Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-23Bitstream added on 2014-06-13T21:03:19Z : No. of bitstreams: 1 marqueti_ac_dr_araca.pdf: 258633 bytes, checksum: 711d6e5f7bcc5a0600ade1c21b730a84 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo avaliou a ocorrência de leveduras do gênero Candida sp além dos principais microrganismos periodontopatogênicos e enterobactérias na saliva, em mucosa e no biofilme aderido à prótese total, correlacionando com aspectos clínicos e condição de higiene bucal de 90 indivíduos edêntulos e portadores de prótese total, por meio de métodos moleculares (PCR). Espécimes clínicos intrabucais foram coletados desses indivíduos após avaliação das condições sócio-econômicas e comportamentais. A microbiota bucal dos pacientes foi caracterizada por meio da obtenção de amostras de biofilme aderido às próteses totais, mucosa e saliva, as quais foram processadas, por meio de PCR. As inter-relações entre os diferentes microrganismos foram determinadas por meio dos testes de Qui-quadrado e Mann- Whitney. Verificaram-se diferenças na ocorrência de Prevotella intermedia e Enterobacteriaceae na saliva dos pacientes edêntulos, o mesmo ocorrendo com Enterobacteriaceae, Camphylobacter rectus e gênero Pseudomonas no biofilme aderido às próteses totais. As condições de higiene bucal e estado de conservação da prótese total precários favoreceram a ocorrência de leveduras do tipo Candida sp, em especial Candida albicans, em níveis estatisticamente significante nas amostras de mucosa e biofilme aderido à prótese total, tornando este dispositivo protético um potencial reservatório de leveduras e bactérias entéricas que podem ser de relevância na patogênese das infecções oportunistas / The aim of this study was to evaluate the occurrence of major periodontopathogenic microorganisms and Enterobacteriaceae and biofilm adhered to the denture, mucosa and saliva in 90 edentulous subjects with complete dentures, using molecular methods (PCR). Clinical specimens were collected from these individuals after assessing the socio-economic circumstances and behavioral. The oral microbiota of patients was characterized by obtaining samples of the biofilm adhered to the dental prothesis and saliva, for detection of major pathogens using PCR. The possibility of inter-relationships between different microorganisms was determined using the chi-square test and Mann-Whitney test. There were differences in the occurrence of Prevotella intermedia and Enterobacteriaceae in the saliva of edentulous patients, likewise, Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Camphylobacter rectus and the biofilm attached to denture patients. The conditions for oral hygiene and stat of preservation of prosthesis total precarious favored the occurrence of yeasts of the Candida sp, particularly Candida albicans, statistically significant levels in samples of mucosa and biofilm acceded to total prosthesis, prothetic device, making it a potential reservoir of enteric bacteria and yeasts that may be of relevance in the pathogenesis of opportunistic infections

A resistência das bactérias aos antibióticos é um problema recorrente que dificulta o tratamento de infecções causadas por bactérias. Alguns membros da família Enterobacteriaceae são responsáveis por carrear e disseminar diferentes mecanismos de resistência, entre estes está a capacidade de algumas bactérias em produzir enzimas como as β-lactamases. Tendo em vista esta problemática o objetivo do presente estudo foi detectar/identificar através de análises fenotípicas e genotípicas quais os genes de resistência presentes em amostras ambientais. Para tanto os primeiros ensaios realizados foram os fenotípicos: teste de Hodge Modificado (MHT), testes com inibidores como ácido fenilborônico (APB), EDTA e cloxacilina, e o teste confirmatório para Extended-Spectrum β-lactamase (ESBL). Foram isoladas 131 amostras as quais passaram por uma triagem inicial através do antibiograma, utilizando os antimicrobianos: cefotaxima (30μg), cefpodoxima (10μg), ceftazidima (30μg), ertapenem (10μg), meropenem (10μg), aztreonam ( 30μg). Destas, 62 amostras foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano as quais foram submetidas aos demais testes fenotípicos. Os resultados mostram que 40 amostras apresentaram perfil positivo para pelo menos um dos testes fenotípicos. Estas 40 amostras foram submetidas a PCR Multiplex para detecção e caracterização dos principais genes de resistência à β-lactamases: β-lactamase de espectro extendido (ESBL), Carbapenemase e β-lactamase AmpC. Uma vez detectado os genes, foi realizado o sequenciamento dos amplicons para confirmação da presença dos mesmos A relação clonal foi estabelecida utilizando XbaI através da Eletroforese em Campo Pulsado (PFGE). Os resultados mostraram que em 85% dos isolados foi detectada a presença de genes de resistência, dentre os quais observamos as seguintes espécies: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae. A prevalência foi para os genes de β-lactamases com 77,5% (TEM, SHV e CTX-M) seguido por Carbapenemase (KPC e GES) com 45% e AmpC (ACT/MIR) com 2,5%. Este foi o primeiro relato desses genes de resistência em isolados ambientais no município de Porto Alegre/RS. Oito amostras apresentaram três genes de resistência, quatorze amostras dois e 12 com um gene cada. A análise da eletroforese em campo pulsado mostrou uma relação clonal entre alguns isolados de K. pneumoniae que foram separados em três grupos diferentes (K1, K2, K3). Entre os isolados de Enterobacter sp. não foi possível estabelecer uma relação clonal. Fica claro com o trabalho a ocorrência e a capacidade de disseminação desses genes de resistência em amostras ambientais e o potencial risco à saúde da comunidade em geral, tornando-se um problema de saúde pública. / Bacteria resistant to antibiotics are a recurring problem which makes difficult the treatment of bacterial infections. Some members of the Enterobacteriaceae family are responsible for carrying and disseminating different mechanisms of resistance. Among them are strains which produce enzymes such as β-lactamases. In view of this problem the objective of this study was to detect / identify through phenotypic and genotypic analysis which resistance genes present in environmental isolates. For this the first trials were the phenotypic assys: Hodge test Modified (MHT), tests with inhibitors such as phenylboronic acid (APB), EDTA and cloxacillin, and confirmatory test for Extended-Spectrum β-lactamase (ESBL). In the first screening 131 isolates were submitted to antibiogram using following antimicrobials: cefotaxime (30μg), cefpodoxime (10mg), ceftazidime (30μg), ertapenem (10mg), meropenem (10mg), aztreonam (30μg). Out of 62 isolates were resistant to at least one antimicrobial were submitted to other phenotypic tests. The results show that 40 isolates show a positive profile for at least one phenotypic test. These 40 isolates were submitted to Multiplex PCR for detection and characterization of the major resistance genes for β- lactamases: β-lactamase extended spectrum (ESBL), carbapenemase and β- lactamase AmpC. Once detected the genes, the sequencing of amplicons were performed in order to confirm the presence of the genes. The clonal relationship was established using XbaI endonuclease using Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). The results showed that in 85% of the isolates the presence of resistance genes was detected, among which we observed the following species: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae The prevalence was for the β-lactamase gene with 77.5% (TEM, SHV and CTX-M) followed by carbapenemase (KPC and GES) with 45%, and AmpC (ACT / MIR) with 2.5%. This was the first report where these resistance genes were detected in environmental isolates in the city of Porto Alegre/RS. Eight isolates had three resistance genes, fourteen isolates two genes and 12 with one gene. The analysis of pulsed field gel electrophoresis showed a clonal profile among some K. pneumoniae strains which were separated into three groups (K1, K2, K3). Among Enterobacter sp. strains it was not possible to establish a clonal profile. It is clear from the work the occurrence and the ability of disseminate these resistance genes among environmental isolates and the potential health risk to the community and so becoming a public health problem.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:09:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327152.pdf: 1393303 bytes, checksum: 6ae9b5f6dfed5a6216812c0c640c6327 (MD5) Previous issue date: 2014 / As enterobactérias são patógenos oportunistas responsáveis por cerca de 70% das infecções urinárias e 50% das septicemias. Além disso, têm se tornado um desafio no tratamento de doenças infecciosas, principalmente em hospitais, devido à facilidade com que adquirem genes de resistência. A produção de ß-lactamases de espectro estendido ESBL) é o mecanismo de resistência mais importante das enterobactérias. Dentre as diversas ESBLs descritas na literatura, as do tipo TEM, SHV e CTX-M são as mais disseminadas mundialmente. O objetivo deste estudo foi avaliar por meio de métodos fenotípicos e genotípicos, o perfil de resistência de estirpes de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Enterobacter spp. produtoras de ESBL isoladas de pacientes internados no Hospital Universitário Professor Polydoro Ernani de San Thiago. Foram identificadas 145 amostras isoladas de sangue, urina, secreção traqueal e de ferida cirúrgica de pacientes internados. Foram realizados testes de suscetibilidade aos antimicrobianos e detecção fenotípica de ESBL pelo Teste de Disco Aproximação. A pesquisa genotípica de ESBLs foi feita para os genes blaTEM, blaSHV e blaCTX-M por duas reações de PCR multiplex. E a identidade dos produtos amplificados de cada gene foi confirmada por sequenciamento. A avaliação da similaridade genética entre os isolados foi realizada por meio de RAPD-PCR. Do total de isolados, foram identificados 66,9% de E. coli, 25,5% de K. pneumoniae, 4,1% de Enterobacter cloacae e 3,4% de Enterobacter aerogenes. Além disso, 73% das amostras de urina foram de E. coli, 22% de K. pneumoniae, 1,7% de E. cloacae 3,4% de E. aerogenes. Das amostras de sangue 57,1% foram de E. coli, 28,6% de K. pneumoniae, 7,1% de E. cloacae e 7,1% de E. aerogenes. E de ferida, 25% dos isolados foram de E. coli, 50% de K. pneumoniae e 25% de E. cloacae. A prevalência de ESBL nos isolados foi de 27,6%, sendo que 32,5% dos isolados foram de E. coli, 60 % de K. pneumoniae e 7,5% de E. cloacae. O gene blaTEM foi detectado em 82,5% (33) das amostras, blaSHV 60% (24) dos isolados e blaCTX-M em 42,5% (17), 17,5% (7) e 12,5% (5) para CTX-M Grupo 1, Grupo 2 e Grupo 9, respectivamente. Além disso, 77% dos isolados ESBL positivos expressavam mais de uma enzima. O sequenciamento confirmou a identidade de todos os produtos amplificados. Na genotipagem por RAPD, as amostras de K. pneumoniae foram mais semelhantes entre si que os isolados de E. coli, e duas das três estipes de E. clocae possuíam o mesmo perfil eletroforético. Entretanto, apesar de algumas diferenças pontuais, a maioria dos isolados foram classificadospelo menos como "possivelmente relacionados" segundo os critérios de Tenover. Portanto, com os resultados obtidos nesse estudo, sugere-se a existência de uma estirpe de K. pneumoniae endêmica no HU/UFSC, disseminada por todos os setores, situação semelhante à observada com as estirpes de E. coli.<br> / Abstract : Enterobacteriaceae are opportunistic pathogens responsible for approximately 70% of urinary infections and 50% of septicemia. Furthermore, it has become a challenge in the treatment of infectious diseases, especially in hospitals, due to the easiness with which acquire resistance genes. The production of Extended Spectrum ß-lactamase (ESBL) is the most important mechanism of resistance of Enterobacteriaceae. Among the several ESBLs described in the literature, ESBL like TEM, SHV and CTX-M are the most widespread worldwide. The aim of this study was to evaluate by phenotypic and genotypic methods, the resistance profile of strains of Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae and Enterobacter spp. ESBL-producing isolates from inpatients at the University Hospital Professor Polydoro Ernani San Thiago. 145 strains isolated from blood, urine, tracheal aspirates and wound inpatients were identified. Antimicrobial susceptibility test and phenotypic ESBL detection by Disk Approximation Test were performed. ESBLs Genotypic survey were taken for blaTEM, blaSHV and blaCTX-M genes by two multiplex PCR reactions. And the identity of the amplified product of each gene was confirmed by sequencing. The genetic similarity of isolates was performed by RAPD-PCR. The total isolates, 66.9% were E. coli, 25.5% were K. pneumoniae, 4.1% were Enterobacter cloacae and 3.4% were Enterobacter aerogenes. In addition, 73% of the urine samples were E. coli, 22% were K. pneumoniae, 1.7% were E. cloacae and 3.4% were E. aerogenes. Blood samples were 57.1% of E. coli, 28.6% of K. pneumoniae 7.1% of E. cloacae and 7.1% of E. aerogenes. And wound, 25% of the isolates were E. coli, 50% were K. pneumoniae and 25% were E. cloacae. The ESBL prevalence in isolates was 27.6% and 32.5% of these were E. coli, 60% were K. pneumoniae and 7.5% were E. cloacae. The blaTEM gene in 82.5% (33) samples, blaSHV was detected in 60% (24) isolates and blaCTX-M was detected in 42.5% (17) 17.5% (7) and 12.5% (5) for CTX-M group 1, group 2 and group 9, respectively. Additionally, 77% of ESBL-positive isolates expressing more than one enzyme type. The sequencing confirmed the identity of all PCR products. RAPD genotyping, K. pneumoniae samples were more similar to each otherthan E. coli isolates, and two of the three E. clocae stems had the same electrophoretic profile. However, despite some slight differences, most isolates were classified at least as "possibly related" according to the criteria of Tenover. Therefore, the results obtained in this study suggest the existence of a strain of K. pneumoniae endemic in HU / UFSC, spread across all sectors, similar to that observed with strains of E. coli situation.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-12-05T03:13:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349066.pdf: 1604822 bytes, checksum: 6dcad9000b8ad0336f60ea146c481e2e (MD5) Previous issue date: 2017 / A resistência aos carbapenêmicos por meio da produção de enzimas denominadas carbapenemases tem sido amplamente relatada em espécies pertencentes à família Enterobacteriaceae, estando relacionadas a altas taxas de mortalidade. Neste sentido, o presente trabalho teve por objetivo investigar enterobactérias resistentes a carbapenêmicos (ERC) pelo período de um ano em um hospital de Blumenau (SC), levando em conta os aspectos clínicos, relacionados à internação dos pacientes, e microbiológicos, avaliados por meio de metodologias fenotípicas e genotípicas. Ao término da coleta, foram obtidas 152 amostras isoladas de 147 pacientes, provenientes de swab anal de vigilância, urina, aspirado traqueal e sangue, entre outros sítios em menor proporção. A espécie predominantemente isolada foi Klebsiella pneumoniae (84,2%), seguida das espécies Serratia marcescens (9,9%), Enterobacter cloacae (3,9%), Escherichia coli (1,3%) e Enterobacter aerogenes (0,7%). Os resultados indicam que 55,9% dos isolados caracterizam colonizações, enquanto os demais 43,4% resultaram de processos infecciosos e 0,7% não foram caracterizados quanto à natureza da sua presença. Dos pacientes analisados, 60% apresentaram processos de colonização/infecção com origem na instituição hospitalar analisada, das quais 78% ocorreram quando o paciente se encontrava internado na Unidade de Terapia Intensiva (UTI). Os fatores de risco significativamente relevantes para a obtenção de uma cultura positiva para ERC incluem o uso de instrumentos invasivos (cateteres venosos centrais e vesicais, ventilação mecânica), a realização de procedimentos invasivos e a prévia exposição aos antimicrobianos de amplo espectro do grupo das penicilinas/inibidores de betalactamases. Em relação ao desfecho clínico, 31% dos pacientes vieram a óbito, sendo a utilização de instrumentos invasivos, a realização de procedimentos invasivos, a admissão em UTI e prévias internações fatores significativamente associados à mortalidade dos pacientes. Em relação às enterobactérias isoladas em processos infecciosos, destaca-se o considerável índice de sensibilidade aos aminoglicosídeos amicacina e gentamicina. Já em relação aos isolados bacterianos provenientes de processos de colonização, índices de sensibilidade elevados foram verificados em relação ao antimicrobiano fosfomicina. A pesquisa genotípica para carbapenemases apresentou resultados positivos para o gene blaKPC em 98,6% dos isolados. As metodologias fenotípicas de inibição enzimática e BlueCarba, utilizadas para a pesquisa de carbapenemases, apresentaram, ambas, ótimos resultados de sensibilidade e especificidade quando comparadas à metodologia genotípica PCR. Já a metodologia de tipagem molecular rep-PCR pôde ser aplicada com sucesso na avaliação da clonalidade dos isolados das espécies K. pneumoniae, S. marcescens, E. cloacae e E. coli. / Abstract : Resistance to carbapenems mediated by enzymes called carbapenemases has been widely reported in species belonging to the Enterobacteriaceae family, being related to high mortality rates. The present study aimed to investigate carbapenem-resistant Enterobacteriaceae (CRE) for a one year period in a hospital in Blumenau (SC), taking into account the clinical aspects, related to the patients hospitalization, and microbiological aspects, evaluated by phenotypic and genotypic methodologies. By the end of the study, 152 samples from 147 patients were obtained, isolated from surveillance anal swab, urine, tracheal aspirate and blood, among other sites to a lesser extent. The predominant isolated species was Klebsiella pneumoniae (84.2%), followed by Serratia marcescens (9.9%), Enterobacter cloacae (3.9%), Escherichia coli (1.3%) and Enterobacter aerogenes (0.7%). The results indicate that 55.9% of the isolates characterize colonizations, while the remaining 43.4% resulted from infectious processes and 0.7% were not characterized about the nature of their presence. About the analyzed patients, 60% had colonization/infection processes originated in the analyzed hospital institution, of which 78% occurred when the patient was admitted in the Intensive Care Unit (ICU). Significant risk factors related to a positive culture for CRE include the use of invasive instruments (central venous and bladder catheters, mechanical ventilation), invasive procedures and prior exposure to broad spectrum antimicrobial agents from the penicillin/betalactamase inhibitors group. Regarding the clinical outcome, 31% of the patients died. The significant risk factors related to the patients mortality were the use of invasive instruments, invasive procedures, admission to ICU and previous hospitalizations. About the susceptibility profile of the enterobacteria isolated in infectious processes, the sensitivity to aminoglycosides, including amicacin and gentamicin stands out. Regarding the bacterial isolates from colonization processes, a high sensitivity index was verified for the antimicrobial fosfomycin. Genotypic research for carbapenemases showed positive results for the blaKPC gene in 98.6% of the isolates. The phenotypic methodologies of enzymatic inhibition and BlueCarba, used for the research of carbapenemases, presented, both, excellent results of sensitivity and specificity when compared to the genotypic methodology. The rep-PCR molecular typing methodology could be applied successfully for the clonality evaluation of the isolates of K. pneumoniae, S. marcescens, E. cloacae and E. coli.

A resistência das bactérias aos antibióticos é um problema recorrente que dificulta o tratamento de infecções causadas por bactérias. Alguns membros da família Enterobacteriaceae são responsáveis por carrear e disseminar diferentes mecanismos de resistência, entre estes está a capacidade de algumas bactérias em produzir enzimas como as β-lactamases. Tendo em vista esta problemática o objetivo do presente estudo foi detectar/identificar através de análises fenotípicas e genotípicas quais os genes de resistência presentes em amostras ambientais. Para tanto os primeiros ensaios realizados foram os fenotípicos: teste de Hodge Modificado (MHT), testes com inibidores como ácido fenilborônico (APB), EDTA e cloxacilina, e o teste confirmatório para Extended-Spectrum β-lactamase (ESBL). Foram isoladas 131 amostras as quais passaram por uma triagem inicial através do antibiograma, utilizando os antimicrobianos: cefotaxima (30μg), cefpodoxima (10μg), ceftazidima (30μg), ertapenem (10μg), meropenem (10μg), aztreonam ( 30μg). Destas, 62 amostras foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano as quais foram submetidas aos demais testes fenotípicos. Os resultados mostram que 40 amostras apresentaram perfil positivo para pelo menos um dos testes fenotípicos. Estas 40 amostras foram submetidas a PCR Multiplex para detecção e caracterização dos principais genes de resistência à β-lactamases: β-lactamase de espectro extendido (ESBL), Carbapenemase e β-lactamase AmpC. Uma vez detectado os genes, foi realizado o sequenciamento dos amplicons para confirmação da presença dos mesmos A relação clonal foi estabelecida utilizando XbaI através da Eletroforese em Campo Pulsado (PFGE). Os resultados mostraram que em 85% dos isolados foi detectada a presença de genes de resistência, dentre os quais observamos as seguintes espécies: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae. A prevalência foi para os genes de β-lactamases com 77,5% (TEM, SHV e CTX-M) seguido por Carbapenemase (KPC e GES) com 45% e AmpC (ACT/MIR) com 2,5%. Este foi o primeiro relato desses genes de resistência em isolados ambientais no município de Porto Alegre/RS. Oito amostras apresentaram três genes de resistência, quatorze amostras dois e 12 com um gene cada. A análise da eletroforese em campo pulsado mostrou uma relação clonal entre alguns isolados de K. pneumoniae que foram separados em três grupos diferentes (K1, K2, K3). Entre os isolados de Enterobacter sp. não foi possível estabelecer uma relação clonal. Fica claro com o trabalho a ocorrência e a capacidade de disseminação desses genes de resistência em amostras ambientais e o potencial risco à saúde da comunidade em geral, tornando-se um problema de saúde pública. / Bacteria resistant to antibiotics are a recurring problem which makes difficult the treatment of bacterial infections. Some members of the Enterobacteriaceae family are responsible for carrying and disseminating different mechanisms of resistance. Among them are strains which produce enzymes such as β-lactamases. In view of this problem the objective of this study was to detect / identify through phenotypic and genotypic analysis which resistance genes present in environmental isolates. For this the first trials were the phenotypic assys: Hodge test Modified (MHT), tests with inhibitors such as phenylboronic acid (APB), EDTA and cloxacillin, and confirmatory test for Extended-Spectrum β-lactamase (ESBL). In the first screening 131 isolates were submitted to antibiogram using following antimicrobials: cefotaxime (30μg), cefpodoxime (10mg), ceftazidime (30μg), ertapenem (10mg), meropenem (10mg), aztreonam (30μg). Out of 62 isolates were resistant to at least one antimicrobial were submitted to other phenotypic tests. The results show that 40 isolates show a positive profile for at least one phenotypic test. These 40 isolates were submitted to Multiplex PCR for detection and characterization of the major resistance genes for β- lactamases: β-lactamase extended spectrum (ESBL), carbapenemase and β- lactamase AmpC. Once detected the genes, the sequencing of amplicons were performed in order to confirm the presence of the genes. The clonal relationship was established using XbaI endonuclease using Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). The results showed that in 85% of the isolates the presence of resistance genes was detected, among which we observed the following species: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae The prevalence was for the β-lactamase gene with 77.5% (TEM, SHV and CTX-M) followed by carbapenemase (KPC and GES) with 45%, and AmpC (ACT / MIR) with 2.5%. This was the first report where these resistance genes were detected in environmental isolates in the city of Porto Alegre/RS. Eight isolates had three resistance genes, fourteen isolates two genes and 12 with one gene. The analysis of pulsed field gel electrophoresis showed a clonal profile among some K. pneumoniae strains which were separated into three groups (K1, K2, K3). Among Enterobacter sp. strains it was not possible to establish a clonal profile. It is clear from the work the occurrence and the ability of disseminate these resistance genes among environmental isolates and the potential health risk to the community and so becoming a public health problem.

Orientador: Elerson Gaetti-Jardim Júnior / Coorientador: Alvimar Lima de Castro / Banca: Hélio Massaiochi Tanimoto / Banca: Luís Fernando Landucci / Banca: Ana Cláudia Okamoto / Banca: Marcelo Coelho Goiato / Resumo: Este estudo avaliou a ocorrência de leveduras do gênero Candida sp além dos principais microrganismos periodontopatogênicos e enterobactérias na saliva, em mucosa e no biofilme aderido à prótese total, correlacionando com aspectos clínicos e condição de higiene bucal de 90 indivíduos edêntulos e portadores de prótese total, por meio de métodos moleculares (PCR). Espécimes clínicos intrabucais foram coletados desses indivíduos após avaliação das condições sócio-econômicas e comportamentais. A microbiota bucal dos pacientes foi caracterizada por meio da obtenção de amostras de biofilme aderido às próteses totais, mucosa e saliva, as quais foram processadas, por meio de PCR. As inter-relações entre os diferentes microrganismos foram determinadas por meio dos testes de Qui-quadrado e Mann- Whitney. Verificaram-se diferenças na ocorrência de Prevotella intermedia e Enterobacteriaceae na saliva dos pacientes edêntulos, o mesmo ocorrendo com Enterobacteriaceae, Camphylobacter rectus e gênero Pseudomonas no biofilme aderido às próteses totais. As condições de higiene bucal e estado de conservação da prótese total precários favoreceram a ocorrência de leveduras do tipo Candida sp, em especial Candida albicans, em níveis estatisticamente significante nas amostras de mucosa e biofilme aderido à prótese total, tornando este dispositivo protético um potencial reservatório de leveduras e bactérias entéricas que podem ser de relevância na patogênese das infecções oportunistas / Abstract: The aim of this study was to evaluate the occurrence of major periodontopathogenic microorganisms and Enterobacteriaceae and biofilm adhered to the denture, mucosa and saliva in 90 edentulous subjects with complete dentures, using molecular methods (PCR). Clinical specimens were collected from these individuals after assessing the socio-economic circumstances and behavioral. The oral microbiota of patients was characterized by obtaining samples of the biofilm adhered to the dental prothesis and saliva, for detection of major pathogens using PCR. The possibility of inter-relationships between different microorganisms was determined using the chi-square test and Mann-Whitney test. There were differences in the occurrence of Prevotella intermedia and Enterobacteriaceae in the saliva of edentulous patients, likewise, Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Camphylobacter rectus and the biofilm attached to denture patients. The conditions for oral hygiene and stat of preservation of prosthesis total precarious favored the occurrence of yeasts of the Candida sp, particularly Candida albicans, statistically significant levels in samples of mucosa and biofilm acceded to total prosthesis, prothetic device, making it a potential reservoir of enteric bacteria and yeasts that may be of relevance in the pathogenesis of opportunistic infections / Doutor

Resumo: Águas provenientes de fontes e poços comunitários são consideradas fontes alternativas de abastecimento, no entanto para serem consumidas por seres humanos devem apresentar-se livres de indicadores de contaminação fecal. Microorganismos entéricos como coliformes termotolerantes ou Escherichia coli são empregados como indicadores de potabilidade. Enterococcus spp faz parte da flora intestinal normal e também considerado indicador de contaminação fecal, o qual apresenta como característica intrínseca a multirresistência a drogas antimicrobianas e constitui a segunda causa mais importante de infecções hospitalares. Para avaliar o risco de consumo desse tipo de água é necessário avaliar as amostras não só sob o aspecto vinculado aos parâmetros legais, mas principalmente aos vinculados à incidência de isolados resistentes a antibióticos e/ou com fatores de virulência nesses indicadores em virtude da presença de linhagens com potencial risco patogênico. Foram avaliadas 39 amostras de água de fontes alternativas, utilizadas pela população de Curitiba e região metropolitana. A maioria dos isolados de Enterococcus spp foi Enterococcus faecalis (78,4%), seguido de Enterococcus faecium (13,5%). Ao avaliar a sensibilidade aos antibióticos, através do método de disco-difusão, todos os 37 isolados de Enterococcus spp foram sensíveis à vancomicina e ampicilina, no entanto somente 24% foram sensíveis a todos os antibióticos testados, sendo que 37,8% dos isolados apresentaram multirresistência. Os antibióticos que apresentaram menor índice de sensibilidade foram a eritromicina (21,6%), seguido de rifampicina (43,2%) e, dentre os antibióticos de alta resistência, 8,1% dos isolados foram resistentes à gentamicina e 10,8% à estreptomicina. Dentre os 23 isolados de E. coli, todos foram sensíveis à efoxitina, gentamicina, ciprofloxacin, amicacina e cefepime, no entanto somente 39,1% foram sensíveis a todos os antibióticos testados e 26,1% dos isolados apresentaram multirresistência. Os antibióticos que apresentaram menor índice de sensibilidade foram eropenem (69,6%), seguido de cefuroxima (78,3%). Dentre os fatores de virulência em Enterococcus spp, 40,5% apresentaram gelatinase, 43,2% caseinase, 32,4% hemolisina, 2,7% beta-lactamase e 35,1% gene ace. Não foram detectados fatores e genes de virulência diarreiogênicos nos isolados de E. coli. O potencial risco patogênico pelo consumo de águas provenientes de fontes alternativas em áreas urbanas revelou-se pelo fato de estarem sendo consumidas sem desinfecção prévia e onde somente 30,8% das amostras apresentaram-se livres de indicadores de contaminação fecal, e também pela presença de linhagens resistentes a antibióticos e/ou Enterococcus spp carreando fatores de virulência e/ou gene de virulência. Ao recuperar Enterococcus spp em 25,6% dos pontos onde E. coli não foi detectada, a inclusão deste indicador contaminação fecal torna-se necessária, potencializado pelo fato de que linhagens avirulentas podem tornar-se virulentas através da transferência de genes de resistência e/ou de virulência e pela seleção positiva de linhagens resistentes, principalmente pela habilidade de colonizar o trato gastrointestinal em paciente sob antibioticoterapia prolongada.

A resistência das bactérias aos antibióticos é um problema recorrente que dificulta o tratamento de infecções causadas por bactérias. Alguns membros da família Enterobacteriaceae são responsáveis por carrear e disseminar diferentes mecanismos de resistência, entre estes está a capacidade de algumas bactérias em produzir enzimas como as β-lactamases. Tendo em vista esta problemática o objetivo do presente estudo foi detectar/identificar através de análises fenotípicas e genotípicas quais os genes de resistência presentes em amostras ambientais. Para tanto os primeiros ensaios realizados foram os fenotípicos: teste de Hodge Modificado (MHT), testes com inibidores como ácido fenilborônico (APB), EDTA e cloxacilina, e o teste confirmatório para Extended-Spectrum β-lactamase (ESBL). Foram isoladas 131 amostras as quais passaram por uma triagem inicial através do antibiograma, utilizando os antimicrobianos: cefotaxima (30μg), cefpodoxima (10μg), ceftazidima (30μg), ertapenem (10μg), meropenem (10μg), aztreonam ( 30μg). Destas, 62 amostras foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano as quais foram submetidas aos demais testes fenotípicos. Os resultados mostram que 40 amostras apresentaram perfil positivo para pelo menos um dos testes fenotípicos. Estas 40 amostras foram submetidas a PCR Multiplex para detecção e caracterização dos principais genes de resistência à β-lactamases: β-lactamase de espectro extendido (ESBL), Carbapenemase e β-lactamase AmpC. Uma vez detectado os genes, foi realizado o sequenciamento dos amplicons para confirmação da presença dos mesmos A relação clonal foi estabelecida utilizando XbaI através da Eletroforese em Campo Pulsado (PFGE). Os resultados mostraram que em 85% dos isolados foi detectada a presença de genes de resistência, dentre os quais observamos as seguintes espécies: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae. A prevalência foi para os genes de β-lactamases com 77,5% (TEM, SHV e CTX-M) seguido por Carbapenemase (KPC e GES) com 45% e AmpC (ACT/MIR) com 2,5%. Este foi o primeiro relato desses genes de resistência em isolados ambientais no município de Porto Alegre/RS. Oito amostras apresentaram três genes de resistência, quatorze amostras dois e 12 com um gene cada. A análise da eletroforese em campo pulsado mostrou uma relação clonal entre alguns isolados de K. pneumoniae que foram separados em três grupos diferentes (K1, K2, K3). Entre os isolados de Enterobacter sp. não foi possível estabelecer uma relação clonal. Fica claro com o trabalho a ocorrência e a capacidade de disseminação desses genes de resistência em amostras ambientais e o potencial risco à saúde da comunidade em geral, tornando-se um problema de saúde pública. / Bacteria resistant to antibiotics are a recurring problem which makes difficult the treatment of bacterial infections. Some members of the Enterobacteriaceae family are responsible for carrying and disseminating different mechanisms of resistance. Among them are strains which produce enzymes such as β-lactamases. In view of this problem the objective of this study was to detect / identify through phenotypic and genotypic analysis which resistance genes present in environmental isolates. For this the first trials were the phenotypic assys: Hodge test Modified (MHT), tests with inhibitors such as phenylboronic acid (APB), EDTA and cloxacillin, and confirmatory test for Extended-Spectrum β-lactamase (ESBL). In the first screening 131 isolates were submitted to antibiogram using following antimicrobials: cefotaxime (30μg), cefpodoxime (10mg), ceftazidime (30μg), ertapenem (10mg), meropenem (10mg), aztreonam (30μg). Out of 62 isolates were resistant to at least one antimicrobial were submitted to other phenotypic tests. The results show that 40 isolates show a positive profile for at least one phenotypic test. These 40 isolates were submitted to Multiplex PCR for detection and characterization of the major resistance genes for β- lactamases: β-lactamase extended spectrum (ESBL), carbapenemase and β- lactamase AmpC. Once detected the genes, the sequencing of amplicons were performed in order to confirm the presence of the genes. The clonal relationship was established using XbaI endonuclease using Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). The results showed that in 85% of the isolates the presence of resistance genes was detected, among which we observed the following species: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae The prevalence was for the β-lactamase gene with 77.5% (TEM, SHV and CTX-M) followed by carbapenemase (KPC and GES) with 45%, and AmpC (ACT / MIR) with 2.5%. This was the first report where these resistance genes were detected in environmental isolates in the city of Porto Alegre/RS. Eight isolates had three resistance genes, fourteen isolates two genes and 12 with one gene. The analysis of pulsed field gel electrophoresis showed a clonal profile among some K. pneumoniae strains which were separated into three groups (K1, K2, K3). Among Enterobacter sp. strains it was not possible to establish a clonal profile. It is clear from the work the occurrence and the ability of disseminate these resistance genes among environmental isolates and the potential health risk to the community and so becoming a public health problem.

Um importante micro-organismo causador de doenças de origem alimentar, presente em animais e no homem, é a Salmonella spp. Sua presença no intestino, na pele e entre as penas das aves pode levar à contaminação das carcaças no momento do abate. Pode ocorrer também a contaminação do próprio ambiente de abate, dos manipuladores além da contaminação cruzada entre os animais. Apesar de o Brasil ser um grande produtor de aves, pouco se sabe sobre a influência de abates realizados sob preceitos religiosos na qualidade microbiológica das carcaças produzidas. Dentre os abates religiosos está o abate Schechita que se diferencia do abate convencional pela não realização da escalda antes da depenagem das aves, bem como a utilização do melichah - que tem como uma de suas etapas a aplicação a seco de cloreto de sódio nas carcaças, seguida de sua lavagem. O presente estudo tem por objetivo avaliar a influência do melichah sobre a ocorrência de Salmonella e sobre a população de enterobactérias em carcaças de frangos. Para tanto, foram avaliadas 318 carcaças de aves, sendo 159 obtidas antes da etapa de salga e 159 após a dessalga, coletadas em um abatedouro sob fiscalização do Serviço de Inspeção Federal do MAPA. As carcaças foram submetidas ao enxágue com solução salina e o caldo resultante transportado ao laboratório da FCF-USP para análise. Também se determinou o peso das carcaças; aferiu-se a temperatura das mesmas e o teor de cloro livre na água do tanque de dessalga. A detecção da presença de Salmonella spp. foi realizada conforme a metodologia ISO 6579:2002, enquanto que sua enumeração foi realizada segundo a técnica do Número Mais Provável Miniaturizado (ISO/TC 34/SC 9, N 988, 2009). A enumeração de enterobactérias foi realizada empregando-se placas de Petrifilm EB (3M®) incubadas a 37ºC/ 24h, segundo recomendação do fabricante. Salmonella spp. foi encontrada em somente uma (0,6%) amostra de carcaça antes da salga. Nessa amostra a população do patógeno foi de 41 NMP/g e a de enterobactérias foi de 4 log UFC/g. A população média de enterobactérias nas amostras foi de 3,21±0,79 log UFC/g antes da salga e de 3,15±0,63 log UFC/g após a salga, indicando que não houve diferença significativa (p<0,05) entre ambas. Na simulação do melichah em laboratório observou-se que a redução do patógeno foi significativa, mostrando a influência da etapa de salga sobre esse micro-organismo. / Salmonella spp is an important foodborne pathogen for animals and human beings. The microorganism is found in the intestine, skin, and bird\'s feathers and is able to contaminate carcasses during slaughtering process. The environmental contamination, as well the food handlers, and cross contamination with animals are also possible. Although Brazil is a major poultry producer, little is known about the influence of slaughter performed under religious precepts on the microbiological quality of the produced carcasses. Among the religious slaughters, the Schechita is different from the conventional ones due to the performance of the scalding step before poultry defeathering, and also due to the use of melichah, by which sodium chloride is applied on the carcasses, followed by a washing procedure. The present study aims to evaluate the influence of melichah on the occurrence of Salmonella and on the enterobacteria populations in chicken carcasses. A total of 318 poultry carcasses were evaluated -159 were obtained before salting step and 159 after it, all collected from a slaughterhouse monitored by the Federal Inspection Service of MAPA. The carcasses were rinsed with sodium chloride solution and this solution was taken to the laboratory of FCF-USP for analysis. The carcasses were weighed, their temperature was assessed and the amount of free chloride in the desalting tanks water was determined. The detection of Salmonella was done according to the methodology ISO 6579:2002, whereas its enumeration was performed by the use of the Miniaturized Most-Probable-Number technique (ISO/TC 34/SC 9, N 988, 2009). The enumeratin of enterobacteria populations was done by the use of Petrifilm EB (3M®) and incubation at 37ºC/ 24h, according to the manufacturer instructions. Salmonella spp. was found in only one sample (0.6%) of a carcass before salting step. In this sample, the pathogen population was determined as 41 MPN/g, whereas the counts obtained for enterobacteria were 4 log CFU/g. The average enterobacteria populations found in the samples were 3.21±0.79 log CFU/g before salting and 3.15±0.63 log CFUC/g after it, indicating that there was not a statistically significant difference between them (p<0.05). During melichah simulation done in the laboratory, the reduction in the pathogen counts observed was significant, which demonstrates the influence of the salting step on this microorganism.

Um importante micro-organismo causador de doenças de origem alimentar, presente em animais e no homem, é a Salmonella spp. Sua presença no intestino, na pele e entre as penas das aves pode levar à contaminação das carcaças no momento do abate. Pode ocorrer também a contaminação do próprio ambiente de abate, dos manipuladores além da contaminação cruzada entre os animais. Apesar de o Brasil ser um grande produtor de aves, pouco se sabe sobre a influência de abates realizados sob preceitos religiosos na qualidade microbiológica das carcaças produzidas. Dentre os abates religiosos está o abate Schechita que se diferencia do abate convencional pela não realização da escalda antes da depenagem das aves, bem como a utilização do melichah - que tem como uma de suas etapas a aplicação a seco de cloreto de sódio nas carcaças, seguida de sua lavagem. O presente estudo tem por objetivo avaliar a influência do melichah sobre a ocorrência de Salmonella e sobre a população de enterobactérias em carcaças de frangos. Para tanto, foram avaliadas 318 carcaças de aves, sendo 159 obtidas antes da etapa de salga e 159 após a dessalga, coletadas em um abatedouro sob fiscalização do Serviço de Inspeção Federal do MAPA. As carcaças foram submetidas ao enxágue com solução salina e o caldo resultante transportado ao laboratório da FCF-USP para análise. Também se determinou o peso das carcaças; aferiu-se a temperatura das mesmas e o teor de cloro livre na água do tanque de dessalga. A detecção da presença de Salmonella spp. foi realizada conforme a metodologia ISO 6579:2002, enquanto que sua enumeração foi realizada segundo a técnica do Número Mais Provável Miniaturizado (ISO/TC 34/SC 9, N 988, 2009). A enumeração de enterobactérias foi realizada empregando-se placas de Petrifilm EB (3M®) incubadas a 37ºC/ 24h, segundo recomendação do fabricante. Salmonella spp. foi encontrada em somente uma (0,6%) amostra de carcaça antes da salga. Nessa amostra a população do patógeno foi de 41 NMP/g e a de enterobactérias foi de 4 log UFC/g. A população média de enterobactérias nas amostras foi de 3,21±0,79 log UFC/g antes da salga e de 3,15±0,63 log UFC/g após a salga, indicando que não houve diferença significativa (p<0,05) entre ambas. Na simulação do melichah em laboratório observou-se que a redução do patógeno foi significativa, mostrando a influência da etapa de salga sobre esse micro-organismo. / Salmonella spp is an important foodborne pathogen for animals and human beings. The microorganism is found in the intestine, skin, and bird\'s feathers and is able to contaminate carcasses during slaughtering process. The environmental contamination, as well the food handlers, and cross contamination with animals are also possible. Although Brazil is a major poultry producer, little is known about the influence of slaughter performed under religious precepts on the microbiological quality of the produced carcasses. Among the religious slaughters, the Schechita is different from the conventional ones due to the performance of the scalding step before poultry defeathering, and also due to the use of melichah, by which sodium chloride is applied on the carcasses, followed by a washing procedure. The present study aims to evaluate the influence of melichah on the occurrence of Salmonella and on the enterobacteria populations in chicken carcasses. A total of 318 poultry carcasses were evaluated -159 were obtained before salting step and 159 after it, all collected from a slaughterhouse monitored by the Federal Inspection Service of MAPA. The carcasses were rinsed with sodium chloride solution and this solution was taken to the laboratory of FCF-USP for analysis. The carcasses were weighed, their temperature was assessed and the amount of free chloride in the desalting tanks water was determined. The detection of Salmonella was done according to the methodology ISO 6579:2002, whereas its enumeration was performed by the use of the Miniaturized Most-Probable-Number technique (ISO/TC 34/SC 9, N 988, 2009). The enumeratin of enterobacteria populations was done by the use of Petrifilm EB (3M®) and incubation at 37ºC/ 24h, according to the manufacturer instructions. Salmonella spp. was found in only one sample (0.6%) of a carcass before salting step. In this sample, the pathogen population was determined as 41 MPN/g, whereas the counts obtained for enterobacteria were 4 log CFU/g. The average enterobacteria populations found in the samples were 3.21±0.79 log CFU/g before salting and 3.15±0.63 log CFUC/g after it, indicating that there was not a statistically significant difference between them (p<0.05). During melichah simulation done in the laboratory, the reduction in the pathogen counts observed was significant, which demonstrates the influence of the salting step on this microorganism.