La brucelosis canina es una enfermedad infecciosa ocasionada por la bacteria Brucella canis (B. canis) que se caracteriza por la presentación de diversos transtornos reproductivos. Además, debido a su carácter zoonótico, es considerada una enfermedad ocupacional en seres humanos. El presente estudio evaluó la prevalencia de seroreactores a B. canis en el distrito de Los Olivos a través del método de diagnóstico serológico: Inmunodifusión en Agar Gel (IDAG). Con este fin se recolectaron 288 muestras de sangre de caninos provenientes de los sectores norte, sur, este y oeste del distrito. A partir de estas muestras se obtuvieron 1 mililitro de suero sanguíneo. Se realizó la prueba de IGDA con antígeno de B .canis para determinar seropositividad a brucelosis canina. Los resultados indicaron una prevalencia corregida de 5.43% (IC ± 2.31%) de seroreactores a B. canis. Los resultados del análisis univariado no demostraron asociación estadística significativa entre las variables incluidas en el estudio (edad, sexo, condición fisiológica, hábitos de paseo e historia reproductiva) sobre los resultados de serología a B. canis (p>0.05). El análisis multivariado mediante el modelo de regresión logística multinomial (RLM) y el posterior análisis mediante el test de razón de Verosimilitud (LRTest) indicó que la edad de los perros (animales mayores de 1 año vs animales menores de 1 año) así como la historia reproductiva (animales sin historia de cruces vs animales con historia de cruces) son las variables que mejor explican los resultados de seropositividad a B. canis en el estudio. (LRTest Modelo regresión con edad e historia reproductiva p<0.05). Los resultados indican que existe exposición a B. canis en la población canina del distrito de Los Olivos, lo cual representa la gran importancia epidemiológica, dado el carácter zoonótico de la enfermedad. PALABRAS CLAVES: B. canis, IDAG, Brucelosis canina, prevalencia / --- Canine Brucellosis is an infectious disease caused by the Brucella canis bacterium (B. canis) characterized by the presentation of various reproductive disorders. Moreover, due to its zoonotic nature, is considered an occupational disease in human beings. This study evaluated the prevalence of seroreactors to B. canis in the district of Los Olivos through serological diagnostic method: Agar Gel Immunodiffusion (AGID). For this purpose, 288 blood samples were collected from dogs from areas north, south, east and west of the district. From these samples we obtained 1 milliliter of blood serum. The AGID with antigen B. canis was performed in order to determine canine brucellosis seropositivity. The results showed a corrected prevalence of 5.43% (IC ± 2.31%) of seroreactors to B. canis. The results of the univariate analysis did not show significant statistical association between the variables included in the study (age, sex, physiological condition, walking habits, reproductive history) on the results of serology to B. canis (p> .05).Multivariate analysis using multinomial logistic regression (MLR) and subsequent analysis using the Likelihood ratio test (LRTest) indicated that the age of the dogs (animals older than 1 year vs animals less than 1 year) and the reproductive history (animals without a history of animal crossings history vs. crosses) are the variables that best explain the results of seropositivity to B. canis in the study (LRTest regression model with age and reproductive history p <.05). The results indicate exposure to B. canis in the dog population of Los Olivos district, representing the epidemiological importance, given the zoonotic nature of the disease. KEYWORDS: B. canis, AGID, Canine Brucellosis, prevalence

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo de este estudio fue indagar la exposición frente a Brucella canis y Leptospira spp. a través de la detección de anticuerpos en cánidos silvestres y domésticos en la Isla Grande de Tierra del Fuego. Se analizó un total de 56 sueros, 15 de zorros culpeo fueguino, 12 de zorros chilla y 29 de perros domésticos. Dos técnicas serológicas fueron utilizadas para la detección de anticuerpos: contrainmunoelectroforesis (CIEF) y aglutinación microscópica (MAT) para brucelosis canina y leptospirosis, respectivamente. Los resultados mostraron la ausencia de anticuerpos contra B. canis y la presencia de anticuerpos contra Leptospira spp., con prevalencias de un 20% para zorros culpeo, 8,3% para zorros chilla y 3,4% para perros domésticos. Estos resultados se pueden explicar por factores tales como las características intrínsecas del agente infeccioso y/o ubicación de los animales analizados. Así, una comprensión más profunda sobre la interacción de los cánidos silvestres y domésticos con otras especies animales en un medio ambiente en común, es una herramienta esencial hacia la conservación de las especies endémicas en peligro de extinción de la Isla Grande de Tierra del Fuego como el zorro fueguino. / The objective of this study was to explore exposure against Brucella canis and Leptospira spp. through the presence of antibodies in wild and domestic canids in Isla Grande de Tierra del Fuego. A total of 56 sera, 15 from Fuegian culpeo foxes, 12 from grey foxes and 29 from domestic dogs, were analyzed. Two serological techniques were used for antibody detection: counterimmunoelectrophoresis (CIEF) and microscopic agglutination (MAT) for canine brucellosis and leptospirosis, respectively. The results showed the absence of antibodies against B. canis and the presence of antibodies against Leptospira spp., with prevalence’s of 20% for culpeo foxes, 8.3% for grey foxes and 3.4% for domestic dogs. These results could be explained by factors such as intrinsic characteristics of the infectious agent and/or location of the test animals. Thus, a deeper understanding of the interaction of wild and domestic canids with other animal species in an environment in common, is an essential tool towards the conservation of the endangered endemic species from the Isla Grande de Tierra del Fuego like the Fuegian fox.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Se muestrearon aleatoriamente 384 caninos de clínicas veterinarias de las 34 comunas del Gran Santiago, determinándose la seroprevalencia de brucelosis canina por Brucella canis. Los animales correspondieron a mayores de seis meses de edad, sin distinción de sexo, raza ni condición sanitaria. La técnica empleada fue contrainmunoelectroforesis con antígeno LPS-R de Brucella ovis, y se realizó en los Laboratorios de Microbiología de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile. Junto a la extracción de muestra sanguínea se realizó una encuesta por animal, para determinar el conocimiento sobre la patología por parte del propietario de la mascota, la existencia o no de sospecha del Médico Veterinario tratante y, antecedentes reproductivos relacionados. Serológicamente se obtuvieron 21 muestras sospechosas, a las cuales no se les realizó seguimiento y por lo tanto fueron descartadas. De las 363 restantes se obtuvieron 16,8% (61/363) resultados positivos y 83,2% (302/363) negativos. Según positividad y sexo, el 19,6% de los positivos correspondieron a machos y el 14,5% a hembras, sin diferencias significativas (p>0.05). Se observó una relación de positividad con la edad de las mascotas, obteniéndose la mayor positividad en el grupo de animales de 3 a 5 años. La sensibilidad del médico veterinario a diagnosticar los positivos fue de 24,5% y la especificidad a establecer los negativos fue de 90%. El valor predictivo entre sospecha clínica del veterinario tratante y seropositividad fue de 34,1%. La encuesta reveló escaso conocimiento de los propietarios sobre brucelosis canina; sólo el 4,2% recordó al menos un signo de la enfermedad. La mayoría de los animales positivos resultaron asintomáticos y dentro de los signos clínicos observados, apareció con mayor frecuencia el aborto en hembras y la orquitis en machos. Se destaca la presencia de animales menores de 1 año positivos a brucelosis canina y con antecedentes de no presentar cruza previa

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El diagnóstico definitivo y específico de la brucelosis en caninos, causada por Brucella canis (B. canis), se realiza mediante el aislamiento de la bacteria desde muestras patológicas o fluidos. Sin embargo, como la enfermedad se caracteriza por presentar periodos abacterémicos, un cultivo negativo no excluye la posibilidad de infección. Debido a que se utiliza ampliamente la detección de anticuerpos frente a la infección y que tanto B. ovis y B. canis comparten componentes antigénicos con la cepa vacuna Brucella abortus RB51 (B. abortus CRB51), ésta podría ser usada como antígeno en el diagnóstico serológico de la enfermedad. En el presente estudio, se describe un enzimoinmunoensayo indirecto (ELISA-I) para el serodiagnóstico de brucelosis canina utilizando un extracto altamente purificado de lipopolisacárido rugoso (LPS-R) de Brucella abortus CRB51, cuyos resultados fueron comparados con la técnica contrainmunoelectroforesis (CIEF) que utiliza un antígeno extraído de una cepa rugosa de B. ovis, con diferentes componentes, incluyendo al LPS-R. En este estudio se incluyeron 156 sueros de perro, muestras para diagnóstico de brucelosis canina mediante CIEF, que fueron recibidas en el laboratorio de Microbiología de FAVET. El análisis de los resultados indicó asociación estadística entre ambas pruebas (p>0,05) para el diagnóstico de brucelosis canina. Además, ambas pruebas obtuvieron un alto índice de concordancia (K= 0,961). Estos resultados hacen del ELISA-I propuesto una prueba promisoria al utilizar un antígeno más purificado y entregar resultados cuantitativos

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La Brucelosis canina es una enfermedad infectocontagiosa zoonótica causada por la bacteria Brucella canis, afectando principalmente el sistema reproductivo de los perros en ambos sexos. Los signos de esta enfermedad no son evidentes clínicamente e incluso muchos pueden ser asintomáticos. Se caracteriza por producir aborto tardío en hembras y orquitis, epididimitis e infertilidad en machos, pero muchas veces estos signos pueden pasar desapercibidos. En este estudio se determina la sensibilidad analítica de un ensayo PCR tanto para muestras de sangre contaminadas como en cultivos puros para el diagnóstico de brucelosis canina, comparando dos métodos de extracción de DNA. Como resultado se obtuvo que la prueba PCR es capaz de detectar la bacteria en sangre pero obteniendo resultados positivos sólo con uno de los métodos de extracción, detectándose DNA hasta el nivel de los femtogramos / Proyecto FIV 121014019102003

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La brucelosis canina constituye un problema para la salud animal y humana, que cobra especial relevancia en los criaderos caninos, debido a sus mecanismos de transmisión, alto potencial de diseminación en estos y a los efectos perjudiciales que causa en la fertilidad de los animales afectados. El diagnóstico definitivo es el diagnóstico directo mediante cultivo, pero por inconvenientes prácticos y costos asociados es poco factible de aplicar en criaderos que busquen diagnosticar a todos sus animales. Surge entonces la serología como alternativa de diagnóstico indirecto. Dentro de estas técnicas, la denominada prueba de aglutinación rápida en placa con 2-mercaptoetanol (2ME-RSAT), se consideró como una atractiva alternativa de “screening” para el diagnóstico de Brucella canis en Chile. Esto dada su rapidez en la obtención de resultados, facilidad de implementación y bajo costo La presente memoria de título implementó la prueba de 2ME-RSAT, ya utilizada en otros países, en el laboratorio de bacteriología de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile (LaBFAVET). Estableciéndose que presentó una sensibilidad de 100% y una especificidad de 74,3%, utilizando la prueba de contrainmunoelectroforesis (CIEF) como técnica de referencia. Se trabajó con 23 sueros controles positivos de perras experimentalmente infectadas y 39 sueros controles negativos provenientes de perros negativos por CIEF y sin sospecha clínica de Brucella canis. El antígeno utilizado fue una suspensión de células inactivadas de B. canis. Se calcularon además las concordancias del 2ME-RSAT con las pruebas de CIEF y ELISA indirecto, actualmente realizadas en la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias (FAVET) de la Universidad de Chile. La sensibilidad y especificidad obtenidas permiten suponer la utilidad del 2ME-RSAT como “screening” diagnóstico. Pero la concordancia moderada con CIEF (k = 0.489) y baja con ELISA (k = 0.143), ponen en duda dicha utilidad / Canine brucellosis is a disease that signifies a problem for animal and human health, but has especial significance for breeding kennels, where its transmission mechanisms and high potential for dissemination are important factors, as well as the negative consequences it causes in affected animals. Direct diagnostic through bacteriological culture is the gold standard but due to practical problems and associated costs, it is not a feasible alternative for breeding kennels that seek to test all their animals. Indirect diagnostics through serology is therefore a plausible option. Due to its potential for obtaining results in a short time frame, its simple implementation and low cost, the rapid slide agglutination test with 2-Mercaptoethanol (2ME-RSAT) was considered an attractive alternative for the screening diagnostic of Brucella canis. This thesis implemented the 2ME-RSAT test, already used in other countries, in the Laboratory of Bacteriology at de Faculty of Veterinary Sciences of the University of Chile. Determining a sensitivity of 100% and specificity of 74,3%, with counter-immuno-electrophoresis (CIEP) as the referential technique. The materials employed were: 23 positive control serums obtained from experimentally infected bitches, 39 negative control serums from dogs negative by CIEP and without clinical signs of canine brucellosis. The antigen used was a suspension of inactivated B. canis cells. The agreement with CIEP and indirect ELISA techniques, both performed at the University of Chile Veterinary Diagnostics Laboratories, was also calculated. The sensitivity and specificity levels obtained suggest the plausibility of employing 2ME-RSAT as a diagnostic screening test. However the agreement results, moderate for CIEP (k = 0.489) and low for ELISA (k = 0.143), cast doubts on its usefulness. Various factors could explain this contradiction and are detailed in the discussion

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La brucelosis canina es una enfermedad zoonótica causada por Brucella canis, la cual produce signos reproductivos como abortos en hembras e infertilidad en machos, siendo transmitida al hombre a través de contacto con perras que hayan parido o abortado recientemente o por exposición a la bacteria en laboratorios. La enfermedad actualmente presenta tres puntos críticos y que afectan directamente su control y prevención: i) no existen vacunas comerciales, ii) no hay tratamientos antimicrobianos exitosos y iii) existen problemas en el diagnóstico por cultivo tradicional debido a su lento crecimiento e intermitencia en la bacteremia, y problemas en la sensibilidad y especificidad de las técnicas serológicas en el diagnóstico indirecto. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) surge entonces como una opción de diagnóstico por ser altamente sensible y específica, otorgando además una pesquisa rápida. En el presente estudio se estableció la sensibilidad analítica de un protocolo de PCR convencional con partidores diseñados en el país en cultivo puro, muestras de sangre y orina para el diagnóstico de B. canis. La sensibilidad analítica en cultivo puro fue de 22,24 fg/μL de DNA y en muestras de sangre y orina experimentalmente contaminadas de 4,4x100 UFC/mL. La elevada sensibilidad analítica determinada sugiere que este protocolo puede ser utilizado como una alternativa de alto valor para el diagnóstico de B. canis en las muestras mencionadas, siendo importante continuar con esta línea de investigación, orientando estos hacia un estudio más detallado de especificidad y estudios de sensibilidad analítica en otras matrices. / Canine brucellosis is a zoonotic disease caused by Brucella canis, which produces reproductive signs such as abortion in bitches and infertility in dogs. These being transmitted to humans by contact with bitches that have recently given birth or aborted or by exposure to the bacteria in laboratories. Currently, the disease has three critical points that, to date, have not been resolved and that directly affect the control and prevention of this: i) there are no commercial vaccines, ii) no successful antimicrobial treatments and iii) problems in diagnosis; existing both difficulties to isolate the agent because of its slow growth and intermittent bacteremia in bacterial culture, and sensitivity and specificity problems in the numerous serological techniques. The PCR, thus, emerges as a diagnostic option due to its highly sensitive and specific nature, providing a fast diagnosis as a result. In the present study, the analytical sensitivity of conventional PCR protocol with primers designed in the country in pure culture, blood and urine samples for diagnosis of B. canis was established. The analytical sensitivity in pure culture was 22,24 fg/μL of DNA, and in experimentally contaminated blood and urine samples 4,4x100 UFC/mL. Given the high analytical sensitivity suggests that this protocol can be used as a highly valuable alternative for the diagnosis of this disease in the samples mentioned, understanding - consequently -, the major importance to continue this line of research, orienting these to a more detailed study of specificity, and analytical sensitivity studies in other matrices.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias / Se determinó la seroprevalencia de brucelosis canina, producida por Brucella canis, en perros con dueño, con el fin de conocer la realidad de esta infección en el Gran Santiago. Para ello se muestrearon 449 perros pertenecientes a las 34 comunas que lo conforman, de ambos sexos y mayores a 6 meses de edad, los cuales fueron distribuidos por zonas (centro, norte, sur, oriente, poniente). A estos perros, se les extrajo una muestra sanguínea, las cuales se analizaron a través de la técnica de ELISA indirecto, utilizando como antígeno un lipopolisacárido rugoso (LPSR) de Brucella abortus RB51. Junto con la obtención de las muestras, se realizó una encuesta, con el fin de asociar la positividad a la infección de B. canis a factores de riesgo, mediante un modelo de regresión logística múltiple. Se obtuvieron 40 muestras positivas, lo que representa una seroprevalencia corregida por estrato de 8,7%; EE= 2,8% (IC: 5,9% - 11,5%) en el Gran Santiago, la mayoría provenientes de centros de esterilización municipales (74% del total), siendo la zona sur y poniente las de mayor importancia. De las 449 muestras totales, sólo 392 muestras fueron consideradas para identificar los factores de riesgo, ya que las 57 muestras restantes no presentaron información sobre la variable “Número de cruzas que ha tenido”. Las variables independientes “Edad (en años)” (O.R.= 1,18), “Total de perros que viven juntos” (O.R.= 1,12) y “Número de cruzas” (O.R.= 1,37) fueron significativas y consideradas factores de riesgo. Con los resultados de este estudio se concluye que el 8,7% de los perros con dueños del Gran Santiago se infectaron con Brucella canis, infección que se asoció positivamente a la edad, al número de perros que cohabitan y al número de cruzas, lo que recalca la importancia que implica el control de brucelosis canina por B. canis en salud pública, principalmente a través de la esterilización temprana de las mascotas, por ser una enfermedad zoonótica y por el hecho de que las muestras se obtuvieron de pacientes clínicamente sanos.