Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Carlos Antônio de Carvalho Fernandes / Banca: Eunice Oba / Banca: Mayra Elena Ortiz D'Avila Assumpção / Banca: Maria Denise Lopes / Resumo: Neste estudo vitrificou-se em OPS ovócitos (Experimentos 1, 2 e 3) e embriões bovinos (Experimentos 4, 5 e 6) em três soluções de vitrificação distintas: Experimentos 1 e 4) 20%EG + 20%DMSO + 0,5M sacarose; Experimentos 2 e 5) 20%DF + 20%EG + 0,5M sacarose; Experimentos 3 e 6) 20%DF + 20%DMSO + 0,5M sacarose. Os embriões foram vitrificados na presença ou não de citocalasina B. Os ovócitos foram vitrificados ou somente expostos aos crioprotetores imaturos (G0h e G0hexp), ou após 6 horas (G6h e G6hexp), 12 horas (G12h e G12hexp) ou 22 horas de MIV (G22h e G22hexp). Após a exposição ou aquecimento, parte dos ovócitos completou as 22 horas de MIV e foi destinada à PIV, para avaliação da capacidade de se desenvolverem até blastocisto. No restante avaliou-se o estágio de maturação nuclear e a distribuição dos grânulos corticais e das mitocôndrias. Observou-se que a exposição dos ovócitos imaturos (0 ou 6 horas de MIV) aos crioprotetores nos experimentos 1, 2 e 3 resultou em perda substancial de viabilidade, avaliada pelas taxas de clivagem (GC=79,4%; 1G0hexp=37,1%; 1G6hexp=51,1%; 2G0hexp=33%; 2G6hexp=52,5%; 3G0hexp=36,2%; 3G6hexp=49,8%), o que foi menos notável nos ovócitos expostos após 12 ou 22 horas de MIV (1G12hexp=59,1%; 1G22hexp=71,1%; 2G12hexp=61,5%; 2G22hexp=62,5%; 3G12hexp=58,8%; 3G22hexp=68,6%). A realização da MIV antes da vitrificação foi benéfica. Apesar de nenhuma das soluções de crioprotetores ter sido capaz de promover proteção adequada aos ovócitos submetidos à vitrificação em qualquer momento da MIV, no Experimento 1 foi observada clivagem (1G12h=7,3%; 1G22h=4,2%) indicando que a mistura de crioprotetores EG+DMSO foi a mais eficiente nas condições utilizadas. Entretanto, não houve produção de blastocistos em nenhum experimento. Nos Experimentos 4, 5 e 6 notou-se que em todos os grupos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this study bovine oocytes (Experiments 1, 2 and 3) and embryos (Experiments 4, 5 and 6) were vitrified in OPS using 3 different cryoprotectant solutions: Experiments 1 and 4) 20%EG + 20%DMSO + 0,5M sucrose; Experiments 2 and 5) 20%DF + 20%EG + 0.5M sucrose; Experiments 3 and 6) 20%DF + 20%DMSO + 0.5M sucrose. Embryos were vitrified in the presence or not of cytocalasin B. Oocytes were vitrified or just exposed to the cryoprotectant solutions after 0h (G0h and G0hexp), 6h of IVM (G6h and G6hexp), 12h of IVM (G12h and G12hexp) and 22h of of in vitro maturation (IVM) (G22h and G22hexp). Oocytes from groups 0 and 6h were considered immature and from 12 and 22h groups were considered mature. After exposure to cryoprotectants or warming, part of the oocytes that completed 22h of IVM were submitted to IVF to evaluate their developmental ability. Another part of the oocytes were used to evaluate nuclear maturation in the distribution of mitochondria and cortical granules. The results showed that the exposure of immature oocytes (0 and 6 hours of MIV) to cryoprotectants reduce their viability, since cleavage rates of all groups were significantly lower compared to control group (GC=79.4%; 1G0hexp=37.1%; 1G6hexp51.1%; 2G0hexp=33%; 2G6hexp=52.5%; 3G0hexp=36.2%; 3G6hexp=49.8%). This effect was less evident in the groups of mature oocytes submitted to IVM for 12 or 22 hours (1G12hexp=59.1%; 1G22hexp=71.1%; 2G12hexp=61.5%; 2G22hexp=62.5%; 3G12hexp=58.8%; 3G22hexp=68.6%). The previous IVM is beneficial to vitrification. Although none of the cryoprotectant solutions utilized were totally efficient in protecting the oocytes form cryodamage, in Experiment 1 cleavage was observed (1G12h=7.3%; 1G22h=4.2%) indicating that the combination of EG+DMSO was more effective than the other two. However in none of the groups blastocyst was formed. When embryos... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: José Camisão de Souza / Banca: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Naiara Zoccal Saraiva / Banca: Cássia Maria Barroso Orlandi / Resumo: Raças zebuínas (Bos taurus indicus) e seus cruzamentos têm papel fundamental na pecuária brasileira, e a raça Gir, em especial, acrescenta rusticidade e produtividade nas suas descendentes leiteiras. A produção in vitro de embriões bovinos é uma biotécnica de alto valor econômico, que, aliada à utilização de sêmen sexado para cromossoma X, possibilita a multiplicação com fêmeas de valor genético superior. Foram realizados dois experimentos com o objetivo de avaliar a produção in vitro (PIV) de embriões de doadoras da raça Gir na Fazenda Experimental da EPAMIG, em Uberaba, MG. O experimento 1 (EXP 1) visou verificar o efeito da ablação do folículo dominante sobre os resultados da PIV. No experimento 2 (EXP 2) os efeitos da estação do ano, idade da doadora, DNA mitocondrial materno e efeito do touro sobre a PIV foram estudados. No EXP 1, 42 multíparas e primíparas foram submetidas à aspiração de oócitos (OPU) a partir dos 15 dias pós-parto e a intervalos de 21 dias, sendo efetuada (65 sessões de OPU) ou não (115 sessões de OPU) a ablação do folículo dominante 3 dias antes da aspiração. Das 198 aspirações realizadas foram coletados 3.884 oócitos viáveis, que resultaram em 1.114 blastocistos. O número médio de oócitos viáveis aspirados e de blastocistos por sessão foi de 20,0 ± 10,6 e de 5,70 ± 4,9, respectivamente. Não foram identificados efeito da ordem de parto e aspiração, do dia após o parto para início da coleta e da condição corporal da doadora nos resultados da PIV. No entanto, a produção de blastocistos por sessão foi superior (5,65±1,02 vs. 3,78±0,97) nas vacas que sofreram ablação do folículo dominante (p<0,05). No EXP 2 foram avaliadas 363 aspirações de 85 doadoras fertilizadas com 23 touros diferentes que geraram 6.084 oócitos viáveis, 2.537 embriões, 1.105 gestações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Zebu breeds (Bos taurus indicus) and its crosses have an essential role on the Brazilian cattle industry, and the Gyr breed, especially, incorporates hardiness and productivity onto its dairy descendants. The in vitro production of bovine embryos is a biotechnique of high economic value, which, combined to the use of sex-sorted semen bearing X chromosomes, allows for the multiplication of superior genetic value dams. Two experiments were conducted to evaluate the in vitro production (IVP) of embryos from Gyr donor cows at the EPAMIG Research Farm in Uberaba, MG, Brazil. Experiment 1 (EXP 1) aimed to verify the effect of ablation of the dominant follicle on IVP results. In experiment 2 (EXP 2), the effects of season, donor age, mitochondrial DNA and sire on IVP were studied. In EXP 1, 42 multiparous and primiparous cows underwent ovum pick up (OPU) after removal (65 OPU sessions- DFR) or non removal (115 OPU sessions- Control) of the dominant follicle 3 days before aspiration, starting from 15 days postpartum at approximately 21 day-intervals. Of the 180 OPU sessions performed, 3,884 viable oocytes were collected, which resulted in 1,114 blastocysts. The overall average numbers of oocytes aspirated and viable blastocysts per session were 20.0 ± 10.6 ± 4.9 and 5.70, respectively. OPU session, parity, calving to OPU interval and donor body condition did not influence IVP results. However, the production of blastocysts per session was higher (5.65 ± 1.02 vs. 3.78 ± 0.97) in DFR-cows (P <0.05). In EXP 2, a total of 363 OPU sessions from 85 donors was studied. Semen from 23 different bulls was used for in vitro fertilization, yielding 6,084 viable oocytes, 2,537 embryos and 1,105 pregnancies overall. Thirty and sixty-day day pregnancy rates after embryo transfer were 41.7% and 39.5%, respectively... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Margot Alves Nunes Dode / Resumo: Objetivou-se com o presente estudo avaliar a criotorerância de mórulas e blastocistos produzidos in vivo de doadoras da raça Sindi e Nelore (Bos indicus) e Holandês Preto e Branco (HPB - Bos taurus). No Experimento 1, 24 fêmeas lactantes e não lactantes da raça Sindi foram superovuladas com 100 mg de FSH suíno com protocolos em que as duas últimas aplicações de FSH foram substituídas ou não por 300 UI de eCG. Sete dias após a indução da ovulação, os embriões foram colhidos e avaliados quanto ao estágio de desenvolvimento embrionário e grau de qualidade. Dois terços dos embriões foram destinados à criopreservação, dos quais metade foi congelada pelo método convencional, com curva de resfriamento de -0,5ºC/min e a outra metade foi vitrificada pela técnica de Cryotop. Em seguida, foram descongelados e transferidos para receptoras sincronizadas, de maneira contemporânea aos embriões frescos. No Experimento 2, 31 fêmeas da raça Nelore foram superovuladas com 133 mg de FSH suíno e os dois terços dos embriões colhidos foram criopreservados e transferidos semelhantemente ao Experimento 1. No Experimento 3, 67 vacas lactantes e novilhas da raça HPB foram superovuladas com 500 e 300 UI de FSH suíno, respectivamente, e após a colheita dos embriões foram adotados os mesmos procedimentos realizados nos Experimentos 1 e 2. Os resultados foram analisados por modelos lineares generalizados e estão apresentados na forma de média dos quadrados mínimos ± erro padrão. Nos Experimentos 1 e 2, os embriões transferidos a fresco apresentaram maior taxa de concepção aos 30 dias do que os vitrificados e congelados (54,8±7,4a, 17,7±7,3b e 19,5±6,6%b; respectivamente; P 0,0013) na raça Sindi (n=231 embriões) e (46,0±6,1a; 31,2±5,4b e 28,1±5,3%b; respectivamente, P 0,04) na raça Nelore (n=297 embriões). O estágio de desenvolvimento embrionário parece não... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the cryotolerance of morulae and blastocysts produced in vivo in Sindhi and Nelore (Bos indicus) and Holstein (Bos taurus) donnors. In Experiment 1, 24 lactating and non-lactating Sindhi donnors were superovulated with 100 mg porcine FSH with protocols in which the last two FSH treatments were replaced or not by 300 IU eCG. Embryos were collected 7 days after ovulation induction and embryo development and quality degree were accessed. Two thirds of the embryos were cryopreserved, by the conventional freezing or Cryotop method. After that, embryos were thawed and transferred to synchronized recipients, simultaneously to fresh embryos. In Experiment 2, 31 Nelore cows were superovulated with 133 mg porcine FSH and two thirds of the embryos were cryopreserved and transferred similarly to Experiment 1. In Experiment 3, 67 Holstein lactating dairy cows and heifers were superovulated with 500 and 300 IU pFSH, respectively, and the same procedures were performed as in Experiments 1 and 2. Results were analyzed using generalized linear models and are presented as least squares means ± standard error. In Experiments 1 and 2, fresh embryos had a higher conception rate at Day 30 than those vitrified and frozen (54.8±7.4a, 17.7±7.3b and 19.5±6.6%b; respectively; P 0.0013) in Sindhi donnors (n=231 embryos) and (46.0±6.1a; 31.2±5.4b and 28.1±5.3%b; respectively; P 0.04) in Nelore donors (n = 297 embryos). Embryo developmental stage seems to have not influenced conception rates of Zebu embryos, especially cryopreserved ones. Finnaly, in Experiment 3, conception rates of fresh and cryopreserved embryos were similar (37.4±12.3, 24.5±11.3 and 21.0±9.5%; respectively, P>0.15) and also no difference was detected for the cryotolerance of morulae versus blastocysts (P>0.10) / Mestre

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Banca: Ériklis Nogueira / Banca: Karina Beloti Avelino / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: objetivo deste estudo foi contribuir para o conhecimento da técnica de criopreservação de embriões in vitro. Oócitos (n=965) foram maturados durante 24h em TCM-199 suplementado com 0,2mM de piruvato, 25 mM de bicarbonato de sódio e 75 mg/ml de gentamicina. Os zigotos foram cultivados em meio SOFm suplementado com 0,5% BSA e FCS 2,5%. Culturas foram realizadas a 38,5°C em 5% de CO2 no ar umidificado, em 100 μl de meio de gotículas recuperado com óleo mineral. No sétimo dia da cultura, os embriões (n = 387) foram marcados e apenas blastocistos excelente a boa qualidade foram criopreservados (10 embriões / palheta 0,25 ml). Os seguintes grupos experimentais foram concebidos, nomeado de acordo com a solução de crioprotetor utilizado: glicerol 1,0 M de etileno glicol em PBS (G); glicerol 1,0 M + 0,3 M de sacarose em PBS (GS); etilenoglicol 1.5 M em PBS (E) e 1,5 M + 0,3 M de sacarose em PBS (ES). Após o descongelamento, os embriões foram re-cultivadas em 100 ml de meio de gotas SOFm a 38,5 º C e 5% de CO2 no ar por 72 h. Os dados demonstraram que a qualidade do embrião, avaliada pelo escore de embriões e número de células embrionárias, parece ser melhor no grupo E e ES. No processo de vitrificação, 300 embriões de excelente qualidade morfológica, Bi e Bl foram vitrificados, e foram sincronizadas 500 receptoras de embriões, divididas em 3 grupos de 150 animais cada grupo. O diagnóstico de gestação nas receptoras após a inovulação dos embriões foram realizados após 42 dias. A taxa de concepção variou entre os grupos, sendo que no grupo I obteve 6 gestações (18,75%) de receptoras que receberam embriões da raça Nelore, 9 gestações (26,47%) de receptoras que receberam embriões da raça Brangus e 12 gestações (35,3%) de receptoras que receberam embriões da raça Brahman ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to contribute to the knowledge of the technique of cryopreservation of embryos in vitro. Oocytes (n = 965) were matured for 24h in TCM- 199 supplemented with 0.2 mM pyruvate, 25 mM sodium bicarbonate and 75 mg / ml of gentamicin. Zygotes were cultured in medium supplemented with 0.5% SOFm BSA and 2.5% FCS. Cultures were performed at 38.5 ° C in 5% CO2 in humidified air in 100 l of medium droplets recovered with mineral oil. On the seventh day of culture, the embryos (n = 387) were scored and only good quality excellent blastocysts were cryopreserved (10 embryos / straw 0.25 ml). The following experimental groups were designed, named according to the cryoprotectant solution used: glycerol 1.0 M ethylene glycol in PBS (G) 1.0 M glycerol + 0.3 M sucrose in PBS (GS), ethylene glycol 1.5 M PBS (E) and 1.5 M + 0.3 M sucrose in PBS (ES). After thawing, the embryos were re-grown in 100 ml of medium SOFm drops to 38.5 º C and 5% CO2 in air for 72 h. The data demonstrated that embryo quality was evaluated by scoring the number of embryos and embryonic cells, seems to be better in group E and ES. In the process of vitrification, 300 embryos of excellent morphology, Bi and Bl, were vitrified, and 500 were synchronized embryo recipients were divided into 3 groups of 150 animals each group. Pregnancies after embryo transfer in recipient embryos were performed after 42 days. The conception rate varied between the groups, whereas in group I had six pregnancies (18.75%) of recipients that received embryos Nellore, 9 pregnancies (26.47%) of recipients that received embryos of Brangus and 12 pregnancies (35.3%) of recipients that received embryos from Brahman ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Julio Cesar Ferraz Jacob / Resumo: O presente estudo tem como objetivo verificar a resposta ovulatória e recuperação embrionária em éguas após o tratamento com FSHp (Folltropin-V®) em diferentes momentos, com diferentes doses e na raça BH. O crescimento folicular foi acompanhado diariamente e os tratamentos (i.m. a cada 12h) foram mantidos até que o maior(es) folículo(s) atingiu 32mm, a indução da ovulação (2500 UI de hCG i.v.) foi realizada quando o maior(es) folículo(s) atingiu 35mm e a colheita de embriões no D8. No experimento 1, a dose de 25mg de FSHp foi testada em 28 éguas para determinação do melhor momento após aspiração folicular: 13mm (n=7, salina, controle), 13mm (n=7, FSHp-F13) e 20mm (n=7, FSHp-F20); ou em um dia determinado do ciclo: D6 (n=7, FSHp- D6). No experimento 2, a dose de 50mg de FSHp foi testada em 17 éguas quando o maior folículo atingiu 13mm (n=7, FSHp-13) e comparada ao grupo controle (n=10). No experimento 3, em 26 éguas BH inciou-se os seguintes tratamentos no D6: salina (n=7, controle), 25mg de FSHp (n=7, 25FSHp-D6), 12,5mg de EPE (n=7, EPE-D6) e 50 mg de FSHp (n=5, 50FSHp-D6). Usou-se a análise de variância de perfil, seguida do método de Tukey e para os dados de embriões/ovulação foi realizado o teste exato de Fisher (5% de significância). Os tratamentos com 25mg ou 50mg não promoveram aumento significativo no número de ovulações e de embriões recuperados, mas promoveu aumento no diâmetro máximo atingido por F3. O início do tratamento quando o maior folículo da onda induzida atingiu 20mm reduziu o tempo de tratamento. Conclui-se que os tratamentos com FSHp não promoveram resposta satisfatória e que o início do tratamento próximo ao desvio permitiu redução no tempo de tratamento. / Abstract: The present study aims to verify the ovulatory response and embrionary recover in mares treated at different moments with pFSH (Folltropin-V®), with different doses and in BH breeding mares. The follicular growth was daily accompanied and treatments (i.m. BID) were kept until major follicles reached 32mm, ovulation induction (2500 UI of hCH i.v.) was done when major follicles reached 35mm and embryo collection at D8. In experiment 1, 25mg of pFSH was tested in 28 mares for determination of the best moment for start of treatment after follicle ablation: 13mm (n=7, saline, control), 13mm (n=7, FSHp-F13) e 20mm (n=7, FSHp-F20); or in a previously determined cycle day: D6 (n=7, FSHp-D6). In experiment 2, 50mg of pFSH was tested in 17 mares when the largest follicle achieved 13mm (n=7, FSHp-13) and compared to a control grupo (n=10). In experiment 3, in 26 BH mares was initiated the following treatments beginning at D6: saline (n=7, control), 25mg of pFSH (n=7, 25FSHp-D6), 12,5mg of EPE (n=7, EPE-D6) e 50 mg of pFSH (n=5, 50FSHp-D6). For statistical analysis, Profile analysis followed by Tuckey method and, for embryo/ovulation, Fisher test were used (significance at 5%). Treatments with 25mg or 50mg did not promote a significative increase on ovulations and embryo recover, but increased maximum diameter of F3. The start of treatment when the largest follicle of an induced follicular wave achieved 20mm reduced time of treatment. It is concluded that pFSH treatment did not promote a satisfactory response and that beginning of treatment close to deviation allowed the reduction of treatment time. / Mestre

Orientador: Cesar Roberto Esper / Banca: Vênicio José de Andrade / Banca: Marcos Silva / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Vera Fernanda Martins Hossipian de Lima / Resumo: Pouco se sabe sobre os eventos morfológicos que ocorrem durante o desenvolvimento pré-natal das gônadas nas raças zebuinas. O objetivo deste estudo foi descrever os eventos morfológicos relacionados ao desenvolvimento pré-natal da gônada, incluindo a sua formação, identificação de células germinativas primordiais, surgimento de oogônios, oócitos e folículos em embriões e fetos da raça Nelore. Oitenta e um embriões e fetos bovinos, com idade variando de 26 a 240 dias após fecundação, foram coletados em frigoríficos. A idade dos fetos foi estimada a partir de medidas tomadas no sentido crânio-caudal e aplicadas à fórmula proposta por Rexroad et. al. (1974). O sexo foi identificado a partir de observações macroscópicas e usando a técnica do PCR (Polymerase Chain Reaction) somente quando as diferenças sexuais morfológicas não foram evidentes. Para histologia, as gônadas foram fixadas em líquido de Bouin por 24 horas. Após processamento histológico, cortes de tecido de 5mm, foram corados com hematoxilina-eosina. Os resultados mostraram que a crista gonádica se formou a partir de 29 dias após fecundação. No 34º dia, células germinativas primordiais foram identificadas. As oogônias surgiram em grande quantidade entre 50 e 100 dias e seu número reduziu drasticamente, atingindo números finais aos 140 dias. Os folículos primordiais, folículos em crescimento e antrais apareceram em média aos 95, 140 e 180 dias, respectivamente. Oogônias e folículos primordiais, de forma diferente dos folículos em crescimento, apresentaram diferenças significativas no seu diâmetro nos vários períodos estudados. Folículos antrais mostraram diâmetro médio de 96,92 l 31,07mm aos 180 dias , chegando atingir médias de1331,43 l 567,43mm aos 240 dias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Little is known about morphological events occurring during the prenatal development of gonads in the Zebu breeds. The objective of this study was to describe the morphologic events related to the prenatal development of the gonad, including its formation, identification of primordial germinative cells, appearance of oogonia, oocytes and follicles in Nelore breed embryos and fetuses. Eighty-one bovine embryos and fetuses, with age range from 26 to 240 days following fecundation, were gathered in a local slaughter-house. The age of fetuses was estimated from measures taken in the cranium-caudal direction and applied to the formula proposed by Rexroad et. al. (1974). The sex was identified from macroscopic observations and using PCR (Polymerase Chain Reaction) technique only when the morphologic sexual differences were not evident. For histology, gonads were fixed into Bouin fluid for 24 hours. Then, 5mm-tissue cuts were stained with hematoxylin-eosin. The results showed that the gonadal ridge was developed from 29 days following fecundation. At the 34th day, primordial germ cells were identified. Oogonia arose in great quantity between 50 and 100 days and its number reduced dramatically, attaining final numbers at 140 days. The primordial follicles, growing follicles and antral follicles appeared on the average at 95, 140 and 180 days, respectively. Oogonia and primordial follicles, in a different way from growing follicles, presented significant differences in its diameter in the several periods studied. Antral follicles showed 96.92 l 31.07mm in diameter at 180 days, achieving means of 1331.43 l 567.43 mm at 240 days. The statistical analysis showed a positive and highly significant correlation (P< 0.01), between the oogonia diameter and its nucleus, as well as between the primordial and growing follicles with its oocytes and respective nuclei... (Complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Doutor

Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: O processo de criopreservação afeta a capacidade funcional dos espermatozóides, diminuindo a fertilidade. Tendo conhecimento desses danos a diluição do sêmen é necessária antes de submetê-lo ao choque térmico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o sêmen bovino congelado com dois diferentes diluidores. O ejaculado de quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma delas submetida ao diluidor Tris e gema de ovo (A) e a outra ao diluidor à base de lecitina de soja (Andromed®) (B). Após a diluição o sêmen foi congelado e armazenado em nitrogênio líquido de acordo com os padrões pré-estabelecidos da central de inseminação artificial. No experimento I, cinco palhetas do diluidor A e B de cada touro foram descongeladas e avaliadas quanto à motilidade (análise subjetiva e computadorizada), vigor, concentração, morfologia espermática e teste de termo-resistência lento (TTL), avaliação da integridade de membranas por meio da associação das sondas Iodeto de Propídio (PI), Isotiocionato de Fluoresceína - Pisum sativum (FITC-PSA) e Carbocianina Catiônica Lipofílica (JC-1) e avaliação funcional da membrana plasmática através do teste hiposmótico (HIPO). A avaliação da integridade da cromatina foi realizada pelo método de coloração com laranja de acridina (LA). No experimento II, o sêmen congelado com os diferentes diluidores foi utilizado na fecundação in vitro (FIV), sendo observada as taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário in vitro. A análise estatística foi efetuada através dos testes de Análise de Variância (ANOVA), teste de Tukey e teste de Wilcoxon. Em relação aos resultados obtidos com os experimentos I e II não foi observado diferença estatística entre os diluidores testados, concluindo-se que o diluidor composto por lecitina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nowadays the embryo transfer is a biotechnology widely used, however not much is know about the best place to put embryos into the uterine horn ipsilateral to the corpus luteum (CL). In addition, not much is known about the morphological characteristics thorough the uterine horn and if it could improve or damage the uterine environment. The aims of this study were: to investigate the effect of the site of embryo placement (cranial, medial or caudal) into the uterine horn adjacent to the CL on pregnancy rates; to analyze the morphology from these tree portions of the both uterine horns adjacent and opposite to CL using histology and scanning electron microscopy; and establish the relation between pregnancy rates and morphofunctions characteristics to indicate the best place to transfer embryos. In this study 600 in vivo produced embryos (fresh and frozen-thawed) and 315 in vitro produced embryos were transferred to Holstein and crossbred recipients, in order. Nine crossbred heifers were slaughtered approximately seven days after estrus and the uterus were studied to analyze its morphology at the same time that the embryos have been transferred. The results showed that the site of embryo placement did not influence (P>0.05) the pregnancy rates in recipients receiving fresh embryos during summertime. During the winter, the pregnancy rates were greater (P<0.05) for fresh embryos transferred into the caudal portion of the uterus horn than cranial portion. For animals that received in vitro produced embryo, the site of embryo placement did not interfere (P>0.05) in the pregnancy rates. Morphophological characteristics observed by histology and scanning electron microscopy was similar in all parts of the uterine horn ipsilateral to the CL studied. However, the average number of blood vessels counted was lower in the contralateral uterine... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Luiz Fernando de Souza Rodrigues / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Foram realizados 20 programas de superovulação e colheita de embriões em ovelhas Santa Inês, com objetivo de testar a hipótese que a adição de LH ao final do protocolo de superovulação causa incremento nas taxas de ovulação e de produção de embriões. Para tanto, o experimento foi delineado em cross-over, sendo o estro sincronizado com CIDR™ por 14 dias. No D7, substituiu-se o implante por um novo, e administrou-se 37,5 μg de d-cloprostenol, IM. Para superestimulação, 256 mg de FSHp foram administradas em 8 doses decrescentes, iniciando no D12. No D14, as fêmeas receberam 200 UI de eCG e 37,5 μg de d-cloprostenol. No grupo controle (G-C) a taxa FSH/LH foi constante, enquanto no G-LH o protocolo preconizava o acrescido de 7,5 mg de LH, administrado 24 h após a retirada do implante (D15). As fêmeas foram inseminadas com sêmen congelado, por laparoscopia, as 42 e 48 h após a retirada do implante, concomitantemente, as estruturas ovarianas foram avaliadas. No D21, os embriões foram cirurgicamente colhidos e avaliados. Os resultados demonstraram que o LH administrado ao final do tratamento superovulatório não incrementou de maneira significativa a taxa de ovulação e o número de embriões viáveis (78,7% ± 22,72 e 3,77 ± 4,29, respectivamente, G-C; 84,75 ± 10,13 e 4,22 ± 5,19, G-LH). Quanto ao período das ovulações, observou-se grande distribuição nos grupos, sendo possivelmente correlacionado ao grande número de estruturas não fecundadas e embriões degenerados encontrados. A ausência de diferença estatística no número de corpos lúteos, de embriões recuperados e viáveis pode ser associada à grande variabilidade individual. / Abstract: Twenty superovulation programs and embryos recovery were accomplished in Santa Inês sheep, with objective to test the hypothesis that addition of LH at the end of the superovulatory regimen causes an increase in the ovulation rate and of embryos production. For so much, the experiment was delineated in cross-over, being the estrus synchronized with CIDR, for 14 days. On D7, the implant was substituted by a new one, and 37.5 μg of d-cloprostenol were administered. Then, 256 mg of FSHp were administered in 8 decreasing doses, starting on D12. On D14, all females received 200 IU of eCG and 37.5 μg of d-cloprostenol. In control group (G-C), the FSH/LH ratio was constant, while in G-LH 7.5 mg of LH, administered 24 h after implant withdrawal (D15). The laparoscopic inseminations occurred 42 and 48 h after implant withdrawal, concomitantly, the evaluated ovarian structures. On D21, the embryos were surgically collected and evaluated. Overall, the results showed that LH administration at the end of the FSH treatment did not significant increase the ovulation rate and number of viable embryos (78.7% ± 22.72 and 3.77 ± 4.29, respectively, G-C; 84.76 ± 10.14 and 4.22 ± 5.22, G-LH). For the period of the ovulations, a great distribution was observed inside of the groups, being correlated possibly to the great number of unfertilized oocytes and degenerated embryos. The no statistical difference in the number of corpus luteum, embryos recovery and viability can be associated the great individual variability. / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Camila Infantosi Vannucchi / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do benzoato de estradiol na prevenção de gestação em cadelas recém-acasaladas. Utilizou-se 24 fêmeas: GRUPO I (Experimental) - 12 cadelas que receberam uma única aplicação de benzoato de estradiol, dose de 0,2 mg/Kg, via intramuscular, entre o 2º e 7º dia da data da última cobertura. GRUPO II (Controle)- 12 cadelas que receberam solução oleosa diluente, dose de 0,2 ml/Kg, via intramuscular, entre os dias 2 e 7 da última data de cobertura. A ovariohisterectomia (OSH) foi realizada entre os dias 6 a 16 após a última cobertura e foram avaliadas: taxa de recuperação e degeneração ovocitária/ embrionária; viabilidade embrionária e a influência do fármaco sobre à migração, clivagem e implantação embrionária. Foi examinado, também, os efeitos do benzoato de estradiol no sistema hematológico após a utilização da droga. Para avaliação dos hemogramas foi realizado análise de variância -ANOVA (p< 0,05) para medidas repetidas e o teste de Tukey para os parâmetros hematológicos. Para as variáveis recuperação ovocitária e embrionária foi utilizado o coeficiente de correlação de Pearson; para migração embrionária e clivagem embrionária foi realizado o teste de qui-quadrado, na análise de viabilidade embrionária foi utilizado teste exato de Fisher e na análise da implantação foi utilizada análise descritiva dos dados. Todos os testes foram realizados a 5% de nível de significância. Obteve-se 03 embriões no grupo experimental e 52 no grupo controle; o benzoato de estradiol exerceu influencia sobre o número de estruturas recuperadas, porém não influenciou a migração, clivagem e a viabilidade embrionária quando utilizado até o 7°dia após a cobertura. Não foi detectada a presença de vesículas embrionárias implantadas em ambos os grupos, porém... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this experiment was to evaluate the effects of the estradiol benzoate on the prevention of pregnancy in mismantig dogs. For that, 24 bitches were divided, in: Experimental Group - 12 bitches that has received a single application of the estradiol benzoate (dose of 0,2 mg/Kg, intramuscular application), in a 2 to 7º days after the last mating. Control Group - 12 bitches received an oily solution (dose of 0,2 mL/Kg, intramuscular application) on the same period (between 2 to 7 days after the last mating). Ovariohysterectomy (OSH) has performed, between days 6 and 16 after the last mating and the parameters evaluated were the recovery rate and the embryonic/ oocytary degeneration rate and the influence of the drug on the migration, the viability, clivage and embryonic implantation. The effect of the estradiol benzoate on the hematologic system after the use of the drug was also investigate. For the oocytary and embryonic recovery variables the coefficient of Pearson correlation was used, in the analysis of the embryonic migration and embryonic clivage a qui-square test was carried qui-square test, in the analysis of embryonic viability were used the Fisher's exact test were used and in the analysis of the implantation descriptive analysis o was used. All the tests used 5% of significance level.Three embryos in the experimental group and 52 embryos in the control group were acquired; estradiol benzoate did practise influences on the number of structures recouvered, but, nor on the migration, clivage and embryonic viability, when used until the 7° day after the mating. There was no detection the presence of embryonic vesicles in both the groups, Apparently, OSHs were performed to soon for the detection of embryonic vesicle... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Elmo Gomes Diniz / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos separar os espermatozóides portadores do cromossomo X viáveis, dos portadores do Y, através de gradiente descontínuo de densidade de PercollTM. Utilizar esse sêmen na produção in vitro de embriões bovinos, substituindo o SFB pela BSA no cultivo. Congelar estes embriões pelo método da congelação lenta. Avaliar a criotolerância dos embriões do sexo feminino pela taxa de eclosão e a eficiência do gradiente pela técnica da PCR, que identificou o sexo dos embriões produzidos. Foram produzidos 133 embriões do tratamento sexado (embriões produzidos a partir de sêmen submetido ao gradiente de densidade de PercollTM) e 100 do tratamento controle (embriões produzidos de acordo com o protocolo utilizado no departamento de Reprodução Animal). Após congelação, descongelação e cultivo destes embriões apenas 8 eclodiram do tratamento sexado e também 8 do tratamento controle, a análise estatística deste resultado demonstrou que o sexo não influenciou na taxa de eclosão pós descongelação. Porém a análise estatística dos embriões produzidos com sêmen sexado e submetidos a PCR demonstrou que o gradiente de densidade de PercollTM foi eficaz na separação dos espermatozóides X viáveis em 62%. / Abstract: The present study had as purposes to separe X and Y sperm by PercollTM descontinuous density gradient. Use the semen on in vitro production bovine embryos, replacing the BFS for BSA on the culture. To freezing the embryos by the slow curve method. Evaluate the female embryos cryotolerance by eclosion rate and the gradient eficience by PCR technique that identify the embryos sex. 133 embryos were produced by the sexed treatment and 100 by control treatment. After freezing, unfreezing and culture of the embryos, only 8 ecloded of each treatment, the result statistics analyses showed that the sex had no influence on the eclosion rate after unfreeze. However the statistics analyses of the sexed semen produced embryos and submitted to PCR showed that the PercollTM density gradient was efficient on the viable X separation sperm in 62%. / Mestre