Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La epididimitis contagiosa del carnero es una enfermedad bacteriana del ovino producida por Brucella ovis (B. ovis), que afecta mayormente el aparato genital de hembras y machos, siendo estos últimos los principales hospederos. Esta enfermedad es de importancia para la explotación ovina, debido a las pérdidas económicas y reproductivas producidas por abortos en ovejas e infertilidad en los carneros. Las estrategias de control de la enfermedad están basadas en un buen diagnóstico, por lo que es esencial contar con métodos de alta sensibilidad y especificidad que sean económicos y fáciles de realizar. El objetivo de este trabajo es implementar la técnica de Contrainmunoelectroforesis (CIEF) para el diagnóstico de epididimitis contagiosa del carnero y compararla con la prueba de Inmunodifusión Doble en gel de agar (ID) Se implementó la técnica de CIEF, realizando la lectura a las 24 horas y utilizando, al igual que en la ID, antígeno LPS-r de B. ovis. Se analizaron 243 sueros de carneros seropositivos y 243 sueros de carneros seronegativos por ID. Además, se analizaron por ambas pruebas 2 carneros infectados experimentalmente, de los que se obtuvo sangre semanalmente hasta las 58 semanas post-infección. La CIEF mostró tener una sensibilidad de 82.71% (201/243) y una especificidad de 77.36% (188/243) al ser comparada con ID, con un índice de concordancia Kappa de 0.6, sin observarse diferencias estadísticamente significativas entre ambas pruebas. Por otra parte, en los dos carneros infectados experimentalmente, ambas pruebas fueron capaces de detectar la presencia de anticuerpos desde la 4ª hasta la 58ª semana post-infección. Finalmente, se puede decir que la CIEF no mostró diferencias significativas al ser comparada con la ID, obteniendo sensibilidad y especificidad mayores al 75%. La principal ventaja de la CIEF sobre la ID es la significativa disminución en el tiempo que demora en detectar la formación de bandas de precipitación (24 hrs. v/s 72 hrs)

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente trabajo se desarrolló y validó un ensayo inmunoabsorbente ligado a un enzima (ELISA), usando antígeno lipopolisacárido rugoso (LPS-R) de la cepa RB51 de Brucella abortus para el diagnóstico de infección con B. ovis en ovinos. Se probaron 2 tipos de placas de poliestireno NUNC 69620 y Maxisorp, 2 tipos de tampones de distinto pH con 2 diferentes conjugados: policlonal anti IgG-ovina (Sigma A3415) y monoclonal anti IgG-caprino/ovino (Sigma A9452), las diluciones del antígeno y del conjugado del trabajo se obtuvieron mediante una titulación en tablero de ajedrez. El ensayo se validó utilizando la placa NUNC 69620 con una sensibilización del antígeno 1:50 en el tampón carbonato-bicarbonato y el uso del conjugado monoclonal, en 55 sueros de ovinos positivos a examen clínico y a la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y 338 sueros de ovinos provenientes de un rebaño libre de la enfermedad, confirmados por medio de fijación del complemento (FC). Para comparar las placas, las densidades ópticas (DO) fueron llevadas a porcentajes de positividad (PP), el punto de corte fue un 39,5% utilizando la metodología “Receiver-Operator Characteristic” (ROC), estimando la sensibilidad y la especificidad en un 92.7% y un 98,5% respectivamente. Estos resultados permiten establecer que el ELISA desarrollado sea una alternativa real, para el diagnóstico serólogico de B. ovis en el país

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se describe el desarrollo y validación de un Ensayo inmunoenzimático indirecto (ELISA-I) para el diagnóstico serológico de la infección por Brucella ovis (B. ovis) en ovinos, utilizando proteínas citosólicas de Brucella abortus RB51 (B. abortus RB51) como antígeno. Se probaron dos tipos de placas de poliestireno, NUNC 69620 y NUNC Maxisorp, dos tampones de sensibilización de diferente pH con dos alternativas de conjugado, el anticuerpo monoclonal anti IgG-caprino/ovino (Sigma A9452) y la proteína G (Sigma P81170). Las concentraciones óptimas de antígeno citosólico, sueros y conjugados fueron determinadas mediante titulación del tipo checkerboard. Para la validación del ensayo se utilizaron 55 sueros de ovinos considerados como infectados/expuestos, positivos a examen clínico, a un ELISA-I comercial, a la fijación del complemento (FC) y a la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y 338 sueros de ovinos no infectados, provenientes de un rebaño ovino libre de infección, negativos a la prueba de FC. El punto de corte diagnóstico fue determinado a través del método de las características del tipo receptor-operador (ROC). El ELISA-I desarrollado con anticuerpo monoclonal como conjugado mostró mejores valores de sensibilidad (90,9%) y especificidad (95,9%). Estos resultados, a pesar de ser significativos, son deficientes para ser considerados de utilidad diagnóstica y lograr un adecuado control de la infección en rebaños ovinos. La baja sensibilidad obtenida al utilizar proteínas citosólicas como antígeno estaría relacionada con la escasa exposición al antígeno y la corta memoria inmunológica que generarían este tipo de proteínas en un animal infectado.