Made available in DSpace on 2019-03-30T00:18:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-01-04 / The antiphospholipid syndrome (APS) is characterized by thrombotic events and gestational loss of repetition and is considered the most common acquired thrombophilia. When it is not associated with any connective tissue disease it is said to be primary APS (PAPS). Although diferente mechanisms have been proposed to explain the state of hypercoagulability in APS, such as the induction of tissue factor expression by endothelial cells and monocytes, the precise pathogenesis of the disease remains unknown. In this study, using mass spectrometry, one of the most sensitive current proteomic techniques, allowing the large-scale study of the expression, location and structure profiles of different proteins of the organism, we evaluated on the plasma a pattern expressed protein of 14 patients with PAPS when compared to 17 controls, matched for age and sex. As a result, a pattern of 11 different proteins was detected in plasma from PAPS carriers over controls. Four proteins were related to pathophysiological mechanisms involved in the development of thrombosis: alpha-chain fibrinogen, gamma-chain fibrinogen, apolipoprotein C-III and ¿-1-glycoprotein-1. These proteins are functionally related to processes primarily associated with the induction of a pro-coagulant state, as well as autoimmune responses. The use of these proteins as biomarkers, may help the management of patients with PAPS, as it¿s a useful tool to identify the risk of developing thromboembolic complications. Future prospective studies should confirm these findings using a larger number of patients with APS. Keywords: mass spectrometry; biomarkers; antiphospholipid syndrome. / A síndrome antifosfolípide (SAF) é caracterizada por eventos trombóticos e perdas gestacionais de repetição e é considerada a trombofilia adquirida mais comum. Quando não está associada a alguma doença do tecido conectivo é dita como SAF primária (SAFP). Embora diferentes mecanismos tenham sido propostos para explicar o estado de hipercoagulabilidade na SAF, como a indução da expressão do fator tecidual por células endoteliais e monócitos, a fisiopatologia precisa da doença ainda não é totalmente conhecida. Nesse estudo, utilizando a espectrometria de massas, uma das técnicas proteômicas atuais mais sensíveis, que permite o estudo em grande escala dos perfis de expressão, localização e estrutura de diferentes proteínas do organismo, avaliamos o padrão de proteínas expressas no plasma de 14 pacientes portadores de SAFP comparados com o de 17 controles, pareados para idade e sexo. Como resultado, um padrão de 11 proteínas diferentes foi detectado no plasma de portadores de SAFP em relação aos controles. Quatro proteínas apresentaram relação com mecanismos fisiopatogênicos envolvidos no desenvolvimento da trombose: fibrinogênio de cadeia alfa, fibrinogênio de cadeia gama, apolipoproteína C-III e a ¿-1- glicoproteína-1. Essas proteínas estão relacionadas funcionalmente com processos principalmente associados à indução de um estado pró-coagulante, bem como respostas autoimunes. A utilização dessas proteínas como biomarcadores, pode auxiliar o manejo de pacientes com SAFP, por ser uma ferramenta útil para identificar o risco de desenvolver complicações tromboembólicas. Futuros estudos prospectivos devem confirmar esses achados utilizado um número maior de pacientes com SAFP. Palavras-chaves: espectrometria de massas; biomarcadores; síndrome antifosfolipídica.

MOREIRA, Cleane Gomes. Purificação, caracterização físico-química, estrutural e biológica de uma lectina de sementes de Canavalia villosa Benth. 2017. 84 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Coordenação PPGBiotec (ppgbiotec@ufc.br) on 2017-06-27T12:53:45Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_cgmoreira.pdf: 2444477 bytes, checksum: 2d95101645c5274785c72d6b9bf30aae (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-06-28T18:42:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_cgmoreira.pdf: 2444477 bytes, checksum: 2d95101645c5274785c72d6b9bf30aae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T18:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_cgmoreira.pdf: 2444477 bytes, checksum: 2d95101645c5274785c72d6b9bf30aae (MD5) Previous issue date: 2017 / Presenting important carbohydrate binding properties, lectins are proteins able to decipher the glycocode, and as such, they can be used in bioassays involving, for example, cell-cell communication and cell signaling, as well as protein targeting. In this study, a new mannosespecific lectin from Canavalia villosa seeds (Cvill) was isolated by a single affinity chromatography step in a Sephadex® G-50 column. SDS-PAGE showed the lectin to be composed of three bands, and similar to the other lectins of the subtribe Diocleinae, analysis by mass spectrometry indicated that the lectin C. villosa has three chains (α, β and γ) with masses of 25,647; 12,966 and 12,685 Da, respectively, similarly to the profile of ConA-like lectins specific to mannose. A two-dimensional electrophoresis analysis showed the presence of five isoforms and isoelectric point around pH 5.0. The lectin strongly agglutinated rabbit erythrocytes native and treated with proteolytic enzymes, and presented sugar specificity to α-methyl-D-mannoside and D-mannose, in addition to high stability within a broad range of pH (pH 5,0 a 7,0) and temperature (up to 70 °C). Partial sequence of the protein was obtained by MS-MALDI TOF/TOF covering approximately 41% of the sequence. The protein was crystallized by vapor diffusion method in the presence of α-methyl-D-mannoside. The lectin also showed average toxicity against artemia nauplii and induced paw edema and hypernociception in mice with the participation of the carbohydrate binding site. In tests on C6 lineage of Rattus norvegicus glioma cells, Cvill showed ability to reduce viability and changes in morphology in the cells tested. / Com importantes propriedades de ligação a carboidratos, lectinas são proteínas capazes de decifrar o glicocódigo e, como tal, podem ser utilizadas em bioensaios que envolvem, por exemplo, a comunicação célula-célula e sinalização celular, bem como o direcionamento de proteínas. Neste estudo, uma nova lectina específica a manose foi isolada de sementes de Canavalia villosa por um único passo de cromatografia de afinidade em coluna de Sephadex® G-50. SDS-PAGE mostrou que a lectina é composta de três bandas e a análise por espectrometria de massas indicou que a lectina de C. villosa possui três cadeias (α, β e γ) com massas de 25.647, 12.966 e 12.685 Da, respectivamente, similar ao perfil de lectinas ConAlike específicas a manose. A análise em eletroforese bidimensional mostrou a presença de cinco isoformas e ponto isoelétrico em torno de pH 5,0. A lectina aglutinou fortemente eritrócitos de coelho nativos e tratados com enzimas proteolíticas e foi inibida por D-manose e α-metil-D-manosídeo. A atividade hemaglutinante da Cvill é máxima nos pH 5,0 a 7,0, e estável até a temperatura de 70 °C. A sequência parcial da lectina foi obtida por MS-MALDI TOF/TOF com cobertura de aproximadamente 41% da sequência. A proteína foi cristalizada pelo método de difusão de vapor na presença do ligante α-metil-D-manosídeo. Essa lectina mostrou alta toxicidade contra náuplios de Artemia sp., induziu edema de pata e hipernocicepção em ratos com participação do sítio de ligação a carboidratos e mostrou efeitos citotóxicos em células de glioma da linhagem C6 com uma potente atividade na redução da viabilidade celular e alteração na morfologia celular.

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Maria Teresa de Alvarenga Freire / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-16T23:01:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dutra_CamilaBraga_D.pdf: 1974104 bytes, checksum: 7a0aae96f3654e27fb7d553ee756e522 (MD5) Previous issue date: 2010 / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-09-05T12:00:46Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3937791 bytes, checksum: fbf678d9dc4659707796320f30ad3bce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T12:00:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3937791 bytes, checksum: fbf678d9dc4659707796320f30ad3bce (MD5) Previous issue date: 2017-07-25 / Stingless bees are producing honey with unique and high-value features; nonetheless, information about the volatile and sensorial profile of honeys produced by Melipona ssp. are scarce. This study aimed to characterize Monofloral honeys produced from flora / fauna of the northeastern semiarid region in order to determine potential chemical and sensorial markers (volatile compounds) to assist in attesting the authenticity of these honeys, which consequently contribute to the enhancement of melipoliculture activity. The samples, a total of twelve honeys, were produced by Jandaira species (Melipona subnitida Ducke) and uruçu (M. scutellaris Latrelle) and were collected in four different meliponaries, located in the region of Seridó, state of Rio Grande do Norte, and in the Agreste region, in the state of Paraiba. Through melissopalinological analysis, the samples were classified as Monofloral honeys of Juazeiro (Ziziphus joazeiro Mart.), velame branco (Croton heliotropiifolius Kunth), jurema branca (Mimosa arenosa willd poir), chanana (Turnera subulata L.), malicia (Mimosa quadrivalvis L.), angico (Anadenanthera colubrina) and algaroba (Prosopis juliflora Sw). The research initially involved the study of optimal conditions of Solid Phase Microextraction (SPME) technique for the extraction of volatile compounds of Monofloral honeys. Subsequently, honeys were evaluated by applying three analytical techniques: SPME applied to volatile analysis by GC-MS (HS-SPME-GC-MS), Quantitative Descriptive Analysis (QDA) and Gas Chromatography Olfactometry (GC-O). The optimization studies of SPME technique / GC / MS indicated the following optimized conditions: 15 minute equilibration time, 45 minutes extraction time and 45 ° C extraction temperature. A total of 161 volatile compounds, 13 belonging to chemical classes were identified in 12 samples evaluated. The profile of volatile compounds played an important role in determining floral source of honey, since the results suggest the existence of differentiators compounds and potential markers related to evaluated botanical sources. As an example, linalool to honeys from malicia, D-sylvestrene for honeys from chanana, rose-oxide for mesquite honey and benzeneethanol for angico honey. Honeys made from the blossoms from Juazeiro were sensorially sweeter, with aroma and flavor of more intense caramel. These honeys also showed a more characteristic flavor of honey, which can be associated with benzaldehyde compounds and benzene acetaldehyde. Honeys made from the velame branco flowerings were more acidic and less sweet, and were the only ones who showed volatile methyl eugenol in its composition, considered a character impact compound. Honeys from jurema branca showed higher aroma of beeswax; furthermore, compounds hexanol, limonene, α-farnesene and δ-cardinene may have contributed to generate the herbaceous aromas perceived with higher intensity in honeys produced in this bloom. Through olfactometry technique, it was found that chemical compounds pentanoate acetate, methyl eugenol, safranal and β-damascenone volatiles had a greater odor impact in white velame honey prepared by uruçu bee. It is emphasized that, in relation to the sensorial profile and volatile profile, statistically significant differences were observed (p ≤ 0.05) among honeys produced by different bees from the same botanical origin. In this context, the results show the strong influence of flowering in the volatile and sensory profile of monofloral honeys analyzed, representing an important contribution to knowledge related to aroma and flavor chemistry of this type of honey. Moreover, these are new results, which may be used in screening and evaluation of honey conformity, adding value to the product and the region, as well as help define marketing strategies and preservation of local culture and identity. / As abelhas sem ferrão são produtoras de méis com características únicas e elevado valor comercial; no entanto, informações acerca do perfil volátil e sensorial dos méis produzidos por Melipona ssp. são escassas. O presente estudo teve como objetivo caracterizar méis monoflorais produzidos a partir da flora/fauna da região semiárida nordestina, a fim de determinar potenciais marcadores químicos (compostos voláteis) e sensoriais que auxiliem na comprovação da autenticidade destes méis, o que consequentemente contribuirá para a valorização da atividade melicultora. As amostras, em um total de doze méis, foram produzidas pelas espécies jandaíra (Melípona subnitida Ducke) e uruçu (Melipona scutellaris Latrelle), tendo sido coletadas em quatro meliponários distintos, situados na região do Seridó do Estado do Rio Grande do Norte, e na região do Agreste do Estado da Paraíba. Através da análise melissopalinológica, as amostras coletadas foram classificadas como méis monoflorais de juazeiro (Ziziphus joazeiro Mart.), velame branco (Croton heliotropiifolius Kunth), jurema branca (Mimosa arenosa willd poir), chanana (Turnera subulata L.), malícia (Mimosa quadrivalvis L.), angico (Anadenanthera colubrina) e algaroba (Prosopis juliflora Sw). A pesquisa inicialmente envolveu o estudo das condições ótimas da técnica de Micro Extração em Fase Sólida (MEFS) para extração de compostos voláteis dos méis monoflorais. Posteriormente, os méis foram avaliados aplicando-se três técnicas analíticas: MEFS aplicada à análise de voláteis por CG-EM (HS-MEFS-CG-EM), Análise Quantitativa Descritiva (ADQ) e Cromatografia Gasosa Olfatometria (CG-O). Os estudos de otimização da técnica de MEFS/CG/EM indicaram as seguintes condições otimizadas: tempo de equilíbrio de 15 minutos, tempo de extração de 45 minutos e temperatura de extração de 45 °C. Um total de 161 compostos voláteis, pertencentes a 13 classes químicas, foi identificado nos doze méis avaliados. O perfil de compostos voláteis desempenhou um papel importante na determinação da origem floral do mel, uma vez que os resultados encontrados sugerem a existência de compostos diferenciadores e potenciais marcadores referentes às fontes botânicas avaliadas. Como exemplo, citam-se o linalol para méis de malícia, o D-silvestreno para méis de chanana, rose-oxide para mel de algaroba e o benzenoetanol para o mel de angico. Os méis elaborados a partir das floradas de juazeiro foram sensorialmente mais doces, apresentando aroma e sabor de caramelo mais intenso. Esses méis também apresentaram um aroma mais característico de mel, que pode estar associado aos compostos benzaldeído e benzenoacetaldeído. Os méis elaborados a partir das floradas de velame branco foram mais ácidos e menos doces, sendo os únicos que apresentaram em sua composição o volátil metil eugenol, considerado um character impact compound. Os méis de jurema branca apresentaram maior aroma de cera de abelha; além disso, os compostos hexanol, limoneno, α-farneseno e δ-cardineno podem ter contribuído para gerar os aromas herbáceos percebidos com maior intensidade nos méis produzidos nessa florada. Através da técnica olfatométrica, detectou-se que os compostos químicos - pentanoato de etila, metil eugenol, safranal e β-damascenona - foram os voláteis que tiveram maior impacto odorífero no mel de velame branco elaborado pela abelha uruçu. Enfatiza-se que, em relação ao perfil sensorial e ao de voláteis, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas (p ≤ 0,05) entre os méis produzidos por abelhas diferentes a partir da mesma origem botânica. Neste contexto, os resultados evidenciam a forte influência da florada no perfil volátil e sensorial dos méis monoflorais analisados, representando uma contribuição importante para o conhecimento relacionado à química de aroma e sabor desse tipo de mel. Ademais, estes são resultados inéditos, que poderão ser utilizados na avaliação da conformidade do mel, agregando valor ao produto e à região, além 9 de contribuir para definir estratégias de comercialização e preservação da cultura e da identidade locais.

Orientador: Marcelo Alexandre Prado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T09:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MirandaeSilva_LigiaMaria_M.pdf: 148256 bytes, checksum: 789cac2002bb2e8dcb1bf70832d395b6 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O crescente aumento populacional em escala mundial, tornou necessário um grande esforço por parte da agricultura para aumentar, a cada ano, a produção de alimentos para atender as necessidades do mercado externo e interno do Brasil. Recursos técnicos e científicos passaram então, a serem aplicados em busca da melhoria na produção dos cultivos,principalmente mediante o uso de fertilizantes e praguicidas. Com isso, a sociedade se deparou com problemas de ordem de equilíbrio ambiental e saúde pública, pois devido à contínua diversificação dos fitoparasitas, surgem, a todo momento, reduções do período de tempo entre aplicações consecutivas, e mais importante talvez, usos de doses mais altas e emprego simultâneo de diferentes pesticidas, por parte dos agricultores, objetivando complementar ações específicas ou alcançar efeitos sinérgicos para maiores rendimentos na produção. Tal situação traz como conseqüência óbvia e direta, o aumento, inaceitável, dos riscos de contaminação do meio ambiente com resíduos químicos de defensívos da área agropecuarista prejudiciais à saúde, o que leva a inúmeros problemas relativos à segurança alimentar dos produtos consumidos, e à uma preocupação de âmbito nacional evidenciada pela criação do Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em alimentos (PARA) da ANVISA. O aumento na necessidade de detecção e quantificação destes compostos, acarretou o desenvolvimento de pesquisas no setor, a fim de atingir uma melhoria na eficiência,qualidade e rapidez de resposta nas análises. A possibilidade do estudo de não apenas um de cada vez, mas de até 300 compostos sendo extraídos, detectados e quantificados simultâneamente se tornou a saída mais viável, tanto qualitativa quanto economicamente, facilitando o monitoramento contínuo do fornecimento de produtos do setor alimentício pelos chamados métodos multiresíduos. O presentre trabalho teve como princípio a validação de um método multiresíduo para análise de 14 analitos usando uma técnica de alto poder de concentração e limpeza do extrato como o GPC (Gel Permeation Chromatography) e detecção e quantificação por GC-MS/MS e LC-MS/MS. Os pesticidas investigados englobam classes como: acaricidas, inseticidas, fungicidas, nematicidas e formicidas de aplicação foliar, em sementes ou em solo, sendo que o acefato, metamidofós, acetamiprido e o thiamethoxan foram extraídos de amostras de batata e feijão e analisados por LC-MS/MS e a azoxistrobina, bifentrina, carbofuran, chlorotalonil, clorpirifós, clorfenapir, etofenprox, famoxadone,metalaxil, procimidone e o tebuconazole em amostras de batata e tomate e analisados por GCMS/MS. Os limites de detecção (LD) encontrados variaram de 0,06 a 2,89µg/L, e os coeficientes de variação (CV), de 0,036 a 2,036%. As recuperações foram determinadas em cada tipo de amostras, e os valores encontrados estavam entre 93,34% e 109,67%. Nenhuma das matrizes utilizadas apresentaram resultados insatisfatórios e o método utilizado mostrouse robusto e de fácil aplicação para todos os analitos testados / Abstract: The growing population worldwide, has required a great effort on the part of agriculture to increase each year, the production of food to meet the needs of external and internal market of Brazil. Technical and scientific resources spent then, to be applied in pursuit of improved crop production, mainly through the use of fertilizers and pesticides.With this, the company encountered problems in the balance of environmental and public health, since due to the continuous diversification of plant parasites, arise at any moment,reductions in the time period between consecutive applications, and perhaps most important,uses more doses high and simultaneous use of different pesticides by farmers, aiming to complete specific actions or to achieve synergistic effects in producing higher yields. This situation brings obvious and direct consequence, the increase unacceptable risk of environmental contamination with chemical residues from pesticides in farms are harmful to health, which leads to numerous problems relating to food safety of the products consumed, and to a concern nationwide evidenced by the creation of the Program Analysis of Pesticide Residues in Food (TO) of ANVISA. The increase in the necessity for detection and quantification of these compounds, led the development of research in the sector in order to achieve an improvement in efficiency, quality and responsiveness in the analyzes. The possibility of studying not just one at a time, but up to 300 compounds being extracted,detected and quantified simultaneously output became more viable, both qualitatively and economically, facilitating continuous monitoring of the supply of products by the food industry called methods multiresidue. The principle presentre work was the validation of a multiresidue method for analysis of 14 analytes using a technique of high power concentration and cleanup of the extract as GPC (Gel Permeation Chromatography) and detection and quantification by GC-MS/MS and LC- MS / MS. The pesticides investigated include classes such as acaricides, insecticides, fungicides, insecticides and nematicides foliar, seed or soil,and acephate, methamidophos, and Acetamiprid thiamethoxan were extracted from samples of potatoes and beans and analyzed by LC-MS / MS and azoxystrobin, bifenthrin, carbofuran,chlorothalonil, chlorpyrifos, chlorfenapyr, etofenprox, famoxadone, metalaxyl, procymidone and tebuconazole in samples of potato and tomato and analyzed by GC-MS/MS. The limits of detection (LOD) ranged from 0.06 to 2.89 mg / L, and the coefficients of variation (CV), 0.036 to 2.036%. The recoveries were determined for each type of samples, and the values were between 93.34% and 109.67%. None of the arrays used had unsatisfactory results and method proved to be robust and easy to apply for all analytes tested / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos