Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: José Antônio Dell'Aqua Junior / Banca: Márcio Teoro do Carmo / Resumo: Métodos de processamento espermático são rotineiramente utilizados para otimização do sêmen de garanhões. As biotecnologias aplicadas a reprodução permitem que animais geneticamente superiores disseminem suas características. Apesar disso, mesmo em garanhões clinicamente sadios, o sêmen criopreservado possui taxas de fertilidade inferiores quando comparado ao sêmen fresco, em decorrência do estresse químico e físico gerados pela preservação através do frio. Tal, condição pode ser intensificada em animais que apresentam alterações no trato reprodutivo que comprometam a qualidade seminal, como por exemplo, a presença de sangue no ejaculado, denominado hemospermia. Esta afecção geralmente é observada em decorrência de lesões na uretra, processo uretral, pênis e vesícula seminal. O efeito dos componentes sanguíneos sobre a qualidade do sêmen ainda não está bem estabelecido. A manipulação do sêmen por meio da centrifugação com gradientes de densidade além de proporcionar a seleção das células espermáticas, possivelmente permite a separação das hemácias do ejaculado em casos de hemospermia. Em virtude da escassez de informações sobre a viabilidade do sêmen na presença do sangue, visto que os ejaculados com quadro de hemospermia são descartados e a possibilidade de separar as hemácias do ejaculado apresentam dificuldades no aproveitamento do sêmen, mais estudos são necessários acerca do assunto para minimizar as dúvidas da utilização ou não do ejaculado. / Abstract: Sperm processing methods are routinely used for stall optimization of stallions. Biotechnology applied to reproduction allows genetically superior in animals to be better harvested, to disseminate their characteristics through generations. Despite this, even in clinically healthy stallions, cryopreserved semen has lower fertility rates when compared to fresh semen, due to the stress generated by cryopreservation. Such a condition can be intensified in animals that present pathologies in the reproductive tract that compromise seminal quality, such as the presence of blood in the ejaculate, called hemospermia. This condition is usually seen as a result of injuries to the urethra, urethral process or penis. It is unknown what amount of blood in an ejaculate leads to subfertility. The manipulation of semen by centrifugation with density gradients in addition to providing the selection of the spermatic cells possibly allows the separation of the red blood cells from the ejaculate in cases of hemospermia. Due to the scarcity of information on the viability of semen in the presence of blood and the possibility of separating red blood cells from ejaculate more studies are needed on the subject. / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Coorientador: Paula Ripamonte / Banca: Frederico Ozanan Papa / Banca: Cezinande Meira / Banca: Márcio Teoro do Carmo / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Resumo: As alterações observadas nos folículos pré-ovulatórios dos mamíferos a partir da onda pré-ovulatória de LH são mediadas por fatores de crescimento como AR e ER, que induzem a expansão das células do cumulus e maturação oocitária. O LH também estimula a deposição de ácido hialurônico mediada pela enzima HAS-2. Em eqüinos, já foi caracterizada a expressão de HAS-2, AR e ER em resposta à administração de hCG em folículos pré-ovulatórios, mas sua ação em folículos imaturos não está esclarecida, embora tenha sido demonstrada a expansão precoce do cumulus após sua administração em folículos menores de 30mm. O objetivo deste estudo foi caracterizar o padrão de expressão de ER, AR e HAS-2 em folículos de eqüinos em diferentes estágios de maturação, submetidos ou não ao tratamento com EPE e hCG. Para isso, recuperamos células foliculares por OPU de folículos de diversos tamanhos, em 3 ou 24 horas após estímulo gonadotrófico exógeno, e avaliamos a expressão gênica de ER, AR e HAS-2 por PCR em tempo real. O tratamento com hCG induziu a expressão de ER em folículos imaturos e pré-ovulatórios, demonstrando sua capacidade de indução da maturação folicular precoce, e houve tendência do mesmo efeito ser obtido com a expressão de HAS-2, embora não tenha sido estatisticamente comprovado. O EPE apresentou efeito menor que a hCG na indução da expressão de ER, o que pode ser justificado pelo mecanismo de down regulation que o LH exerce sobre a ativação dos fatores de crescimento ligados ao EGF, como a ER e a AR / Abstract: The modifications observed on mammalia n follicles after the pré-ovulatory surge of LH are mediated by growth factors like epiregulin (ER), which is responsible for the cumulus cells expansion and interfere with the oocyte maturation . The LH also stimulates the deposition of hyaluronic acid mediated by the hialuronan synthase -2 (HAS-2). In horses , the expression of HAS-2 and ER was already characterized in pre-ovulatory follicles , after the administration of hCG. In the present experiment we were able to demonstrate that the hCG is also able to induce the expression of ER in equine follicles smaller than 30mm in diameter , confirming an ability of immature follicles in responding to hormonal stimuli. Although no statistic differences were observed among groups a tendency to the same effect was also observed for the HAS-2. Similarly, the use of EPE stimulated the expression of ER, but when EPE and hCG were combined a decrease in expression was observed. This observation indicates a mechanism of down regulation exerted by the LH on the ER and HAS expression / Doutor

Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Nereu Carlos Prestes / Banca: José Antonio Visintin / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Resumo: A célula-tronco (CT) é definida como uma célula com capacidade de gerar diferentes tipos celulares e reconstituir diversos tecidos. Além disso, a CT apresenta propriedades de auto-renovação, gerando cópias idênticas a si mesma. De acordo com sua origem, as células-tronco podem ser chamadas de "adultas" e "embrionárias". As células-tronco adultas (CTA) mais utilizadas nas clínicas de terapia celular são as células-tronco hematopoiéticas e as células tronco mesenquimais, encontradas principalmente na medula óssea, tecido adiposo e no sangue do cordão umbilical. As células-tronco embrionárias (CTE) são derivadas da massa celular interna de embriões no estágio de blastocisto. Desta maneira este trabalho teve como objetivo desenvolver uma metodologia adequada para o isolamento, cultivo e caracterização de células tronco embrionárias e mesenquimais de eqüinos, além de verificar a capacidade que as células possuem em se diferenciar in vitro em outros tipos célulares. Foi coletado sangue da medula óssea de eqüinos entre 8 e 15 anos de idade. As células tronco mesenquimais foram isoladas após a primeira e segunda passagem. As células foram caracterizadas com marcadores de superfície CD34 (mononucleares) e CD44 (mesenquimais). Após isolamento e caracterização, as células tronco mesenquimais foram diferenciadas para as linhagens osteogênica, adipogênica, condrogênica e neurogênica. A confirmação da diferenciação das células tronco foi realizada por marcadores teciduais específicos. Estas células também, foram capazes de expressarem marcadores neurais. Para o isolamento das células tronco embrionária eqüina, embriões com oito a nove dias foram coletado e a massa celular interna (MCI) isolada mecanicamente. Após o isolamento, a MCI foi transferida para a placa de cultivo previamente preparada com monocamada de fibroblastos para o desenvolvimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The stem cell (SC) is defined as cells with the capacity of generate different cellular types and rebuild various tissues. Moreover, the SC has a selfregenerate ability, generating identical copies of itself. According to its origins, the SC can be named as "adult" or "embryonic". The adult stem cell (ASC) more often used in clinical trials and cellular therapy, are the hematopoietic stem cells and the mesenchymal stem cells, isolated mainly from the marrow bone, adipose tissue and umbilical cord blood. The embryonic stem cells (ESC) are obtained from the inner cell mass of embryos at the blastocyst stage. In this way the present study had as objective to develop an adequate methodology of isolation, culture and characterization of embryonic and mesechymal stem cells from horses, verifying the capacity of those cells to differentiate in vitro into different cells types. Bone marrow blood was collected from horses, aging from 8 to 15 years and filtered with a donation blood kit filter, to avoid clots. The mesenchymal stem cells were isolated after the first and the second passage. The SC were characterized using surface markers CD34 (monuclear) and CD44 (mesenchymal). After the isolation and characterization, the mesenchymal stem cells were differenced into osteogenic, adipogenic, condrogenic and neurogenic lineage. The cells differentiations were confirmed using specific tissue markers. To isolate the embryonic stem cells equine embryos with 8 to 9 days were used. The inner cell mass (ICM) were extract mechanically and transferred to a culture dish previously prepared with fibroblasts monolayer to colony formation and development. The colonies were characterized with pluripotency markers and then submitted to a differentiation process into neurogenic lineage, confirmed by specific neural tissue markers / Doutor

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-02Bitstream added on 2014-08-13T18:01:15Z : No. of bitstreams: 1 000732142.pdf: 1071161 bytes, checksum: 2cb970afdbdc6d295fe573aeb86e30a8 (MD5) / Apesar dos benefícios proporcionados pelo plasma seminal durante a cobertura, quando biotecnologias são utilizadas, como a inseminação artificial, sua função é questionável, visto que trabalhos utilizando espermatozoides da cauda do epidídimo acrescido ou não do plasma seminal não apresentaram diferença nas taxas de concepção. Além disso, estudos relataram efeito deletério das secreções das glândulas anexas sobre a viabilidade espermática e taxa de concepção, principalmente em garanhões com baixa qualidade seminal. Neste sentido, o objetivo do presente estudo é: 1) comparar os parâmetros de cinética espermática, viabilidade estrutural e fertilidade dos espermatozoides recuperados do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis; 2) avaliar diferenças na composição eletrolítica do plasma seminal de animais com alta e baixa fertilidade. 3) comparar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e viabilidade dos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis. As avaliações das amostras seminais consistiram na análise computadorizada das características da motilidade (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) e nas análises de citometria de fluxo da integridade da membrana plasmática, da integridade acrossomal, da peroxidação das membranas espermáticas, da fragmentação do DNA, da capacitação espermática, da translocação de fosfatidilserina da membrana e da ativação de caspase. Os espermatozoides do epidídimo após descongelação apresentaram superioridade nos parâmetros de cinética e viabilidade espermática, além de melhor fertilidade, demonstrando que estes espermatozoides são mais resistentes ao processo de congelação quando comparado aos espermatozoides do ejaculado. O plasma seminal de garanhões subférteis apresentou maiores concentrações de sódio ... / Despite the benefits provided by seminal plasma during natural cover when biotechnology are used as artificial insemination, its function is questionable, since studies using spermatozoa from cauda epididymis with or without the addition of seminal plasma showed no difference in conception rates. Furthermore, studies have reported deleterious effects of secretions from accessory glands on sperm viability and conception rate, especially in stallions with poor semen quality. Thus the aims of this study were: 1) compare the kinetic parameters, structural viability and fertility of sperm recovered from ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. 2) evaluate differences in electrolyte composition in the seminal plasma of animals with high and low fertility. 3) compare the effect of seminal plasma addition from stallions with high and low fertility on freezability and viability of sperm from the ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. The assessment of each samples was determined by computer-assisted sperm analyses of motility (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) and flow cytometry analyses of plasma membrane integrity, acrosome integrity, peroxidation of sperm membranes, DNA fragmentation index, degree of protein tyrosine phosphorylation in sperm surface and caspase activity. The epididymal sperm after thawing showed superiority in kinetic parameters and sperm viability, as well as better fertility, demonstrating that these spermatozoa are more resistant to freezing process when compared to sperm from the ejaculate. The seminal plasma of subfertile stallions has higher sodium concentrations in the seminal plasma than fertile stallions, what makes this finding a possible way to explain the deleterious effect of seminal plasma in these animals. Moreover, it was found that this deleterious effect is dose-dependent since the addition of 20% of seminal plasma from fertile and ...

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Julio Cesar Ferraz Jacob / Resumo: O presente estudo tem como objetivo verificar a resposta ovulatória e recuperação embrionária em éguas após o tratamento com FSHp (Folltropin-V®) em diferentes momentos, com diferentes doses e na raça BH. O crescimento folicular foi acompanhado diariamente e os tratamentos (i.m. a cada 12h) foram mantidos até que o maior(es) folículo(s) atingiu 32mm, a indução da ovulação (2500 UI de hCG i.v.) foi realizada quando o maior(es) folículo(s) atingiu 35mm e a colheita de embriões no D8. No experimento 1, a dose de 25mg de FSHp foi testada em 28 éguas para determinação do melhor momento após aspiração folicular: 13mm (n=7, salina, controle), 13mm (n=7, FSHp-F13) e 20mm (n=7, FSHp-F20); ou em um dia determinado do ciclo: D6 (n=7, FSHp- D6). No experimento 2, a dose de 50mg de FSHp foi testada em 17 éguas quando o maior folículo atingiu 13mm (n=7, FSHp-13) e comparada ao grupo controle (n=10). No experimento 3, em 26 éguas BH inciou-se os seguintes tratamentos no D6: salina (n=7, controle), 25mg de FSHp (n=7, 25FSHp-D6), 12,5mg de EPE (n=7, EPE-D6) e 50 mg de FSHp (n=5, 50FSHp-D6). Usou-se a análise de variância de perfil, seguida do método de Tukey e para os dados de embriões/ovulação foi realizado o teste exato de Fisher (5% de significância). Os tratamentos com 25mg ou 50mg não promoveram aumento significativo no número de ovulações e de embriões recuperados, mas promoveu aumento no diâmetro máximo atingido por F3. O início do tratamento quando o maior folículo da onda induzida atingiu 20mm reduziu o tempo de tratamento. Conclui-se que os tratamentos com FSHp não promoveram resposta satisfatória e que o início do tratamento próximo ao desvio permitiu redução no tempo de tratamento. / Abstract: The present study aims to verify the ovulatory response and embrionary recover in mares treated at different moments with pFSH (Folltropin-V®), with different doses and in BH breeding mares. The follicular growth was daily accompanied and treatments (i.m. BID) were kept until major follicles reached 32mm, ovulation induction (2500 UI of hCH i.v.) was done when major follicles reached 35mm and embryo collection at D8. In experiment 1, 25mg of pFSH was tested in 28 mares for determination of the best moment for start of treatment after follicle ablation: 13mm (n=7, saline, control), 13mm (n=7, FSHp-F13) e 20mm (n=7, FSHp-F20); or in a previously determined cycle day: D6 (n=7, FSHp-D6). In experiment 2, 50mg of pFSH was tested in 17 mares when the largest follicle achieved 13mm (n=7, FSHp-13) and compared to a control grupo (n=10). In experiment 3, in 26 BH mares was initiated the following treatments beginning at D6: saline (n=7, control), 25mg of pFSH (n=7, 25FSHp-D6), 12,5mg of EPE (n=7, EPE-D6) e 50 mg of pFSH (n=5, 50FSHp-D6). For statistical analysis, Profile analysis followed by Tuckey method and, for embryo/ovulation, Fisher test were used (significance at 5%). Treatments with 25mg or 50mg did not promote a significative increase on ovulations and embryo recover, but increased maximum diameter of F3. The start of treatment when the largest follicle of an induced follicular wave achieved 20mm reduced time of treatment. It is concluded that pFSH treatment did not promote a satisfactory response and that beginning of treatment close to deviation allowed the reduction of treatment time. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-12Bitstream added on 2014-06-13T19:05:26Z : No. of bitstreams: 1 blanco_idp_dr_botfmvz.pdf: 464375 bytes, checksum: 98e141ce5fa2b921f8f4ddf393292d45 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As alterações observadas nos folículos pré-ovulatórios dos mamíferos a partir da onda pré-ovulatória de LH são mediadas por fatores de crescimento como AR e ER, que induzem a expansão das células do cumulus e maturação oocitária. O LH também estimula a deposição de ácido hialurônico mediada pela enzima HAS-2. Em eqüinos, já foi caracterizada a expressão de HAS-2, AR e ER em resposta à administração de hCG em folículos pré-ovulatórios, mas sua ação em folículos imaturos não está esclarecida, embora tenha sido demonstrada a expansão precoce do cumulus após sua administração em folículos menores de 30mm. O objetivo deste estudo foi caracterizar o padrão de expressão de ER, AR e HAS-2 em folículos de eqüinos em diferentes estágios de maturação, submetidos ou não ao tratamento com EPE e hCG. Para isso, recuperamos células foliculares por OPU de folículos de diversos tamanhos, em 3 ou 24 horas após estímulo gonadotrófico exógeno, e avaliamos a expressão gênica de ER, AR e HAS-2 por PCR em tempo real. O tratamento com hCG induziu a expressão de ER em folículos imaturos e pré-ovulatórios, demonstrando sua capacidade de indução da maturação folicular precoce, e houve tendência do mesmo efeito ser obtido com a expressão de HAS-2, embora não tenha sido estatisticamente comprovado. O EPE apresentou efeito menor que a hCG na indução da expressão de ER, o que pode ser justificado pelo mecanismo de down regulation que o LH exerce sobre a ativação dos fatores de crescimento ligados ao EGF, como a ER e a AR / The modifications observed on mammalia n follicles after the pré-ovulatory surge of LH are mediated by growth factors like epiregulin (ER), which is responsible for the cumulus cells expansion and interfere with the oocyte maturation . The LH also stimulates the deposition of hyaluronic acid mediated by the hialuronan synthase -2 (HAS-2). In horses , the expression of HAS-2 and ER was already characterized in pre-ovulatory follicles , after the administration of hCG. In the present experiment we were able to demonstrate that the hCG is also able to induce the expression of ER in equine follicles smaller than 30mm in diameter , confirming an ability of immature follicles in responding to hormonal stimuli. Although no statistic differences were observed among groups a tendency to the same effect was also observed for the HAS-2. Similarly, the use of EPE stimulated the expression of ER, but when EPE and hCG were combined a decrease in expression was observed. This observation indicates a mechanism of down regulation exerted by the LH on the ER and HAS expression

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-13Bitstream added on 2014-06-13T20:46:11Z : No. of bitstreams: 1 ignacio_fs_dr_botfmvz.pdf: 780944 bytes, checksum: 399ca6536c4a5a4c454f0633b28c2768 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Um grande fator limitante dos programas de transferência de embrião é o número de receptoras disponíveis durante a estação de monta. A aspiração de folículos ≥25mm promove a formação de uma estrutura lútea capaz de produzir progesterona em concentrações semelhantes ao diestro (>2ng/ml). O objetivo do presente trabalho foi avaliar a formação lútea de folículos ≥25mm aspirados, o útero e a taxa de prenhez destes animais após a inovulação. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em três grupos: grupo controle (indução da ovulação com 2500 UI de hCG), grupo aspiração (aspiração do folículo ≥25mm) e hCG+aspiração (aplicação de 2500 UI de hCG 24h antes da aspiração de folículo ≥25mm). Cada égua foi acompanhada ultrassonograficamente para detecção da ovulação, aplicação de 7,5mg de PGF2α cinco dias após a ovulação para indução da luteólise e para determinação do momento da aspiração. O experimento foi dividido em: fase 1 – dosagens de progesterona intrafoliculares e plasmáticas e avaliação ultrassonográfica por modo B e Power Doppler das estruturas lúteas e útero; fase 2 – teste de fertilidade. As concentrações de P4 intrafoliculares foram maiores para os folículos aspirados com diâmetros maiores e a aplicação prévia do hCG aumentou estas nos folículos entre 25-29mm, bem como, a resposta ao tratamento. A aspiração folicular promoveu aumento nas concentrações de P4 plasmáticas a concentrações semelhantes ao diestro (≥2ng/mL), no entanto, as estruturas formadas a partir da aspiração apresentam luteinização mais lenta. O aumento da P4 plasmática foi capaz de promover alterações uterinas semelhantes ao diestro espontâneo e taxa de 43% de prenhez foi atingida com as éguas aspiradas. Conclui-se que a aspiração de folículos ≥25mm pode ser uma opção para... / The major limiting factor of embryo transfer programs is the number of available recipient mares during the breeding season. The aspiration of follicles ≥25 mm leads to the formation of a structure capable of producing progesterone at concentrations similar to diestrus (> 2ng/ml). The present work aims to evaluate the luteal structure from ablation of follicles ≥25mm, uterine conditions and pregnancy rates after embryo transfer. Mares were randomly assigned into three groups: control group (ovulation induction with 2500 IU hCG), ablation group (follicle ≥25mm ablation) and hCG + ablation (2500 IU of hCG injection 24h before ablation of follicle ≥25mm ). Each mare was monitored by ultrasound for detection of ovulation and the determination of the time of ablation. A 7.5 mg dose of PGF2α was administered five days post ovulation to induce luteolysis. The experiment was divided into: phase 1 - intrafollicular plasma progesterone measurement and ultrasound evaluation by B-mode and power Doppler of luteal structures and uterus; phase 2 - fertility test. Concentrations of intrafollicular P4 were greater for larger follicles and hCG was efficient on increasing these levels on follicles 25-29mm, as well as increasing its response to treatment. Follicular ablation induced an increase in P4 plasma concentrations to values similar to diestrus (≥ 2ng/ml), however, the formed structures showed a delay on the luteinisation process. The increase in plasma P4 was able also to promote changes in the uterus that were similar to diestrous and these mares showed a 43% pregnancy rate. In conclusion, ablation of follicles ≥25mm can be an option for programs with limited number of recipients, however, more studies are still needed to explain ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-19Bitstream added on 2014-11-10T11:57:44Z : No. of bitstreams: 1 000788398.pdf: 359564 bytes, checksum: 9f9d8433658bf4b20dc7fe6d641d8e84 (MD5) / Vários fatores influenciam no resultado da transferência de embrião (TE) em equinos, sendo que a sincronia entre a doadora e a receptora muitas vezes limita o uso da receptora, pois não há sincronia do ambiente uterino e com o estágio do embrião que será transferido. Éguas doadoras de embriões muitas vezes devido ao manejo distintos das receptoras tendem a apresentar ciclos ovulatórios por mais tempo durante a estação reprodutiva. Atualmente, muitos protocolos e terapias possibilitam uma maior recuperação de embriões por ciclo, mesmo de éguas idosas, dessa forma as receptoras desempenham um importante papel na cadeia da TE. Várias estratégias são utilizadas para maximizar o uso de éguas receptoras e com isso aumentar o número de produtos de TE por estação. Com a intenção de sincronizar ou aumentar o tempo de utilização das receptoras durante a estação de monta, pode-se utilizar progesterona e progestágenos, e estrógenos dessa forma, reduz a relação doadora/receptora, gerando uma redução de custo e tempo, além da utilização de éguas não ciclantes com índices de gestação satisfatórios. O presente estudo teve como objetivo estudar o efeito da utilização do estrógeno e progesterona no diestro para maximizar a utilização de receptoras de embrião. Onde foi observado a taxa de prenhez no grupo diestro de 40%, sendo uma alternativa estratégica em programas de TE quando poucas receptoras estiverem disponíveis / Several factors influence the outcome of embryo transfer (TE) in horses, and the synchrony between donor and recipient often limits the use of the recipient, because there is no synchronization of the uterine environment and the stage of the embryo to be transferred. Mares embryo donors often due to different handling of the recipients tend to have longer ovulatory cycles during the breeding season. Currently many protocols and therapies enable greater recovery of embryos per cycle, even old mares, so the receivers play an important point in the chain of TE. Several strategies are used to maximize the use of recipient mares and thereby increase the number of products per season TE. With the intention of increasing or synchronize the time of use of the receiver during the breeding season may be mentioned progesterone and progestins, estrogens and thus reduces the ratio donor / recipient, resulting in a reduction of cost and time, besides the use mares with ciclantes not satisfactory pregnancy rates. The present study aimed to study the effect of the use of estrogen and progesterone in diestrus to maximize the use of embryo recipients in TE programs

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-14Bitstream added on 2014-11-10T11:57:44Z : No. of bitstreams: 1 000784153.pdf: 1615325 bytes, checksum: f1698e7c84f8e1f9d5d79d9ac9a019c3 (MD5) / Estudos recentes têm demonstrado diferentes respostas do CL quando da administração de prostaglandina F2α em diferentes doses e momentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do tratamento com baixas doses de PGF2α sobre características funcionais e estruturais de CLs em fases distintas do diestro em éguas. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em 8 grupos: D2-NaCL (n=6; 2 mL de solução de NaCl à 0,9%); D2-Pgf (n=9; 10 mg de Dinoprost Trometamina); D2-1/10Pgf (n=6; 1 mg de Dinoprost Trometamina); D2-1/20Pgf (n=6; 0,5 mg de Dinoprost Trometamina); D8-NaCl (n=7; 2 mL de solução de NaCl à 0,9%); D8-Pgf (n=6; 10 mg de Dinoprost Trometamina); D8-1/10Pgf (n=7; 1mg Dinoprost Trometamina); D8-1/20Pgf (n=7; 0,5 mg de Dinoprost Trometamina). A área total do CL (AT), a perfusão sanguínea objetiva (PVO) e subjetiva (PVS) do CL e as concentrações plasmáticas de progesterona (P4) foram avaliados a cada 6 horas durante 48 horas (H0 = momento imediatamente antes do tratamento). A AT não sofreu interferência da dose de PGF2α independente do dia de tratamento. A P4 apresentou uma correlação positiva com a PVO e PVS, sendo esta última mais sensível na detecção das alterações de P4. O tratamento no D2 não foi capaz de induzir a luteólise completa em nenhuma égua enquanto que o tratamento no D8 promoveu luteólise completa em todas as éguas do grupo controle positivo e parcial e completa em algumas éguas dos grupos D8-1/10Pgf e D8-1/20Pgf. Resposta dose-dependente da PGF2α foi observada, ou seja, quanto menor a dose aplicada menor as quedas em PVS e P4. Conclui-se que a resposta do CL ao tratamento com diferentes doses de PGF2α depende da fase de desenvolvimento do CL / Recent studies have demonstrated different response of the CL to different doses of prostaglandin F2α on differente moments. The present experiment aims to evaluate the effect of treatments with PGF2α low doses over functional e structural characteristics of the CLs at two distintic stages. Mares were randomly assigned into groups: D2-NaCL (n=6; 2 mL of saline solution); D2-Pgf (n=9; 10 mg of Dinoprost Tromethamine); D2-1/10Pgf (n=6; 1 mg of Dinoprost Tromethamine); D2-1/20Pgf (n=6; 0,5 mg of Dinoprost Tromethamine); D8-NaCl (n=7; 2 mL of saline solution; D8-Pgf (n=6; 10 mg of Dinoprost Tromethamine); D8-1/10Pgf (n=7; 1mg of Dinoprost Tromethamine); D8-1/20Pgf (n=7; 0,5 mg of Dinoprost Tromethamine). Total area (AT), objective (PVO) and subjective (PVS) vascular perfusion of the CL and plasmatic progesterone (P4) were evaluated every six hours for 48h after treatment (H0 = immediately before treatment). PGF2α did not influenced on AT or day of treatment. P4 showed a positive correlation to PVO and PVS, and PVS was strongly correlated to P4. Treatment on D2 was not able to induce total luteolysis in any mare while treatment on D8 promoted total luteolysis in all mares in group D8-Pgf and 29% and 14% of the mares for the groups D8-1/10Pgf and D8-1/20Pgf, respectively. Parical luteolysis were also detected in groups on D8. The response to PGF2α seems to be dose-dependent, the decrease in PGF2α dose proportionally decreases PVS and P4. It is concluded that CL response to treatment with different doses of PGF2α depends os the CL developmental stage

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-20. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:13:44Z : No. of bitstreams: 1 000866927.pdf: 585944 bytes, checksum: 976b997ede2e6fb1c664f9142a6fcbaf (MD5) / Muitos garanhões não respondem de forma satisfatória frente ao processo de criopreservação sendo vários os fatores envolvidos nessa intolerância. Visando elucidar resultados superiores de alguns animais aos processos de criopreservação espermática, foram realizados dois experimentos. No experimento I, o objetivo foi avaliar a ação do estresse oxidativo e as consequências no sêmen de garanhões resistentes e sensíveis ao processo de congelação espermática, verificando também a influência do fator racial frente ao processo de congelação espermática. No experimento II, o objetivo foi avaliar a influência da presença do plasma seminal sobre a resistência espermática no sêmen refrigerado de garanhões considerados bad e good coolers. Para avaliação das amostras seminais foi realizada análise computadorizada de cinética espermática (CASA, Thorne Research - HTMA IVOS), análise e quantificação do estresse oxidativo pela mensuração das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), análise da fragmentação do DNA espermático (HALOMAX) e análises de translocação de fosfolipídios da membrana, índice de caspase ativada e quantificação de espécies reativas de oxigênio pela citometria de fluxo. No experimento I, não houve influência racial com relação à qualidade espermática, além disso, os garanhões bad freezer, que apresentaram maior perda de qualidade seminal após a congelação espermática, revelaram maiores níveis de estresse oxidativo e fragmentação do DNA espermático. No experimento II, os garanhões sensíveis à refrigeração apresentaram melhora da qualidade espermática ao retirarmos o plasma seminal. Já nos good coolers houve uma manutenção da qualidade espermática na presença do plasma seminal e uma diminuição da qualidade sem o plasma seminal. Além disso, observamos ao submeter as amostras ao teste-desafio, que as análises espermáticas se tornam mais confiáveis... / A significant number of stallions do not respond in a satisfactory way to the cryopreservation process and that there are many factors involved. In order to elucidate the reasons why some animals have superior results in the spermatic cryopreservation processes, two experiments were conducted. In experiment I, the goal was to evaluate the action of oxidative stress and the consequences in the semen of stallions that were resistant and susceptible to the spermatic freezing process. The influence of the racial factor to the spermatic freezing process was also verified. In experiment II, the goal was to evaluate the influence of the seminal plasma presence on spermatic resistance in cooled semen of stallions considered as bad and good coolers. To evaluate seminal samples, computer analysis of the spermatic cinetic was done (CASA, Thorne Research - HTM IVOS), oxidative stress levels were assessed by thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), sperm DNA fragmentation (HALOMAX) and analysis of the translocation of membrane phospholipids, activated caspase indices and quantification of ROS with flow cytometry were done. In experiment I, there was no influence of the breed factor in relation to the sperm quality of the analyses that were done. Furthermore, the bad freezers stallions, that showed the most loss of seminal quality after spermatic freezing, presented higher rates of oxidative stress and spermatic DNA fragmentation. In experiment II, the stallions that were considered sensitive showed improvement of the sperm quality as the SP was removed. Furthermore, in the good coolers we observed the preservation of sperm quality in the presence of SP and a quality decrease in the samples without the SP. Additionally, we also observed the importance of the test challenge for the evaluation of the sperm analysis, because when submitted to stressful situations, the differences were evident. Keywords: Semen, cryopreservation, oxidative stress...