Memoria para optar el título de Bioquímico / El componente nervioso simpático regula la función ovárica y su actividad nerviosa aumenta al final del periodo reproductivo, lo que supone una relación entre envejecimiento ovárico y aumento del tono simpático. Este componente nervioso tiene una porción extrínseca y otra intrínseca, las que podrían participar de manera complementaria en la regulación de la función ovárica normal y en especial en el proceso de envejecimiento del ovario. Este trabajo tiene por objeto demostrar que células ováricas tipo-neuronas, que forman parte del componente nervioso intrínseco, participan en el aumento del tono adrenérgico, observado al final del periodo reproductivo. Para esto se midió la capacidad de incorporación y liberación de norepinefrina tritiada en ovarios completos, células ováricas obtenidas por punción y ovario residual posterior a la punción de ratas controles y ratas desnervadas de entre 6 a 12 meses de edad. Con el objeto de evaluar la participación de transportadores de catecolaminas se pre-incubó con una solución de cocaína 10 μM. Para determinar la presencia de células tipo-neurona en el ovario, se realizaron ensayos de inmunohistoquímica para los marcadores nerviosos DAT y Snap-25 en cortes de ovario pertenecientes a ratas de 6,10 y 14 meses de edad. Los resultados muestran que en la senescencia existe un aumento sostenido del tono adrenérgico intrínseco del ovario, representando hasta un 30% del tono simpático total. Además, este componente intrínseco estaría conformado por células tipo-neuronas pertenecientes al tejido intersticial, las que poseen transportadores de catecolaminas que participarían en la homeostasis adrenérgica del ovario. Finalmente, los ensayos de inmunoreactividad para DAT y Snap-25 mostraron la presencia de estos marcadores en células de la granulosa y tejido intersticial, avalando la existencia de células tipo-neuronas en el ovario. Lo anterior da luces sobre la participación de un componente celular distinto a los descritos anteriormente en el envejecimiento ovárico y permite plantear nuevas interpretaciones sobre los eventos que ocurren al final del periodo reproductivo tanto en ratas como en la mujer / The nervous component that modulates ovarian function increases its activity at the end of reproductive period, implying a relationship between ovarian aging and an increase of the sympathetic tone. This nervous component has two portions, an extrinsic one and other intrinsic, which could participate in a complementary manner in the normal modulating ovarian function particularly in the ovary aging process. This paper aims to demonstrate that ovarian neuron-like cells belonging to intrinsic nervous component are involved in the increase adrenergic tone observed at the end of reproductive period. For this, we measured the capability of releasing radiolabeled noradrenalin previously incorporated of full ovaries, ovarian cells obtained by puncture and remaining ovaries after puncture in controls and denervate rats between 6-12 months of age. In order to evaluate the participation of catecholamine carriers, the tissues were previously incubated with cocaine 10 μM solution. To determine the presence of neuron-like cells in the ovary an immunohistochemical assay was performed for the nervous markers DAT and Snap-25 in ovary slides of 6, 10 and 14 months of age control rats. The results show that during senescence there is an increase in the intrinsic adrenergic tone of the ovary, representing 30% of the total sympathetic tone. In addition, this component would consist of intrinsic cells neuron-like belonging to the interstitial tissue, which possesses catecholamine transporters, involved in adrenergic ovarian homeostasis. Finally, immunoreactivity assays for DAT and Snap-25 showed the presence of these markers in granulosa cells and interstitial tissue, supporting the existence of neuron-like cells in the ovary. This sheds light on the involvement of a different cellular compartment during ovarian aging and can suggest new interpretations of the events occurring at the end of the reproductive period in both rats and women

Memoria para optar al título de Bioquímico / Debido a la demanda social, la mujer ha tenido que postergar la maternidad. Esto presenta el inconveniente de que con el aumento de la edad decrece el número y la calidad de los folículos, disminuyendo progresivamente la fertilidad. Además, se ha descrito que los ovarios de mujeres pre y posmenopáusicas presentan características del desarrollo folicular similares al del ovario poliquístico (PCO) descrito en mujeres en edad fértil. También se ha descrito que mujeres con PCO y posmenopáusicas (entre 51 y 94 años de edad) presentan una mayor densidad de fibras nerviosas ováricas comparadas con ovarios de mujeres normales. En el modelo múrido, la rata presenta un aumento en la concentración de noradrenalina (NA) intraovárica y un incremento en el número de folículos tipo III (FTIII) y quistes ováricos a medida que envejece. Como consecuencia, disminuye el número de cuerpos lúteos (CL), el porcentaje de ovulación y el número de partos y crías. Por otro lado, en PCO en rata inducido con estímulos hormonales y/o ambientales, se generan características similares a las descritas en el envejecimiento ovárico. Además, PCO en ratas es acompañado de un aumento en la activación noradrenérgica ovárica, la cual es gatillada por un aumento previo en la producción de NGF intraovárico y su receptor de baja afinidad p75NTR. Mas aún, incremento de NGF intraovárico mediante al inyección de células sobreproductoras en el ovario de ratas jóvenes, induce un incremento del número de FTIII y prequistes. Por lo tanto, proponemos que NGF como factor neurotrófico y/o factor de crecimiento, durante el periodo de subfertilidad, acelera el envejecimiento ovárico siendo un importante componente para el control del final del periodo reproductivo en la rata. Ratas Sprague-Dawley de 6, 8 y 10 meses de edad fueron tratadas con NGF localmente en el ovario durante 28 días mediante una minibomba osmótica. Durante el procedimiento la ciclicidad estral fue estudiada por frotis vaginal. Posteriormente las ratas fueron eutanasiadas y se determinó la concentración de NGF intraovárico, la concentración de NA por HPLC, hormonas esteroidales en suero por EIA, y la morfología ovárica fue analizada mediante cortes de 6 um teñidos con hematoxilina-eosina. Los resultados demostraron los mayores efectos de la administración de NGF se observaron a los 10 meses de edad, donde observamos un incrementó en la concentración de NA y el número de FTIII en ovario, como esperábamos, disminuyó el número de CL y el porcentaje de ovulación. En los tratamientos de 6 y 8 meses no se observaron cambios tan importantes. Sin embargo, se observaron algunas características típicas del envejecimiento ovárico, como incremento de la concentración de noradrenalina, disminución de la población folicular y aumento de folículos tipo III. En la función esteroidogénica, se observó un perfil hormonal sérico similar al del envejecimiento. Estos resultados sugieren que el aumento intraovárico de NGF participa en el envejecimiento del ovario, favoreciendo la aparición de las características observadas al final del periodo reproductivo. / Woman has delayed their motherhood still after 30 years old because of social demand, but ovarian follicle numbers and quality decreases with age, progressively decreasing the fertility with age. Furthermore, it has been described that ovaries from women during the pre- and/or post-menopausal period show a follicular development similar to polycystic ovary (PCO) in fertile women. It has been also found that the ovary of women with PCO (between 18 and 44 years old) or during postmenopausal period (between 51 and 94 years old) shows increased nerves fibers in contrast with the ovary of normal women. In the murine model, the ovary of ageing rat is characterized by increased concentration of noradrenaline (NA) and elevated number of type III follicles (FTIII) and cysts in the ovary. As a consequence, it decreased the number of corpus luteum (CL), the ovulation rate, pregnancy and the number of live pups. PCO in rat, either induced by hormonal and/or environmental stimulus, presents similar characteristics as most of ovarian ageing. In addition PCO in rats is accompanied by an increase in the activity of sympathetic nerves induced by a previous increase in the intraovarian levels of NGF (nerve growth factor) and its receptor p75NTR. Moreover, local increase of NGF by injection of overproducing cells in the ovaries of young rats induces an elevated number of FTIII and pre-cysts. Therefore, now we propose that NGF, during the subfertile period, could act either as a neurotrophic factor or as a growth factor to accelerate the ovarian ageing being a principal component to control the end of reproductive period in rats. Sprague-Dawley rats 6, 8 and 10 months old (before at the end of the reproductive period) were used. We administered NGF during 28 days trough an osmotic mini-pumps, connected to the ovary by a sylastic cannula. During the procedure the estrual cycling activity was followed by vaginal smear. Rats were euthanized and the ovarian concentration of NGF was determined by ELISA, NA was determined by HPLC, the concentration of steroid hormones in serum by EIA and the morphological analysis of the ovary was done in 6 um slices stained with hematoxylineosin measured. The major effects of NGF occurred in the 10 months old rats, at this age we observe an increase in the concentration of NA and in the number of FTIII. As we can expect, the number of CL and the ovulation rate were decreased. In the NGF treatment at 6 and 8 months old there were no important changes. However, we observed the appearance of some ovarian ageing characteristics such as an increase in the concentration of NA, decrease of follicular population and an elevate number of FTIII (it was observed at 8 month old, as we can expect if the ageing is accelerated). In the steroidogenic function, we observe in all treatments the normal ageing-hormonal profile. These results suggest that the intraovarian excess of NGF accelerate the ageing ovarian, maybe increasing the rises of the typical characteristic at the end of the reproductive period