O transplante autólogo de células-tronco hematopoéticas (TACTH) tem se mostrado mais eficaz como tratamento das formas graves da esclerose sistêmica (ES) do que a imunossupressão convencional (IS), porém os mecanismos imunológicos envolvidos com a resposta terapêutica não estão completamente elucidados. Células mononucleares do sangue periférico e soro/plasma foram coletados de 31 pacientes com ES antes e semestralmente, até 36 meses pós-transplante, e de 16 pacientes com ES não-transplantados tratados com IS. A função tímica foi avaliada por RT-qPCR dos valores de b- e signal joint (sj)-T-cell receptor excision circles (TREC), sendo a taxa de proliferação intratímica (n) calculada pela fórmula: n=LOG(sjTREC/bTREC)/LOG2. A história replicativa das células B e a função medular foram quantificadas pelos valores de coding-joint (Cj) e sj-kappa-deleting recombination excision circles (sjKREC) e a taxa de proliferação das células B no sangue periférico (N) foi calculada pela fórmula: N=LOG(Cj/sjKREC)/LOG2. O comprimento telomérico foi avaliado por RT-qPCR e estimado pela razão T/S (Telomere repeat copy number/Single-copy gene copy number). As células recém-emigradas do timo (RET) CD3+CD4+CD31+CD45RA+, T reguladoras (Tregs) CD4+CD25hiFoxP3+(GITR+/CTLA-4+), naïve CD19+CD27-IgD+, Bm2 CD19+CD38lowIgD+, B reguladoras (Bregs) CD19+CD24hiCD38hi, senescentes CD8+CD28- CD57+ e exaustas PD1+ foram quantificadas por citometria de fluxo. O TCR foi sequenciado por sequenciamento de nova geração e o perfil de citocinas séricas inflamatórias e pró- fibróticas foi avaliado por CBA-Flex e ELISA. Observamos que os valores de sjTREC e bTREC diminuíram aos 6 meses pós-TACTH, retornando a valores basais aos 12 meses, correlacionando com o número de RET e promovendo maior diversidade do TCR. Não houve mudança na taxa de divisão de timócitos. A contagem de Tregs aumentou aos 12 meses pósTACTH, correlacionando com valores de sjTREC e apresentando maior expressão de GITR e CTLA-4. A partir dos 12 meses, até o final do acompanhamento, os valores de sjKREC aumentaram, enquanto que os de Cj permaneceram estáveis, correlacionando com aumento da contagem de células B naïve e Bm2, e resultando em uma menor taxa de divisão de células B. Houve aumento de Bregs de 6 meses a um ano após o TACTH, cujos níveis correlacionaramse com aqueles de sjKREC, e apresentando maior produção de IL-10 mediante estímulo com CPG±CD40L do que antes do transplante. O comprimento telomérico diminuiu aos 6 meses pós-TACTH e correlacionou-se com níveis elevados de células senescentes que expressavam FoxP3, aliado a um aumento de expressão de PD1 pelas células T e redução dos níveis séricos de IL-6, IL-1b e proteína C reativa. Seis pacientes recaíram após o transplante, apresentando menor expressão de FoxP3, GITR e CTLA-4 pelas Tregs, diminuição da contagem de Breg e da diversidade do TCR. Adicionalmente, a remissão clínica foi associada a maior expressão de PD1 por células T e B e baixos níveis séricos de TGF-b, IL-6, IL-1b, IL-17A, MIP-1a, GCSF e IL-12. Portanto, o aumento de células T e B reguladoras geradas de novo pós-TACTH, associado à renovação do repertório de células T, alta expressão de PD1 e baixos níveis séricos de mediadores inflamatórios e prófibróticos, estão relacionadas com a resposta clínica dos pacientes com ES ao transplante. / Autologous hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) is more effective for patients with severe systemic sclerosis (SSc) than conventional immunosuppression (IS). However, the immunological mechanisms associated with the therapeutic efficacy of AHSCT are not fully elucidated. Peripheral blood mononuclear cells and serum/plasma were collected from 31 SSc patients before and semiannually, until 36 months post-transplant, and from 16 nontransplanted SSc patients treated with IS. Thymic function was measured by RT-qPCR quantification of ?- and signal joint (sj)-T-cell receptor excision circles (sjTREC) and intrathymic T-cell division (n) was calculated by the formula: n=LOG(sjTREC/?TREC)/LOG2. Bcell replication history and bone marrow function were assessed by coding-joint (Cj) and sjkappa-deleting recombination excision circles (sjKREC). B-cell divisions in the peripheral blood (N) were calculated by the formula: N=LOG(Cj/sjKREC)/LOG2. CD3+CD4+CD31+CD45RA+ recent thymic emigrants (RTE), CD4+CD25hiFoxP3+ (GITR+/CTLA-4+) regulatory T-cells (Tregs), CD19+CD27-IgD+ naïve B-cells, CD19+CD38lowIgD+ Bm2 B-cells, CD19+CD24hiCD38hi regulatory B-cells (Bregs), CD8+CD28-CD57+ senescent cells and PD1+ exhausted cells were quantified by FACS (fluorescence-activated cell sorting). The T-cell receptor (TCR) was sequenced by New Generation Sequencing and the profile of inflammatory and pro-fibrotic serum cytokines was evaluated by CBA-Flex (cytometric bead-array) and ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). sjTREC and ?TREC values decreased at 6 months post-AHSCT, returning to pretransplant values at 12 months, correlating with RTE counts and associated with higher diversity of the TCR. There was no change in thymocyte division rates. At 12 months postAHSCT, Treg counts increased and correlated with sjTREC values, presenting increased expression of GITR and CTLA-4 when compared to pre-transplant levels. From 12 months until the end of follow-up, sjKREC values increased, while those of Cj remained stable, correlating with increased counts of naïve and Bm2 B-cells, resulting in reduced rate of B-cell division. There was an increase of Breg frequency from 6-months until one-year after AHSCT, correlating with sjKREC values and presenting higher IL-10 production after stimulation with CPG±CD40L than before transplantation. Telomere length decreased at 6 months post-transplant and correlated with elevated levels of FoxP3-expressing senescent cells, together with increased expression of PD1 by T-cells and reduced serum IL-6, IL-1b and C-reactive protein levels. Six patients relapsed after transplantation, presenting lower expression of FoxP3, GITR, CTLA-4 by Tregs, decreased Breg counts and reduced TCR diversity. In addition, clinical remission was associated with increased PD1 expression by T and B cells and low serum levels of TGF-?, IL-6, IL-1, IL-17A, MIP-1, G-CSF and IL-12. Therefore, newly-generated regulatory T and B cells after AHSCT, associated with T-cell repertoire renewal, high PD1 expression and low serum levels of inflammatory and profibrotic mediators associate with clinical outcomes of SSc patients after AHSCT.

Esclerose sistêmica (ES) é uma doença autoimune caracterizada por fibrose cutânea associada a envolvimento visceral, levando a diminuição da capacidade física, limitação no desempenho das atividades de vida diária e prejuízo na qualidade de vida. O transplante autólogo de células-tronco hematopoéticas (TACTH) vem sendo estudado como uma alternativa terapêutica para pacientes com ES, proporcionando melhora do acometimento cutâneo e ao menos estabilização do quadro pulmonar. O objetivo deste estudo é avaliar o impacto do TACTH no acometimento da pele, capacidade funcional e qualidade de vida em pacientes com ES. Trata-se de um estudo longitudinal e prospectivo, conduzido no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto. Os pacientes com ES submetidos ao TACTH foram avaliados inicialmente, e reavaliados 6 e 12 meses após o tratamento. A avaliação consistiu dos seguintes itens: acometimento da pele, avaliado pelo escore modificado de Rodnan (mRSS), função pulmonar (capacidade vital forçada, CVF e capacidade de difusão do monóxido de carbono, DLCO), força muscular respiratória (pressão inspiratória máxima - PImáx, e pressão expiratória máxima - PEmáx), mobilidade tóraco-abdominal pela cirtometria, avaliação funcional dos membros superiores (força de preensão das mãos, amplitude de movimento pela goniometria, distância finger-to-palm - FTP, questionários Disabilities of the arm, shoulder and hands - DASH, e Cochin hand functional scale - CHFS), abertura oral, teste de caminhada de seis minutos (TC6) e questionário de qualidade de vida Medical Outcomes Study - 36 item short-form (SF-36). Vinte e sete pacientes com ES foram avaliados antes e 6 meses após o transplante, e 22 desses pacientes foram adicionalmente avaliados aos 12 meses pós-transplante. Quando comparadas com os valores iniciais, pré-transplante, observou-se melhora significativa das variáveis mRSS, PImáx, PEmáx, cirtometria, força de preensão das mãos dominante e não-dominante, amplitudes de movimento articulares, FTP das mãos dominante e não-dominante, DASH, CHFS, abertura oral, distância percorrida no TC6, domínios capacidade funcional, aspectos físicos, dor, estado geral de saúde, vitalidade, aspectos sociais e saúde mental do SF-36 e medidas sumárias de componentes físico e mental do SF-36, após o transplante. Houve estabilização da função pulmonar após o transplante. Houve correlação significativa entre o mRSS e medidas de amplitude de movimento de punho, entre a capacidade física avaliada pelo TC6 e o componente físico do SF-36 e entre o questionário DASH e o componente físico do SF-36. Em conclusão, o TACTH promove melhora significativa do acometimento da pele, da capacidade funcional e da qualidade de vida de pacientes com ES, até pelo menos 1 ano de seguimento após o transplante. Embora a função pulmonar tenha apenas se estabilizado, os pacientes apresentaram significativa melhora da capacidade física. / Systemic sclerosis (SSc) is an autoimune disease characterized by skin fibrosis, associated with internal organ involvement, leading to decreased physical capacity, limitations in daily life activities and impairment of quality of life. Autologous hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) has been studied as an alternative treatment for patients with severe SSc, and promotes improvement of skin involvement and, at least, pulmonary function stabilization. The aim of this study is to evaluate the impact of AHSCT in skin involvement, functional capacity and quality of life in SSc patients. This is a prospective and longitudinal study, conducted at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, University of São Paulo. SSc patients were evaluated before, and 6 and 12 months after transplant for skin involvement by modified Rodnan skin score (mRSS), pulmonary function (forced vital capacity, FVC, carbon monoxide diffusion capacity, DLCO), respiratory muscle strength (maximal inspiratory pressure - MIP, and maximal expiratory pressure - MEP), thoracoabdominal mobility by cirtometry, functional evaluation of upper limbs (hand grip strength, range of motion by goniometry, finger-to-palm distance - FTP, Disabilities of the arm, shoulder and hands questionnaire - DASH, and Cochin hand functional scale questionnaire - CHFS), mouth opening, six-minute walk test (6MWT) and quality of life by the Medical Outcomes Study - 36 item short-form (SF-36). Twenty-seven patients were evaluated before and at 6 months after transplant, 22 of which were additionally evaluated at 12 months after transplant. When compared to pre-transplant evaluations, patients presented significant improvement of mRSS, MIP, MEP, cirtometry, hand grip strength, range of motion measurement, FTP distance, DASH, COCHIN, mouth opening, distance in 6MWT, physical functioning, role-physical, bodily pain, general health, vitality, social functioning and mental health domains of SF-36, and summary measures of the SF-36 Physical Component score and Mental Component score after AHSCT. The pulmonary function stabilized after transplant. Significant correlations were observed between skin involvement and range of motion measures, physical capacity and quality of life, and DASH and quality of life. In conclusion, AHSCT significantly improves the functional status of SSc patients in the first year of follow-up. Although the pulmonary function remained stable after AHSCT, there was significant increase in the physical capacity of patients.

Objetivos: A FCL é um novo padrão de doença intersticial pulmonar idiopática associado ao refluxo gastro-esofágico. Nós investigamos sua presença na ES com envolvimento pulmonar. Métodos: 28 pacientes com ES foram submetidos à biópsia pulmonar a céu aberto. As amostras foram classificadas conforme o novo consenso de classificação das pneumonias intersticiais idiopáticas e de acordo com os critérios do padrão FCL. Tomografia computadorizada de alta resolução (TCAR) de tórax, prova de função pulmonar (PFP), esofagograma de contraste e/ou endoscopia digestiva alta também foram realizadas. Resultados: Na ES, o padrão NSIP (67,8%) e a FCL (75%) foram os padrões mais freqüentemente encontrados e na maioria dos casos, eles co-existiam. Todos, exceto um paciente com FCL tinha a característica distribuição broncocêntrica das lesões, sendo mais extensa nos casos com FCL isolada (p=0,001). Da mesma forma, o conteúdo basofílico foi mais freqüente nos pacientes com FCL e completamente ausente no grupo NSIP (p<0,001). Na TCAR, a distribuição central do envolvimento pulmonar foi o achado mais prevalente nos pacientes com FCL isolada (57,14%) contrastando com a 10 predominância do padrão periférico nos outros grupos (p=0,02). Além disso, uma tendência quanto à distribuição segmentar na TCAR foi observada no grupo com FCL isolada (85,71%) e FCL+NSIP (71,43%), enquanto que 80% dos pacientes com NSIP tinham uma distribuição difusa das lesões pulmonares (p=0,08). Anormalidades esofágicas foram um achado quase universal. Conclusão: Está é a primeira descrição de fibrose centrilobular em pacientes com ES e envolvimento pulmonar. Este padrão tem características histológicas e tomográficas distintas e a identificação deste subgrupo de pacientes irá certamente contribuir para uma melhor abordagem terapêutica. / Objectives: CLF is a new histological pattern of idiopathic ILD associated to esophageal reflux. We have investigated its presence in SSc with lung involvement. Methods: 28 SSc patients were submitted to open lung biopsy. The specimens were classified according to the new consensus classification of idiopathic interstitial pneumonia and to the diagnostic criteria for CLF. High Resolution Computer Tomography (HRCT), Pulmonary Function Tests (PFT), contrast esophagogram and/or upper digestive endoscopy were also performed. Main Results: In SSc, the NSIP (67.8%) and the centrilobular (75%) patterns were the most frequent and in the majority of the cases, they co-existed. All, except one patient with CLF had the characteristic bronchocentric distribution and this lesion was more extensive in those with isolated CLF (p=0.01). Likewise, the basophilic content was more frequent in patients with CLF and completely absent in NSIP group (p<0.001). The central distribution of lung involvement on HRCT was the most prevalent finding in patients with isolated CLF (57.14%) contrasting with the predominant peripheral pattern in the other groups (p=0.02). Moreover, a trend towards a patchy distribution on HRCT was observed for CLF group (85.71%) and CLF+NSIP group (71.43%) whereas 80% of the NSIP group had diffuse distribution (p=0.08). Esophageal abnormalities were almost a universal finding. Conclusions: This is the first report of centrilobular fibrosis in SSc patients with lung involvement. This new pattern has distinct histological and tomographic features. The identification of this subgroup of patients will certainly contribute for a more appropriate therapeutic approach.

Objetivos: A FCL é um novo padrão de doença intersticial pulmonar idiopática associado ao refluxo gastro-esofágico. Nós investigamos sua presença na ES com envolvimento pulmonar. Métodos: 28 pacientes com ES foram submetidos à biópsia pulmonar a céu aberto. As amostras foram classificadas conforme o novo consenso de classificação das pneumonias intersticiais idiopáticas e de acordo com os critérios do padrão FCL. Tomografia computadorizada de alta resolução (TCAR) de tórax, prova de função pulmonar (PFP), esofagograma de contraste e/ou endoscopia digestiva alta também foram realizadas. Resultados: Na ES, o padrão NSIP (67,8%) e a FCL (75%) foram os padrões mais freqüentemente encontrados e na maioria dos casos, eles co-existiam. Todos, exceto um paciente com FCL tinha a característica distribuição broncocêntrica das lesões, sendo mais extensa nos casos com FCL isolada (p=0,001). Da mesma forma, o conteúdo basofílico foi mais freqüente nos pacientes com FCL e completamente ausente no grupo NSIP (p<0,001). Na TCAR, a distribuição central do envolvimento pulmonar foi o achado mais prevalente nos pacientes com FCL isolada (57,14%) contrastando com a 10 predominância do padrão periférico nos outros grupos (p=0,02). Além disso, uma tendência quanto à distribuição segmentar na TCAR foi observada no grupo com FCL isolada (85,71%) e FCL+NSIP (71,43%), enquanto que 80% dos pacientes com NSIP tinham uma distribuição difusa das lesões pulmonares (p=0,08). Anormalidades esofágicas foram um achado quase universal. Conclusão: Está é a primeira descrição de fibrose centrilobular em pacientes com ES e envolvimento pulmonar. Este padrão tem características histológicas e tomográficas distintas e a identificação deste subgrupo de pacientes irá certamente contribuir para uma melhor abordagem terapêutica. / Objectives: CLF is a new histological pattern of idiopathic ILD associated to esophageal reflux. We have investigated its presence in SSc with lung involvement. Methods: 28 SSc patients were submitted to open lung biopsy. The specimens were classified according to the new consensus classification of idiopathic interstitial pneumonia and to the diagnostic criteria for CLF. High Resolution Computer Tomography (HRCT), Pulmonary Function Tests (PFT), contrast esophagogram and/or upper digestive endoscopy were also performed. Main Results: In SSc, the NSIP (67.8%) and the centrilobular (75%) patterns were the most frequent and in the majority of the cases, they co-existed. All, except one patient with CLF had the characteristic bronchocentric distribution and this lesion was more extensive in those with isolated CLF (p=0.01). Likewise, the basophilic content was more frequent in patients with CLF and completely absent in NSIP group (p<0.001). The central distribution of lung involvement on HRCT was the most prevalent finding in patients with isolated CLF (57.14%) contrasting with the predominant peripheral pattern in the other groups (p=0.02). Moreover, a trend towards a patchy distribution on HRCT was observed for CLF group (85.71%) and CLF+NSIP group (71.43%) whereas 80% of the NSIP group had diffuse distribution (p=0.08). Esophageal abnormalities were almost a universal finding. Conclusions: This is the first report of centrilobular fibrosis in SSc patients with lung involvement. This new pattern has distinct histological and tomographic features. The identification of this subgroup of patients will certainly contribute for a more appropriate therapeutic approach.