatã e DH 3 , ao contrário das concentrações das enzimas pectinases e celulase. De maneira geral, o rendimento protoplástico Apoatã, sempre inferior àquele DH 3 , foi maior quando as duas pectinases, pectoliase e macerozima, estiveram associadas à celulase, as três nas maiores concentrações testadas. Os 12 meios de cultivo de protoplastos testados não permitiram distinguir os protoplastos parentais Apoatã e DH 3 em nível de crescimento dos microcalos. Alternativamente, os inibidores metabólicos iodoacetamida e rodamina, nas respectivas concentrações de 2 e de 0,9 mM, mostraram-se eficazes em inibir a regeneração dos protoplastos parentais em microcalos. Seu aproveitamento permitiu a realização de 23 ensaios de eletrofusão interespecífica, cujos produtos, aparentemente justificados pela complementação metabólica, encontram-se em desenvolvimento com vistas à diferenciação embriogênica e regeneração de plantas. Esta última permitirá análises para verificação do potencial da fusão protoplástica no melhoramento parassexual em Coffea. / The aim of the present work was to evaluate the feasibility of interspecific protoplast fusion as a tool in the parassexual improvement in Coffea. Introgression of nematode resistance from Coffea canephora cv. Apoatã was attempted in diploid (DH 3 ) and tetraploid (Catimor and Catuaí Amarelo) C. arabica genotypes by protoplast fusion. Protoplasts were isolated from embryogenic cell suspensions initiated from leaf explants-derived friable embryogenic calli. For Apoatã and DH 3 cell suspensions the kinetics of growth and protoplast yield was evaluated as affected by the intervals of subcultures and the conditions of enzymatic digestion of the cell walls of their small cell aggregates. Investigations aiming at selection of protoplast heterofused-derived cell aggregates were also accomplished. All genotypes studied reacted favorably to the formation of friable embryogenic calli. C. arabica genotypes, DH 3 and Catuaí Vermelho, however, required the use of both auxin and cytokinin. Conversely, Apoatã, Catimor and Catuaí Amarelo presented similar morphogenetic responses when induction media were supplemented with BAP only. Frequencies of friable embryogenic calli of 80, 60, 40, 40 and 20% were obtained for Apoatã, DH 3 , Catimor, Catuaí Amarelo and Catuaí Vermelho, respectively. Embryogenic differentiation from cell aggregates, in liquid culture, produced about 241.000, 72.870 and 121.760 embryos g -1 FW for Apoatã, Catimor and DH 3 , respectively. Immediately to the subculture, Apoatã and DH 3 cell suspensions revealed a typical sigmoidal growth curve. Coincidentally, the lowest protoplast yields were observed for post-subculture intervals above the inflection point. The pre-plasmolysis, the size of the aggregates (smaller than 1 mm diameter) and the addition of cysteine 0.83 mM, during the enzymatic digestion, did not affect protoplast yield of Apoatã and DH 3 cell suspensions, unlike the concentrations of the pectinases and cellulase enzymes. In general, protoplast yields of Apoatã were always inferior to that DH 3 . High yields were achieved when the two pectinases (pectolyase and macerozyme) were combined to cellulase, at the highest tested concentrations. The twelve protoplast culture media tested did not allow any distinction between parental protoplasts Apoatã and DH 3 , at microcalli growth stages. Alternatively, the metabolic inhibitors iodoacetamide and rhodamine, at the concentrations 2 and 0.9 mM, respectively, were effective in inhibiting microcalli formation from cultured parental protoplasts. Its use allowed the accomplishment of 23 independent interspecific electrofusion assessments whose products led to the development of embryogenic differentiation. Further work will be carried out in order to characterize the putative heterofused regenerants and to examine the potential of somatic hybridization as a tool for parassexual improvement in Coffea. / Tese importada do Alexandria

JEREISSATI, E. S. Indução, isolamento e caracterização de linhagens de calos de feijão-de-corda (Vigna unguiculata), 2008, 98 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-01-15T18:45:03Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_esjereissati.pdf: 1977738 bytes, checksum: 07766ffc1c0c530a367f7b10a522a973 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-15T20:12:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_esjereissati.pdf: 1977738 bytes, checksum: 07766ffc1c0c530a367f7b10a522a973 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-15T20:12:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_esjereissati.pdf: 1977738 bytes, checksum: 07766ffc1c0c530a367f7b10a522a973 (MD5) Previous issue date: 2008 / Somatic embryogenesis is the process by which somatic plant tissues gives rise to plant embryos under inductors conditions. Somatic embryogenesis represents the most commonly employed tool in commercial propagation of plants. In recent times, genes involved in the process have been identified, partucularly those involved in the maintenance of meristems and pattern formation. There are genes which, when ectopically expressed, can induce the formation of somatic embryos. In cowpea, there are few reports on somatic embryogenesis. In addition, the reports on the process recorded a very low frequency and a complicated system of regeneration involving several steps. This work attempted to isolate callus lines of cowpea and establish an ideal culture condition necessary for their maintenance. Histological analysis was conducted to characterize the isolated lines of callus anatomically. From the four lines obtained, 3 presented cells exhibiting the charactersitc embryogenic potential and of this, Line 2 actually gave rise to embryogenic structures when cultured in liquid media. The lines of callus were maintained in cultured condition for over a year without loss of their characteristics. Experiments that monitored the growth of cell suspension from the callus revealed that five days is the best period for subculture of the cells. Regeneration experiments in cowpea will find the different callus lines isolated in this work useful in the attempt to optimize the different strategies of regeneration of the crop in vitro. / Embriogênese Somática é o processo pelo qual, tecidos somáticos vegetais dão origem a embriões de plantas sob condições indutivas. A embriogênese somática é atualmente a ferramenta mais empregada para a propagação de plantas em escala comercial. Recentemente foram identificados alguns genes envolvidos no processo. Alguns desses genes estão envolvidos com a manutenção do meristema, outros estão envolvidos com a formação de padrão. Existem genes que quando expressos ectopicamente podem induzir a formação de embriões somáticos. Existem poucos trabalhos na literatura sobre a embriogênese somática em feijão-de-corda. Além disso, esses trabalhos apresentam uma freqüência de regeneração pequena e um complicado sistema de regeneração que envolve muitas etapas. O objetivo deste trabalho foi isolar linhagens de calos embriogênicos de feijão-de-corda e estabelecer as condições de cultivo ideais para estes calos. Análises histológicas foram utilizadas para a caracterização anatômica das linhagens de calos isolados. Das 4 linhagens de calos isolados três apresentam células com características de células embriogênicas, sendo que apenas a linhagem 2 deu origem a estruturas embriogênicas em suspensão celular. Essas linhagens de calos foram subcultivadas por mais de um ano sem perder as suas características. Os experimentos de crescimento das suspensões celulares mostraram que as suspensões devem ser subcultivados em períodos de 5 dias. Os próximos trabalhos que envolvam a regeneração em feijão-de-corda devem trabalhar com essa linhagem de calo facilmente isolável e altamente estável em cultura.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-16T17:30:34Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1704498 bytes, checksum: bd9361caa999676067e272268f557a68 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T17:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1704498 bytes, checksum: bd9361caa999676067e272268f557a68 (MD5) Previous issue date: 2015-07-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O milho é uma das principais culturas do Brasil e hoje os estudos de transformação genética de plantas estão sendo utilizados como estratégia para obtenção de materiais com resistência a pragas e doenças, tolerância a herbicidas e melhoria na qualidade nutricional. Assim, objetivou-se avaliar meios de cultivo na embriogênese somática de embriões imaturos de milho tropical, estudar metodologias de transformação genética de milho tropical, avaliar promotores de floema PP2 na transformação de milho, avaliar promotores de fruto PCaLTP-S, constitutivo PSulfT0,5, de folha PCit0,4, de senescência PSAG12-like, na transformação genética de milho. Foram conduzidos quatro experimentos em laboratório. Os materiais utilizados foram a linhagem elite L3 de clima tropical para avaliar meios de cultivo na embriogênese somática e na transformação de milho tropical, e o híbrido Hi-II de clima temperado, para os experimentos de avaliação de promotores. Os resultados indicaram que para a embriogênese somática, o meio de cultivo mais eficiente na produção de calos embriogênicos foi o meio M1 (Meio basal N6, 30 g L -1 de sacarose, 100 mg L -1 de caseína hidrolisada, 100 mg L -1 de mio inositol; 2,9 g L -1 de L-prolina e; 15 mg L -1 de nitrato de prata). Para a maturação dos calos embriogênicos, o tratamento sem reguladores de crescimento com adição de CuSO 4 possibilitou maior porcentagem de regeneração. O protocolo desenvolvido apresentou produção de 85% de calos embriogênicos e 45% de plantas regeneradas, podendo, dessa forma, ser utilizado para a produção de plantas transgênicas de milho. A metodologia mais indicada para a transformação genética de milho tropical, foi o método I, visto que a utilização de meios de co-cultivo e repouso com maior concentração de sais foi benéfico para a transferência do T-DNA. Adicionalmente, os resultados indicam que a suplementação do meio de co-cultivo com apenas um antioxidante, a cisteína, é suficiente para a recuperação de células transformadas. No estudo dos promotores de floema em milho, foi gerada uma construção com promotor PP2 heterólogo de milho isolado de uma Cucurbitácea. O promotor PP2 isolado de abóbora dirigiu a expressão do gene repórter gus para o sistema vascular em milho, revelando que pode ser utilizado em estudos futuros de transformação genética de milho. Nas análises de PCR quantitativo dos promotores heterólogos PCaLTP-S, PSulfT0,5, PCit0,4, PSAG12-like, a expressão foi detectada nos tecidos de folha e raiz. Novos estudos devem ser realizados para comprovar a funcionalidade desses promotores heterólogos no milho. / Maize is an important crop in Brazil and today the genetic transformation studies of plants are being used as a strategy to obtain materials with resistance to pests and diseases, herbicide tolerance and improved nutritional quality. Thus aimed to evaluate culture media in somatic embryogenesis of immature embryos of tropical maize, studying methods of genetic transformation of tropical maize, evaluate the phloem promoters PP2 in transforming maize, evaluate promoters PCaLTP-S fruit, PSulfT0,5 constitutive, PCit0,4 leaf and PSAG12-like senescence in genetic transformation of maize. Four experiments were conducted in the laboratory. The materials used were the tropical climate L3 elite line to evaluate culture media in somatic embryogenesis and transformation of tropical maize, and Hi-II hybrid temperate climate for promoters of evaluation experiments. The results indicated that for somatic embryogenesis, the most efficient means of cultivation in the production of embryogenic callus was the M1 medium (N6 basal medium, 30 g L -1 sucrose 100 mg L -1 casein hydrolyzate, 100 mg L - 1 myo-inositol, 2.9 g L -1 L-proline and 15 mg L -1 of silver nitrate). For the maturation of somatic embryogenesis, treatment without growth regulators with the addition of CuSO 4 allowed higher percentage of regeneration. The presented protocol developed production of 85% of embryogenic callus and 45% of regenerated plants and may thus be used for the production of transgenic maize plants. The most suitable method for the genetic transformation of tropical maize was the method I, since the use of means of co- cultivation and resting with a higher salt concentration is beneficial to the transfer of T- DNA. Additionally, the results indicated that supplementation of co-cultivation medium with only the antioxidant cysteine is sufficient to recover transformed cells. In the study of phloem promoters in maize, a construct was generated with PP2 heterologous promoter isolated from a cucurbit. The PP2 pumpkin isolated promoter directed the expression of the GUS reporter gene to the vascular system in maize, revealing that can be used in future studies of genetic transformation of maize. In the quantitative PCR analysis of heterologous promoters PCaLTP-S PSulfT0,5, PCit0,4, PSAG12-like expression was detected in leaf and root tissues. Further studies should be conducted to verify the functionality of these heterologous promoters in maize.

Submitted by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-12T13:10:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) MATURAÇÃO E GERMINAÇÃO DE EMBRIÕES SOMÁTICOS DO MAMOEIRO ‘GOLDEN THB’.pdf: 1024133 bytes, checksum: e296e48b78affdc8d143ba8ae0e27724 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-12T13:10:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) MATURAÇÃO E GERMINAÇÃO DE EMBRIÕES SOMÁTICOS DO MAMOEIRO ‘GOLDEN THB’.pdf: 1024133 bytes, checksum: e296e48b78affdc8d143ba8ae0e27724 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-12T13:10:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) MATURAÇÃO E GERMINAÇÃO DE EMBRIÕES SOMÁTICOS DO MAMOEIRO ‘GOLDEN THB’.pdf: 1024133 bytes, checksum: e296e48b78affdc8d143ba8ae0e27724 (MD5) / Objetivou-se avaliar a maturação e germinação de embriões somáticos do mamoeiro ‘Golden THB’. Para a obtenção dos embriões somáticos, folhas cotiledonares de plântulas de mamoeiro obtidas da germinação in vitro, em meio MS basal, foram inoculadas em meio de indução contendo sais de MS; myo-inositol (0,55 mM), sacarose (87,5 mM), ágar-ágar Vetec® (8 g L-1) e suplementado com 4-CPA (ácido p-clorofenoxiacético) (25 μM). Após 50 dias, os calos embriogênicos foram transferidos para os meios de maturação: Experimento 1 (MM1) constituído de meio MS, ABA (0,5 μM, CA (15 g L-1) e os tratamentos suplementados com diferentes concentrações de PEG 6000 (0; 40; 50; 60 e 70 g L-1) durante 45 dias; Experimento 2 (MM2) constituído de meio MS, ABA (0,5 μM), CA (15 g L-1) e os tratamentos suplementados com diferentes concentrações de extrato de malte (0,0; 0,1; 0,2; 0,3 e 0,4 g L-1) durante 45 dias. Os tratamentos foram compostos com quatro repetições de três placas de Petri de 100 mm × 20 mm, contendo quatro calos embriogênicos. Os embriões cotiledonares normais gerados no MM2 suplementado com ABA (0,5 μM), CA (15 g L-1) e extrato de malte (0,2 g L-1) foram transferidos para os meios de germinação (MG) formado pelo meio MS concentração total de sais, sacarose (87,5 mM), myo-inositol (0,0; 0,275; 0,550 e 0,825 mM) e ágar-ágar Vetec® (8 g L-1). Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias estudadas por análise de regressão. Os tratamentos com PEG foram inferiores e prejudicaram o processo de formação dos embriões e sua utilização na concentração de 70 g L-1 reduz em 31,85% a produção de embriões somáticos total e normais do mamoeiro ‘Golden THB’. Portanto, para a embriogênese somática do mamoeiro ‘Goden THB’ não se recomenda a maturação em meio contendo PEG 6000. A adição de extrato de malte (0,17 g L-1), no meio de maturação potencializou o desenvolvimento embrionário de mamoeiro ‘Golden THB’, 45,40 ES calo-1. Identificou-se a ocorrência de embriogênese somática secundária e a formação de embriões somáticos anormais. A suplementação de myo-inositol (0,45 mM) no meio MS proporcionou ganhos significativos na porcentagem de germinação de embriões somáticos e posterior conversão em plântulas de mamoeiro ‘Golden THB’. / This work aimed to evaluate the maturation and germination of somatic embryos of papaya 'Golden THB'. To obtain the somatic embryos, cotyledons of seedlings of papaya obtained from in vitro germination in MS basal medium, were inoculated into induction medium containing MS salts; myo-inositol (0.55 mM), sucrose (87.5 mM), agar Vetec ® (8 g L-1) supplemented with 4 -CPA (p-chlorophenoxyacetic acid) (25 mM). After 50 days, the calli were transferred to maturation medium: Experiment 1 (MM1) consisting of MS medium, ABA (0.5 mM, CA (15 g L-1) and the treatments supplemented with different concentrations of PEG 6000 (0, 40, 50, 60 and 70 g L-1) for 45 days; Experiment 2 (MM2), consisting of MS medium, ABA (0.5 mM), CA (15 g L -1) and the supplemented treatments different concentrations of malt extract (0.0, 0.1, 0.2, 0.3 and 0.4 g L-1). During 45 days the treatments consisted of four replicates of three Petri dishes of 100 mm × 20 mm, containing four calli. The normal cotyledonary embryos generated in MM2 supplemented with ABA (0.5 mM), CA (15 g -1) and malt extract (0.2 g L-1) were transferred to the germination medium (GM) L formed by the total concentration of medium MS salts, sucrose (87.5 mM), myo- inositol (0.0, 0.275, 0.550 and 0.825 mM) and agar Vetec ® (8 g L-1). The data were subjected to analysis of variance and means studied by regression analysis. Treatment with PEG were lower and harmed the process of formation of embryos and their use at a concentration of 70 g L-1 reduces by 31.85% of the total production and normal somatic embryos of papaya 'Golden THB'. So for somatic embryogenesis of papaya 'Goden THB' not recommended in the maturation medium containing PEG 6000. Adding malt extract (0.17 g L-1) in the maturation medium potentiated the embryonic development of papaya 'Golden THB', 45.40 ES callus-1. Identify the occurrence of secondary somatic embryogenesis and the formation of abnormal somatic embryos. The supplementation of myo-inositol (0.45 mM) in MS medium yielded significant gains in the percentage of germination of somatic embryos and conversion into plantlets papaya 'Golden THB'.