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Caracterização molecular dos principais fatores de virulência e genótipos de Clostridium perfringens isolados de frangos com enterite necrótica. / Molecular characterization of the virulence factors and genotypes of Clostridium perfringens isolated from chickens with necrotic enteritis.

Luis Antonio Llanco Albornoz 14 February 2014 (has links)
Clostridium perfringens causa enterite necrótica aviária devido à produção de toxinas que lesam o intestino. Neste estudo, de 94 amostras nove apresentaram C. perfringens, totalizando 22 isolados. Todos exceto um isolado, possuíram os genes nanI (95%) e/ou nanJ (81%), e 19/22, mostraram atividade neuraminidase em hemácias de frango. A atividade hemaglutinante foi observada em poucos isolados (26%). Todos os isolados foram plc positivos (toxina α), sendo classificados como tipo A. Sete isolados (31,8%) abrigaram o gene tpeL que codifica a toxina TpeL. Isolados tpeL+ mostraram efeito citotóxico característico da ação desta toxina. Alguns isolados mostraram capacidade de aderir e invadir células Vero. A maioria dos isolados foi resistente à sulfaquinoxalina (100%), cefalexina (95%) e eritromicina (95%) e sensíveis (100%) à cefoxitina, amoxicilina, enrofloxacina, amoxicilina-ácido clavulânico, penicilina-estreptomicina, cloranfenicol e metronidazol. Todos os isolados foram agrupados geneticamente em sete clusters, apresentando se como um grupo heterogêneo. / Clostridium perfringens cause avian necrotic enteritis due to production of toxins that damage the intestine. In this study, nine out of 94 samples had C. perfringens, totaling 22 isolates. All the isolates with exception of one, possessed the genes nanI (95 %) and/or nanJ (81 %), and 19/22 showed neuraminidase activity in chicken erythrocytes. The hemagglutinating activity was observed in a few isolates (26 %). All isolates were plc positive (toxin α) being classified as type A. Seven isolates (31.8%) harbored tpeL gene encoding the toxin TpeL. TpeL + isolates showed characteristic cytotoxic effect of the action of this toxin. Some isolates showed ability to adhere and invade Hep-2 cells. Most of the isolates were resistant sulphaquinoxaline (100%), cephalexin (95%) and erythromycin (95%) and sensitivity (100%) to cefoxitin, amoxicillin, enrofloxacin, amoxicillin - clavulanic acid, penicillin -streptomycin, chloramphenicol and metronidazole. All isolates were genetically grouped into seven clusters, presenting itself as a heterogeneous group.
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Construção e avaliação de vacinas de toxina α recombi-nante de Clostridium perfringens A / Construction and evaluation of Clostridium perfringens A recombinant α toxin vaccines.

Santos, João Rodrigo Gil de Los 02 October 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-10-02 / Avian Necrotic Enteritis (NE) is an acute enterotoxaemia caused by Clostridium perfringens A and C. The control of the disease is based on antibiotics added to animal feed. The ban of this practice by consumer markets, considered the biggest challenge to industrial aviculture, demanded the adoption of other alternatives for its control, among others, immunization with recombinant vaccines. The aim of this work was to produce and evaluate C. perfringens recombinant α toxin (rAT) vaccines adjuvanted with either Al(OH)3 (rAT+Al(OH)3 or recombinant B subunit of the heat-labile enterotoxin of Escherichia coli (rLTB) (rAT+rLTB), and a chimeric protein containing the α toxin fused to rLTB (rLTB-AT). The rAT+Al(OH)3 was innocuous and protected mice against a challenge with native α toxin (sT), and it was immunogenic and did not affect productivity parameters in broilers. The rAT+rLTB showed a dose-protection relationship in mice, while rLTB-AT did not protect mice against sT challenge. The rAT could be an alternative for controlling NE. / A Enterite Necrótica Aviar (ENA) é uma enterotoxemia aguda, causada pelos Clostridium perfringens A e C, cujo controle baseia-se na adição de antibióticos na ração. A restrição dessa prática pelo mercado consumidor, que tornou seu controle o maior desafio para o setor avícola, exigiu a adoção de novas estratégias para o controle, entre elas a imunização. Vacinas recombinantes vêm despertando grande interesse entre pesquisadores e empresas do setor. O objetivo deste trabalho foi elaborar vacinas de toxina α recombinante de C. perfringens (rAT) utilizando como adjuvantes Al(OH)3 (rAT+Al(OH)3) e subunidade B recombinante da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (rLTB) (rAT+rLTB), e construir e avaliar uma proteína quimérica contendo rAT fusionada a rLTB (rLTB-AT). A rAT+Al(OH)3 foi inócua e protetora contra agressão de toxina α nativa (sT) em camundongos, e imunogênica em frangos de corte, sem afetar a produtividade. A rAT+rLTB demonstrou relação dose-proteção em camundongos, entanto a rLTB-AT não protegeu camundongos contra agressão de sT. A rAT demonstrou ser uma alternativa para controlar a ENA. Palavras-chave: Enterite Necrótica Aviar, Clostridium perfringens A, toxina α recombinante, vacinas.
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Alterações histológicas no epitélio intestinal de juvenis de dourado Salminus brasiliensis alimentados com dietas contendo fontes proteicas vegetais / Histological changes of intestinal epithelium of juveniles dourado Salminus brasiliensis fed diet with vegetables proteins sources alternatives

Thaline Maira Pachelli da Cruz 22 January 2018 (has links)
Restrições econômicas e ambientais trazem a necessidade de substituir a farinha de peixe em dietas de organismos aquáticos por matérias-primas menos dispendiosas de origem vegetal. Entretanto, tais fontes proteicas vegetais possuem fatores antinutricionais que podem ter efeitos negativos sobre o sistema digestório dos peixes, alterando a saúde e, em consequência, a produção. O objetivo deste trabalho foi avaliar a digestibilidade e alterações na histologia do epitélio intestinal de juvenis do Characiforme carnívoro dourado, Salminus brasiliensis, alimentados com dietas contendo farelo de soja (FSO), farelo de algodão (FAl) e farelo de amendoim (FAM) como principais fontes proteicas. Foram conduzidos dois experimentos: digestibilidade (Ensaio I) e histológico (Ensaio II). O Ensaio I foi conduzido em protocolo padrão utilizando dietas práticas adicionadas do marcador inerte óxido de crômio III (CR2O3) e sistema Guelph modificado para coleta de fezes e consequente cálculo dos coeficientes de digestibilidade. No Ensaio II as mesmas fonte proteicas - FSO, FAL e FAM - foram utilizadas em substituição à proteína da farinha de peixe em uma dieta controle com cinco níveis de inclusão: 0 (controle), 25,0 %; 50%; 75,0% e 100%, em um delineamento inteiramente aleatorizado (n=3). O experimento teve a duração de 40 dias, e as coleta de amostras de tecido foram feitas aos 20 e 40 dias. As amostras do intestino posterior foram analisadas quanto às características histológicas e morfológicas, além de quantificação de células caliciformes e análise histomorfométrica do tecido intestinal. Não foram registradas diferenças para os coeficientes de digestibilidade da proteína e energia no ensaio de digestibilidade. O ensaio de desempenho mostrou que a inclusão de FAM e FAL nas dietas melhora o consumo de alimento comparativamente ao FSO Em relação as variáveis histológicas, os níveis que condicionaram alterações significativas nos parâmetros morfométricos foram FSO50 e FOS75. O FSO50 promoveu uma redução das dobras intestinais aos 20 dias, porém aos 40 dias houve aumento na altura das dobras, no espessamento da lâmina-própria e aumento na densidade das células caliciformes. Considerando a microscopia de varredura, sinais acentuados de enterite foram registrados. A alteração na morfologia e histologia do epitélio intestinal foi reflexo da interação de efeitos dos fatores antinutricionais presentes em cada fonte proteica vegetal. Consequentemente, registrou-se menor ganho de peso, crescimento e diminuição da homeostase intestinal, embora os melhores consumos e CAA fossem registrados para os peixes alimentados com FAL e FP. Conclui-se que o FSO causou enterite nos juvenis de dourado e FAL e FAM podem ser utilizados na alimentação de dourado. / Economic and environment constraints have brought the need to replace fishmeal (FM) in diets of aquatic organisms by less expensive feedstuff, especially dietary protein sources. However, such protein sources generally of plant origin, e.g. soybean meal, have antinutritional factors that can negatively affect digestive system of the fish, impairing health and consequently, production. To identify possible effects of plant protein sources in the diets for carnivore fish, this study evaluated effects of various dietary plant protein sources on digestibility, performance, histology of the intestinal epithelium of the carnivore, Neotropical Characin dourado, Salminus brasiliensis, fed plant protein-based diets. A digestibility trial was carried out in standard protocol using diets with inert marker chromium oxide III (Cr2O3) and modified system Guelph for feces. A performance test evaluated the use of three plant protein sources, soybean meal (SBM), cottonseed meal (CTM) and peanut meal (PTM) as surrogate protein source to fishmeal in a practical diet in five levels inclusion: 0 (control); 25.0%; 50.0%; 75.0% and 100%, in a randomized block design (n=3). Samples of tissue of intestinal tract of fish were collected in the distal segment at 20 and 40 days of the feeding period, and analyzed for histological and morphological characteristics. No differences were recorded for apparent digestibility coefficients (ADC) of feedstuff and energy and protein of feedstuffs. Dietary CM and PM elicited better feed consumption comparatively to the other feedstuff, Fish fed diet diet SBM50 presented reduction of intestinal folds at 20 days, but at 40 days had increased folds height, lamina propria thickening, and increased goblet cell density. Considering a scanning microscopy, evident signs of enteritis were registered. The alteration in the morphology and histology of the intestinal epithelium reflected the interaction of effects of the antinutritional factors present in each vegetable protein source, resulting in lower weight gain, growth and decreased intestinal homeostasis, even though best feed consumption and ADC were registered for fish fed CTM and FM.Concluded that SBM caused enteritis and CTM and PM can be used in feeding dourado.
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Detecção e caracterização molecular do gene 3 e 5 do coronavírus de perus (TCOV) isolados de perus com severa enterite no Brasil. / Detection and molecular characterization of gene 3 and 5 of turkey coronavirus (TCoV) from turkeys with severe enteritis in Brazil.

Bünger, Amarilis Novaes D'Elboux 26 August 2009 (has links)
O coronavírus de perus (TCoV) é o agente etiológico associado a síndrome de mortalidade entérica das aves (PEMS). PEMS é uma enfermidade entérica, aguda e altamente contagiosa dos perus caracterizada por depressão, anorexia, diarréia e alta mortalidade em lotes de perus comerciais. A presença do coronavírus de perus (TCov) foi pesquisada em 29 amostras de conteúdo intestinal de perus entre 10 e 104 dias de idade que apresentaram enterite severa no período de 2004 a 2006. A detecção do TcoV foi realizada realizada através da técnica da transcriptase reversa e da reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR), mediante a amplificação da região 3 UTR, seguida pela amplificação dos genes 3 e 5. A caracterização molecular dos vírus foi realizada mediante a amplificação dos genes 3 e 5, que mostrou similaridade genética entre as amostras, mas diferenças com as sequencias dos outros TCoVs publicados previamente. Em relação ao gene 3, as amostras apresentaram maior relação com o vírus da bronquite infecciosa das aves (IBV), enquanto que com o gene 5 houve maior identidade com os cronavírus de faisão (PhCoV). Nossos resultados sugerem que a estratégia de amplificação da região 3 UTR provou ser uma estratégia eficaz para a detecção do TcoV em conteúdo intestinal. / Turkey coronavirus (TCoV) is causative agent associated to Poult Enteritis and Mortality Syndrome (PEMS) in turkeys wideworld. The disease is characterized by an acute highly contagious enteric disease of turkeys characterized by depression, anorexia, diarrhea and high mortality in co mMercial turkey flocks. The presence of turkey coronavirus (TCoV) in 29 intestinal content samples from turkey flocks aged between 10 and 104 days with severe enteritis was monitored in the period of 2004 to 2006. TCoV detection was accomplished by the reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), through amplification of the 3´UTR region, followed by amplification of genes 3 and 5. Molecular characterization of the viruses was done through amplification of genes 3 and 5, and showed evidence of genetic similarity between them, although they differed of sequences of other TCoVs described in the literature. In relation to gene 3, samples showed greater relationship with chicken infectious bronchitis virus (IBV), and while gene 5 showed greater identity with pheasant coronavirus (PhCoV). Our results suggest that the strategy of amplification of the 3´UTR region has proved to an effective means of detection of TCoV in intestinal contents.
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Detecção e caracterização molecular do gene 3 e 5 do coronavírus de perus (TCOV) isolados de perus com severa enterite no Brasil. / Detection and molecular characterization of gene 3 and 5 of turkey coronavirus (TCoV) from turkeys with severe enteritis in Brazil.

Amarilis Novaes D'Elboux Bünger 26 August 2009 (has links)
O coronavírus de perus (TCoV) é o agente etiológico associado a síndrome de mortalidade entérica das aves (PEMS). PEMS é uma enfermidade entérica, aguda e altamente contagiosa dos perus caracterizada por depressão, anorexia, diarréia e alta mortalidade em lotes de perus comerciais. A presença do coronavírus de perus (TCov) foi pesquisada em 29 amostras de conteúdo intestinal de perus entre 10 e 104 dias de idade que apresentaram enterite severa no período de 2004 a 2006. A detecção do TcoV foi realizada realizada através da técnica da transcriptase reversa e da reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR), mediante a amplificação da região 3 UTR, seguida pela amplificação dos genes 3 e 5. A caracterização molecular dos vírus foi realizada mediante a amplificação dos genes 3 e 5, que mostrou similaridade genética entre as amostras, mas diferenças com as sequencias dos outros TCoVs publicados previamente. Em relação ao gene 3, as amostras apresentaram maior relação com o vírus da bronquite infecciosa das aves (IBV), enquanto que com o gene 5 houve maior identidade com os cronavírus de faisão (PhCoV). Nossos resultados sugerem que a estratégia de amplificação da região 3 UTR provou ser uma estratégia eficaz para a detecção do TcoV em conteúdo intestinal. / Turkey coronavirus (TCoV) is causative agent associated to Poult Enteritis and Mortality Syndrome (PEMS) in turkeys wideworld. The disease is characterized by an acute highly contagious enteric disease of turkeys characterized by depression, anorexia, diarrhea and high mortality in co mMercial turkey flocks. The presence of turkey coronavirus (TCoV) in 29 intestinal content samples from turkey flocks aged between 10 and 104 days with severe enteritis was monitored in the period of 2004 to 2006. TCoV detection was accomplished by the reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), through amplification of the 3´UTR region, followed by amplification of genes 3 and 5. Molecular characterization of the viruses was done through amplification of genes 3 and 5, and showed evidence of genetic similarity between them, although they differed of sequences of other TCoVs described in the literature. In relation to gene 3, samples showed greater relationship with chicken infectious bronchitis virus (IBV), and while gene 5 showed greater identity with pheasant coronavirus (PhCoV). Our results suggest that the strategy of amplification of the 3´UTR region has proved to an effective means of detection of TCoV in intestinal contents.

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