Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fabiana Ferreira Fonseca / Banca: José Antonio Dell'Aqua Junior / Banca: Arlindo de Alencar Araripe Noronha Moura / Banca: Lucilene Delazari dos Santos / Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar os parâmetros seminais, a expressão de proteínas do plasma seminal (PS) e da membrana plasmática (MP) correlacionando-os com a fertilidade de garanhões Quarto de Milha (Experimento I); e caracterizar o proteoma do PS e da MP de espermatozoides por eletroforese 2D e espectrometria de massas (Experimento II). No Experimento I, três ejaculados de 10 garanhões férteis e 9 garanhões subférteis foram avaliados quanto aos parâmetros de cinética, integridade de membrana plasmática e acrossomal e cromatina espermática. Proteínas do PS e extraídas da MP foram submetidas a eletroforese 2D e espectrometria de massas (MALDI-TOF/TOF) e análise shotgun (LC-ESIQTOF). Foi observada associação positiva da fertilidade com a MT, MP, LIN e RAP. Um spot diferencial (28 kDa; pI 5,6) do PS apresentou maior expressão em garanhões subférteis. Não foi observada diferença na expressão proteica na MP entre os garanhões. Na análise shotgun, foram identificadas 53 proteínas únicas no PS de garanhões férteis, como a SPATA21 e 103 nos garanhões subférteis, como a clusterina. Na MP, foram identificadas 269 proteínas em animais com alta fertilidade como a SP-1, SMOK e PLC, e 167 proteínas únicas em garanhões subférteis. No Experimento II, o PS e o extrato de MP apresentaram predominância de polipeptídeos com massa molecular < 35 kDa. Proteínas ribossomais foram detectadas nas duas amostras. A análise shotgun identificou 66 proteínas no PS e 291 no extrato de MP; envolvidas no processo reprodutivo como as kallikrein, SP-1, SP-2, Fn-2 e Fn-3, SPATA. Em conclusão, o estudo de garanhões com distintos índices de concepção permitiu a identificação de proteínas únicas do PS e da MP e de parâmetros de cinética espermática relacionados a fertilidade que podem servir como base para determinação de marcadores de fertilidade em garanhões. Uma série de proteínas da MP podem ser originárias do... / Abstract: The aim of this study was to investigate the seminal parameters, the expression of proteins in seminal plasma (SP) and plasma membrane (PM) correlating them with the fertility of Quarter Horses stallions (Experiment I); and characterize the proteome of SP and PM sperm by 2D electrophoresis and mass spectrometry (Experiment II). In Experiment I, three ejaculates from 10 fertile stallions and nine subfertile stallions were evaluated for kinetic parameters, plasma membrane integrity and acrosome and sperm chromatin. Proteins extracted from the SP and MP were submitted to 2D electrophoresis coupled to mass spectrometry (MALDI-TOF/TOF) and shotgun analysis (LC-ESIQTOF). Positive association of fertility with MT, MP, LIN and RAP was observed. A differential spot (28 kDa, pI 5.6) of SP showed higher expression in subfertile stallions. No difference in protein expression in PM among stallions was observed. In the shotgun analysis, 53 unique proteins in the SP of fertile stallions, as SPATA21, and 103 in subfertile stallions, as clusterin, were identified. In PM, 269 proteins were identified in animals with high fertility as SP-1, SMOK and PLC, and 167 unique proteins in subfertile stallions. In Experiment II, the SP and the extract of PM showed a predominance of polypeptides with molecular mass < 35 kDa. Ribosomal proteins were detected in both samples. Shotgun analysis identified 66 proteins in SP and 291 in the extract of PM; involved in the reproductive process such as kallikrein, SP-1, SP-2, Fn-2 and Fn-3, SPATA. In conclusion, the study of stallions with distinct conception rates allowed the identification of unique proteins of SP and PM and kinetic parameters related to fertility which may serve as basis for determination of fertility biomarkers in stallions. A number of PM proteins may originate from the SP and be related to sperm functionality and interaction between gametes. Although, the use of modern proteomic approach allowed the ... / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: André Maciel Crespilho / Resumo: A vesiculite seminal possui grande relevância na clínica reprodutiva devido à dificuldade de tratamento, elevados índices de recidiva, risco de contaminação de fêmeas com agentes patogênicos, inutilização de animais e baixos índices de fertilidade. O tratamento local tem sido apontado por diversos autores como a melhor alternativa terapêutica, porém nenhum estudo avaliou seus efeitos na qualidade e longevidade seminal. Nesse sentido, os objetivos do presente estudo incluíram: investigar quais são as principais bactérias envolvidas na enfermidade e os principais fatores de risco para os garanhões; avaliar e comparar o efeito do tratamento local de vesiculite seminal quanto aos índices de cinética e morfologia espermática, integridade de membrana plasmática, porcentagem de leucócitos e contagem de unidades formadoras de colônias (UFC) de amostras seminais frescas, refrigeradas e congeladas e o teor de óxido nítrico no plasma seminal, antes (M0), após uma semana (M1) e um mês (M2) da terapia. Os resultados obtidos permitiram inferir que a vesiculite seminal foi mais prevalente em animais adultos e idosos, a evolução da enfermidade ocorreu de forma crônica em todos os animais selecionados, a monta natural constituiu um fator predisponente para o surgimento da doença, a coloração amarelada do sêmen e a dificuldade na ejaculação são sinais indicativos de alteração da glândula e a bactéria mais prevalente envolvida na etiopatogenia da infecção foi a Pseudomonas aeruginosa. De maneira geral, o tratamento local levou a uma melhora da qualidade seminal após uma semana (M1), no sêmen a fresco, refrigerado e congelado, quanto aos índices de cinética espermática e integridade de membrana plasmática (p<0,05). No sêmen a fresco promoveu redução do volume seminal, incremento da concentração espermática, redução da porcentagem de leucócitos e de UFC/mL no M1 em relação aos demais momentos ... / Abstract: Seminal vesiculitis has great relevance in reproductive clinic due to the difficulty of treatment, high rates of recurrence, risk of female contamination with pathogenic agents, retirement of animals and low fertility rates. Local treatment has been reported as the best therapeutic alternative, although no other studies have evaluated its effects on seminal quality and longevity. The aims of this study included: to investigate what are the main bacteria involved in the disease and the risk factors for stallions; to evaluate and to compare the effect of local treatment of seminal vesiculitis on the sperm kinetic parameters, morphology and viability (plasma membrane integrity), percentage of leukocytes and counting colony forming units (CFU) of fresh, cooled and frozen semen samples and the content of nitric oxide in the seminal plasma, before (M0) and after one week (M1) and one month (M2) therapy. The results allow us to infer that the seminal vesiculitis was more prevalent in adults and aged animals, the evolution of the disease appeared chronically in all selected animals, natural breeding was a risk factor for onset of the disorder, the bege coulor of semen and ejaculatory dysfunction were signs indicative of abnormalities in the gland and the most common bacteria involved in the pathogenesis of the infection was Pseudomonas aeruginosa. In general, the local treatment produced an improvement in semen quality after a week (M1) in fresh, cooled and frozen semen on the kinetic parameters and sperm viability (p<0.05). In fresh semen promoted reduction in the volume of ejaculate, sperm concentration increased, reducing the percentage of leukocytes and CFU/mL in M1 compared to the other moments (p<0.05). In frozen semen promoted reduction of lipid peroxidation and of ROS content in M1 compared to other moments (p<0.05). The cooled semen for 24 hours at 5°C and 15°C demonstrated similar efficiency in the pre and post-treatment ... / Mestre

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Júnior / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: André Maciel Crespilho / Resumo: Os equinos e asininos pertencem à família Equidae e género Equus, por este motivo são considerados similares e tratados de forma equivalente em relação à fisiologia reprodutiva. A membrana plasmática do espermatozoide funciona como uma barreira física ao ambiente externo e a sua integridade estrutural está diretamente relacionada ao tipo e quantidade de lipídios que a compõem. Desta forma, este estudo teve como objetivos comparar perfil lipídico dos espermatozoides de jumentos e cavalos e comparar o perfil lipídico da membrana dos espermatozoides de jumentos antes e após os processos de criopreservação. No Experimento 1 comparamos o perfil lipídico da membrana espermática de jumentos e cavalos e foram identificados 101 íons lipídicos em cavalos e 105 em jumentos. Os asininos apresentaram maior abundância relativa em 18 íons. No Experimento 2 foram avaliadas as alterações do perfil lipídico da membrana espermática de jumentos durante o processo de criopreservação e observou-se perda de 14 íons lipídicos e 16 novos íons surgiram após os processos de criopreservação. De acordo com os resultados obtidos podemos concluir que a composição lipídica da membrana do espermatozoide de jumentos é diferente de cavalos e os processos de criopreservação levam a alterações na composição de fosfolipídeos da membrana plasmática de espermatozoides de jumentos / Abstract: The horses and donkeys belong to the Equidae family and genus Equus, for this reason are considered similar and treated equivalently with respect to reproductive physiology. The plasma membrane of the sperm works as a physical barrier to the external environment and its structural integrity is directly related to the type and quantity of lipids that comprise it. Thus, this study aimed to compare the lipid profile of sperm donkeys and horses and compare the lipid membrane of the donkey sperm before and after cryopreservation processes. In Experiment 1 compared the lipid profile of the donkeys and horses sperm membrane and 101 lipid ions were identified in horses and 105 donkeys in. The donkeys had higher relative abundance in 18 ions. In Experiment 2 were evaluated changes in the lipid profile of the donkeys sperm membrane during the cryopreservation process and there was loss of 14 lipid ions and 16 new lipid ions arose after the cryopreservation processes. According to the obtained results we can conclude that the lipid composition of donkey sperm membrane is different from horses and cryopreservation processes lead to changes in the phospholipid composition of the plasma membrane of sperm donkeys / Doutor

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Júnior / Banca: / Resumo: O presente estudo objetivou verificar a utilização do acetato de deslorelina indução de dupla ovulação em éguas. No experimento 1 as foram utilizados 16 ciclos de 8 éguas, que foram tratadas com 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina, partir do D8 do ciclo estral até no mínimo dois folículos atingirem 33 mm quando foi induzida a ovulação com 2500 UI de hCG. A inseminação artificial foi realizada 24 horas após a indução com 1x109 de espermatozóides viáveis e a colheita dos embriões foi realizada no oitavo dia após a primeira ovulação detectada. No experimento 2 foram utilizados 112 ciclos de 56 éguas, neste experimento o protocolo com o acetato de deslorelina foi iniciado somente quando foi detectado um folículo com diâmetro de 25 mm e pelo menos um segundo folículo com diâmetro ≥ 21 ±1 mm nesse momento foi efetuada a aplicação de 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina e os demais procedimentos foram semelhantes aos descritos no protocolo do experimento 1. Para as análises estatísticas das variáveis estudadas foram utilizados os testes "t de Student" e teste Exato de Fisher. No experimento 1 apenas duas éguas do grupo tratado com acetato de deslorelina responderam com dupla ovulação. Já no experimento 2 a porcentagem de animais que responderam com dupla ovulação foi de 82% e a recuperação embrionária por ciclo foi de 1,12 x 0,57 no grupo tratado com acetato de deslorelina e no grupo controle, respectivamente (p<0,05). O acetato de deslorelina é eficiente na indução de duplas ovulações em éguas desde que o protocolo seja iniciado com no mínimo dois folículos entre 20 e 25 mm de diâmetro nos ovários e permite uma recuperação embrionária de um embrião por lavado uterino em média / Abstract: This study aimed to verify whether deslorelin acetate could induce double ovulation in equine mares. In Experiment 1, we studied 16 estrous cycles in eight mares treated with 100 μg of deslorelin acetate or saline intramuscularly (IM) every 12 hours from D8 of the estrous cycle until at least two follicles reached 33 mm. At this time, ovulation was induced with 2500 IU of hCG. Artificial insemination was performed using 1 x 109 viable sperm 24 hours after induction, and embryos were collected on the eighth day after ovulation was first detected. In Experiment 2, we studied 112 cycles in 56 mares. In this experiment, the deslorelin acetate protocol was initiated only after a follicle with a diameter of 25 mm and at least one second follicle with a diameter ≥ 21 ± 1 mm was detected, at which time 100 mg deslorelin acetate or saline was administered IM every 12 hours. The other procedures were similar to those described in Experiment 1. The variables studied were analyzed using Student's t-test and Fisher's exact test. In the first experiment, only two mares in the group treated with deslorelin acetate responded with double ovulation. In the second experiment, 82% of animals per cycle responded with double ovulation, and the embryo recovery per cycle was 1.12 and 0.57 in the group treated with deslorelin acetate and the control group, respectively (p < 0.05). Deslorelin acetate is effective in inducing double ovulation in mares when the protocol is initiated when at least two follicles are between 20 and 25 mm in diameter. On average, it allows for the recovery of one embryo by uterine lavage / Mestre

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: O objetivo deste estudo foi verificar a influência da adição de antiinflamatórios esteróides (AIES) ao diluidor seminal na motilidade e funcionalidade espermática e a eficiência da dexametasona na imunomodulação da resposta inflamatória após a cobertura. A dexametasona foi selecionada entre quinze diferentes AIES. Foram analisadas a motilidade (CASA), a integridade da membrana plasmática e acrossomal e o potencial da membrana mitocondrial dos espermatozóides nos momentos zero, 30, 60 e 120 minutos após a diluição. A intensidade da reação inflamatória provocada pelo sêmen foi mensurada em éguas resistentes e susceptíveis à endometrite persistente pós cobertura utilizando exame ultrassonográfico e citologia exfoliativa do útero, concentração de neutrófilos e de óxido nítrico do fluído uterino e taxa de recuperação embrionária. Dentre os AIES testados a dexametasona foi a que apresentou menor efeito deletério sobre as caracteísticas de motilidade e na morfofuncionalidade espermática. Quinze éguas resistentes e 15 susceptíveis à endometrite persistente após cobertura foram submetidas ao tratamento com dexametasona sistêmica e intra uterina adicionada ao diluidor de sêmen. As éguas susceptíveis apresentaram resposta inflamatória mais intensa durante as primeiras 8 horas após a inseminação artificial (p<0,05), porém, após 24 horas as concentrações de óxido nítrico foram semelhantes entre as éguas resistentes e susceptíveis, apesar das éguas susceptíveis manterem a reação inflamatória mais intensa até esse momento (p<0,05). As taxas de recuperação embrionária foram maiores para as éguas resistentes do que para as susceptíveis (p<0,05). Os tratamentos com dexametasona não se mostraram eficazes na imunomodulação da resposta inflamatória induzida pela cobertura / Abstract: The objective of this study was to assess the influence of the addition of anti-inflammatory steroids (AIS) in the seminal extender in sperm viability and functionality, and efficiency of dexamethasone on immune modulation of inflammatory response after mating. Dexamethasone was selected from fifteen different AIS. Motility, membrane and acrosomal integrity and mitochondrial membrane potential of spermatozoa in moments 0, 30, 60 e 120 minutes after dilution were analyzed. The intensity of the inflammatory reaction caused by sperm was measured in resistant and susceptible mares using ultrasound examination and exfoliative cytology of the uterus, concentration of neutrophils and nitric oxide in uterine fluid and rate of embryo recovery. Among the AIS tested dexamethasone maintained the sperm motility parameters and did not show any deleterious effects on sperm structure and function (p>0.05). Fifteen mares resistant and 15 susceptible to post-breeding endometritis were subjected to treatment with dexamethasone systemic and intra uterine added to the semen extender. Susceptible mares showed more severe inflammatory response during the first 8 hours after artificial insemination (p<0.05), while 24 hours after mating the concentrations of nitric oxide were similar between resistant and susceptible mares, despite the fact that susceptible mares presented inflammatory reaction more intensive in this moment (p<0.05). The embryo recovery rates were higher for mares resistant compared to susceptible (p<0.05). Treatments with dexamethasone were not effective in the immunomodulation of the inflammatory response induced by mating / Mestre

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Resumo: Em eqüinos existe um grande interesse em se desenvolver e aprimorar técnicas de inseminação artificial que possibilitam a obtenção de bons índices de fertilidade utilizando um baixo número de espermatozóides. O presente trabalho teve como objetivos avaliar: 1) a viabilidade, in vitro, do sêmen congelado de garanhões após a diluição em fluido folicular pré-ovulatório de éguas; 2) a população espermática no oviduto de éguas, utilizando diferentes técnicas de inseminação; 3) a fertilidade de éguas após a utilização de diferentes técnicas de inseminação artificial, utilizando um baixo número de espermatozóides; 4) a reação inflamatória na cavidade peritoneal após as inseminações intrafoliculares e intraperitoneais; 5) averiguar o efeito da presença de espermatozóides dentro do folículo pré-ovulatório, na capacidade de fertilização do oócito. No experimento 1 foram realizadas análises laboratoriais da viabilidade espermática, de sêmen congelado de garanhões sem diluição (GI), diluído em Kenney (GII) e diluído em fluido folicular (GIII). Observou-se que porcentagem de espermatozóides com membrana plasmática íntegra não diferiu significativamente entre os grupos (p>0,05). Também não foi observado diferença estatística (p>0,05) entre os grupos na porcentagem de espermatozóides vivos com membrana acrossomal íntegra. A motilidade total foi significativamente inferior (p<0,05) no grupo em que o sêmen foi diluído em fluido folicular (GIII) apenas no primeiro momento, logo após a diluição (T0). A motilidade progressiva foi significativamente maior (p<0,05) no grupo diluído com Kenney (GII) do que nos demais grupos em T0 e três horas após (T3). A velocidade espermática ao longo de uma trajetória média (VAP) foi significativamente maior (p<0,05) em GIII do que em GI nos momentos T0, após uma (T1) e duas horas (T2) da diluição. / Abstract: The objective of the present study was to evaluated the viability, in vitro, of stallion frozen semen after dilution in mare's pre-ovulatory follicular fluid; assess sperm population in mares's oviduct using differents artificial insemination techinics; verify the fertility of of differents artificial insemination techinics in mares with low sperm number; assess if mares develop an inflamatory reaction in the peritoneal cavity after intraperitoneal and intrafollicular insemination and to verify if the presence of sperm in pre-ovulatory follicle could interfere on oocyte fertilization capacity. In experiment 1, frozen-thawed semen viability was evaluated without dilution (GI) and after dilution with Kenney or Mare's pre-ovulatory follicular fluid. The percentage of sperm with plasmatic membrane integrity was not different between the groups (p>0,05). No statistical difference (p>0,05) was observed between the groups in percentage of live sperm with intact acrosome. Total motility (MT) was significantly lower (p<0,05) in follicular fluid group (GIII) just in the first moment (T0). Progressive motility was significantly higher (p<0,05) in group diluted with Kenney (GII) than the other groups in T0 and 3 hours after (T3). Average path velocity (VAP) was significantly higher (p<0,05) in GIII than GI in moments T0, T1 and T2. Straight line velocity (VSL), curvilinear velocity (VCL) and Beat cross frequence (BCF) were significantly lower (p<0,05) in GI in moments T0, T1 and T2, when compared with GIII. No statistical difference (p>0,05) were observed in amplitud of lateral head (ALH), straightness (STR) and percentage of sperm with linear (LIN) and rapid (RAP) movement between GI and GIII in any moment. In T3 no statistical difference was observed (p>0,05) between all groups in any motility parameters analyzed. / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Coorientador: Marini Melo / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Ian Martin / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição da asolctina de soja ou da fosfatidilcolina de soja em diluente à base de gema de ovo sobre os parâmetros espermáticos e índices de fertilidade de sêmen congelado de garanhões. No Experimento I, dezenove ejaculados de três garanhões foram submetidos ao processo de criopreservação utilizando três diluentes de congelação: Botu-Crio® (BC), Botu-Crio® adicionado de asolctina de soja (BC+Ac) e Botu-Crio® adicionado de fosfatidilcolina de soja (BC+Fc), para posterior avaliação dos parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática. No Experimento II, comparou-se a taxa de fertilidade referente aos três meios de congelação por meio de inseminação artificial das éguas com "pool" de espermatozoides dos três garanhões. Não houve diferença significativa no que se refere aos parâmetros espermáticos (P<0,05) de motilidade total (69,16±9,28; 64,63±11,05; 68,47±7,92), motilidade progressiva (25,00±5,43; 23,26±5,63; 26,16±5,50), integridade de membrana plasmática (39,37±8,82; 39,95±9,52; 41,63±9,24) e índice de concepção (46,7%, 13,3%, 37,5%) entre os meios BC, BC+Ac e BC+Fc, respectivamente. Entretanto, existiu uma tendência a maior (P>0,05) taxa de fertilidade do diluente Botu-Crio® quando comparado ao meio adicionado de asolctina de soja. Diante dos resultados encontrados, conclui-se que tanto a adição da asolctina de soja quanto da fosfatidilcolina de soja ao diluente Botu-Crio® apresenta a mesma eficácia que o diluente Botu-Crio® convencional na criopreservação de sêmen equino / Abstract:The aim of this study was to evaluate the effect of addition of soybean asolectin and phosphatidylcholine in an egg yolk-based extender on sperm parameters and fertility rates of frozen stallion semen. In Experiment I, nineteen ejaculates from three stallions were submitted to cryopreservation process using three freezing extenders: Botu-Crio™ (BC), Botu-Crio™ with soybean asolectin (BC+Ac) and Botu-Crio™ with soybean phosphatidylcholine (BC+Fc), for further evaluation of kinetic parameters and sperm plasma membrane integrity. In Experiment II, the fertility rates from the three freezing extenders were compared through artificial insemination in mares using a sperm "pool" of three stallions. No significant differences were found on sperm parameters (P<0.05) of total motility (69.16±9.28; 64.63±11.05; 68.47±7.92); progressive motility (25.00±5.43; 23.26±5.63; 26.16±5.50); plasma membrane integrity (39.37±8.82; 39.95±9.52; 41.63±9.24) and fertility rates (46.7%, 13.3%, 37.5%), for the BC, BC+Ac and BC+Fc groups, respectively. However, the tendency toward higher (P>0.05) fertility rates in Botu-Crio™ (BC) freezing extender than the freezing extender containing soybean asolectin (BC + Ac). Based in these results, it is concluded that the both addition of soybean asolectin and phosphatidylcholine to Botu-Crio™ freezing extender has the same effectiveness as the conventional Botu-Crio™ used in the cryopreservation of equine semen / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Resumo: O presente estudo objetivou a colheita do sêmen de garanhões nos haras, diluição e transporte destas amostras em dois sistemas de refrigeração (Equitainerâ e Max-Semen Expressâ) para os centros especializados onde foram submetidos ao processo de congelação. No Experimento I foi utilizado 01 ejaculado de 12 garanhões de diferentes raças. Após a colheita os ejaculados foram divididos em duas alíquotas: uma submetida ao processo de congelação convencional, utilizando o meio diluidor Botu-Crioâ e outra diluída com Botu-Semenâ e armazenada em Equitainerâ durante 24h. Após a refrigeração o sêmen foi centrifugado e ressuspendido com Botu-Crioâ e submetidas ao processo de congelação. As amostras descongeladas foram analisadas pelo CASA e a integridade de membrana plasmática pelo uso de sondas fluorescentes. Os resultados do Experimento I mostraram que não houve diferença nos parâmetros avaliados (motilidade total, progressiva e integridade da membrana plasmática) entre a metodologia convencional e a congelação de sêmen após 24h de refrigeração (p>0,05). No Experimento II, foi utilizado 01 ejaculado de 11 garanhões, os quais foram diluídos e armazenados em dois sistemas de transporte (Equitainerâ e Max-Semen Expressâ) durante 24h. As amostras foram congeladas, conforme descrito no Experimento I utilizando-se a associação do glicerol com dimetilacetamida, dimetilformamida e metilformamida. Após a descongelação a análise dos parâmetros espermáticos demonstrou a superioridade do Equitainerâ em relação ao Max-Semen Expressâ (p<0,05). A metilformamida associada ao glicerol apresentou resultados superiores aos demais crioprotetores utilizados . O teste de fertilidade comparou amostras congeladas de dois garanhões (A e B) pelos métodos: convencional e pós-refrigeração em Equitainer por 24h.... (Resumo complet, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to develop a new method to freeze equine semen. Semen was collected at the stallion farm, diluted, divided into two samples and cooled at Equitainer® or Max-Semen Express®, then transported to an equipped laboratory for freezing. On Experiment I used one ejaculate from each of 11 stallions from different breeds. The ejaculates were divided into two parts: one was frozen following a regular protocol and the other was diluted with Botu-Semen® and stored at Equitainer® for 24 hours. Afterwards, cooled semen was centrifuged and ressuspended with Botu-Crio® and then frozen. After thawing motility was evaluated by CASA and by fluorescent probes for plasma membrane integrity evaluation. Based on these results of Experiment I concluded that there was no difference between total motility, progressive motility and plasma membrane integrity when comparing the two methods for freezing semen (p>0,05). At Experiment II one ejaculate from each of 11 stallions was collected, diluted and stored either an Equitainer® or in a Max-Semen Express® for 24 hours. The samples were frozen as described on Experiment I using the association of glycerol with dimethylformamide, dimethylacetamide and methylformamide. After thawing the results suggested that the Equitainer® was better than Max-Semen Express® in maintaining sperm viability (p>0,05). The association of metilformamida and glycerol was superior to the others. Fertility trials compared the two methods: conventional and cooled/frozen semen. Ten mares were inseminated in a total of 40 cycles; the mares were monitorated every day by ovarian ultrasonography. Ovulation was induced using 10mg EPE (equine pituitary extract) intravenously when a follicle of 35mm of diameter was detected. Inseminations were performed twice, before and after ovulation with 350x106 spermatozoa/mL toward the tip of the horn.... (Complete abstract, access undermentioned electronic address) / Mestre

Orientador: Cezinande de Meira / Coorientador: José Paes de Oliveira Filho / Banca: Fabiana Ferreira de Ssouza / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Paula de Carvalho Papa / Banca: Guilherme Pugliesi / Resumo: Com o objetivo de investigar os efeitos da administração de 2,5 mg de benzoato de estradiol (BE) seguido de 1500 mg de progesterona de longa ação (P4 LA) sobre a dinâmica molecular endometrial, características morfológicas do útero e concentrações plasmáticas de estrógeno e progesterona em éguas receptoras acíclicas, foram avaliados: a expressão proteica e as alterações na abundância relativa dos transcritos para os receptores de estrógeno (ER) e progesterona (PR) no endométrio por meio da RT-qPCR e imunohistoquímica; as características morfológicas do útero por ultrassonografia e palpação retal; e as concentrações plasmáticas do estrógeno e progesterona por meio de radioimunoensaio. A aplicação de 2,5 mg, 5 mg ou 10 mg de BE foram eficazes em causar edema uterino máximo 24 h após a administração. A dose de 2,5 mg de BE provocou picos de concentração de estradiol similares aos de éguas tratadas com 5 mg, 10 mg e aos de éguas cíclicas, sem elevar a concentração de estrógeno conjugado como observado com as outras doses de BE. Ainda, a concentração de P4 foi reduzida após a aplicação da P4 LA quando 10 mg de BE foram utilizados. A administração dos tratamentos hormonais alterou a abundância relativa dos transcritos para ERα, ERβ e PR de forma similar às alterações encontradas em éguas cíclicas quando o final do estro e início do diestro foram comparados. Em conclusão, o uso de 2,5 mg de BE seguido de 1500 mg de P4 LA provoca alterações similares na morfologia uterina, abundância relativa dos transcritos para ERα, ERβ e PR no endométrio, e de concentrações circulantes de estrógeno e progesterona às encontradas em éguas cíclicas / Abstract: To investigate the effects of the administration of 2.5 mg of estradiol benzoate (EB) followed by 1500 mg of long acting progesterone (LA P4) on endometrial molecular dynamics, uterine morphological characteristics, as well as estrogen and progesterone plasma concentrations in non-cyclic recipient mares, we evaluated: protein expression and changes in relative abundance of transcripts for estrogen (ER) and progesterone receptors (PR) in the endometrium by RT-qPCR and immunohistochemistry; uterine morphological characteristics by ultrasonography and rectal palpation; and estrogen and progesterone plasma concentrations by radioimmunoassay. The administration of 2.5 mg, 5 mg or 10 mg of EB were effective at promoting maximum uterine edema 24 h after their injection. The dose of 2.5 mg of EB caused similar estradiol concentration peaks to those observed in mares treated with 5 mg or10 mg of EB and to those observed in cyclic mares, which was not followed by increased concentrations of estrogen conjugate as observed for the other doses. Moreover, P4 concentration was reduced 24 h after LA P4 administration when the dose of 10 mg of EB was injected. The administration of the hormonal protocols altered the relative abundance of transcripts for ERα, ERβ and PR in non-cyclic mares as observed in cyclic ones when late estrus and early diestrus were compared. In conclusion, the use of 2.5 mg of EB followed by 1500 mg of LA P4 causes similar uterine morphology changes, relative abundance of transcripts for ERα, ERβ and PR, and estrogen and progesterone circulating concentrations to those found in cyclic mares / Doutor

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 561282 bytes, checksum: 2441e2f2e56cb1be7ad7d2579dc4e47e (MD5) Previous issue date: 2010-12-17 / The aim of the present study was to improve reproductive conditions of mares candidates as embryo recipient through hCG (human chorionic gonadotrophin) administration. Four days after ovulation (D4), recipient mares were divided in two groups: G1 control (n = 24) administration of 2 mL of physiologic solution (i.m) and G2 treatment (n = 26) administration of 2.000 IU of hCG (Chorulon®; i.m). Uterine and cervical tonus, uterine echotexture and edema, diameter of corpus luteum (CL), CL circumference and area, and diameter of the largest follicle in each ovary were evaluated in both groups on days 4, 8 and 13 (day 0 = ovulation) by transretal palpation and/or ultrassonography. Additionally, quality of transferred embryos and asynchrony between recipient and donor were also evaluated. Blood samples from recipient mares were collected on D0, D4, D8 and D13 for progesterone assay. Higher concentration of plasmatic progesterone (p < 0,05) was observed in G1 on D0 and D4 than in treated group (G2), although no significant difference was observed on D8 and D13 between groups. No difference (p > 0,05) were observed between groups for uterine and cervical tonus characteristics, uterine edema and echotexture, diameter, circumference and area of the corpus luteum. The degree of asynchrony between recipients and donors and the quality of embryos transferred to recipients did not differed (p > 0,05) between groups. The pregnancy rates were 84,6% (22/26) and 75% (18/24) for treated and control groups, respectively (p > 0,05). In conclusion, based on the conditions of the present study, treatment with hCG did not improve plasma progesterone concentration, pregnancy rate of recipient mares and did not change reproductive characteristics of recipient mares in diestrus. / Neste estudo avaliou-se a gonadotrofina coriônica humana (hCG), no intuito de melhorar as condições reprodutivas de fêmeas equinas candidatas a receptoras de embriões. No quarto dia após a ovulação (D4), as éguas receptoras foram divididas em dois grupos: G1-controle (n = 24) administração intramuscular de 2 mL de solução fisiológica e G2 (n = 26) administração intramuscular de 2.000 UI de hCG (Chorulon®). Nos dois grupos foram avaliadas, no D4, D8 e D13, por palpação retal e&#8260;ou ultras-sonografia, as seguintes características reprodutivas: tônus uterino, tônus cervical, edema uterino; diâmetro do corpo lúteo (CL), perímetro do CL, área do CL e diâmetro do maior folículo em cada ovário. Além disso, foram avaliados a qualidade dos embriões transferidos e o grau de assincronia entre receptora e doadora. Amostras de sangue das receptoras foram coletadas nos dias D0, D4, D8 e D13, para dosagem de progesterona. Constatou-se maior concentração de progesterona plasmática (p < 0,05) no grupo-controle (G1) nos dias D0 e D4, em relação ao tratado (G2), porém nos dias D8 e D13 não houve diferenças significativas entre os grupos. Não foram encontradas diferenças entre os grupos para as características de tônus uterino e cervical, edema e ecotextura uterina, diâmetro, perímetro e área do corpo lúteo (p > 0,05). O grau de assincronia entre doadoras e receptoras não diferiu (p > 0,05) entre os tratamentos e os embriões que as receptoras receberam tiveram qualidade semelhante (p > 0,05). A porcentagem de prenhez foi de 84,6% (22/26) para o grupo tratado e de 75% (18/24) para o grupo-controle, não tendo sido observadas diferenças (p > 0,05). Nas condições deste estudo, conclui-se que a hCG não induziu ao aumento na concentração plasmática de progesterona, não elevou a taxa de prenhez dos animais tratados e ainda não induziu a modificações nas características reprodutivas de receptoras equinas em diestro.