Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Las enfermedades asociadas a circovirus porcino tipo 2 (PCV-2) son consideradas el problema productivo y económico más grande de la industria porcina mundial. Además de mejorar la gestión y las prácticas de manejo (mejor higiene, menor hacinamiento y mejor ventilación), la disponibilidad de vacunas anti-PCV-2 representa la opción inmunológica más eficaz para paliar el impacto de estas enfermedades. Para el presente estudio y con la finalidad de estudiar el patrón de seroconversión contra PCV-2 entre cerdos vacunados con una vacuna comercial versus cerdos infectados naturalmente, se montó un ensayo de ELISA indirecto, usando como sustrato específico una versión recombinante de la subunidad proteica involucrada con el ensamblaje de la cápside viral (Cap). De estos análisis se concluyó, en primera instancia, que dicha estructura pudo ser reconocida en forma específica tanto por los sueros de los animales vacunados como no vacunados infectados naturalmente, analizados a distintos periodos de tiempo: 30, 50, 70, 90, 110 y 130 días, siendo posible analizar el patrón de seroconversión IgM/IgG anti-PCV-2 en dichos animales. En este estudio se concluye que el efecto diferenciador de la prueba montada de ELISA indirecto entre animales vacunados o no vacunados, depende si es que el animal cuenta o no con inmunidad de base materna anti-PCV-2, pudiendo ser esta una condición interferente con la vacunación temprana. Así, fue posible organizar y dividir los datos del patrón de seroconversión IgM/IgG anti-PCV-2 bajo cuatro escenarios distintos de resultados: 1, animales vacunados con baja inmunidad de base; 2, animales vacunados con alta inmunidad de base; 3, animales no vacunados con alta inmunidad de base y 4, animales no vacunados con baja inmunidad de base. Si bien en el presente estudio la determinación de la presencia de anticuerpos totales contra PCV-2, no resultó ser útil para diferenciar anticuerpos neutralizantes, los resultados presentados y discutidos en esta memoria son de utilidad para evaluar el status de seroconversión general contra PCV-2 de un plantel nacional de producción porcina / Fondecyt 11110135

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El diagnóstico definitivo y específico de la brucelosis en caninos, causada por Brucella canis (B. canis), se realiza mediante el aislamiento de la bacteria desde muestras patológicas o fluidos. Sin embargo, como la enfermedad se caracteriza por presentar periodos abacterémicos, un cultivo negativo no excluye la posibilidad de infección. Debido a que se utiliza ampliamente la detección de anticuerpos frente a la infección y que tanto B. ovis y B. canis comparten componentes antigénicos con la cepa vacuna Brucella abortus RB51 (B. abortus CRB51), ésta podría ser usada como antígeno en el diagnóstico serológico de la enfermedad. En el presente estudio, se describe un enzimoinmunoensayo indirecto (ELISA-I) para el serodiagnóstico de brucelosis canina utilizando un extracto altamente purificado de lipopolisacárido rugoso (LPS-R) de Brucella abortus CRB51, cuyos resultados fueron comparados con la técnica contrainmunoelectroforesis (CIEF) que utiliza un antígeno extraído de una cepa rugosa de B. ovis, con diferentes componentes, incluyendo al LPS-R. En este estudio se incluyeron 156 sueros de perro, muestras para diagnóstico de brucelosis canina mediante CIEF, que fueron recibidas en el laboratorio de Microbiología de FAVET. El análisis de los resultados indicó asociación estadística entre ambas pruebas (p>0,05) para el diagnóstico de brucelosis canina. Además, ambas pruebas obtuvieron un alto índice de concordancia (K= 0,961). Estos resultados hacen del ELISA-I propuesto una prueba promisoria al utilizar un antígeno más purificado y entregar resultados cuantitativos

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Fundamentos: Parvovirus B19 (PV-B19) pertenece a la familia Parvoviridae, género Eritrovirus. Es un virus ADN de hebra simple que presenta secuencias palindrómicas en sus extremos. Es muy prevalente en la población general, llegando a detectarse anticuerpos anti PV-B19 en más del 85% de la población geriátrica. Este virus es el agente causal de una amplia gama de manifestaciones clínicas, cuya severidad depende del estado inmunológico y hematológico del hospedero, e incluye el eritema infeccioso, problemas hematológicos y reumatológicos e hidrops fetal, entre otras. Objetivo: Se determinó la presencia de Parvovirus B19 en pacientes con manifestaciones clínicas asociadas a este virus. Materiales y Métodos: Se analizaron 262 muestras de sangre de pacientes provenientes de distintos centros hospitalarios de la Región Metropolitana y del Servicio de Diagnóstico del Programa de Virología, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. De estas muestras, 211 fueron analizadas mediante la técnica de ELISA para la pesquisa de IgM anti PV-B19, 244 con PCR anidado (PCR-Nested), para detectar genoma viral y 185 muestras con ambas técnicas. Resultados: De las muestras analizadas mediante la técnica de PCR anidado, se detectó genoma viral en un 25% de éstas y de las muestras analizadas mediante la técnica de ELISA, se localizó IgM anti PV-B19 en un 19%. Considerando sólo las 185 muestras que fueron analizadas con ambas técnicas, se detectó un 31.9% de positividad. En los casos positivos para el virus, las manifestaciones clínicas prevalentes fueron síndrome febril y eritema infeccioso

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente trabajo se describe la evolución de anticuerpos caninos contra Brucella canis, de dos perras inoculadas experimentalmente, mediante un ensayo inmunoenzimático indirecto (ELISA-I) usando como antígenos el lipopolisacárido rugoso (LPS-R) y proteínas citosólicas de Brucella abortus Cepa RB51. El objetivo fue discriminar el momento en que se hacen detectables los anticuerpos para cada ELISA-I y describir la evolución de éstos en el tiempo. Se utilizaron sueros de dos perras infectadas con B. canis, A y B, con un total de 20 y 16 muestras de sueros seriados, respectivamente. Para ambos ELISA-I se usaron líneas de corte obtenidas por metodología “Receiver-Operator Characteristic” (ROC), que determinaron la positividad o negatividad a la prueba. Ambos ELISA-I fueron capaces de detectar anticuerpos tempranamente y fue posible constatar su permanencia en el tiempo. La detección de anticuerpos mediante ELISA-I, tanto con antígeno de proteínas citosólicas como con antígeno LPS-R de B. abortus Cepa RB51, se mantuvo detectable, al menos, hasta la semana 38 post infección

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias. / Las aflatoxinas son micotoxinas consideradas altamente carcinogénicas, siendo la aflatoxina B1, carcinógeno del Grupo 1, de acuerdo al IARC. Estas micotoxinas llegan a tener impactos en la salud y económicos significativos, lo que las convierte en objetivos importantes para la detección y cuantificación. La evidencia científica ha demostrado que el clima influye en su presencia, por lo cual, las regiones tropicales y subtropicales como la provincia de Huambo-Angola, son considerados propensas a su desarrollo, asociándose principalmente a los cultivos de maíz, maní y otras semillas. Para identificar y cuantificar la presencia de esta toxina en los granos, se implementó un método analítico de screening a través de la técnica inmunoenzimatica (ELISA), mediante la cual se analizó un total de 36 muestras (32 muestras de piensos y 4 de maíz en grano para alimento animal), utilizando un valor de corte de 5 ng/g como valor referencial analíticamente aceptable, siendo todos sus resultados no detectados a un nivel de control de 5 ng/g. Posteriormente, se reanalizaron 10 de estas muestras, utilizando cromatografía líquida de alta resolución acoplada a un detector de fluorescencia (HPLC-FL), técnica mediante la cual no se evidenció señal en los tiempos de retención, lo que fue concordante con los resultados obtenidos por el métodos ELISA. Por otra parte, se implementó un diseño de programa para monitorear aflatoxinas B1 en alimentos destinado a la producción avícola, en la provincia de Huambo–Angola, contribuyendo a la entrega de información para implementar acciones de control y mitigación en la calidad e inocuidad alimentaria en la industria avícola / Aflatoxins are mycotoxins considered to be highly carcinogenic, aflatoxin B1 being a carcinogen of group 1, according to IARC. These mycotoxins have significant health and economic impacts, which makes them important targets for detection and quantification. Scientific evidence has shown that climate influences their presence, therefore, tropical and subtropical regions such as Huambo - Angola province are considered prone to their development, associating mainly to the crops of corn, peanuts and other seeds. In order to identify and quantify the presence of this toxin in the grains, an analytical method of screening was implemented through the immunoenzymatic technique (ELISA), through which a total of 36 samples were analyzed (32 samples of feed and 4 of corn for animal food), using a cut-off value of 5 ng / g as an analytically acceptable referential value, all of which results were not detected at a control level of 5 ng / g. Subsequently, 10 of these samples, using high-performance liquid chromatography coupled to a fluorescence detector (HPLC-FL), a technique whereby no signal was observed in the retention times, which was consistent with the results obtained by the ELISA methods. On the other hand, a program design was implemented to monitor aflatoxins in food destined to poultry production, in the province of Huambo-Angola, contributing to the delivery of information to implement control and mitigation actions in the quality and food safety in the poultry industry

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Se realizó la prueba de ELISA para evaluar la respuesta serológica de gallinas ponedoras comerciales según el plan de vacunación contra la Bronquitis Infecciosa (BI) aplicado en un plantel comercial, consistente en 8 vacunas vivas aplicadas al día de edad, 4, 7, 10, 14, 17, 20 y 70 semanas de edad. Un total de 500 gallinas constituyó la muestra de 25 lotes de gallinas de diferentes edades y número de vacunas aplicadas (20 sueros de cada lote). Estos lotes de gallinas estaban alojados en distintos sectores de esta empresa. Los lotes de gallinas con 6, 7 y 8 vacunas aplicadas, presentaron títulos de anticuerpos contra BI con una Media Geométrica (MG) de 1137 a 6612. El análisis estadístico según el número de vacunas aplicadas, demostró que hubo un incremento significativo de los títulos de anticuerpos después de 6 vacunas, al obtenerse una Media Aritmética (MA) de 2341; y vuelve a haber un incremento significativo a una MA de 4711 con 7 vacunas. Sin embargo, con 8 vacunas se logra una MA de 4434, que es estadísticamente similar a la anterior. El análisis estadístico de los sectores de gallinas con 7 vacunas, demuestra títulos de anticuerpos contra BI con una MA de 2887 a 6193, que estadísticamente se puede diferenciar en dos grupos principales. Los sectores de gallinas con 8 vacunas presentaron títulos de anticuerpos con una MA en un rango de 3799 a 5622, que también se diferencian, en dos grupos estadísticamente diferentes. Se concluyó que los títulos de anticuerpos obtenidos de diferentes lotes de gallinas, son compatibles con la información bibliográfica y manuales técnicos de la prueba de ELISA. Además, la diversidad de títulos de anticuerpos obtenidos entre los distintos lotes o sectores de gallinas, con o sin número de vacunas similares, pueden estar influenciadas por las diferencias temporales de la aplicación de las vacunas, diferencias estructurales de los galpones y los sectores, diferencias de las vacunas, diferencias de manejo y personal de vacunación, entre otros factores. / ELISA test was performed to evaluate serological response of commercial laying hens according to a vaccination plan against Infectious Bronchitis (IB) applied in a commercial farm. Five hundred laying hens were sampled from 25 flocks of different ages and number of vaccines given (20 sera from each flock). Flocks were located in different sectors of the farm. Flocks of hens with 6, 7 and 8 vaccines given, showed antibody titers against IB with a Geometric Mean (GM) from 1137 to 6612. The statistical analysis according to the number of applied vaccines, showed that there was a significant increase in antibody titers after 6 vaccines with an Arithmetic Mean (AM) of 2341; and again there was a significant increase of the AM to 4711 with 7 vaccines. However, with 8 vaccines, the AM of 4434 was statistically similar to the previous group. Statistical analysis of the hen sectors with 7 vaccines showed antibody titers against IB with an AM of 2887 to 6193, which statistically can be differentiated into two main groups. Sectors of hens with 8 vaccines, exhibited antibody titres with an AM in a range of 3799 to 5622, which also differ in two statistical different groups. It was concluded that antibody titers obtained from different flocks of hens are consistent with literature and technical guidelines for ELISA test. In addition, the diversity of antibody titers obtained among flocks or sectors of birds, with or without number of similar vaccines, may be influenced by temporary differences in the application of vaccines, structural differences of the facilities and building sectors, differences associated to vaccines, differences of management and vaccination staff, among others.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La Paratuberculosis o Enfermedad de Johne es una enteritis granulomatosa crónica de los rumiantes, causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, comunmente conocido como Mycobacterium paratuberculosis. Esta enfermedad se caracteriza por poseer un período de incubación de más de dos años, infectándose el animal en los primeros meses de vida, principalmente en el período neonatal. La gran mayoría de los animales infectados la cursan en forma subclínica, lo que dificulta inmensamente su diagnóstico, debido a la baja sensibilidad de los métodos existentes. El objetivo de este trabajo fue comparar y relacionar dos métodos diagnósticos, uno bacteriológico y otro serológico, en animales de predios infectados de la Región Metropolitana, con el fin de aportar con información para la implementación de un adecuado método de control de esta enfermedad en el país. Es así como se recolectó muestras de sangre y de deposiciones de 136 animales sintomáticos y asintomáticos procedentes de 2 rebaños lecheros infectados. Las muestras de suero fueron sometidas a una prueba de ELISA comercial y las muestras de deposiciones fueron cultivadas en medio de cultivo Herrold modificado con yema de huevo con y sin Micobactina J. Las muestras de deposiciones fueron procesadas previamente utilizando como decontaminante fecal el cloruro de hexadecilpiridinium y luego se realizó una incubación con los antibióticos, vancomicina, amphotericina B y ácido nalidíxico según el protocolo descrito por Whitlock y Rosenberger (1990). El 10,29% de las muestras de deposiciones resultaron positivas al cultivo, siendo confirmadas como tal, por su lento crecimiento sólo en el medio con Micobactina J (a partir de la octava semana) y mediante la técnica de tinción de Ziehl Neelsen. El diagnóstico serológico mediante la prueba de ELISA detectó un 83,8% de animales positivos. En este estudio hubo un alto porcentaje de muestras de cultivo contaminadas con hongos (44,85%), lo que resultó en una falta de asociación entre la prueba del cultivo fecal y la prueba de ELISA. El análisis estadístico mostró que no existe asociación entre las técnicas empleadas (P < 0,0001; kappa = 0,029). La alta tasa de contaminación de los cultivos se debió principalmente a que en algunas muestras se utilizó tubos, que en vez de tapa rosca, poseían un tapón de algodón cardé y que estaban además sellados con cinta “Parafilm”. El 90% de las muestras contaminadas correspondió a este tipo de tubos. Además un grado alto de contaminación siempre es esperable, debido a que se trabaja con material fecal. Para mejorar la técnica, se sugiere probar el método propuesto por Stabel (1997), quien propone el uso de antibióticos (vancomicina y ácido nalidíxico) en el medio de cultivo

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La Enfermedad de Chagas (ECh) es una zoonosis causada por el parásito Trypanosoma cruzi. En Chile, se estima que existen aproximadamente 160.000 personas infectadas. La ECh cursa con dos etapas clínicas, la etapa aguda y la crónica; un 30% de los pacientes desarrolla cardiopatía, megasíndromes digestivos o ambos. La mayoría de los individuos se encuentran en la fase crónica indeterminada, donde los resultados de tratamiento farmacológico no han sido concluyentes, debido a que la negativización total de las pruebas serológicas convencionales requiere años de seguimiento. Nifurtimox (NF) y Benznidazol (BZ) son los únicos fármacos autorizados para el tratamiento etiológico. El objetivo fue evaluar la eficacia de NF en el tratamiento de la ECh crónica en seguimiento prolongado utilizando parámetros serológicos, determinando si existen diferencias estadísticamente significativas entre dos grupos de estudio, utilizando las técnicas de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) y ELISA. La población en estudio estuvo conformada por 100 individuos con ECh crónica tratados (6,6 años promedio), 100 individuos con ECh crónica no tratados y 100 individuos negativos para ECh. Se realizó el análisis estadístico utilizando pruebas no paramétricas en ELISA (Mann Withney: p= 0,0003) y paramétricas en IFI (t Student: p=0,0001). Se logró determinar que existen diferencias estadísticamente significativas (p<0,05) en ambas pruebas. Concluyéndose que los niveles de IgG en individuos con ECh son menores en individuos tratados con NF, respecto a los no tratados, lo que indica eficacia quimioterapéutica en seguimiento prolongado / Human American Trypanosomiasis or Chagas disease (ChD) is caused by the protozoan parasite Trypanosoma cruzi. Probably affects 160.000 people in Chile. ChD has two successive phases: acute and chronic. Several years of starting the chronic phase, 30% of infected individuals develop irreversible lesions of the autonomous nervous system in the heart, digestive system, or both. Mostly infected are in the indeterminate form of human chronic ChD, without conclusive results, because the total negativization of conventional serological tests requires years of follow-up. Nifurtimox (NF) and benznidazole (BZ) are the availables drugs for the etiological treatment. The aim was to evaluate the efficacy of NF in the treatment of chronic ChD using serological parameters, determining if there are statistically significant differences between three study groups, using Indirect Immunofluorescence (IFA) and ELISA techniques. Study population consisted of 100 individuals with treated chronic ChD (6.6 years average), 100 individuals with chronic untreated ChD and 100 individuals negative for ChD. Statistical analysis was performed using nonparametric tests in ELISA (Mann Withney: p = 0.0003) and parametric tests in IFA (Student t test: p = 0.0001), which allowed determining that there are statistically significant differences (p <0.05) in both tests. It is concluded that the levels of IgG in individuals with ChD are lower in individuals treated with NF, compared to those not treated, indicating chemotherapeutic efficacy in prolonged follow-up / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1161485.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Con el objetivo de realizar una evaluación serológica de la respuesta inmune de pollos de engorde en condiciones de campo frente un programa no convencional de vacunación contra Bronquitis Infecciosa con dos vacunas de serotipos diferentes, se realizaron muestreos para obtener sueros de aves vacunadas con la cepa Ma5 del virus de la Bronquitis infecciosa al día de edad y una vacuna de la cepa 4/91 a los 14 días de edad para detectar anticuerpos a través de la técnica de ELISA. Para esto se muestrearon seis grupos (de 20 pollos cada uno) de aves comerciales en condiciones de campo a los días 14, 28 y 35 de edad en cada día, además de utilizar dos grupos en condiciones experimentales, uno bajo el mismo protocolo no convencional de vacunación y el segundo grupo como control negativo (sin vacunas) muestreados en los mismos días y la misma cantidad de individuos. Además, se muestrearon 20 pollos al día de edad para determinar el nivel de anticuerpos maternos. El resultado de los títulos de anticuerpos fue una baja considerable en el día 14 de edad (dos semanas post vacunación) en comparación a los títulos de anticuerpos maternos, con un leve aumento en el día 28 de edad (4 semanas post primera vacunación y dos semanas post segunda vacunación), y con un mayor aumento en el día 35 presentándose todas las medias geométricas positivas, excepto por el grupo Control negativo experimental. Se determinó la existencia de diferencias significativas entre los grupos en el día 35 de muestreo a través de la prueba de ANOVA para luego identificar a través de la prueba de Tukey entre cuáles grupos había diferencias, observándose que el grupo Control negativo experimental se diferencia del resto y el grupo Experimental vacunado no presenta diferencias significativas con la mayoría de los grupos de campo / In order to perform a serological evaluation of the immune response of broilers in field conditions using an unconventional program of vaccination against Infectious Bronchitis with two vaccines of different serotypes, samples were taken to obtain sera from birds vaccinated with the Ma5 strain of infectious bronchitis virus at day of age and a vaccine of the strain 4/91 at 14 days old to detect antibodies through the ELISA technique. For this, six groups (of 20 chickens each) of commercial birds were sampled under field conditions on days 14, 28 and 35 old, for each day, in addition two groups were used under experimental conditions, one under the same protocol of non conventional vaccination and the second group as negative control (without vaccines) sampled in the same days and the same number of individuals per group were used. In addition, 20 chickens were sampled at one day old to determine the level of maternal antibodies. The result of the antibody titres showed a considerable decrease on 14 day old (two weeks post vaccination) compared to the maternal antibody titers, with a slight increase on 28 day old (4 weeks post first vaccination and two weeks post second vaccination), and with a greater increase on 35 day old showing all groups positive averages, except for the experimental negative control group. We determined the existence of significant differences between the groups on day 35 of sampling through the ANOVA test and then identify through the Tukey test between which groups there were differences, observing that the experimental negative control group is different from the rest and the Experimental vaccinated group does not present significant differences with most of the field groups

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se describe el desarrollo y validación de un Ensayo inmunoenzimático indirecto (ELISA-I) para el diagnóstico serológico de la infección por Brucella ovis (B. ovis) en ovinos, utilizando proteínas citosólicas de Brucella abortus RB51 (B. abortus RB51) como antígeno. Se probaron dos tipos de placas de poliestireno, NUNC 69620 y NUNC Maxisorp, dos tampones de sensibilización de diferente pH con dos alternativas de conjugado, el anticuerpo monoclonal anti IgG-caprino/ovino (Sigma A9452) y la proteína G (Sigma P81170). Las concentraciones óptimas de antígeno citosólico, sueros y conjugados fueron determinadas mediante titulación del tipo checkerboard. Para la validación del ensayo se utilizaron 55 sueros de ovinos considerados como infectados/expuestos, positivos a examen clínico, a un ELISA-I comercial, a la fijación del complemento (FC) y a la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y 338 sueros de ovinos no infectados, provenientes de un rebaño ovino libre de infección, negativos a la prueba de FC. El punto de corte diagnóstico fue determinado a través del método de las características del tipo receptor-operador (ROC). El ELISA-I desarrollado con anticuerpo monoclonal como conjugado mostró mejores valores de sensibilidad (90,9%) y especificidad (95,9%). Estos resultados, a pesar de ser significativos, son deficientes para ser considerados de utilidad diagnóstica y lograr un adecuado control de la infección en rebaños ovinos. La baja sensibilidad obtenida al utilizar proteínas citosólicas como antígeno estaría relacionada con la escasa exposición al antígeno y la corta memoria inmunológica que generarían este tipo de proteínas en un animal infectado.