Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-31Bitstream added on 2014-06-13T20:19:21Z : No. of bitstreams: 1 araujo_ghm_me_botfmvz.pdf: 252944 bytes, checksum: 8bfe64297ba80536cb087534254b2f9b (MD5) / Estudos sobre a luteólise os fatores que a influenciam foram conduzidos em diferentes espécies de interesse econômico, recentemente, verificou-se a influência do LH sobre a luteólise ocorrida nas espécies suína e bovina, mostrando sua função nestas espécies. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de se avaliar o efeito do LH sobre as concentrações plasmáticas de progesterona durante a luteólise induzida com dinoprost, usou diferentes tratamentos superovulatórios como modelos que simularam ambientes com concentrações plasmáticas de LH distintas. Sete éguas foram divididas e utilizadas uma vez em cada um dos seguintes 4 grupos: Grupo 01 (n=6): controle que recebeu a aplicação de 5 mg de dinoprost, IM no 7° dia após a ovulação (dia 0); Grupo 02 (n=7): recebeu aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e EPE doses constantes (25mg/IM/b.i.d.) do dia 0 até o dia 3; Grupo 03 (n=7): recebeu aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e EPE doses decrescentes (40 mg/IM. no dia 0, 35 mg/IM/b.i.d. no dia 1, 30 mg/IM/b.i.d no dia 2; e, no dia 3, 25 mg/IM/b.i.d); Grupo 04 (n=5): FSH purificado eqüino (eFSH), aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e eFSH (12,5 mg/IM/b.i.d.) até o dia 3. As coletas de sangue foram realizadas dia -1 ao dia 3 dos tratamentos para as dosagens hormonais de progesterona (P4) e LH por radioimunoensaio. No dia -1 não foi observada qualquer diferença entre os grupos, indicando iguais condições dos grupos no momento do início dos tratamentos. A luteólise (P4<1ng/mL) foi alcançada em todos os grupos em até 48 horas (dia 2) após o início dos tratamentos. Sendo observada diferenças nos valores plasmáticos de LH desde da primeira aplicação do EPE ou eFSH. / Researches has been conduced about luteolysis and other factors that affect in some away the lifespan of the corpus luteum in different species, recently, has been shown the effect of the LH on the luteolysis in swine and bovine specie, demonstrating its function in this species. The aim of the present study was to evaluate the effect of the LH concentrations on the progesterone levels during the induced luteolysis with dinoprost, using as a model for different LH concentrations environments the superovulatory treatment with EPE and purified equine FSH. Seven mares were divided and utilized once in all 4 groups: Group 01 (n=6): control, 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0); Group 02 (n=7): 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and EPE in constant doses till day 3; Group 03 (n=7): 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and EPE in decreased doses (40 mg/IM in day 0, 35 mg/IM/b.i.d. in day 1, 30 mg/IM/b.i.d. in day 2, and, 25 mg/IM/b.i.d. in day 3); Group 04 (n=5): equine purified FSH, 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and 12.5 mg/IM/b.i.d. of eFSH until day 3. The blood samples have been taken from the day -1 to day 3 daily with the objective of evaluated LH and progesterone levels. In the day -1, no differences were observed on hormones dosages among the groups, indicating the same conditions for all groups before the treatments. The luteolysis (P4<1ng/mL) was reached in all groups until 48 hours (day 2) after the beginning of the treatments. Differences were found among the plasmatic values of LH since the first treatment of EPE or eFSH. Differences were observed in P4 levels after day 2 with 0.61 ± 0.10a ng/mL in Group 01; 0.28 ± 0.09b ng/mL in Group 02; 0.25 ± 0.23b ng/mL in Group 03; and, 0.45 ± 0.42ab ng/mL in Group 04...(Complete abstract click electronic access below)

Resumo: Este trabalho teve como objetivo avaliar a maturação nuclear e citoplasmática em duas condições experimentais. No experimento I (Exp I) comparou-se a utilização de três diferentes meios de cultivo TCM-199, SOFaa e HTF:BME na maturação in vitro de ovócitos eqüinos. No experimento II (Exp II) avaliou-se a habilidade dos ovócitos eqüinos maturados em meio HTF:BME suplementado com FSH homólogo e heterólogo e hormônio de crescimento eqüino (eGH), de serem fertilizados e passar pelo desenvolvimento embrionário e fetal após a transferência de ovócitos. Os ovários eqüinos foram obtidos de abatedouro e os ovócitos recuperados pela técnica de fatiamento. Em cada experimento foram realizadas cinco procedimentos com uma média de 30 ovócitos por grupo, estes foram maturados por 36 a 40 horas à 38,5ºC em atmosfera de 5% de CO2 em ar. A avaliação da maturação nuclear nos dois experimentos foi realizada em ovócitos desnudados, transferidos para gotas colocadas sobre lâmina histológica contendo 10μl Hoechst 33342 e examinados em microscópio invertido com luz fluorescente. A avaliação da morfologia citoplasmática foi realizada através de Microscopia Eletrônica de Transmissão. A análise estatística foi realizada através de ANOVA Para a transferência de ovócitos foram utilizadas receptoras não cíclicas, tratadas com Cipionato de Estradiol (ECP) por três dias (5, 3 e 2ml/dia IM). As receptoras foram inseminadas 12 horas pré e pós cirurgia, com 2x109 espermatozóides viáveis por inseminação. Foi realizada a transferência de 12,8 ovócitos maturados em média, nas condições do Exp II para cada égua, que após a cirurgia recebeu 200 mg/dia de progesterona... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: This study was designed to evaluate the nuclear and citoplasmatic oocyte maturation in two situations. Experiment I (ExpI) aimed to compare the use of TCM-199, SOFaa and HTF:BME media to mature equine oocytes in vitro. Experiment II (ExpII) evaluate the ability of equine oocytes matured in HTF:BME media containing homologous and heterologous FSH, associated with equine growth hormone (eGH), to undergo maturation and development after oocyte transfer. Equine ovaries were obtained in a slaughterhouse and the oocytes recovered after slicing the ovaries. For each experiment, five replicates were performed. After selection an average of 30 oocytes per group were matured during 36 to 40 hours at 38.5oC In an atmosphere with 5% CO2 in air. Nuclear maturation in both experiments was evaluated staining the oocytes with 10μl Hoechst 33342. Citoplasmatic maturation was analyzed in five oocytes per group using Transmission Electron Microscopy. All data was analyzed using ANOVA. For oocyte transfer, non-cycling recipient mares were treated with Estradiol Cipionate (ECP) during 3 days (5, 3 and 2ml/day IM). After transfer of an average of 12,8 oocytes matured in the Exp II conditions, each recipient mare was inseminated 12 hours pre- and post ovulation with 2x109 live sperm cells. After the surgery all recipient mares received 200 mg/day of progesterone... (Complete abstract, click electronic address below). / Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Coorientador: Marco Antonio Alvarenga / Mestre

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: Estudos sobre a luteólise os fatores que a influenciam foram conduzidos em diferentes espécies de interesse econômico, recentemente, verificou-se a influência do LH sobre a luteólise ocorrida nas espécies suína e bovina, mostrando sua função nestas espécies. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de se avaliar o efeito do LH sobre as concentrações plasmáticas de progesterona durante a luteólise induzida com dinoprost, usou diferentes tratamentos superovulatórios como modelos que simularam ambientes com concentrações plasmáticas de LH distintas. Sete éguas foram divididas e utilizadas uma vez em cada um dos seguintes 4 grupos: Grupo 01 (n=6): controle que recebeu a aplicação de 5 mg de dinoprost, IM no 7° dia após a ovulação (dia 0); Grupo 02 (n=7): recebeu aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e EPE doses constantes (25mg/IM/b.i.d.) do dia 0 até o dia 3; Grupo 03 (n=7): recebeu aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e EPE doses decrescentes (40 mg/IM. no dia 0, 35 mg/IM/b.i.d. no dia 1, 30 mg/IM/b.i.d no dia 2; e, no dia 3, 25 mg/IM/b.i.d); Grupo 04 (n=5): FSH purificado eqüino (eFSH), aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e eFSH (12,5 mg/IM/b.i.d.) até o dia 3. As coletas de sangue foram realizadas dia -1 ao dia 3 dos tratamentos para as dosagens hormonais de progesterona (P4) e LH por radioimunoensaio. No dia -1 não foi observada qualquer diferença entre os grupos, indicando iguais condições dos grupos no momento do início dos tratamentos. A luteólise (P4<1ng/mL) foi alcançada em todos os grupos em até 48 horas (dia 2) após o início dos tratamentos. Sendo observada diferenças nos valores plasmáticos de LH desde da primeira aplicação do EPE ou eFSH. / Abstract: Researches has been conduced about luteolysis and other factors that affect in some away the lifespan of the corpus luteum in different species, recently, has been shown the effect of the LH on the luteolysis in swine and bovine specie, demonstrating its function in this species. The aim of the present study was to evaluate the effect of the LH concentrations on the progesterone levels during the induced luteolysis with dinoprost, using as a model for different LH concentrations environments the superovulatory treatment with EPE and purified equine FSH. Seven mares were divided and utilized once in all 4 groups: Group 01 (n=6): control, 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0); Group 02 (n=7): 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and EPE in constant doses till day 3; Group 03 (n=7): 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and EPE in decreased doses (40 mg/IM in day 0, 35 mg/IM/b.i.d. in day 1, 30 mg/IM/b.i.d. in day 2, and, 25 mg/IM/b.i.d. in day 3); Group 04 (n=5): equine purified FSH, 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and 12.5 mg/IM/b.i.d. of eFSH until day 3. The blood samples have been taken from the day -1 to day 3 daily with the objective of evaluated LH and progesterone levels. In the day -1, no differences were observed on hormones dosages among the groups, indicating the same conditions for all groups before the treatments. The luteolysis (P4<1ng/mL) was reached in all groups until 48 hours (day 2) after the beginning of the treatments. Differences were found among the plasmatic values of LH since the first treatment of EPE or eFSH. Differences were observed in P4 levels after day 2 with 0.61 ± 0.10a ng/mL in Group 01; 0.28 ± 0.09b ng/mL in Group 02; 0.25 ± 0.23b ng/mL in Group 03; and, 0.45 ± 0.42ab ng/mL in Group 04...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Abstract: The present work aimed to investigated several kinds of amides to freeze equine semen. Two ejaculates from 20 stallions of different breeds were used. All ejaculates with initial motility greater than 60 % were split and frozen in 0.5 ml French straws in a milk base extender (INRA 82) containing the different studied cryoprotectants. The post-thaw percentage of motility and other motility parameters wer evaluated using CASA .To evaluate cell viability fluorescent probes were used. Stains used were Carboxyfluorescein and propidium iodine (PI). The first experiment was designed to investigated the protective effect of 3 amides ; Dymethyl acetamide at 3 concentrations - 1, 3 and 5 % v/v; dymethyl formamide at 5% and methyl formamide at 5%. Differences on motion parameters between cryoprotectant treatments were determined by analysis of variance using SAS system. Utilization of amides significantly improved most of parameters evaluated when compared with Glycerol. Progressive motility evaluated by optical microscopy was higher (p< 0,0001) for semen that was frozen with MF 5% and DF5%. The progressive motility evaluated by CASA was higher for the MF 5 % and DA 3% groups. The electron microscopy evaluation showed that DA 5% and MF 5 % were superior in the ability to preserved the acrossomal integrity. The acrossomal status evaluated by fluorescence showed that the preservation was higher on the groups DA 5%, MF 5 % and DF5% (p<0.0001). On the second experiment the cryoprotective effect of two associations of glycerol (Gly) and dimethylformamide (DF) were tested ( Gly 3.5% + DF 1.5 % and DF 3.5% + Gly 1.5%)... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Frederico Ozanan Papa / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Rodrigo da Costa Mattos / Abstract: The sperm osmotic stress induced by the cryprotectors during cryopreservation is an important factor involved on sperm viability. The present study aimed to study the viability and fertility after induction of osmotic stress using different amides and glycerol. Experment 1 aimmed to study the semen freezability of 27 stallions with the utilization of the cryoprotectors dimetilacetamida (DA), metilformamida (MF), dimetilformamida (DF) e glicerol (GL), the amidas based cryoprotectors were superior to glycerol in the ability to preserve pos thaw motility and membrane integrity (p<0,001). From these 27 stallions 9 were selected and classified with acceptable freezability and 12 as non acceptable freezabilty based on post thaw quality after frozen with GL. No differences were observe on total motility (TM), progressive motility (PM) and membrane integrity (MI) for the acceptable and non acceptable freezabilty groups. Four stallions with higher freezabilty were selected from the acceptable group and no differences between amides and glicerol were observed (p>0.05). From the non acceptable group 6 stallions with lower freezability were sellected, and amides were superior to GL for all post thaw evaluated parameters. (p<0,0001). On Experiment II, the same 10 stallions were used to evaluated the effect of the osmotic stress on the viability of fresh semen. The semen was incubated for 10 minuts in a 1 Molar solution of each studied cryoprotector. A significant decrease on total motility were observed after the incubation on the hypertonic solution (12,93l15,22d; 61,53l16,17b; 44,67l22,68c; 41,73l24,28c, DA, MF, DF e GL respective) when compared with the control group (81,4l9,15a). The lower motility was observed on the DA treatment. Also a higher decrease in the membrane integrity was observed in the solution of DA, MF, DF e GL (48,47l9,49bc, 49,20l8,47bc, 53,07l12,04b, 42,33l12,15c respectively) compared with control (61,87l13,62a). / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-07T22:34:07Z No. of bitstreams: 1 Juliana Lopes Almeida.pdf: 420266 bytes, checksum: 4df60e81a8ee2a3121c95ea91bbe519d (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-06-23T02:57:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Juliana Lopes Almeida.pdf: 420266 bytes, checksum: 4df60e81a8ee2a3121c95ea91bbe519d (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-23T02:57:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Lopes Almeida.pdf: 420266 bytes, checksum: 4df60e81a8ee2a3121c95ea91bbe519d (MD5) Previous issue date: 2006-04 / A baixa fertilidade é um dos fatores que restringe o uso da criopreservação de sêmen na espécie eqüina. Durante o congelamento, os espermatozóides sofrem vários danos, tais como alterações na membrana, capacitação prematura, alterações no DNA e estresse oxidativo. Os espermatozóides são suscetíveis ao estresse oxidativo devido, principalmente, à grande quantidade de ácidos graxos poliinsaturados presentes nas suas membranas e pela baixa concentração de enzimas antioxidantes no seu citoplasma. A reduzida fertilidade, muitas vezes, tem sido correlacionada com a baixa capacidade antioxidante do sêmen e tal fato pode se dar devido à retirada do plasma seminal durante o processo de criopreservação. Estudos recentes têm demonstrado efeito benéfico do plasma seminal no armazenamento dos espermatozóides eqüinos submetidos ao resfriamento ou congelamento. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de diferentes concentrações de plasma seminal na proteção contra o estresse oxidativo e danos na viabilidade da célula espermática. Foram utilizados 4 garanhões, sendo congeladas 4 partidas de cada animal. Após a colheita o plasma seminal foi retirado e os espermatozóides ressuspendidos em diluente contendo diferentes concentrações de plasma 0% (T1), 5% (T2), 25% (T3) e 50% (T4). As análises realizadas pós-descongelação foram motilidade, vigor, morfologia, integridade de membrana, integridade de acrossoma , integridade de DNA, peroxidação lipídica e proteína carbonilada. A adição de plasma seminal não afetou (p>0,05) a morfologia espermática e a integridade de DNA. Espermatozóides congelados com 5% de plasma seminal (T2) foram semelhantes ao controle (T1) em todas as variáveis estudadas (p>0,05), com exceção da peroxidação lipídica, que foi maior (p<0,05) no tratamento sem plasma (T1). O T4 apresentou menor (p<0,05) motilidade, vigor, percentagem de células com membrana íntegra e acrossoma intacto. Efeitos do plasma seminal na proteção contra oxidação de proteínas não foram observados(p>0,05). Em conclusão, o plasma seminal possui efeito antioxidante durante criopreservação, entretanto esse efeito não protege a viabilidade das células espermáticas de outros danos decorrentes da criopreservação, podendo , inclusive acentuar esses danos quando utilizado em concentrações de 25% ou mais. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / One of the major limiting factors of equine frozen semen is the low fertility obtained. During freezing process spermatozoa undergoes a series of damages such as changes in membrane components, premature capacitation, chromatin damages and oxidative stress. Sperm cells are very susceptible to oxidative stress due to high concentration of polyunsaturated fatty acids in the membrane and low concentration of antioxidant enzymes in their cytoplasm. It has been shown that there is a correlation between low antioxidant capacity of semen and fertility of the animal and it may be due to seminal plasma removal during cooling or freezing process. Recent studies have shown a beneficial effect of seminal plasma in the storage of equine spermatozoa either by cooling or by cryopreservation. The objective of the present study was to evaluate the effect of different concentrations of seminal plasma in the protection against oxidative stress during cryopresenvation of equine spermatozoa, and to verify that effect in cell viability. In this experiment, four stallions were used and four ejaculates were obtained from each animal. After collection, seminal plasma was removed and spermatozoa ressuspended in extender with seminal plasma in different concentrations 0% (T1), 5% (T2), 25% (T3) e 50% (T4). Motility, vigor, morphology, membrane, acrossome and DNA integrity, lipid peroxidation and protein oxidation were analyzed after freezing and thawing. Seminal plasma did not affect (p>0,05) sperm morphology and DNA integrity. Frozen spermatozoa with 5% (T2) of seminal plasma were similar (p>0,05) to control (T1) in all variables studied, except in lipid peroxidation analysis, in which the results were higher (p<0,05) in control in comparison with the other treatments. T4 presented lower (p<0,05) motility, vigor, membrane and acrossome intact cells percentage. Effect of seminal plasma protection against protein oxidation was not observed (p>0,05). In conclusion, seminal plasma presented antioxidant effect during cryopreservation, however, this effect does not protect the spermatozoa viability from other cryopreservation damages and it may even exacerbate theses damages in concentrations of 25% or higher.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T20:38:40Z : No. of bitstreams: 1 dores_cb_me_botfmvz.pdf: 3161670 bytes, checksum: a11ca3c4c2058df1d9e382287df9e6b5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A característica inerente às células-tronco embrionárias de se manterem estáveis durante longos períodos de cultivo possibilita que um grande número de células indiferenciadas sejam utilizadas em procedimentos terapêuticos ou realização de pesquisas. Aproximadamente 97 doenças genéticas equinas têm alta homologia com defeitos genéticos de humanos. O estudo de CTE de animais ungulados é útil no estudo de biofarmacos, engenharia genética e elucidação da embriogênese. Trabalhos sobre o isolamento, cultivo e caracterização do perfil genético de CTE equinas são escassos na literatura. No presente estudo, três diferentes métodos do isolamento da MCI foram testados em blastocistos equinos, avaliando o potencial de derivação de linhagens e a expressão do gene Oct-4: 1) separação mecânica (n=26), 2) imunocirurgia (n=6), 3) aspiração por micromanipulação (n=4). Todas as MCI foram cultivadas nas mesmas condições: monocamada de fibroblastos inativadas, meio DMEM/F12 suplementado com LIF, soro fetal bovino, aminoácidos não essenciais, sódio piruvato, l-glutamina e 2-mercaptoetanol. A eficácia do isolamento da MCI e o estabelecimento de linhagens foram avaliados quanto à adesão, aspectos morfológicos dos agregados celulares e velocidade de crescimento. As linhagens estabelecidas foram caracterizadas pela expressão do gene Oct-4 e Nanog. Nenhuma das MCI isoladas do grupo 3 aderiram à placa, e todas morreram entre 48 e 72 horas de cultivo. No grupo 1, uma MCI apresentou crescimento satisfatório apenas durante o cultivo primário. Colônias foram estabelecidas no grupo 2 e, após a segunda passagem, as células foram avaliadas e congeladas. Utilizou-se a RT-PCR para a detecção da expressão dos genes Oct-4 e Nanog em amostras de CTE, anel coriônico e fibroblastos fetais equinos. Todas as amostras expressaram o gene Oct-4, mostrando que o gene é expresso... / The ability of Embryonic Stem cells to be maintained during extended culture periods would support the existence of large pools of undifferentiated stem cells for therapeutic and research applications. Approximately 97 equine genetic diseases have high homology to human genetic defects. ES cell lines from domestic ungulates would also be useful for disease resistance, for biopharming, and in genetic engineering. Studies of the isolation of equine embryonic stem cells and their genetic expression are quite limited. In the present study three different experimental approaches were used for ICM isolation from day 8 blastocysts and further ES cell line derivation and OCT-4 and Nanog expression: 1. Mechanical Process (26), 2. Immunosurgery (6) and 3. Aspiration of the ICM (4). All the ICM were maintained at the same conditions: under inactivated murine fibroblast feeder support in medium supplemented with Leukemia Inhibitor Factor, Fetal Calf Serum, Non essential amino acids, Sodium Pyruvate, L-Glutamine and 2-Mercaptoethanol changed every 24 hours. The colonies were evaluated by attachment, size and shape, type of cells and rate of growth. In addition, established ES cell colonies were characterized by OCT-4 expression. Only ICM outgrowths and colonies containing circular, small, and high ratio nucleo:cytoplasm cells were considered and passaged. None ICM from group 3 attached and all died after 48 to 72 hours after isolation. In group 1, one ICM had successful development but died after the first passage. Colonies were established from group 2. And after proliferation for 2 passages the cells were analyzed and frozen. RT-PCR was performed to evaluate the OCT-4 expression from ES cells, fetal fibroblast and day 32-34 chorionic girdle samples. All samples were positive for OCT-4 expression, showing that the OCT-4 is expressed in both ICM cells and the trophectoderm derived cells... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-04Bitstream added on 2014-06-13T20:59:35Z : No. of bitstreams: 1 blanco_idp_me_botfmvz.pdf: 957805 bytes, checksum: d8fe74b65ba19ca53f1ec69c651d4a0a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Em éguas, o aprimoramento e a aplicação de técnicas como a ICSI, TO e transferência nuclear é restrita devido à dificuldade de obtenção de oócitos in vivo, atribuída a particularidades dos folículos ovarianos da espécie. Em folículos pré-ovulatórios, a expansão do cumulus que ocorre com a progressão da maturação folicular e deposição de ácido hialurônico aumenta os índices de recuperação de oócitos por folículo, enquanto o tratamento superovulatório, embora não seja eficiente em aumentar os índices de recuperação por folículo, melhora os índices de recuperação por égua. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da administração de hCG na expansão das células da granulosa e do cumulus e no índice de recuperação de oócitos a partir de folículos imaturos de éguas superovuladas. Para isso 10 éguas foram submetidas à OPU após três diferentes tratamentos hormonais (G1: EPE, G2: EPE/hCG e G3:controle). Cada égua foi submetida aos três tratamentos, tendo sido alternados um ciclo onde era permitido que houvesse ovulação, sem interferência, e um ciclo com OPU. No ciclo onde devia ocorrer aspiração, as éguas recebiam aplicações de prostaglandina no sétimo e oitavo dia após a ovulação. Para os grupos 1 e 2, iniciava-se o tratamento com EPE no D7. Quando a maioria dos folículos atingia entre 22 e 27 mm, somente o grupo 1 recebia hCG, a EPE era suspensa e efetuava-se OPU 24 horas depois para ambos os grupos. Para o grupo controle, após a aplicação de prostaglandina a OPU era efetuada 24 horas após o folículo dominante atingir 27-30 mm. Em todos os grupos foram aspirados folículos entre 10 e 35 mm. Não houve diferença entre os 3 grupos quanto aos índices de recuperação de oócitos por folículo, com médias de 15% a 16,7%. Entretanto, a hCG foi capaz de induzir uma expansão e luteinização precoce das células foliculares. / In mares, the use of artificial reproductive techniques (ART) such as intracitoplasmatic sperm injection (ICSI), oocyte transfer (OT), and cloning is limited by the low availability of oocytes obtained either in vitro or in vivo. The low recovery rate of oocytes from immature follicles seems to be linked with anatomical particularities of the follicular wall. In pre-ovulatory follicles (>35mm in diameter), final oocyte maturation is accompanied by the expansion of the cumulus, which releases the oocyte from the follicular wall resulting in increased recovery rates after follicular aspiration. The number of oocytes recovered in each OPU (Ovum Pick Up) section should be higher with superovulation. However, although the total number of oocytes recovered by each individual mare is increased, the recovery rate per follicle is still low. Treatment with hCG modifies the intra-follicular environment by inducing precocious expansion of the granulosa cells, leading to a higher recovery rate during OPU of pre-ovulatory follicles. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of hCG treatment on the recovery rate of oocytes obtained from immature follicles in mares superovulated with Equine Pituitary Extract (EPE). Ten mares were rotated in three different treatments: G1 – superovulated with EPE; G2 – Superovulated with EPE and treated with hCG, and G3 – Control. For all treatments, when the biggest follicle reached 27 – 30 mm, all follicles bigger than 10 mm were aspirated. Each OPU cycle was alternated with a rest cycle when a spontaneous ovulation occurred. Although treatment with hCG increased the number of follicles presenting expanded granulosa and high intra-follicular progesterone concentration, no statistically significant differences were observed between groups regarding oocyte recovery.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:58:56Z : No. of bitstreams: 1 rochafilho_an_me_botfmvz.pdf: 542814 bytes, checksum: 0888c83f7ead4d23bbd7aefbda870dd1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos de doses baixas de extrato de pituitária (EPE) ou FSH purificado eqüino (eFSH) no crescimento folicular, taxa de ovulação e de recuperação embrionária em éguas. O experimento foi conduzido de outubro a dezembro de 2004 com a utilização de 27 éguas doadoras e 28 receptoras de embriões da raça Mangalarga Marchador. Após uma colheita de embrião no dia 8 pós-ovulação, as éguas receberam uma injeção de luteolítico e foram alocadas em um de dois grupos experimentais: EPE (n=13) ou eFSH (n=14). Para todas as éguas estudaram-se dois intervalos entre uma colheita de embrião e a ovulação subseqüente, sendo o primeiro o ciclo controle (sem tratamento) e o segundo o ciclo tratado. Em ambos os ciclos ultra-sonografia transretal do útero e dos ovários foi realizada diariamente para acompanhar o desenvolvimento dos dois maiores folículos. Durante o estro as éguas foram inseminadas a cada 48 h com sêmen a fresco do mesmo garanhão e receberam hCG (2.500 UI/IV) mediante a detecção de pelo menos um folículo com 35 a 40 mm de diâmetro. Os tratamentos consistiram em administração de EPE (4 mg/IM/s.i.d.; Grupo EPE) ou eFSH (5 mg/IM/s.i.d.; Grupo eFSH) do dia 8 (dia 0 = ovulação) até o dia anterior à indução das ovulações com hCG. As colheitas de embrião foram realizadas no oitavo dia pós-ovulação e sempre seguidas da administração de luteolítico. O percentual de éguas com mais de uma ovulação foi comparado pelo teste de Fischer e o número médio de ovulações e embriões, bem como os diâmetros foliculares, pelo teste t pareado entre ciclos dentro do mesmo grupo ou pelo teste t não pareado entre grupos diferentes. Uma probabilidade de P<0,05 indica que a diferença foi significativa e uma probabilidade de P=0,05 a P<0,1 indica que a diferença se aproximou da significância estatística... / The present study aimed to evaluate the effects of low doses of equine pituitary extract (EPE) or purified equine FSH (eFSH) on follicular growth, ovulation rate and embryo recovery rate in mares. The experiment was conducted from October to December 2004 using 27 donors and 28 recipient mares belonging to the Mangalarga Marchador breed. After an embryo collection attempt on day 8 postovulation, all mares received an injection of luteolytic and were assigned to one of two experimental groups: EPE (n=13) or eFSH (n=14). For all mares two intervals between an embryo collection attempt and the subsequent ovulation were studied. The first served as a control cycle and the second as the treated cycle. In both cycles transrectal ultrasonography of the uterus and ovaries was performed daily to keep track of the two largest follicles. During estrus mares were inseminated every 48 h with fresh semen from a single stallion and received an injection of hCG (2,500 IU/IV) upon detection of at least one follicle of 35 to 40 mm in diameter. The treatments consisted of administration of EPE (4 mg/IM/s.i.d.; Group EPE) or eFSH (5 mg/IM/s.i.d.; Group eFSH) from day 8 (day 0 = ovulation) until the day before the induction of ovulation with hCG. The embryo collections were performed on day 8 post-ovulation and were always followed by administration of luteolytic. The percentage of mares with more than one ovulation was compared by means of Fischer's test and the mean number of ovulations and embryos, as well as follicular diameters, by paired Student's t test between cycles within the same group and by unpaired Student's t test between different groups. A probability of P<0.05 indicates that the difference was significant and a probability...

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Denise Pereira Leme / Resumo: O presente estudo objetivou comparar diferentes curvas de congelação utilizando-se uma máquina com curvas programadas (TK3000®) com congelação em vapor de nitrogênio liquido, utilizando sêmen de garanhões de alta e baixa congelabilidade. Comparou-se a eficácia do período de estabilização do sêmen em diferentes sistemas de transporte refrigerado (Botutainer® e Equitainer®) em relação à estabilização feita em refrigerador Minitüb® previamente à congelação. No experimento I e II foram utilizados 4 garanhões com sêmen de alta congelabilidade. As amostras foram refrigeradas durante 20 minutos previamente à congelação em refrigerador Minitüb® (GM), Botutainer® (GB) e Equitainer® (GE). Não houve diferença entre os grupos quanto a motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP): GM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) demonstrando que os dispositivos podem ser utilizados como uma alternativa aos refrigeradores. Os valores de integridade de membrana plasmática (IMP%) foram GM(49,43a); GB(48,70a); GE(44,90b). No experimento II foram utilizadas 3 curvas programadas na TK3000® (C1, C2, C3) e a metodologia em caixa de isopor (GC). As comparações foram realizadas em relação ao GC e não apresentaram diferença significativa. Valores em porcentagem de MT, MP e IMP: GCxC1 (70 x 67,5; 35,7 x 32; 48,3 x 46); GCxC2 (63,3 x 67,66; 33,3 x 34,8; 45,4 x 48,3); GCxC3 (63,2 x 65; 32,2 x 32,4; 48,09 x 49,3). No teste de fertilidade, as inseminações foram realizadas com amostras congeladas com C2 e GC apresentando índices de prenhez de 65 e 60% respectivamente, sem diferença significativa. A TK3000® foi tão eficaz quanto à metodologia de congelação em caixa de isopor em relação à congelabilidade e fertilidade. Todas as curvas testadas foram eficientes na manutenção da viabilidade...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This present study compared freezing ratios in a programmable freezer (TK3000) performed by usual methodology, using good freezers and poor freezers stallions. The semen stabilization period efficiency was compared in cooled semen transport systems (Botutainer® e Equitainer®) in relation with Minitüb® fridge before the cryopreservation. Four good freezers stallions was used in experiments I and II. Samples were cooled during 20 minutes before the cryopreservation in a Minitüb® fridge (GM), Botutainer® (GB) and Equitainer® (GE). There was not difference between groups in relation with total motility (TM) and progressive motility (PM): CM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) showing that transport systems can be used as an alternative instead of fridges. Plasma membrane integrity (MPI%) values were CM (49,43a); GB (48,70a); GE (44,90b). Three frozen rations were used in experiment II in the TK3000® (C1, C2, C3) and the isothermic box (CG). Results from each freezing ratio were compared to the control group and no difference was observed. Percentage values from TM, PM and MPI were the following: CGxC1(70x67,5; 35,7x32; 48,3x46); CGxC2 (63,3x67,66; 33,3x34,8; 45,4x48,3); CGxC3 (63,2x65; 32,2x32,4; 48,09x49,3). In the fertility test, artificial inseminations were performed with C2 and GC frozen samples showing pregnancy rates of 65 and 60%, respectively, without significant difference. The TK3000® was as efficient as the isothermic box frozen methodology in relation to freezability and fertility. All freezing ratios were efficient in semen viability maintenance. Ten Mangalarga Marchador breed stallions were used in the experiment III. The samples were shared and frozen simultaneously in two programmable freezers with different ratios (G2 e G3) and in an isothermic box (CG). For the statistical analisys, semen ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre