Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Gisele Mingoti / Banca: Cássia Orlandi / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o empacotamento da cromatina e morfometria da cabeça de espermatozoides criopreservados de touros Bos taurus indicus da raça Nelore de diferentes idades e a influência do grau de compactação da cromatina na produção in vitro de embriões (PIV). Foram utilizados 40 animais mantidos em centro de coleta e processamento de sêmen (CCPS) e distribuídos em três grupos: Grupo Jovens (entre 1,8 e 2 anos), Grupo Adultos (entre 3,5 e 7 anos) e Grupo Senis (entre 8 e 14,3 anos). Os ejaculados foram congelados de acordo com os padrões pré-estabelecidos do CCPS. Utilizou-se a coloração de azul de toluidina, que permite a avaliação simultânea da cromatina e morfometria da cabeça espermática, a cromomicina A3 (CMA3) para analisar a protaminação espermática e a PIV para o desenvolvimento embrionário. O azul de toluidina foi avaliado pela microscopia óptica e a CMA3 pelo citômetro de fluxo. Na PIV foram realizadas quatro repetições por grupo, com 25 a 30 oócitos em cada repetição. A análise seminal revelou que espermatozoides de touros jovens obtiveram maiores valores de área (A), perímetro (P) e largura (L) quando comparados a adultos e senis (Jovens: A=1848,5±119,79, P=10,23±0,29, L=1,95±0,1; Adultos: A=1672,9±104,46, P=9,86±0,33, L=1,81±0,06; Senis: A=1723,1±124,41, P=9,97±0,33, L=1,83±0,09; P<0,0001) e apresentaram maior deficiência de protaminação quando analisado pela CMA3 (Jovens: 1,57±0,76; Adultos: 1,09±0,63, Senis: 0,90±0,59; P<0,05). Da mesma forma, variáveis de tamanho (A, P, L) e protaminação espermática, avaliado pela CMA3, obtiveram correlação negativa com a idade e positiva com a elipsidade (P<0,05). Espermatozoides com anormalidades na cromatina obtiveram maior área quando comparado àqueles sem alteração de cromatina (P<0,0001). Não houve diferença significativa na PIV quando sêmen com maior e menor parcela de alteração de cromatina foi ... / Abstract: The aim of this study was to evaluate chromatin condensation and sperm head morphometry of cryopreserved semen samples from Bos taurus indicus bulls of different ages and the influence of the degree of chromatin condensation on in vitro embryo production (IVP). A total of 40 animals kept in an Artificial Insemination Centre were divided into three groups: Young Group (1.8 to 2 years), Adult Group (3.5 to 7 years) and Senile Group (8 to 14.3 years). The ejaculates were frozen in accordance with established standards of the Artificial Insemination Centre. The thawed semen samples were evaluated with toluidine blue, which analyzes the chromatin condensation and sperm head morphometry simultaneosly, chromomicin A3 (CMA3) to analyze the protamination and in vitro embryo production to analyze the embryonic development. The toluidine blue was evaluated by optical microscopy and the CMA3 by flow cytometry. Semen analyses revealed that spermatozoa of young bulls had higher values of area (A), perimeter (P) and width (W) when compared to adults and senile (Young: A = 1848.5 ± 119.79, P = 10. 23 ± 0.29, W = 1.95 ± 0.1; Adults: A = 1672.9 ± 104.46, P = 9.86 ± 0.33, W = 1.81 ± 0.06; Senile: A = 1723.1 ± 124.41, P = 9.97 ± 0.33, W = 1.83 ± 0.09; P<0.0001) and had higher protamination deficiency when analyzed with CMA3 (Young: 1.57 ± 0.76, Adults: 1.09 ± 0.63, Senile: 0.90 ± 0.59, P<0.05). Variable size (A, P, W) and sperm protamination evaluated by CMA3 showed negative correlation with age and a positive with ellipticity (P<0.05). Spermatozoa with abnormal chromatin obtained larger area when compared to those with normal chromatin (P<0.0001). There was no significant difference in IVP using semen with higher and lower altered chromatin condensation, evidencing that the proportion of spermatozoa with abnormal chromatin (4 to 16.15%) did not affect the embryonic development. Our results indicate that sperm head of young bulls are ... / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Cesar Roberto Esper / Banca: Marcos Brandão Dias Ferreira / Resumo: As biotecnologias da reprodução são utilizadas como uma alternativa para melhorar a eficiência reprodutiva e acelerar a produção de animais de alto valor zootécnico. Este estudo teve por objetivo avaliar a taxa de concepção de novilhas e vacas mestiças inseminadas com sêmen sexado e convencional (Experimento 1) e a taxa de concepção de novilhas e vacas mestiças submetidas a transferência de embriões produzidos in vivo (TE) e in vitro (PIVE) com sêmen sexado (Experimento 2). No experimento 1, sêmen sexado e convencional foram utilizados na inseminação de vacas (n=50) e novilhas (n=50) após 18-24 horas de observação de cio; no experimento 2 embriões produzidos in vitro (n=50) e in vivo (n=40) foram transferidos para vacas (n=45) e novilhas (n=45). Animais inseminados com sêmen sexado apresentaram taxa de concepção de 44% (11/25) para vacas e 52% (13/25) para novilhas e com sêmen convencional, a taxa de concepção foi de 72% (18/25) para vacas e 68% (17/25) para novilhas. A taxa de concepção obtida pela técnica de produção in vitro de embriões foi de 24% (6/25) para vacas e 28% (7/25) para novilhas e para os embriões produzidos in vivo foi de 45% (9/20) tanto para vacas como para novilhas. A técnica de IA com sêmen sexado apresentou diferença estatística (p<0,05) quando comparada com sêmen convencional, porém a categoria animal não teve diferença estatística (p>0,05) (Experimento 1). Não foi observada diferença estatística (p>0,05) entre a as técnicas de produção in vivo e in vitro de embriões nem entre a categoria animal. Os resultados indicam que o intervalo entre a observação de cio e inseminação de 18-24 horas mostrou-se eficaz na concepção tanto de vacas como de novilhas utilizando sêmen sexado ou convencional, no entanto para se aproximar aos resultados obtidos pelo sêmen convencional há necessidade de mais pesquisas para melhorar a taxa de concepção com sêmen sexado ... / Abstract: The reproduction biotechnologies are used as an alternative to improve reproductive efficiency and accelerate the production of animals of high performance zootechnical. This study aimed to evaluate the conception rate of heifers and cows crossbred inseminated with sexed semen and conventional (Experiment 1) and conception rate of heifers and cows crossbred receiving the transfer of embryos produced in vivo (TE) and in vitro (PIVE) with sexed semen (Experiment 2). In experiment 1, sexed and conventional semen were used for the insemination of cows (n = 50) and heifers (n = 50) after 18-24 hours of estrous observation; in experiment 2 embryos produced in vivo (n = 40) and in vitro (n = 50) were transferred to cows (n = 45) and heifers (n = 45). Animals inseminated with sexed semen showed conception rate from 44% (11/25) for cows and 52% (13/25) for heifers and with conventional semen, the conception rate was 72% (18/25) for cows and 68% (17/25) for heifers. The conception rate obtained by the technique of in vitro production of embryos was 24% (6/25) for cows and 28% (7/25) for heifers and for embryos produced in vivo was 45% (9/20) both for cows as for heifers. The technique of AI with sexed semen presented statistical difference (p <0.05) when compared with conventional semen, but animal category was not statistically different (p> 0.05) (Experiment 1). No statistical difference (p> 0.05) between the production techniques in vivo and in vitro embryo or between animal category was observed. The results indicate that the interval between estrous observation and insemination 18-24 hours was effective on conception of both cows and heifers using conventional and sexed sêmen, however to approximate of the results obtained by the conventional semen is no need to most research to improve conception rates with sexed semen (Experiment 1). Conception rates with embryos PIVE in heifers and cows recipients were lower than those produced in ... / Mestre

Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: O processo de criopreservação afeta a capacidade funcional dos espermatozóides, diminuindo a fertilidade. Tendo conhecimento desses danos a diluição do sêmen é necessária antes de submetê-lo ao choque térmico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o sêmen bovino congelado com dois diferentes diluidores. O ejaculado de quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma delas submetida ao diluidor Tris e gema de ovo (A) e a outra ao diluidor à base de lecitina de soja (Andromed®) (B). Após a diluição o sêmen foi congelado e armazenado em nitrogênio líquido de acordo com os padrões pré-estabelecidos da central de inseminação artificial. No experimento I, cinco palhetas do diluidor A e B de cada touro foram descongeladas e avaliadas quanto à motilidade (análise subjetiva e computadorizada), vigor, concentração, morfologia espermática e teste de termo-resistência lento (TTL), avaliação da integridade de membranas por meio da associação das sondas Iodeto de Propídio (PI), Isotiocionato de Fluoresceína - Pisum sativum (FITC-PSA) e Carbocianina Catiônica Lipofílica (JC-1) e avaliação funcional da membrana plasmática através do teste hiposmótico (HIPO). A avaliação da integridade da cromatina foi realizada pelo método de coloração com laranja de acridina (LA). No experimento II, o sêmen congelado com os diferentes diluidores foi utilizado na fecundação in vitro (FIV), sendo observada as taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário in vitro. A análise estatística foi efetuada através dos testes de Análise de Variância (ANOVA), teste de Tukey e teste de Wilcoxon. Em relação aos resultados obtidos com os experimentos I e II não foi observado diferença estatística entre os diluidores testados, concluindo-se que o diluidor composto por lecitina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nowadays the embryo transfer is a biotechnology widely used, however not much is know about the best place to put embryos into the uterine horn ipsilateral to the corpus luteum (CL). In addition, not much is known about the morphological characteristics thorough the uterine horn and if it could improve or damage the uterine environment. The aims of this study were: to investigate the effect of the site of embryo placement (cranial, medial or caudal) into the uterine horn adjacent to the CL on pregnancy rates; to analyze the morphology from these tree portions of the both uterine horns adjacent and opposite to CL using histology and scanning electron microscopy; and establish the relation between pregnancy rates and morphofunctions characteristics to indicate the best place to transfer embryos. In this study 600 in vivo produced embryos (fresh and frozen-thawed) and 315 in vitro produced embryos were transferred to Holstein and crossbred recipients, in order. Nine crossbred heifers were slaughtered approximately seven days after estrus and the uterus were studied to analyze its morphology at the same time that the embryos have been transferred. The results showed that the site of embryo placement did not influence (P>0.05) the pregnancy rates in recipients receiving fresh embryos during summertime. During the winter, the pregnancy rates were greater (P<0.05) for fresh embryos transferred into the caudal portion of the uterus horn than cranial portion. For animals that received in vitro produced embryo, the site of embryo placement did not interfere (P>0.05) in the pregnancy rates. Morphophological characteristics observed by histology and scanning electron microscopy was similar in all parts of the uterine horn ipsilateral to the CL studied. However, the average number of blood vessels counted was lower in the contralateral uterine... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre