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Determinación de carga viral de circovirus porcino en cerdos inmunizados con una vacuna oral experimentalMartínez Vásquez, Jonatán Armando January 2016 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El circovirus porcino tipo 2 (PCV-2), es un virus pequeño (1768 nucleótidos), ubicuo y resistente en el ambiente. PCV-2 es considerado como el agente etiológico necesario, mas no suficiente para la presentación del Síndrome multisistemico de desmedro postdestete (PMWS). Este síndrome se caracteriza por provocar una severa inmunosupresión, además de un retraso en el crecimiento de los cerdos. Una de las medidas sanitarias efectivas que se reconoce a la hora de disminuir los efectos provocados por el PCV-2 es la inmunización a través de vacunas. Estas en su mayoría son administradas de forma parenteral y han demostrado mejorar índices productivos como ganancia de peso diario y disminución de la mortalidad. En este estudio se evaluó la carga viral de PCV-2 en suero de cerdos, que fueron inmunizados con una vacuna experimental de administración oral que utiliza como agente antigénico la proteína CAP de PVC-2 versus una vacuna comercial de administración parenteral y un grupo control sin inmunizar. Los resultados indican que no existe diferencia significativa en la carga viral de los tres grupos estudiados en los distintos días de muestreo. / Porcine circovirus type 2 (PCV-2) is a small virus (1768 nucleotides), ubiquitous and resistant in the environment. PCV-2 is considered as the necessary, but not sufficient, etiologic agent for post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). This syndrome is characterizes by causing severe immunosuppression and delayed growth of pigs. One of the effective sanitary measures recognized when decreasing the effects caused by PCV-2 is immunization through vaccination. These are mostly parenterally administered and have shown to improve production rates such as daily weight gains and decreased mortality. This study evaluated the viral load of PCV-2 in serum from pigs which were immunized with and experimental oral vaccine that use the CAP protein as an antigenic agent versus a commercial vaccine for parenteral administration and a control group unimmunized. The results indicate no significant difference in viral load of the three groups during different days of testing. / Financiamiento: : Proyecto Fondef IT13120021.
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Efectos en el patrón de seroconversión de cerdos vacunados de manera oral contra circovirus porcino tipo 2Poblete Recabal, Joaquín Ignancio January 2015 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / No autorizada por los autores para ser publicada a texto completo / Proyecto Fondecyt 11110135
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Efecto en los parámetros productivos de cerdos vacunados de manera oral contra circovirus porcino tipo 2Núñez Oyarzún, Ignacio Andrés January 2014 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La producción de cerdos representa la mayor producción de carne del país, por lo tanto se hace cada vez más necesario innovar para controlar de manera preventiva las enfermedades prevalentes en los planteles. Una de estas patologías, es el síndrome de desmedro multisistémico post destete (PMWS), este síndrome es multifactorial y uno de sus causantes más importante es el circovirus porcino tipo II (PCV-2), el cual se encuentra en cerca del 100% de los planteles productivos de cerdos a nivel mundial. Esta situación ha elevado la importancia de la vacunación dentro de la producción, siendo hasta el momento la vacunación parenteral la predilecta. Aunque eficaces, las vacunas parenterales tienen ciertas desventajas, incluyendo estrés animal e inmunosupresión concomitante, además de la implicancia de procedimientos laboriosos asociados. Debido a esto, se están explorando rutas alternativas de administración de vacunas, como la oral, para inmunizar contra el PCV-2. Las vacunas orales, potencialmente suministradas en el alimento o agua bebida, representan una mejora tecnológica en el suministro de antígeno, superando los problemas relacionados con el manejo de la inyección y facilitando el reforzamiento del antígeno cuando la inmunidad de los animales está por debajo del umbral protectivo. En este estudio se prospectó el desarrollo de una vacuna oral contra PCV2, recubriendo el antígeno de la cápside viral con moléculas de quitosano, polímero natural que otorga protección frente a los efectos nocivos del sistema digestivo del cerdo, para una entrega eficiente del antígeno a nivel de la mucosa intestinal. Finalmente, se probó a escala piloto la vacuna oral dentro de un plantel comercial, evaluando dos variables productivas, ECA y GDP, comparándolas versus animales sin inmunizar y animales vacunados con una vacuna comercial intramuscular. Como resultado se obtuvo que la GDP fue mayor en el grupo inoculado con la formulación comercial, y la ECA no mostró diferencias entre los tres grupos. / Proyecto Fondecyt 11110135
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Comparación del patrón de seroconversión contra circovirus porcino tipo 2 (PCV-2) entre cerdos vacunados y cerdos infectados naturalmenteAldunce Forttes, Izvara Odette January 2012 (has links)
Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Las enfermedades asociadas a circovirus porcino tipo 2 (PCV-2) son consideradas el
problema productivo y económico más grande de la industria porcina mundial. Además de mejorar
la gestión y las prácticas de manejo (mejor higiene, menor hacinamiento y mejor ventilación), la
disponibilidad de vacunas anti-PCV-2 representa la opción inmunológica más eficaz para paliar el
impacto de estas enfermedades.
Para el presente estudio y con la finalidad de estudiar el patrón de seroconversión contra
PCV-2 entre cerdos vacunados con una vacuna comercial versus cerdos infectados naturalmente, se
montó un ensayo de ELISA indirecto, usando como sustrato específico una versión recombinante de
la subunidad proteica involucrada con el ensamblaje de la cápside viral (Cap). De estos análisis se
concluyó, en primera instancia, que dicha estructura pudo ser reconocida en forma específica tanto
por los sueros de los animales vacunados como no vacunados infectados naturalmente, analizados a
distintos periodos de tiempo: 30, 50, 70, 90, 110 y 130 días, siendo posible analizar el patrón de
seroconversión IgM/IgG anti-PCV-2 en dichos animales.
En este estudio se concluye que el efecto diferenciador de la prueba montada de ELISA
indirecto entre animales vacunados o no vacunados, depende si es que el animal cuenta o no con
inmunidad de base materna anti-PCV-2, pudiendo ser esta una condición interferente con la
vacunación temprana. Así, fue posible organizar y dividir los datos del patrón de seroconversión
IgM/IgG anti-PCV-2 bajo cuatro escenarios distintos de resultados: 1, animales vacunados con baja
inmunidad de base; 2, animales vacunados con alta inmunidad de base; 3, animales no vacunados
con alta inmunidad de base y 4, animales no vacunados con baja inmunidad de base.
Si bien en el presente estudio la determinación de la presencia de anticuerpos totales contra
PCV-2, no resultó ser útil para diferenciar anticuerpos neutralizantes, los resultados presentados y
discutidos en esta memoria son de utilidad para evaluar el status de seroconversión general contra
PCV-2 de un plantel nacional de producción porcina / Fondecyt 11110135
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Evaluación de la inducción de anticuerpos en un esquema de vacunación oral contra circovirus porcino tipo 2 (PCV -2) usando un modelo experimental murinoBernales Urrutia, Carola del Pilar January 2013 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Las enfermedades asociadas a circovirus porcino tipo 2 (PCV2) son consideradas el problema económico más grande de la industria porcina mundial. Además de mejorar la gestión y las prácticas de manejo (mejor higiene, menor hacinamiento y mejor ventilación), la disponibilidad de vacunas anti-PCV2 representa la opción inmunológica más eficaz para paliar el impacto de estas enfermedades. La proteína de la cápside de PCV2 (Cap) es un importante antígeno para el desarrollo de vacunas. Actualmente, la mayoría de las vacunas comerciales anti-PCV2 se producen como formulaciones inyectables de este antígeno. Aunque eficaces, estas vacunas tienen ciertas desventajas, incluyendo estrés animal e inmunosupresión concomitante, además de la implicancia de procedimientos laboriosos asociados y consumidores de tiempo. En este estudio, una cepa recombinante de la levadura Saccharomyces cerevisiae fue utilizada como vector y vehículo para entregar el antígeno de la cápside viral proveniente de un aislado nacional de PCV2. Este procedimiento se realizó con el fin de obtener datos dirigidos a estudiar el desarrollo de una vacuna oral contra el virus. De esta forma, el potencial inmunogénico de este sistema fue probado en ratones BALB/c, después de la administración de la levadura recombinante vía oral, bajo dos formulaciones distintas, como cepa viva y como extracto sonicado. Para esto, el gen cap químicamente sintetizado con la preferencia codogénica optimizada de la levadura (opt-cap) fue replicado en Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae a través del vector, pYES2. La expresión de la proteína Cap en la levadura fue confirmada a través de Western Blot con suero anti PCV2. Posteriormente, resultados de experimentación in vivo confirmaron que la administración oral en ratones de extractos sonicados de la levadura recombinante, estimulan la inducción de anticuerpos séricos y fecales específicos contra el antígeno Cap más eficientemente que la cepa viva. Estos resultados demostraron que es factible utilizar la levadura S. cerevisiae como un sistema seguro y simple de producir antígenos virales de PCV2, y de esta manera, su entrega vía oral podría ser una estratégica alternativa para inducir eficientemente anticuerpos anti-PCV2. Los resultados obtenidos en esta memoria en un modelo murino, están dirigidos a realizar investigación adicional en cerdos, el hospedero natural de PCV2 / Financiamiento: Proyecto Fondecyt de Iniciación en Investigación No. 1111013 y el Proyecto de Iniciación en Investigación de la Vicerrectoría de Investigación y Desarrollo de la Universidad de Chile, VID I 07/15-2
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Efecto en la carga viral y seroconversión en cerdos inmunizados con dos formulaciones distintas de vacunas contra circovirus porcino tipo 2Bassa Marcoleta, Oliver Andrés January 2017 (has links)
Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Medicina Preventiva Animal / El circovirus porcino tipo 2 (PCV2) es un virus que tiene estrecha relación con
importantes enfermedades en el ganado porcino y es por ello que ha sido de gran
interés de estudio el buscar las mejores alternativas posibles para poder disminuir
el impacto de este agente en la industria porcina. Una de estas alternativas es
disponer de mejores vacunas contra PCV2, entregando así una eficaz protección
inmunológica frente a este agente. La mayoría de las vacunas contra PCV2
poseen una formulación inyectable y aunque son eficaces, no están exentos de
problemas asociados a su administración. Es por ello que resulta de gran iteres de
estudio el poder evaluar la respuesta de una vacuna experimental de mucosa
(oral/intranasal) contra PCV2 en un plantel porcino, midiendo la carga viral y
respuesta humoral resultante de la inmunización de cerdos con esta vacuna.
Material y Método: Se utilizaron 4 grupos de cerdos, un grupo control placebo, otro
inmunizado con una vacuna comercial inyectable contra PCV2 (Circumvent) y los
otros dos grupos fueron inmunizados con una vacuna contra PCV2 basada en
extracto crudo de levadura, enriquecida con VLPs de PCV2 microencapsulada con
quitosano sulfatado (QS), utilizando la vía oral/intranasal e inyectable. Se
analizaron muestras sanguíneas midiendo asi la carga viral mediante qPCR y
anticuerpos totales por ELISA para cada grupo de tratamiento.
Resultados: La inmunización contra PCV2 bajo una formulación de
microencapsulación de antígenos VLPs utilizando quitosano funcionalizado, logró
ser mas eficaz en bajar la carga viral en su formato inyectable en comparación a
los demás grupos. En cuanto a la generación de anticuerpos, si bien los tres
grupos inmunizados tuvieron mejores resultados que el grupo placebo, la
formulación comercial obtuvo diferencias significativas por sobre el resto.
Conclusión: Si bien la vacuna experimental genera protección contra PCV2, no fue
posible en este estudio identificar de manera certera la vía inmunológica con la
cual la vacuna protege al animal. Lo mas probable es que sea mas bien por una
respuesta inmune celular contra PCV2. / Porcine circovirus type 2 (PCV2) is a virus that is closely related to major diseases
in pigs and it has been of great interest to study the find the best possible
alternatives to reduce the impact of this agent in the industry swine. One such
alternative is for better vaccines against PCV2, thus delivering an effective immune
protection against this agent. Most PCV2 vaccines have an injectable formulation
and while effective, are not exempt from problems associated with its
administration. That is why it is of great Turistic of study to evaluate the response
of an experimental vaccine mucosa (oral / intranasal) against PCV2 in a pig
campus, measuring viral load and humoral response resulting from immunization
of pigs with this vaccine.
Material and Methods: 4 groups of pigs, a placebo control group, another
immunized with an injectable commercial vaccine against PCV2 (Circumvent) and
the other two groups were used were immunized with a vaccine against PCV2
based crude extract of yeast, enriched with VLPs PCV2 microencapsulated with
sulfated chitosan (QS) using oral / intranasal and injectable route. blood samples
were analyzed by measuring the viral load so by qPCR and total antibody by
ELISA for each treatment group.
Results: Immunization against PCV2 under a microencapsulation formulation VLPs
antigens using functionalized chitosan, managed to be more effective in lowering
the viral load in its injectable form compared to the other groups. As for the
generation of antibodies, although the three immunized groups did better than the
placebo group, the commercial formulation obtained significant differences over the
rest.
Conclusion: Although the experimental vaccine generates protection against
PCV2, it was not possible in this study to accurately identify the immunological
pathway with which the vaccine protects the animal. It is more likely to be due to a
cellular immune response to PCV2. / Financiamiento: Proyecto Fondef No. IT13I20021.
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Detección y caracterización genotípica de circovirus porcino tipo 2 en ChileNoriega Alvarado, Jorge Andrés January 2008 (has links)
Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / El circovirus porcino tipo 2 (PCV2, del Inglés Porcine Circovirus Type 2)
pertenece a la familia circoviridae, la cual está constituida por virus pequeños y sin
envoltura, con un genoma de ADN circular de hebra simple. El genoma de PCV2
codifica en forma divergente para dos marcos de lectura abiertos (ORFs, del Inglés Open
Reading Frames) involucrados en la formación de la cápside (cap) y el complejo de
replicación viral. Este virus es considerado el agente etiológico principal de una
enfermedad emergente en nuestro país, denominada Síndrome del Desmedro
Multisistémico Postdestete (PMWS, del Inglés Postweaning Multisystemic Wasting
Sindrome) en cerdos, el cual se caracteriza por generar una inmunosupresión severa, con
pérdida progresiva de peso y deterioro general de la condición corpórea, lo que
acompañado por una serie de infecciones concomitantes, llevan a la muerte prematura
del animal, con las consecuentes pérdidas económicas en los países productores.
Si bien es un síndrome ampliamente distribuido en el mundo y muy común en
todos los planteles productores de cerdos, la presencia de PCV2 en Chile no ha sido del
todo demostrada. El objetivo de esta memoria de título fue detectar la presencia de
circovirus porcino tipo 2 en Chile y caracterizar su genotipo.
La detección del virus se realizó por medio de PCR desde muestras de linfonodos
inguinales superficiales de cerdos con signología PMWS, pertenecientes a 3 planteles
porcinos de la zona central de Chile, analizándose al menos 5 casos por plantel.
El gen orf2 del virus fue detectado en el 100 % de las muestras analizadas, tanto
por PCR simple como por PCR semi-cuantitativo. Por otra parte, con el fin de realizar
una caracterización genotípica del virus, el gen orf2 fue sometido a un análisis de la
longitud de los polimorfismos de los fragmentos de restricción (RFLP, del inglés
restriction fragment length polymorphism), no encontrándose diversidad genética, intrae
inter-planteles, entre las muestras analizadas, las cuales presentaron un patrón RFLP
igual a un clon europeo usado como control.
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Posteriormente se realizó la secuenciación nucleotídica en ambos sentidos, tras el
clonamiento, de cuatro secuencias aisladas de los diferentes predios. Las secuencias
presentaron un 94% de identidad nucleotídica entre si y su análisis filogenético las
agrupó en un clado específico, junto con aislados suecos y algunos aislados chinos.
Además, este análisis junto a revisión bibliográfica reciente, permitió diferenciar las
secuencias en dos subgrupos o subgenotipos del virus, 1 y 2. De esta manera fue posible
concluir que el circovirus porcino tipo 2 esta presente en nuestro país y que las cepas
analizadas corresponden al subgrupo 1, presentando una estrecha relación con genotipos
de origen Europeo / Bicentenario
Banco Mundial-Conicyt PSD2; Iniciación en Investigación de la Vicerrectoría de
Investigación y Desarrollo de la Universidad de Chile VID I07/15-2 y el Fondo de
Investigación Veterinaria FIV 2007 de la Facultad de Ciencias Veterinarias y
Pecuarias de la Universidad de Chile
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Determinación y comparación de la carga viral mediante qPCR en sueros de cerdos inmunizados y no inmunizados contra PCV-2 en ChileRisso Folatre, Victoria Paz January 2013 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La producción porcina en Chile aporta un importante porcentaje al total de toneladas de carne producidas anualmente en el país. Es por esta razón que se debe resguardar la calidad sanitaria de los cerdos y evitar enfermedades como la circovirosis la cual ha mostrado generar un gran impacto en la industria porcina mundial.
El agente causal de la enfermedad es Circovirus porcino tipo II (PCV-2), el cual genera un estado de inmunosupresión severo en los animales y consecuentemente, la manifestación de patologías secundarias que terminan por afectar el crecimiento del cerdo.
Además de mejorar la gestión y las prácticas de manejo (mejor higiene, menor hacinamiento y mejor ventilación), la disponibilidad de vacunas contra PCV-2 ha representado una opción inmunológica eficaz para paliar el impacto de estas enfermedades. Existen diferentes vacunas contra PCV-2, muchas de ellas probadas en otros países, pero con pocos referentes de su acción y eficacia en Chile. Además, la presencia de variantes genéticas de PCV-2 en el país, sugiere la importancia de evaluar la eficacia de formulaciones importadas actualmente usadas en la industria porcina nacional, con el fin de obtener información de relevancia para mejorar los protocolos de prevención y control de la enfermedad.
En el presente estudio y con la finalidad de evaluar el efecto de una vacuna comercial contra PCV-2 en Chile, se midió la carga viral de dicho virus en cerdos de un plantel nacional de producción porcina bajo un programa de vacunación contra PCV-2. Para esto, se implementó y estandarizó un ensayo de PCR tiempo real usando SYBR® Green y se utilizó una cohorte de 30 animales (15 vacunados vs 15 no vacunados) muestreados a distintos periodos de tiempo: 30, 50, 70, 90, 110 y 130 días, como grupo de estudio.
Los resultados obtenidos permitieron concluir que en los primeros 90 días de la medición, la carga viral se mantiene en un nivel basal no existiendo diferencias estadísticamente significativas entre el grupo control no vacunado y aquellos animales en los cuales si se administró el producto. Posteriormente, se evidenció una significativa alza de carga viral en ambos grupos en el día 110 del estudio, sin embargo en los animales vacunados, este aumento en el parámetro es ligeramente más tardío (día 130 del muestreo). Por esto se dedujo que la vacuna tiene un factor protectivo sobre los animales al retardar el peak de carga viral en los cerdos vacunados / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11110135
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Síntesis y caracterización de micropartículas tioladas y sulfonatadas de quitosano para la formulación de una vacuna oral contra circovirus porcino tipo II (PCV2)Castillo Rivas, Andrea Paz January 2017 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El uso de micropartículas (MPs) de polímeros naturales ha sido descrito como una innovadora técnica de formulación de adyuvantes para diversas vacunas. Para esta memoria de título se utilizó quitosano (Qo) como polímero natural el cual se funcionalizó con grupos azufrados para preparar quitosano tiolado (QT) y sulfonado (QS). Con estos quitosanos se formularon micropartículas de quitosano tioladas (MPQT) y de quitosano sulfonadas (MPQS) cargadas con el antígeno del circovirus porcino tipo II (PCV2). Las micropartículas de quitosano (MPQ) formuladas y cargadas fueron obtenidas mediante técnicas de gelificación iónica y secado por atomización. Se determinó la presencia de grupos azufrados en las MPQ mediante Espectroscopía infrarroja transformada de Fourier (FTIR) y se caracterizaron en cuanto a morfología, tamaño y cantidad de carga mediante microscopía electrónica de barrido o Scanning Electron Microscope (SEM) y potencial Zeta. Por otro lado, además se evaluaron parámetros de Eficiencia de encapsulación (EE) y Rendimientos de la producción (R), se determinó también la presencia de antígeno mediante Dot Blot y se realizaron estudios in vitro de mucoadhesividad. Los resultados obtenidos por FTIR indicaron la aparición de nuevos picos de absorción que coinciden con los grupos -SH, con enlaces C-O-S y para grupos S=O. Mediante SEM se observó la formación de MPs de Qo con formas más o menos esféricas, bordes definidos, superficie lisa a rugosa, y tamaños que variaron entre 1 y 50 µm. Mediante potencial Zeta las MPQC y MPQT presentaron carga neta positiva mientras que las MPQS presentaron carga neta negativa. Todas las MPs poseen valores de EE superiores a 80%, R sobre 30% para MPs 1X y son positivas a la presencia de antígeno Cap de PCV2 al análisis por Dot Blot. Finalmente, los ensayos de mucoadhesividad mostraron que las MPQT y MPQS presentaron mejor mucoadhesividad respecto a MPQC. En conclusión, se logró preparar y caracterizar Qo funcionalizado con grupos tiol y sulfonato, formular tres tipos de MPs de Qo cargadas con antígeno Cap de PCV2 y caracterizadas en su totalidad. / The use of microparticles (MPs) of natural polymers has been described as an innovative technique of formulating adjuvants for various vaccines. For this title memory chitosan (Qo) was used as the natural polymer which was functionalized with sulfur groups to prepare thiolated (QT) and sulfonated chitosan (QS). With these chitosans, thiolated chitosan microparticles (MPQT) and sulphonated chitosan microparticles (MPQS) loaded with the porcine circovirus type II (PCV2) antigen were formulated. The formulated and loaded chitosan microparticles (MPQ) were obtained by ionic gelation and spray drying techniques. It was determined the presence of sulfur groups in the MPQ by Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) and these MPs were characterized in terms of morphology, size and amount of charge by means of Scanning Electron Microscope (SEM) and Zeta potential, besides evaluating such parameters such as encapsulation efficiency (EE) and yields of production (R), the presence of antigen was also evaluated by Dot Blot and finally in vitro mucoadhesivity studies were performed. The results obtained by FTIR indicate the occurrence of new absorption peaks that coincide with the groups -SH, with C-O-S bonds and for S = O groups. By SEM the formation of MPs of Qo with more or less spherical shapes, defined edges, smooth to rough surface, and sizes varying between 1 and 50 μm are observed. By means of zeta potential the MPQC and MPQT presented positive net load while the MPQS presented negative net load. All MPs have EE values higher than 80%, R about 30% for 1X MPs and are positive for the presence of PCV2 Cap antigen at Dot Blot analysis. Finally, mucoadhesivity assays show that MPQT and MPQS had better mucoadhesivity with respect to MPQC. In conclusion, it is possible to prepare and characterize Qo functionalized with thiol and sulfonate groups, to formulate three types of Qo MPs loaded with PCV2 Cap antigen and to characterize them in their entirety. / Financiamiento: Proyecto Fondef It13120021 & Fondecyt 1140660
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Detección y caracterización genotípica de circovirus porcino tipo 2 en ChileNoriega Alvarado, Jorge Andrés January 2008 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / El circovirus porcino tipo 2 (PCV2, del Inglés Porcine Circovirus Type 2)
pertenece a la familia circoviridae, la cual está constituida por virus pequeños y sin
envoltura, con un genoma de ADN circular de hebra simple. El genoma de PCV2
codifica en forma divergente para dos marcos de lectura abiertos (ORFs, del Inglés Open
Reading Frames) involucrados en la formación de la cápside (cap) y el complejo de
replicación viral. Este virus es considerado el agente etiológico principal de una
enfermedad emergente en nuestro país, denominada Síndrome del Desmedro
Multisistémico Postdestete (PMWS, del Inglés Postweaning Multisystemic Wasting
Sindrome) en cerdos, el cual se caracteriza por generar una inmunosupresión severa, con
pérdida progresiva de peso y deterioro general de la condición corpórea, lo que
acompañado por una serie de infecciones concomitantes, llevan a la muerte prematura
del animal, con las consecuentes pérdidas económicas en los países productores.
Si bien es un síndrome ampliamente distribuido en el mundo y muy común en
todos los planteles productores de cerdos, la presencia de PCV2 en Chile no ha sido del
todo demostrada. El objetivo de esta memoria de título fue detectar la presencia de
circovirus porcino tipo 2 en Chile y caracterizar su genotipo.
La detección del virus se realizó por medio de PCR desde muestras de linfonodos
inguinales superficiales de cerdos con signología PMWS, pertenecientes a 3 planteles
porcinos de la zona central de Chile, analizándose al menos 5 casos por plantel.
El gen orf2 del virus fue detectado en el 100 % de las muestras analizadas, tanto
por PCR simple como por PCR semi-cuantitativo. Por otra parte, con el fin de realizar
una caracterización genotípica del virus, el gen orf2 fue sometido a un análisis de la
longitud de los polimorfismos de los fragmentos de restricción (RFLP, del inglés
restriction fragment length polymorphism), no encontrándose diversidad genética, intrae
inter-planteles, entre las muestras analizadas, las cuales presentaron un patrón RFLP
igual a un clon europeo usado como control.
Posteriormente se realizó la secuenciación nucleotídica en ambos sentidos, tras el
clonamiento, de cuatro secuencias aisladas de los diferentes predios. Las secuencias
presentaron un 94% de identidad nucleotídica entre si y su análisis filogenético las
agrupó en un clado específico, junto con aislados suecos y algunos aislados chinos.
Además, este análisis junto a revisión bibliográfica reciente, permitió diferenciar las
secuencias en dos subgrupos o subgenotipos del virus, 1 y 2. De esta manera fue posible
concluir que el circovirus porcino tipo 2 esta presente en nuestro país y que las cepas
analizadas corresponden al subgrupo 1, presentando una estrecha relación con genotipos
de origen Europeo. / Porcine Circovirus pig type 2 belong to the family circoviridae, constituted by
small virus without envelope, with a simple circular strand DNA genome, which
codifies in divergent form for two open reading frames (ORFs) involved in the capsid
formation (Cap) and the viral replication complex. This virus is considered the mayor
the etiologic agent of an emergent disease in our country, denominated Postweaning
Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS, in pigs, which is characterized to generate a
severe immunosupression, with a progressive weight loss and general decline in the
fitness condition, which is accompanied by a series of concomitant infections, with the
premature death of the animal, and the consequent economic losses in the pig-producing
countries. Although it is a syndrome wide world distributed and very common in all the
pig-producing establishments, the presence of PCV2 in Chile has not absolutely been
demonstrated. The goal of this thesis was to detect the presence of porcine circovirus
type 2 in Chile and to characterize its genotype.
The detection of the virus was performed by PCR from lymph nodes samples of
PMWS-pigs, bellowing to 3 pig- producing establishments from the central zone of
Chile, analyzing 5 cases per establishment at least. The orf2 gene virus was detected in
100% of the analyzed samples, by simplex PCR and by semi-quantitative PCR. On the
other hand, in order to perform the virus genotypic characterization, the orf2 gene
amplified was analyzed by RFLP, not founding genetic diversity among the analyzed
samples intra- and inter-establishments; which presented the same RFLP pattern than
european isolated clone used as ingroup.
The nucleotide sequenciation, after cloning, was performed in both strand in four
isolated sequences from different pig-producing establishment. The sequences presented
a 94% of nucleotidic identity each other. The phylogenetic analysis clustered them in
specific clade, near to some swedish and chinese isolated. This analysis, together to
recent bibliographical revision, allowed to differentiate the sequences in two sub-groups,
1 and 2. Taken together these results shows that porcine circovirus type 2 is present in
our country and that the analyzed isolated correspond to sub-group 1, presenting a near
relation with european isolated. / Trabajo financiado por los proyectos: Bicentenario Banco Mundial-Conicyt PSD2; Iniciación en Investigación de la Vicerrectoría de Investigación y Desarrollo de la Universidad de Chile VID I07/15-2 y el Fondo de Investigación Veterinaria FIV 2007 de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile.
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