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Recherche et caractérisation de nouveaux peptides antimicrobiens à partir de bactéries lactiques isolées du meconium / Research and characterization of novel antimicrobial peptides isolated from lactic acid bacteria of meconium

Al Atya, Ahmed Khassaf 25 March 2016 (has links)
107 isolats bactériens, à Gram positif et catalase négative, appartenant aux groupe des bactéries lactiques, ont été isolés à partir d'échantillons de méconium de six nouveaux-nés à l'hôpital de Roubaix, dans le nord de la France. Ces bactéries ont été identifiés par spectrométrie de masse MALDI-TOF comme étant des Enterococcus faecalis. Cette identification a été confirmée par séquençage du gène 16S. Six isolats E. faecalis 14, E. faecalis 28, E. faecalis 90, E. faecalis 97, E. faecalis 101 et E. faecalis 93, montraient une activité anti-Gram négatif et Gram positif, due à la production d'acide lactique et de bactériocines. Les bactériocines produites par E. faecalis 28 et E. faecalis 93, appelées entérocines DD28 et DD93, ont été purifiés par RP-HPLC et présentent une masse moléculaire de 5205,21 et 5204,89 Da respectivement. La combinaison des entérocines DD28 et DD93, avec l’erytromycine, a montré un effet synergique sur une souche de Staphylococcus aureus résistante a la méticiline (SARM) en culture planctonique ou sous forme de biofilms. Par ailleurs nous avons également montré que la combinaison de la ticarcilline et de la céfotaxime avec la colistine ont une activité antibactérienne forte contre les souches d’E. coli producteurs de BLSE. En outre, l'étude de l’entérocine DD14, une autre bactériocine produite par E. faecalis 14, et de la nisine en combinaison avec la colistine contre des souches d'E. coli d'origine porcine sous forme planctoniques et après formation de biofilm, a montré une activité antimicrobienne remarquable contre ces souches. / 107 bacterial isolates, assumed as lactic acid bacteria, were isolated from samples of meconium of six donors at Roubaix hospital, in the north of France. All these bacterial isolates were identified by MALDI-TOF mass spectrometry as Enterococcus faecalis. However, only six isolates among which E. faecalis 14, E. faecalis 28, E. faecalis 90, E. faecalis 97 and E. faecalis 101 and E. faecalis 93 were active against Gram negative bacteria (GNB) and Gram positive bacteria (GPB), through production of lactic acid and bacteriocin like inhibitory substances (BLIS). These antagonistic isolates were then fully identified by sequencing the 16S gene (16S rDNA). Bacteriocins produced by E. faecalis 28 and E. faecalis 93, called enterocin DD28 and DD93, were purified by RP-HPLC. These enterocins appeared to have a molecular mass, determined by mass spectrometry, of 5205.21 and 5204.89 Da respectively. Combination of the enterocin DD28 and DD93, with erythromycin showed a synergetic effect on Methicillin Resistant Staphylococcus aureus strain on planktonic and biofilm forming cultures. Otherwise combination of ticarcillin and cefotaxime with colistin, another antimicrobial compound, showed strongest anti-bacterial activity against ESBL producing E. coli. Moreover, the study about effect of enterocin DD14, bacteriocin produced from E. faecalis 14, and nisin in combination with colistin against planktonic and biofilm formation of Escherichia coli strains, from swine origin, showed remarkable antimicrobial activity against these strains.
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Propriétés antagonistes et probiotiques de nouvelles bactéries lactiques et levures isolées des matières fécales humaine et animale / Antagonistic and probiotic properties of novel lactic acid bacteria and yeasts isolated from fecal materials of human and animals

Al-Seraih, Alaa Abdulhussain 10 November 2016 (has links)
Quatre-vingt-un isolats de levures et soixante-dix isolats de bactéries lactiques ont été obtenus à partir de matières fécales de volaille et d’enfants, respectivement. Le typage moléculaire de ces levures par la technique de GTG5-rep PCR a donné 22 groupes mais leur identification par des méthodes biochimiques (système ID-32C), et moléculaires (séquençage de l'espace intergénique ITS1-5.8-ITS2) ont abouti à l'identification de Debaryomyces hansenii (téléomorphe de Candida famata). Le criblage de l'activité antagoniste a permis de mettre en évidence l'activité anti-Listeria de la C. famata Y.5; une souche ayant aussi d'autres propriétés probiotiques. Concernant les bactéries lactiques, nous avons mis en évidence l'antagonisme de deux souches, appelées Enterococcus faecalis B3 et B20. Cet antagonisme est attribué à la production de substances extracellulaires de nature protéique "bactériocines". Les souches sont actives contre Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus dont S. aureus résistant à la méthicilline, Clostridium perfringens et Salmonella Newport. La bactériocine produite par la souche B3, appelée entérocine B3A-B3B, a été purifiée par RP-HPLC. Elle est composée de deux peptides dont les masses moléculaires prédites sont de 5,176.31 Da (B3A) et 5,182.21 Da (B3B). Outre son activité sur des souches de L; monocytogenes cultivées en mode planctonique, l’entérocine B3A-B3B présente une activité anti-biofilm sur ce pathogène alimentaire cultivé sur des lames en acier inoxydable. Le séquençage du génome d’E. faecalis B3 et sa comparaison à ceux des souches cliniques et d'une souche probiotique a permis d'établir des rapprochements génétiques. Toutefois, la souche B3 présente plusieurs caractéristiques favorables à son application comme probiotique. / Eighty-one yeasts and seventy lactic acid bacteria (LAB) isolates were selected from fecal samples of poultry and human origins, respectively. The yeast strains were clustered into 22 groups by GTG5-rep PCR, and then identified as Debaryomyces hansenii (Candida famata) species using the biochemical ID-32C system and molecular sequencing of 26S rDNA and ITS1-5.8-ITS2 rDNA. Only one yeast strain, designated as C. famata Y.5, exhibited antimicrobial activity against Listeria innocua. Further characterization of this anti-Listeria strain, permitted to unveil its probiotic potential. Regarding LAB isolates, two of them were active against Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, methicillin-resistant S. aureus (MRSA), Clostridium perfringens, and Salmonella Newport. The identification of these antagonistic LAB strains as achieved by biochemical, MALDI-TOF-MS, and molecular methods concluded to Enterococcus faecalis B3 and B20. Bacteriocin produced by strain B3, designed as enterocin B3A-B3B, was purified by RP-HPLC, and its predicted molecular mass was 5,176.31 Da (B3A) and 5,182.21 Da (B3B). Notably, B3A-B3B hampered the biofilm installation of L. monocytogenes on stainless steel slides. The sequenced whole genome of E. faecalis B3 was compared to those of clinical and probiotic E. faecalis strains. B3 strain resulted to be sensitive to most antibiotics tested, non-cytotoxic, non-hemolytic, and devoid of inflammatory effects. Moreover, it showed remarkable hydrophobicity, auto-aggregation, adhesion to Caco-2 cells, viability in simulated GIT conditions, and cholesterol assimilation. These features together introduce the E. faecalis B3 strain as a probiotic candidate.
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Enterococcus pathotypes as reservoirs of antibiotic resistance determinants in the Kat River and Fort Beaufort abstraction waters

Ntloko, Phindiwe January 2014 (has links)
In this study, 400 presumptive Enterococcus isolates previously recovered from Kat River and Fort Beaufort Abstraction water dam were subjected to molecular confirmation and pathotyping. Two hundred and seventy-four (68%) of these isolates were confirmed to be enterococci species. Confirmations studies were polymerase chain reaction (PCR) based, using enterococci specific primers targeting the tuf gene. The confirmed enterococci isolates were further differentiated into their pathotypes, the targets of which were: E. faecalis, E. avium, E. hirae, E. casseliflavarus and E. gallinarum using well documented species specific primer sequences. E. faecalis accounted for 20% of the isolates, followed by E. avium (16%), E. hirae (13%), E. casseliflavarus (5%) and E. gallinarum (3%). Furthermore, all the confirmed isolates were analysed for antibiotic susceptibilities using a panel of nine different antibiotics, namely vancomycin, linezolid, ciprofloxacin, ampicillin, gentamicin, chloramphenicol, tetracycline, erythromycin, penicillin, and those that were resistant were assayed for the presence of relevant antibiotic resistance genes. All the 274 isolates were found to harbour vanA resistance gene confirming their phenotypic resistance to the vancomycin. Similarly, 60% (109/180) of the isolates showed phenotypic resistance to erythromycin which was further confirmed by the presence of ermA genes in these isolates. The presence of antibiotic resistant bacteria in surface waters poses a risk to public health.
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Isolamento e caracterização de Enterococcus faecallis resistentes a vancomicina ou a altas concentrações de aminoglicosídeos provenientes de suínos no Brasil / Isolation and characterization of Enterococcus faecalis resistant to vancomicyn or high concentrations of aminoglycosides from pigs in Brazil

Filsner, Pedro Henrique Nogueira de Lima 29 January 2014 (has links)
Agentes causadores de infecções urinárias, endocardites, meningites e septicemias os membros do gênero Enterococcus ganharam grande importância epidemiológica nos últimos anos, já que possuem resistência, tanto intrínseca quanto adquirida, a uma ampla gama de antibióticos. Entre as trinta e seis espécies descritas atualmente, duas recebem maior destaque,E. fecalis e E. faecium devido à alta frequência de multirresistência a antimicrobianos e a sua maior participação nos casos de infecções humanas. Vários estudos tem associado o uso de facilitadores de crescimento em animais de produção com o aumento da frequência de multirresistência em várias espécies de Enterococcus. Diante do exposto, no presente estudo foram avaliadas 245 cepas de Enterococcus faecalis isoladas de 171 suínos comercias quanto ao perfil de resistência a antimicrobianos através da determinação da concentração inibitória mínima e quanto ao perfil genotípico através da eletroforese em campo pulsado. As maiores taxas de resistência observadas foram contra a tilosina (98,7%) e lincomicina (98,7%), seguidas pela tetraciclina (97,1%), eritromicina (96,7%), estreptomicina (96,3%), combinação quinupristinadalfopristina (95,5%), kanamicina (93,8%), gentamicina (85,3%), ciprofloxacina (76,7%) e cloranfenicol (71,8%). Não foram identificadas cepas resistentes a vancomicina e a taxa de resistência a princípios como daptomicina (0,4,%), nitrofurantoína (1,2%) e tigeciclina (1,6%) foi baixa. Através da eletroforese em campo pulsado as cepas foram agrupadas em 109 pulsotipos, não havendo grupamentos diretamente relacionados ao perfil de resistência. As cepas foram agrupadas em maior frequência, de acordo com o animal e a granja de origem. No Brasil, o uso de avoparcina em suinocultura não foi muito intensivo, o que provavelmente não contribuiu para a seleção de cepas resistentes a vancomicina, no entanto, a resistência a altos níveis de gentamicina e estreptomicina é alarmante, e devido à importância destes antimicrobianos no tratamento das infecções humanas por Enterococcus, estes níveis de resistência deveriam ser monitorados em isolados de origem animal e ambiental. / Causative agents of urinary tract infections, endocarditis, meningitis and septicemia members of the genus Enterococcus gained great epidemiological importance in the last years, due to resistance, both intrinsic and acquired a wide range of antibiotics. Among the thirty-six species currently described two receive greater emphasis, E. faecalis and E. faecium due to the high frequency of multidrug resistance to antimicrobial agents and their greater involvement in cases of human infections. Several studies have associated the use of growth promoters in production animals to increase the frequency of multidrug resistance in various species of Enterococci. On the exposed, in the present study, 245 strains of E. faecalis isolated from 171 commercial pigs were evaluated for the antimicrobial resistance profile by determining the minimum inhibitory concentration and for the genotypic profile by pulsed field gel electrophoresis. The highest resistance rates were observed against tylosin (98.7 %) and lincomycin (98.7 %), followed by tetracycline (97.1 %), erythromycin (96.7%), streptomycin (96.3%), a combination quinupristin - dalfopristin (95.5 %), kanamycin (93.8 %), gentamicin (85.3 %), ciprofloxacin (76.7 %) and chloramphenicol (71.8%). Strains resistant to vancomycin were not found, and the rate of resistance to daptomycin (0.4 %), nitrofurantoin (1.2%) and tigecycline (1.6%) was low. By pulsed field gel electrophoresis the strains were grouped into 109 pulsotypes, with no groups directly related to the resistance profile. The strains were grouped into higher frequency, according to the animal and farm of origin. In Brazil, the use of avoparcin in swine production was not very intensive, which probably contribute to the low selection of vancomycin-resistant strains, however, resistance to high levels of gentamicin and streptomycin is alarming, and because of the importance of these antimicrobials in treatment of human infections caused by Enterococcus, these resistance levels should be monitored in isolates of animal and environmental origin.
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Desinfecção intratubular de dentes bovinos por soluções de hipoclorito de sódio acidificadas / Intratubular decontamination of bovine teeth by acidified sodium hypochlorite solutions

Maliza, Amanda Garcia Alves 27 May 2013 (has links)
A total descontaminação do sistema de canais radiculares e da massa dentinária é uma constante preocupação clínica. Diante disso, esta pesquisa teve o objetivo de avaliar o nível de descontaminação dentinária alcançada após irrigação com soluções de hipoclorito de sódio em diferentes concentrações valores de pH. Oitenta dentes bovinos unirradiculados foram divididos em 9 grupos experimentais diferentes. As coroas foram seccionadas e despregadas das raízes. Foram obtidos segmentos de 12mm e os canais instrumentados até a lima K120, preenchidos com EDTA 17%, durante 10 minutos. As raízes foram impermeabilizadas externamente com duas camadas de esmalte. Suspensões de Enterococcus faecalis (ATCC 29212) foram padronizadas em espectrofotômetro (3x108 UFC/mL) e depositadas em microtubos com caldo BHI e um espécime. O protocolo de contaminação seguiu a metodologia de MA et al. (2011) com adaptações. Após 5 dias, os espécimes foram fixados em um dispositivo de apoio esterilizado e irrigados durante 5 minutos com as soluções-teste estabilizadas com tampões: (G1) NaOCl 1% - pH5; (G2) NaOCl 1% - pH7; (G3) NaOCl 1% - pH10; (G4) NaOCl 2,5% - pH5; (G5) NaOCl 2,5% - pH 7; (G6) NaOCl 2,5% - pH10; (G7) NaOCl 5% - pH5; (G8) NaOCl 5% - pH7; (G9) NaOCl 5% - pH10, contendo 8 espécimes cada, além dos grupos controles. Após o tratamento com as soluções irrigadoras, metade dos espécimes é avaliada por cultura microbiológica (contagem de unidades formadoras de colônias UFC/mL das raspas de dentina retiradas das paredes dos canais) e a outra metade do mesmo grupo avaliada por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL) e corante Live & Dead. Houve diferença estatística entre diversos grupos, analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Dunn. (p<0,05) Concluiu-se que a solução de hipoclorito de sódio acidificada provocou uma redução significante no número de bactérias. Essa redução foi ainda maior quando a concentração da solução era elevada. / The complete decontamination of root canal system and dentinal mass is a constant clinical concern. Therefore, this study aimed to evaluate the level of dentin decontamination achieved after irrigation with sodium hypochlorite solutions at different concentrations and pH values. Eighty single rooted bovine teeth were divided into 9 different groups. The crowns were sectioned and separated from the roots. Then, there was obtained segments of 12mm and the root canals were instrumented until size #120 K-file and filled with 17% EDTA during 10 minutes. The roots were externally sealed with two layers of nail polish. Suspensions of Enteroccus faecalis (ATCC 29212) were standardized using a spectrophotometer (3x108 CFU/mL) and placed in microtubes containing BHI broth and one sample. The protocol of contamination followed the methodology of MA et al. (2011) with some adjustments. After five days, the samples were fixed in a sterilized device and irrigated during 5 minutes with the tested solutions stabilized by buffers substances: (G1) 1% NaOCl - pH5; (G2) 1% NaOCl - pH7; (G3) NaOCl 1% - pH10; (G4) 2.5% NaOCl - pH5, (G5) 2.5% NaOCl - pH 7, (G6) 2.5% NaOCl - pH10; (G7) 5% NaOCl - pH5; (G8 ) NaOCl 5% - pH 7 (G9) 5% NaOCl - pH10, containing 8 specimens each, and the control groups. After the treatment with the irrigating solutions, half of the specimens were evaluated by microbiological cultures (counting colony forming units CFU/mL of dentine chips removed from the wall of root canals) and the other half of the same group were evaluated by confocal laser scanning microscopy (CLSM) with fluorescent Live & Dead stain. There was statistical difference among various groups (p<0.05) by Kruskal-Wallis and Dunns test. It was concluded that the acidified sodium hypochlorite solution resulted in a significant reduction in the number of bacteria.
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Isolamento e caracterização de Enterococcus faecallis resistentes a vancomicina ou a altas concentrações de aminoglicosídeos provenientes de suínos no Brasil / Isolation and characterization of Enterococcus faecalis resistant to vancomicyn or high concentrations of aminoglycosides from pigs in Brazil

Pedro Henrique Nogueira de Lima Filsner 29 January 2014 (has links)
Agentes causadores de infecções urinárias, endocardites, meningites e septicemias os membros do gênero Enterococcus ganharam grande importância epidemiológica nos últimos anos, já que possuem resistência, tanto intrínseca quanto adquirida, a uma ampla gama de antibióticos. Entre as trinta e seis espécies descritas atualmente, duas recebem maior destaque,E. fecalis e E. faecium devido à alta frequência de multirresistência a antimicrobianos e a sua maior participação nos casos de infecções humanas. Vários estudos tem associado o uso de facilitadores de crescimento em animais de produção com o aumento da frequência de multirresistência em várias espécies de Enterococcus. Diante do exposto, no presente estudo foram avaliadas 245 cepas de Enterococcus faecalis isoladas de 171 suínos comercias quanto ao perfil de resistência a antimicrobianos através da determinação da concentração inibitória mínima e quanto ao perfil genotípico através da eletroforese em campo pulsado. As maiores taxas de resistência observadas foram contra a tilosina (98,7%) e lincomicina (98,7%), seguidas pela tetraciclina (97,1%), eritromicina (96,7%), estreptomicina (96,3%), combinação quinupristinadalfopristina (95,5%), kanamicina (93,8%), gentamicina (85,3%), ciprofloxacina (76,7%) e cloranfenicol (71,8%). Não foram identificadas cepas resistentes a vancomicina e a taxa de resistência a princípios como daptomicina (0,4,%), nitrofurantoína (1,2%) e tigeciclina (1,6%) foi baixa. Através da eletroforese em campo pulsado as cepas foram agrupadas em 109 pulsotipos, não havendo grupamentos diretamente relacionados ao perfil de resistência. As cepas foram agrupadas em maior frequência, de acordo com o animal e a granja de origem. No Brasil, o uso de avoparcina em suinocultura não foi muito intensivo, o que provavelmente não contribuiu para a seleção de cepas resistentes a vancomicina, no entanto, a resistência a altos níveis de gentamicina e estreptomicina é alarmante, e devido à importância destes antimicrobianos no tratamento das infecções humanas por Enterococcus, estes níveis de resistência deveriam ser monitorados em isolados de origem animal e ambiental. / Causative agents of urinary tract infections, endocarditis, meningitis and septicemia members of the genus Enterococcus gained great epidemiological importance in the last years, due to resistance, both intrinsic and acquired a wide range of antibiotics. Among the thirty-six species currently described two receive greater emphasis, E. faecalis and E. faecium due to the high frequency of multidrug resistance to antimicrobial agents and their greater involvement in cases of human infections. Several studies have associated the use of growth promoters in production animals to increase the frequency of multidrug resistance in various species of Enterococci. On the exposed, in the present study, 245 strains of E. faecalis isolated from 171 commercial pigs were evaluated for the antimicrobial resistance profile by determining the minimum inhibitory concentration and for the genotypic profile by pulsed field gel electrophoresis. The highest resistance rates were observed against tylosin (98.7 %) and lincomycin (98.7 %), followed by tetracycline (97.1 %), erythromycin (96.7%), streptomycin (96.3%), a combination quinupristin - dalfopristin (95.5 %), kanamycin (93.8 %), gentamicin (85.3 %), ciprofloxacin (76.7 %) and chloramphenicol (71.8%). Strains resistant to vancomycin were not found, and the rate of resistance to daptomycin (0.4 %), nitrofurantoin (1.2%) and tigecycline (1.6%) was low. By pulsed field gel electrophoresis the strains were grouped into 109 pulsotypes, with no groups directly related to the resistance profile. The strains were grouped into higher frequency, according to the animal and farm of origin. In Brazil, the use of avoparcin in swine production was not very intensive, which probably contribute to the low selection of vancomycin-resistant strains, however, resistance to high levels of gentamicin and streptomycin is alarming, and because of the importance of these antimicrobials in treatment of human infections caused by Enterococcus, these resistance levels should be monitored in isolates of animal and environmental origin.
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Avaliação de moléculas bioativas produzidas por isolados actinomicetos contra cocos Gram positivos de origem clínica / Characterization of bioactive molecules produced by actinomycetes isolated against clinical cocos gram positive

Antunes, Themis Collares January 2013 (has links)
Os actinomicetos são bactérias Gram positivas caracterizadas por sua habilidade em formar hifas, são amplamente distribuídos no ambiente e conhecidos pela diversidade na produção de moléculas biologicamente ativas. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a atividade de compostos produzidos por quarenta isolados de actinomicetos contra isolados clínicos de Enterococcus sp, Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis. O perfil de suscetibilidade das amostras clínicas foi avaliado empregando a técnica de disco difusão em ágar. A atividade antimicrobiana dos actinomicetos foi avaliada pela técnica da dupla camada. Os isolados que apresentaram atividade foram cultivados em caldo amido caseína à temperatura de 30ºC por sete dias, com agitação constante. Após o crescimento, a cultura foi filtrada para obtenção do extrato bruto. A atividade antibiótica do extrato foi avaliada através da técnica de difusão em poço. O isolado que apresentou maior espectro de ação foi selecionado para otimização dos compostos. A otimização da produção dos compostos com atividade antibiótica foi realizada através da avaliação de curva de produção, variação da fonte de carbono, tempo de incubação, pH tamponado e pH não tamponado. No ensaio de sobrecamada os isolados 50 e 8S apresentaram atividade contra a 90% das amostras de microrganismos clínicos de Staphylococcus sp. e Enterococcus sp. No ensaio de difusão em poço o isolado 50 apresentou maior atividade antibiótica que o isolado 8S. Na otimização do extrato as melhores condições de produção foram: 72 h de crescimento, fonte de carbono amido e sem tamponamento de pH. Não foi observada influência de biomassa na produção dos compostos. A cromatografia em camada delgada revelou a presença de duas bandas com fator de retenção de 0,28 (Rf1) e 0,57 (Rf2). / Actinomycetes are Gram positive bacteria, characterized by their ability to form hyphae. They are widely distributed in the environment and known for their diversity in producing biological active molecules. This study aimed to evaluate the activity of compounds produced by forty isolates of Actinomycetes against clinical isolates of Enterococcus sp, Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis. The susceptibility profile of the samples was evaluated using the disk diffusion technique in agar. The antimicrobial activity of actinomycetes was assessed by means of the double layer. Isolates that showed activity were grown in starch casein broth at a temperature of 30 ºC for seven days, with constant agitation. After growth the culture was filtered to obtain a crude extract. The antimicrobial activity of the extract was evaluated by the well diffusion technique. The actinomycete that showed activity against most of the test samples was selected for optimization(s) of the compound(s) production. The optimization of the production was performed by evaluating: growth curve, the use of different carbon source, changes in the incubation time, and culture media with buffered and unbuffered pH. In the overlay assay isolates 50 and 8S presented activity against most of Staphylococcus sp. and Enterococcus sp samples. In diffusion assay isolate 50 showed higher antibiotic activity than the isolated 8S. Compiling the results the best production conditions were: 72 h of growth, carbon source starch without pH buffering at 30°C. There was no effect of biomass (s) compound (s) activity. The thin layer chromatography revealed the presence of two bands with a retention factor of 0.28 (Rf1) and 0.57 (Rf2).
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Caracterização fenotípica e genotípica de amostras de enterococcus spp. isoladas em dois hospitais de Porto Alegre

Bender, Eduardo André January 2008 (has links)
As características fenotípicas e genotípicas de 203 isolados de Enterococcus spp. proveniente de diferentes amostras clínicas em dois hospitais localizados na cidade de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil, foram estudadas. As espécies foram identificadas através de testes bioquímicos convencionais e pelo uso do sistema automatizado VITEK 2 (BioMérieux). As concentrações inibitórias mínimas (CIM) para aminoglicosídeos foram determinadas pelo método de diluição em ágar. O alto nível de resistência aos aminoglicosídeos (HLAR) e à ampicilina foi avaliado pelo mesmo método e adicionalmente pelo método de disco-difusão. A diversidade genética de amostras de Enterococcus faecalis com HLAR foi determinada através da digestão do DNA cromossômico com a enzima SmaI seguida de eletroforese em campo pulsado (PFGE). O E. faecalis foi a espécie mais prevalente (93,6%) seguido por E. faecium (4,4%). A resistência entre os isolados clínicos foi de 2,5% à ampicilina, 0,5% à vancomicina, 0,5% à teicoplanina, 33% ao cloranfenicol, 2% à nitrofurantoína, 62,1% à eritromicina, 64,5% à tetraciclina, 24,6% à rifampicina, 30% ao ciprofloxacino e 87,2% à quinupristina-dalfopristina. A prevalência de HLAR foi de 10,3%, sendo 23,6% para gentamicina e 37,4% para estreptomicina. A maioria das amostras sensíveis aos aminoglicosídeos pelo método de disco-difusão apresentaram CIM inferior a 125 μg/mL e 500μg/mL para gentamicina e estreptomicina, respectivamente. A prevalência de Enterococcus resistentes à vancomicina (ERV) foi muito baixa neste estudo. Um grupo clonal predominante foi encontrado entre amostras de E. faecalis com HLR-Ge/St. Os isolados incluídos no grupo clonal foram provenientes de ambos os hospitais, indicando uma disseminação intra e inter-hospitalar deste clone. / The phenotypic and genotypic characteristics of 203 Enterococcus spp isolates recovered from different clinical sources of two hospitals in Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil, were studied. The species were identified by conventional biochemical tests and the automated system VITEK 2 (BioMérieux). The minimal inhibitory concentrations (MIC) for aminoglycosides were evaluated by agar dilution method. The evaluation of high-level resistance to aminoglycosides (HLAR) and resistance to ampicillin were carried out by the same method as well as by the disc-diffusion method. The genetic diversity of HLAR E. faecalis was assessed by pulsed-field gel electrophoresis of cromossomal DNA after SmaI digestion. The E. faecalis was the most frequent specie (93.6%), followed by E. faecium (4.4%). The percentage of resistance among the clinical isolates was: 2.5% to ampicillin, 0.5% to vancomycin, 0.5% teicoplanin, 33% to chloramphenicol, 2% to nitrofurantoin, 66.1% to erythromycin, 66.5% to tetracycline, 24.6% to rifampicin, 30% to ciprofloxacin and 87.2% to quinupristin-dalfopristin. A total of 10.3% proved to be HLAR, with 23.6% resistant to gentamicin and 37.4% to streptomycin. Most of the aminoglycosides susceptible isolates by the disc-diffusion method presented MIC lower than 125 μg/mL and 500μg/mL for gentamicin e streptomycin, respectively. The prevalence of vancomycin resistance Enterococcus (VRE) was very low in this study. One predominant clonal group was found among E. faecalis exhibiting HLR-Ge/St. The isolates included in the clonal group were recovered from both hospitals, indicating both intrahospital and interhospital spread of this clone.
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Avaliação do efeito da presença do biofilme de Enterococcus faecalis no canal radicular sobre a manutenção da substantividade da clorexidina a 2% : estudo in vitro

Böttcher, Daiana Elisabeth January 2014 (has links)
Introdução: O objetivo do presente estudo foi correlacionar o efeito antimicrobiano residual e a substantividade da solução de clorexidina a 2%, em dentina humana de dentes extraídos e contaminada com E. faecalis, por 48 horas, 7 e 30 dias. Metodologia: Cento e vinte e três dentes humanos extraídos foram utilizados para esse estudo. As amostras foram divididas em quatro grupos conforme a solução irrigadora utilizada (CHX 2% ou soro fisiológico) e na presença ou ausência do biofilme de Enterococcus faecalis. As amostras foram mantidas em contato com a respectiva solução durante 5 minutos. Cada grupo foi distribuído aleatoriamente em 3 subgrupos de acordo com o período de avaliação (n=10). A quantidade de CHX presente foi avaliada através de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e a viabilidade bacteriana foi analisada através de microscópio confocal a laser (CLSM). A análise estatistica foi feita através dos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney U (P<.05) e teste de correlação de Spearman (P<.01). Resultados: Houve uma correlação negativa entre o percentual de células viáveis e a quantidade de CHX remanescente (P = .000). A CHX reduziu significativamente o percentual de células viáveis em relação ao soro após 48 horas (P = .007). A diferença foi mantida no período de 7 dias (P = .001). Após 30 dias, o grupo CHX apresentou um aumento da viabilidade bacteriana tornando-se semelhante ao soro (P = .623). Simultaneamente, a quantidade de CHX reduziu significativamente após 30 dias (P = .000). Conclusão: Os resultados do presente estudo indicam que a CHX a 2% foi detectada nos periodos de 48 horas e 7 dias, mantendo reduzido o percentual de células viáveis. A presença de microrganismos na dentina humana não alterou a quantidade de CHX residual. / Introduction: The aim of this study was to correlate the bacterial viability and the presence of 2% chlorhexidine (CHX) on dentin by means of confocal laser scanning microscope (CLSM) and high-performance liquid chromatography (HPLC) for 48 hours, 7 and 30 days. Methods: One hundred twenty three extracted human teeth were used. Samples were divided into 4 groups according to the solution (CHX or saline) and the presence of Enterococus faecalis biofilm. Samples were kept in contact with 5mL of the solution for 5 minutes. Each group was divided into 3 subgroups according to the evaluation period (n = 10). Statistical analysis was performed by using the Kruskal- Wallis, Mann-Whitney U tests (P < .05) and Spearman’s Rank Correlation Coefficient (P < .01). Results: There was a negative correlation between the percentage of live cells and the amount of remaining CHX (P = .000). CHX significantly reduced the percentage of viable cells compared to saline after 48 hours (P = .007). Differences were maintained in the 7-day evaluation (P = .001). After 30 days, CHX group presented an increase of viable cells, thereby becoming similar to saline (P = .623). Simultaneously, remaining CHX significantly reduced in the 30-day specimens (P = .000). Conclusion: The results of this study indicate that 2% CHX solution was detected for 48 hours and 7 days, keeping a low percentage of viable cells. The presence of microorganisms on human dentin did not affect 2% chlorhexidine maintenance.
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Enterococcus faecalis: fatores de virulência relacionados aos processos de natureza endodôntica / Enterococcus faecalis: virulence factors related to endodontic nature processes.

Aurimar de Oliveira Andrade 12 December 2014 (has links)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo principal deste estudo foi investigar a interação de 24 cepas de E. faecalis isoladas de infecções endodônticas primárias às proteínas de matriz dentinária, como também a moléculas de matriz presentes em lesões de endocardites. A análise desta interação foi feita através de técnica enzimática, com confirmação pela técnica de fluorescência. Além disto, foi realizada a confirmação do isolamento da espécie E. faecalis, através da técnica de PCR para o gene 16SrRNA e a análise da presença de genes de virulência da referida espécie microbiana para aderência às supostas proteínas de matriz incluindo às de ligação ao colágeno (ace, gelE, esp, agg e efaA). O maior padrão de interação das cepas ocorreu com a fibronectina (83,4%), seguido pelo fibrinogênio (62,5%) e colágeno humano tipo I (52%). Curiosamente, a aderência observada para o colágeno do tipo I, foi de pequena magnitude, quando comparado com a amostra padrão da ATCC 29212. As cepas ATCC 29212, A1, A43 e A68 interagiram com todas as proteínas de matriz utilizadas neste estudo. Um percentual expressivo das cepas testadas apresentou amplificação para efaA (86,9%) e para ace (73,9%). Paralelamente, todas as cepas apresentaram amplificação para gelE e foram negativas para os genes agg e esp. Adicionalmente, não houve correlação entre a detecção dos genes de virulência e a interação às proteínas de matriz, evidenciando que, mesmo com a detecção dos genes nas amostras, se faz necessário avaliar a expressão gênica por qPCR. / The main objective of this study was to investigate the interaction of 24 E. faecalis strains isolated from primary endodontic infections with dentin matrix proteins, as well as to the matrix molecules present in endocarditis lesions. The analysis of this interaction was made by enzyme assay, with confirmation by the fluorescence technique. In addition, confirmation of the isolation of the species E. faecalis was performed by PCR for 16S rRNA gene and the analysis of the presence of virulence genes for matrix proteins including type I collagen (ace, gelE, esp , agg and efA). The strains interacted mostly with fibronectin (83.4%), followed by fibrinogen (62.5%) and human collagen type I (52%). Interestingly, the adhesion to type I collagen occurred in small magnitude, when compared with the E. faecalis type strain ATCC 29212. The strains ATCC 29212, A1, A43 and A68 interacted with all matrix proteins investigated in this study. A significant percentage of the tested strains showed amplification for efaA (86.9%) and ace (73.9%). In parallel, all strains showed amplification for gelE and were negative for the genes esp and agg. Additionally, there was no correlation between the detection of virulence genes and the interaction with matrix proteins, showing that even with the detection of genes in a particular strain, it is necessary to evaluate the gene expression by qPCR.

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