CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / A hemorragia subaracnÃidea (HSA) pode advir de diversos agravos ao sistema nervoso central. A HSA pode aumentar a pressÃo intracraniana (PIC) a patamares de grande morbidade. AlÃm de sintomas neurolÃgicos e cardiovasculares, bem descritos na literatura; sintomas gastrintestinais como nÃuseas, vÃmitos e gastrenterites sÃo comuns, mas pouco estudados. O retardo do esvaziamento gÃstrico (EG) à uma das alteraÃÃes fisiolÃgicas encontrada em pacientes com hipertensÃo intracraniana (HIC). Tal distÃrbio reduz as respostas terapÃuticas tendo em vista a reduÃÃo na absorÃÃo dos nutrientes e fÃrmacos, alÃm de levar à aspiraÃÃo pulmonar, que pode levar a Ãbito. Avaliamos o efeito da HSA sobre as alteraÃÃes da motilidade gastrintestinal (Esvaziamento GÃstrico - EG; TrÃnsito Intestinal â TI e ComplacÃncia GÃstrica â CG), dos parÃmetros hemodinÃmicos (PressÃo Arterial MÃdia â PAM, FreqÃÃncia CardÃaca - FC) e sobre a PIC. Bem como os mecanismos neuro-humorais relacionados a essas alteraÃÃes. Utilizamos ratos Wistar (300-350g, N=113), sob auspÃcios do COBEA (CEUA/UFC- Protocolo 41/13). ApÃs anestesia (Ketamina/Xilasina 20-10mg/Kg-IP), os animais foram contidos por estereotÃxico sendo injetados 0,1; 0,2 ou 0,3ml na cisterna magna (sangue autÃlogo â grupo HSA ou Liquor sÃmile â grupo Sham). No momento da induÃÃo da HSA os animais foram submetidos à canulaÃÃo dos ventrÃculos laterais para monitoraÃÃo da PIC e dos vasos femorais Direito a fim de se obter dados hemodinÃmicos. ApÃs 72h da induÃÃo, e sob jejum (24h) com soluÃÃo de reidrataÃÃo oral ad libitum, procedemos aos estudos de EG, TI e CG. Para determinaÃÃo da taxa de EG, uma refeiÃÃo teste (1ml/100g) (vermelho-fenol 0,5mg/ml em glicose-5%) foi administrada via gavagem. Jà o TI foi determinado com administraÃÃo direta da refeiÃÃo no duodeno por meio de cÃnula previamente implantada. Jà a CG foi avaliada utilizando um sistema de barostato a 4, 8 e 12 cm de pressÃo de distensÃo gÃstrica. A PA, FC e PIC foram aferidas no momento da avaliaÃÃo da motilidade gastrintestinal. Os dados, mÃdiaÂEPM, foram analisados pelo teste âtâ de Student (P<0,05). A HSA retardou o EG (38,90Â2,73 vs 47,00Â0,72%; 52,85Â5,14 vs 31,12Â2,0% ou 22,89Â4,46 vs 46,24Â3,56%) e aumentou a PIC (3,33Â0,47 vs 16,10Â0,47cmH2O; 7,68Â0,650 vs 30,86Â0,82cmH2O ou 17,50Â1,29 vs 37,90Â1,38cmH2O) nos diferentes volumes de sangue, seja 0,1; 0,2 ou 0,3ml respectivamente, quando comparados ao controle. A HSA tambÃm promoveu retarde no TI e diminuiÃÃo da CG, aumento da PA e diminuiÃÃo da FC. A vagotomia subdiafragmÃtica, a esplancnotomia e o prÃ-tratamento com guanetidina reverteram o efeito da HSA sobre as alteraÃÃes do EG. Os resultados sugerem que os agravos gastrintestinais advindos da HSA refletem um padrÃo de dismotilidade secundÃrios a HIC, mostrando uma forte correlaÃÃo com os valores de PIC / Subarachnoid hemorrhage (SAH) can arise from various types of damage to the central nervous system. The HSA can increase intracranial pressure (ICP) to levels high morbidity. In addition to neurological and cardiovascular symptoms, well described in the literature; gastrointestinal symptoms such as nausea, vomiting and gastroenteritis are common but little studied. The delay gastric emptying (GE) is one of the physiological changes found in patients with intracranial hypertension (ICH). This disorder reduces therapeutic responses with a view to reducing the absorption of nutrients and drugs, and lead to lung aspiration, which can lead to death. We evaluated the effect of HSA on gastrointestinal motility disorders (Gastric Emptying - EG; Intestinal Transit â IT or Gastric Compliance - CG), hemodynamic parameters (Mean Arterial Pressure - MAP, Heart Rate - HR) and the PIC. As well as neurohumoral mechanisms related to these changes. We used Wistar rats (300 - 350g, N=113) under the auspices COBEA (CEUA/UFC- Protocol 41/13). After anesthesia (Ketamine/Xylazine 20-10mg/Kg-IP), the animals were restrained by stereotactic aparatus being injected 0.1, 0.2 or 0.3 ml in the cisterna magna (autologous blood - HSA group or Liquor simile - Control group). At the time of induction of HSA, the animals were subjected to cannulation of the lateral ventricles for measurement of ICP and rigth femoral vessels in order to obtain the hemodynamic data. After 72h of induction, and fasted (24h) animals with oral rehydration solution ad libitum, proceeded studies EG, IT and CG. To determine the rate of GE a test meal (1ml/100g - phenol red - 0.5 mg/ml in 5 % glucose) was administered by gavage. The IT was already determined on direct administration of the meal into the duodenum through previously implanted cannula. Since the CG was evaluated using a barostat system at 4, 8 and 12 cm of gastric pressure distension. The MAP, HR and ICP were measured when assessing gastrointestinal motility. Data, mean  SEM, were analyzed by the "t" Student test (p<0.05). The HSA delayed gastric emptying (38.90  2.73 vs 47.00  0.72 %; 52.85  5.14 vs 31.12  2.0 % and 22.89  4.46 vs 46,24  3.56 % ) and increased the ICP (3.33  0.47 vs 16.10  0.47 cmH2O; 7.68  0.650 vs 30.86Â0.82 cmH2O and 17.50  1.29 vs 37.90  1.38 cmH2O ) in different volumes of blood, either 0.1, 0.2 or 0.3 ml, respectively, when compared to control. The HSA also promoted delay in IT and GC, increased BP and decreased HR. The subdiaphragmatic vagotomy, the esplancnotomia and pretreatment with guanethidine reversed the effect of HSA on changes in EG. The results suggest that the SAH arising gastrointestinal diseases reflect a pattern of secondary gut dysmotility, showing a strong correlation with the values of ICP

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / INTRODUÃÃO: Recentemente, foi demonstrado que o H2S està envolvido em inÃmeras funÃÃes fisiolÃgicas e patolÃgicas, sendo produzido em muitos tecidos de mamÃferos. OBJETIVOS: Avaliar o papel do H2S na defesa da mucosa e no controle da motilidade gÃstrica em camundongos, bem como estudar a participaÃÃo dos canais de KATP, dos neurÃnios sensoriais sensÃveis à capsaicina e dos receptores TRPV1 neste efeito. MÃTODOS: Camundongos Swiss foram prÃ-tratados com L-cisteÃna (25, 50 ou 100 mg/kg, v.o), NaHS (75, 150 ou 300 Âmol/kg, v.o) ou LawessonÂs (3, 9, 27 ou 81 Âmol/kg, v.o). Trinta minutos depois, o etanol 50% (0,5ml/25g, v.o) foi administrado. Depois de 1 h, os animais foram sacrificados e os estÃmagos abertos para determinaÃÃo da Ãrea da lesÃo usando planimetria computadorizada. AlÃm disso, fragmentos de tecidos foram removidos para anÃlise microscÃpica e dosagem de glutationa e malondialdeÃdo. Para o estudo do esvaziamento gÃstrico, outro grupo experimental foi tratado, por gavagem, com as mesmas doses de L-cisteÃna, NaHS ou LawessonÂs, decorridos 30 min os animais receberam uma soluÃÃo glicosada (5%) contendo vermelho de fenol (0,75 mg/ml) em cada animal. ApÃs 10, 20 ou 30 min os animais foram sacrificados e o esvaziamento gÃstrico foi avaliado por tÃcnica de espectrofotometria. Em outro grupo experimental os animais foram prÃ-tratados com glibenclamida (3 e 10 mg/Kg, v.o.) ou capsazepina (10 mg/kg, i.p). ApÃs 1h, foram administrados a L-cisteÃna (50 mg/kg) ou os doadores de H2S (NaHS 150 Âmol/kg ou o reagente de LawessonÂs 27Âmol/kg, v.o). Trinta minutos depois, o etanol 50% foi administrado para avaliaÃÃo da lesÃo gÃstrica e soluÃÃo de vermelho de fenol foi administrada para avaliar o esvaziamento gÃstrico conforme descrito anteriormente. Para o estudo dos neurÃnios aferentes, foi realizado protocolo de ablaÃÃo dos com doses neurotÃxicas de capsaicina. ApÃs 8 dias, os animais receberam NaHS ou o LawessonÂs e o protocolo de lesÃo gÃstrica por etanol 50% foi determinado como descrito acima. TambÃm foi determinado a contratilidade espontÃnea do fundo gÃstrico incubado com doses crescentes de NaHS ou KCl (controle) utilizando um transdutor de forÃa isomÃtrico acoplado a um sistema de aquisiÃÃo de dados. RESULTADOS: A administraÃÃo de L-cisteÃna, NaHS ou Reagente de LawessonÂs preveniu, de forma dose dependente, a lesÃo por etanol no estÃmago. Essa proteÃÃo foi acompanhada do aumento de GSH e diminuiÃÃo dos nÃveis gÃstricos de MDA quando comparado com o grupo tratado apenas com etanol. Glibenclamida (10 mg/kg) e a capsazepina reverteram completamente esse efeito protetor dos doadores de H2S. Nos animais depletados de neurÃnios aferentes, tambÃm houve uma reversÃo do efeito protetor dos doadores de H2S e da L-cisteÃna. O NaHS, o LawessonÂs e a L-cisteÃna promoveram aceleraÃÃo do esvaziamento gÃstrico quando comparado com o controle, de maneira dose dependente. Este efeito procÃnÃtico foi abolido pela prÃ-administraÃÃo de glibenclamida e capsazepina O NaHS tambÃm foi capaz de induzir um aumento no tÃnus basal que iniciou-se com mÃximo efeito na concentraÃÃo de 300 ÂM em relaÃÃo à contraÃÃo controle de KCl. CONCLUSÃES: o H2S preveniu a lesÃo gÃstrica, o consumo de GSH e aumento da peroxidaÃÃo lipÃdica na mucosa gÃstrica, induzidos pela administraÃÃo de etanol em camundongos. O H2S tambÃm apresentou efeito procinÃtico, acelerando o esvaziamento gÃstrico de lÃquidos em camundongos. Podemos inferir que esses efeitos devem-se a ativaÃÃo dos canais de KATP, dos neurÃnios sensoriais sensÃveis à capsaicina e dos receptores TRPV1. / INTRODUCTION: Recently, the involvement of H2S has been demonstrated in several physiological and pathological conditions, being constitutively produced in mammalian tissues. AIM: To study the role of H2S on both the gastric mucosa defense and the control of gastric motility in mice, and additionally to evaluate the participation of KATP channels, capsaicin-sensitive afferent neurons and TRPV1 receptors in these effects. METHODS: Swiss mice were pre-treated with either L-cysteine (25, 50 or 100 mg/kg, p.o), NaHS (75, 150 or 300 Âmol/kg, p.o) or LawessonÂs reagent (3, 9, 27 or 81 Âmol/kg, p.o). The animals were then given ethanol 50% (0.5ml/25g, p.o.) 30 min later. After 1h of ethanol instillation, the mice were sacrificed and had the stomach collected to measure the injured area through planimetry software. Moreover some samples were obtained to histopathological analysis, glutathione (GSH), and malonyldialdehyde (MDA) dosages. In the study of gastric empty, the animals were administered L-cysteine, NaHS or LawessonÂs reagent, and 30 min later a phenol red solution (0.75 mg/ml) diluted in glucose (5%) was also given. The sacrifice was performed 10, 20 or 30 min after the latter to determine in a spectrophotometer the gastric empty. In another experimental setting, glibenclamide (3 or 10 mg/Kg, v.o.) or capsazepine (10 mg/kg, i.p) were injected 1h previously to the L-cysteine (50 mg/kg, p.o) or H2S donors (NaHS 150 Âmol/kg or LawessonÂs reagent 27Âmol/kg, p.o) instillation. In order to study the role of capsaicin-sensitive afferent neurons, high neurotoxic doses of capsaicin was instilled into the animals. On the 8th day post capsaicin injection, NaHS or LawessonÂs reagent was administered. The protocol for ethanol administration, sacrifice, and dosages were repeated for these conditions as described previously. Finally, the spontaneous contraction of isolated gastric fundus to KCl (control contraction) and growing doses of NaHS was determined in vitro through and isometric force transducer connected to an acquisition system. RESULTS: L-cysteine, NaHS and LawessonÂs reagent prevented, in a dose dependent manner, the ethanol-induced gastric injury. Besides, high and low levels of GSH and MDA were found respectively in comparison to the control group given only ethanol. Glibenclamide (10 mg/kg) and capsazepine completely reversed the protective effect of the H2S donors. The animals that undergone afferent neuronal ablation also developed gastric lesions despite the injection of L-cysteine and H2S donors. NaHS, LawessonÂs reagent and L-cysteine all accelerated gastric empty in comparison to the control group and in a dose-dependent manner. Such prokinetic effect was abolished in glibenclamide and capsazepine pre-treated mice. The NaHS was also able to induce an increase in gastric fundus basal tonus in vitro presenting a ceiling effect in the concentration of 300ÂM when compared with the standard KCl contraction. CONCLUSIONS: The H2S prevented the ethanol-induced gastric damage, GSH consumption, and lipid peroxidation processes in the stomach mucosa of mice. The H2S also revealed a prokinetic effect leading to a higher liquid gastric empty in mice. Such results seem to be dependent on KATP channels, sensory afferent neurons, and TRPV1 receptors activation.

nÃo hà / Està bem estabelecido que a regulaÃÃo dos lÃquidos corporais seja garantida pela interaÃÃo funcional entre os sistemas cardiovascular e renal. Atualmente, evidÃncias clÃnicas e experimentais sugerem que o trato gastrintestinal (TGI) ajusta seu padrÃo motor e absortivo apÃs variaÃÃes agudas da volemia. Embora a insuficiÃncia renal parcial ou total promova variaÃÃes dos volumes corporais circulantes, poucos estudos apontam a relaÃÃo entre a insuficiÃncia renal e o funcionamento do trato gastrintestinal. Neste trabalho, estudamos o efeito da dieta salina sobre a motilidade gastrintestinal [esvaziamento gÃstrico (EG) e o trÃnsito gastrintestinal (GI) de lÃquidos] e transporte intestinal (IT) de Ãgua e eletrÃlitos (Na+, K+ e Cl-) em ratos nefrectomizados parcialmente (nefre5/6) ou falso-operados (FO) em condiÃÃes de hidrataÃÃo e desidrataÃÃo. Para tanto, 138 ratos Wistar, machos (180-220g), submetidos à nefrectomia parcial (nefre5/6) em duas etapas (0 e 7 dias). ApÃs nefre 5/6 ou FO, os animais foram distribuÃdos em dois grupos diferentes, a saber: raÃÃo e salina 1% ou raÃÃo e Ãgua. ApÃs 3d e, sob jejum de 24h com livre acesso à salina ou Ãgua, 1,5ml da refeiÃÃo teste (vermelho fenol 0,5mg/ml e glicose 5%) foi administrada por gavagem em animais acordados. Decorridos 10, 20 ou 30min, os animais foram sacrificados por deslocamento cervical, seguidos da exÃrese das vÃsceras abdominais para determinaÃÃo da taxa de EG e trÃnsito GI. AlÃm disso, um experimento semelhante foi realizado utilizando 5ml de polietilenoglicol-PEG (30% - 20.000 DA) injetado por via subcutÃnea em ratos quatro horas antes do inÃcio do experimento, a fim de simular as condiÃÃes de desidrataÃÃo. Para os estudos do transito intestinal de Ãgua e eletrÃlitos, os animais anestesiados, foram submetidos à perfusÃo ileal com Ringer + vermelho fenol durante 60min. Para todos os experimentos, monitoramos os parÃmetros hemodinÃmicos (pressÃo arterial-PA, pressÃo venosa central-PVC, frequÃncia cardÃaca-FC e volume sanguÃneo-VS) e ainda as concentraÃÃes bioquÃmicas plasmÃticas de Ur, Cr, Na+, K+ e Cl- foram determinadas. Em relaÃÃo ao grupo FO a dieta salina nÃo modificou o EG ou transito GI, nem os parÃmetros hemodinÃmicos ou bioquÃmicos, porÃm promoveu secreÃÃo ileal de Ãgua e eletrÃlitos. Por outro lado, a dieta salina nos animais nefre5/6 promoveu: i) aumento da retenÃÃo gÃstrica de 47%, 26% e 38% (10, 20 e 30 minutos de tempo pÃs-prandial, respectivamente), ii aceleraÃÃo do trÃnsito GI, iii) aumento na secreÃÃo ileal de Ãgua e eletrÃlitos e, iv) aumento da PA, PVC, FC, BV. A desidrataÃÃo aguda com PEG preveniu as alteraÃÃes da motilidade, da secreÃÃo GI e dos parÃmetros hemodinÃmicos secundÃrios hipervolemia crÃnica à custa da nefrectomia 5/6 associada à dieta salina. A motilidade gastrintestinal e o ajuste da absorÃÃo, devido à dieta salina sobre os animais submetidos à nefrectomia parcial, estÃo relacionados aos nÃveis do volume do sangue e pode ser revertida por desidrataÃÃo aguda. Em conclusÃo, trato gastrointestinal pode ajustar tanto o seu motor, bem como atividades de absorÃÃo apÃs desequilÃbrios crÃnicos volume de sangue. / It is well established that the regulation of the corporal fluids is guaranteed by functional interaction between cardiovascular and renal systems. Currently, clinical and experimental evidences suggest that gastrointestinal (GI) tract (GIT) adjust their motor and absorptive activities due to acute changes in the blood volume. Although total or partial renal failure promotes corporal fluids changing. Several studies indicate a relationship among renal failure and GIT functions. In this work, we study the effect of a salt diet on GIT motility [gastric emptying (GE) and GI transit of liquids] and intestinal transport (IT) of H2O and electrolytes (Na+, K+ and Cl-) in partial nephrectomized (nefre5/6) or false-operated (FO) rats under hydrated and dehydrate conditions. For that, 138 male Wistar rats (180-220g) submitted to partial nephrectomy (nefre5/6) in two steps (0 and 7 days). After nefre5/6 or FO procedures, animals were distributed into 2 different experiments both containig two groups as follows: feed+1% saline or feed+water. For the hydrate conditions experiment, after 3d and under 24-hour fasting with free access to water or saline, 1.5ml of the test meal (phenol red 0.5 mg/mL containg 5% glucose) was gavaged in the awake animals. Next 10, 20 or 30 minutes, the animals were sacrificed by cervical dislocation. Following, excision of the abdominal viscera was performed in order to determine the GE rate and GI transit. Additionally, similar experiment were performed using 5mL of polyethylene glycol-PEG (30% - 20,000 DA) injected subcutaneous in the rats 4 hours before the beginning of the experiment in order to simulate the dehydrate conditions. For IT studies, anesthetized animals underwent ileal perfusion with Ringer+phenol red solution and were monitored along 60 min. For all experiments, mean arterial pressure - MAP, central venous pressure-CVP, heart rate-HR and blood volume-BV were monitored. Also, plasmatic concentrations of Ur, Cr, Na+, K+ and Cl- were determined. Compared with FO group, nefre5/6 did not change the GE or GI transit, neither hemodynamic or biochemical parameters, but promotes ileal secretion of water and electrolytes. On the other hand, comparing the salt diet and standard diet, the nefre5/6 animals caused: i) increases on the gastric retention of 47%, 26% and 38% (at 10, 20 and 30 minutes of postprandial time, respectively), ii) acceleration of the GI transit, iii) increases on the ileal secretion of water and electrolytes and, iv) increases BP, CVP, HR and BV. However, changes on the other plasmatic biochemical parameters were not observed in this study. The acute dehydration with PEG prevented gut motility and hemodynamic changes and the increase of gastrointestinal secretions. Gastrointestinal motility and absorptive adjustments due to salt diet on the partial nephrectomized animals, is related to blood volume levels and, can be reversed by acute dehydration. In conclusion, gastrointestinal tract can adjust both their motor as well as absorptive activities after chronic blood volume imbalances.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The monoterpenes &#945;- and &#946;-pinene are constituents commonly found in several essential oils obtained from plants in Brazilian northeast such as âmalva-santaâ and âeucaliptoâ, which are used in folk medicine to treat respiratory and gastrointestinal dysfunctions. Myorelaxant actions are due to the presence of these constituents in their essential oils. The present work aimed to further study the pharmacological effects of these compounds on smooth muscle gastrointestinal contractility as well as on liquid gastric emptying in rats. Wistar rats (200-250 g) were used, sacrificed by cervical dislocation. Strips were carefully obtained from gastric fundus, duodenum and ileum, and were maintained in Tyrodeâs solution. Isometric contractions were recorded through force transducers coupled to a computerized data acquisition system. Solutions containing &#945;- or &#946;-pinene were prepared with Tween 80 (final concentration &#8804; 0,2% v/v). Solely used, &#945;- or &#946;-pinene decreased duodenal basal tonus with IC50 value corresponding to 655.1 ÂM and 810.2 ÂM, respectively. Submaximal contractions induced by K+ (60 mM, K60) or acetylcholine (ACh, 3 ÂM) were inhibited, in a concentration-dependent manner (p < 0.001, ANOVA), with IC50 values of 790.0 [580.2-1007.4] e 760.0 [650.6-870.8] ÂM, respectively to &#945;-pinene and 770.1 [500.3-1180.5] e 620.7 [520.9-750.2] ÂM, respectively to &#946;-pinene. In tissues pre-treated with &#945;- (1 mM) or &#946;-pinene (1 mM) in medium without Ca2+ with EGTA (0.2 mM), ACh (3 ÂM)-induced phasic contractions were inhibited from 18.4  3.3% to 7.7  1.5% and 5.0  1.2% of K60, respectively. In tissues maintained under Ca2+-free conditions (in medium containing EGTA 0.2 mM) and in presence of K+ (60 mM) or ACh (3 ÂM), tonic contractions induced by Ca2+ addition were reduced from 50.2  3.3% and 53.9  5.2%, respectively to values corresponding to 10.6  2.6 % and 24.4  4.1 % to experiments with &#945;-pinene and 6.6  1.1 % and 10.9  3.5 % to experiments with &#946;-pinene, respectively. In tissues pre-treated with &#945;- (1 mM) or &#946;-pinene (1 mM), ACh (60 ÂM)-induced tonic contractions, in verapamil (3 ÂM)-containing medium, were inhibited from 29.0  4.1 % to 10.6  2.7 % and 12.5  2.2 % of the K60, respectively. The caffeine (20 mM)-induced contractile response in normal Tyrodeâs solution was potentiated from 47.8  3.2 % to 72.1  9.0 and 88.8  10.6 % of the control response in virtue of &#945;- (1 mM) or &#946;-pinene (1 mM) presence, respectively. In EGTA-containing Ca2+-free medium, the contractile response to caffeine was reduced to 9.5  3.5%. Under these conditions, and in presence of &#945;- (1 mM) or &#946;-pinene (1 mM), this response was not significantly altered, with values corresponding to 7.2  2.2 e 4.7  1.3 %, respectively. In verapamil- and EGTA-containing Ca2+-free medium, after depletion of the intracellular Ca2+ stores by CCh (100 ÂM), the contractions induced by Ca2+ addition were potentiated by the presence of &#945;- (1 mM) or &#946;-pinene (1 mM) from 30.7  2.1 % to 80.6  4.7 and 51.3  7.6 %, respectively (p < 0.05, Bonferroniâs test). In gastrointestinal dye fractional retention studies, &#945;- or &#946;-pinene increased the rat liquid gastric emptying. On the other hand, they did not alter the ACh-induced contractions on gastric fundus strips. Our study firstly shows that, both &#945;- and &#946;-pinene have prokinetic properties in rats. In isolated tissues, they did not affect cholinergic contractions on gastric fundus strips, but are myorelaxant compounds on rat duodenal preparations, probably by an interference with cellular mechanisms mediated by IP3 release. Moreover, &#945;- and &#946;-pinene activate capacitative Ca2+ entry to intracellular milieu after Ca2+ stores depletion / &#945;- e &#946;-pineno sÃo monoterpenos constituintes do Ãleo essencial de plantas encontradas no Nordeste do Brasil como a malva-santa e o eucalipto que, na medicina popular, sÃo usadas no tratamento de distÃrbios intestinais e respiratÃrios. As aÃÃes miorrelaxantes desses Ãleos essenciais sÃo atribuÃdas à presenÃa de &#945;- e de &#946;-pineno. Nosso objetivo foi estudar mais detalhadamente os efeitos desses constituintes sobre a contratilidade do mÃsculo liso gastrintestinal e sobre o esvaziamento gÃstrico de lÃquido em ratos. No presente estudo, foram usados ratos Wistar machos (200-250g) sacrificados por deslocamento cervical. Tiras de duodeno, Ãleo e fundo de estÃmago foram cortados e mantidos em Tyrode. As contraÃÃes isomÃtricas foram registradas atravÃs de transdutores de forÃa conectados a sistema computadorizado. SoluÃÃes contendo &#945;- ou &#946;-pineno foram preparadas em Tween 80 (concentraÃÃo final &#8804; 0,2% v/v). Usados isoladamente, &#945;- e &#946;-pineno diminuÃram o tÃnus basal em duodeno com CI50 de 655,1 e 810,2 ÂM, respectivamente. ContraÃÃes submaximais induzidas por K+ (60 mM, K60) ou acetilcolina (ACh, 3 ÂM) foram inibidas, de maneira concentraÃÃo-dependente (p < 0,001, ANOVA), com valores de CI50 correspondentes a 790,0 [580,2-1007,4] e 760,0 [650,6-870,8] ÂM, respectivamente, para o &#945;-pineno e 770,1 [500,3-1180,5] e 620,7 [520,9-750,2] ÂM para o &#946;-pineno, respectivamente. Em preparaÃÃes prÃ-tratadas com 1 mM de &#945;- ou &#946;-pineno, a contraÃÃo fÃsica induzida por ACh (3 ÂM) em meio sem Ca2+ contendo EGTA (0,2 mM) foi reduzida de 18,4  3,3 % para 7,7  1,5 % e 5,0  1,2 % da contraÃÃo K60, respectivamente. A contraÃÃo tÃnica induzida por adiÃÃo de Ca2+ (2 mM) em preparaÃÃes mantidas na presenÃa de K+ (60 mM) ou ACh (3 ÂM), em meio sem Ca2+ contendo EGTA (0,2 mM), foi reduzida de 50,2  3,3 % e de 53,9  5,2 % para 10,6  2,6 % e 24,4  4,1 % pelo &#945;-pineno e 6,6  1,1 % e 10,9  3,5 % pelo &#946;-pineno, respectivamente. Em preparaÃÃes prÃ-tratadas com 1 mM de &#945;- ou &#946;-pineno, a contraÃÃo tÃnica induzida por ACh (60 ÂM) em Tyrode normal contendo verapamil (3 ÂM) foi reduzida de 29,0  4,1 % para 10,6  2,7 % e 12,5  2,2 % da K60, respectivamente. A resposta contrÃtil induzida pela cafeÃna (20 mM) em Tyrode normal foi potencializada de 47,8  3,2 % para 72,1  9,0 e 88,8  10,6 % da resposta controle pelo prÃ-tratamento da preparaÃÃo com &#945;- ou &#946;-pineno, respectivamente. Em meio sem Ca2+ com EGTA, a resposta contrÃtil da cafeÃna (20 mM) foi reduzida para 9,5  3,5 %. Sob essa condiÃÃo e, na presenÃa de &#945;- ou &#946;-pineno, a resposta nÃo foi alterada significativamente, correspondendo a 7,2  2,2 e 4,7  1,3 %, respectivamente. ApÃs esgotamento dos estoques intracelulares com CCh (100 mM), a contraÃÃo induzida por adiÃÃo de Ca2+ (2 mM), em meio sem Ca2+ com EGTA (0,2 mM) e verapamil (3 ÂM), foi potencializada pela adiÃÃo prÃvia de &#945;- ou &#946;-pineno de 30,7  2,1 % para 80,6  4,7 e 51,3  7,6 %, respectivamente (p < 0,05, teste de Bonferroni). Em estudos de retenÃÃo fracional de corante no trato gastrintestinal, o &#945;- e o &#946;-pineno aumentaram o esvaziamento gÃstrico, porÃm, a contratilidade induzida por ACh (3 ÂM) em tiras de fundo de estÃmago in vitro nÃo foi alterada pela presenÃa prÃvia de &#945;- e &#946;-pineno. O presente trabalho demonstra, pela primeira vez, que os monoterpenos &#945;- e &#946;-pineno apresentam efeito procinÃtico em ratos. Em tecidos isolados, nÃo afetam a contraÃÃo colinÃrgica em tiras de estÃmago, mas apresentam atividade miorrelaxante em tecido duodenal, por provÃvel interferÃncia com os mecanismos celulares mediados pela formaÃÃo de IP3. AlÃm disso, como demonstrado em Ãleo de rato, esses monoterpenos provavelmente ativam as vias de entrada de Ca2+ para a cÃlula em situaÃÃes de depleÃÃo dos estoques intracelulares

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A insuficiÃncia renal ocasiona importantes disfunÃÃes gastrintestinais. Entretanto poucos estudos apontam a relaÃÃo entre a insuficiÃncia renal e o funcionamento do trato gastrintestinal. Neste trabalho estudamos o esvaziamento gÃstrico e o trÃnsito gastrintestinal de lÃquido em ratos acordados, Ãs 6, 12 e 24 horas apÃs a remoÃÃo cirÃrgica de um ou ambos os rins. Em todos os protocolos experimentais, o esvaziamento gÃstrico e o trÃnsito gastrintestinal foram determinados segundo a tÃcnica descrita por Reynell & Spray. O esvaziamento gÃstrico e o trÃnsito gastrintestinal foram significativamente reduzidos Ãs 6, 12 e 24 horas apÃs ambos os rins terem sido removidos. A remoÃÃo de um Ãnico rim nÃo teve efeito sobre o esvaziamento gÃstrico e o trÃnsito gastrintestinal. Houve um acentuado aumento no volume sangÃÃneo bem como nos nÃveis plasmÃticos de urÃia e creatinina apÃs a nefrectomia bilateral. Em seguida, avaliamos se este fenÃmeno foi causado pela azotemia. Num determinado grupo de animais observamos que a infusÃo de urÃia e creatinina nÃo teve efeito sobre o esvaziamento gÃstrico e o trÃnsito gastrintestinal nos animais intactos. AlÃm disso, a retraÃÃo de 30% do volume sangÃÃneo efetivo reverteu o retarde no esvaziamento gÃstrico e no trÃnsito gastrintestinal nos animais submetidos a nefrectomia bilateral. Em sÃntese, a nefrectomia bilateral induz a inibiÃÃo da motilidade gastrintestinal que parece ser ocasionada pela hipervolemia e nÃo pela azotemia induzida pela nefrectomia bilateral. / Renal failure leads to important gastrointestinal functional changes. However, there are only few studies focused on the relationship between renal failure and gastrointestinal tract physiology. In this work we studied the gastric emptying (GE) and gastrointestinal (GI) transit of liquid 6, 12 and 24hr after awake rats had one or both kidneys surgically removed. In both experimental protocols, GE and GI transit were measured according to Reynell & Spray procedures. GE and GI transit were significantly reduced 6, 12 and 24hr after both kidney removal. Removal of only one kidney had no effect on GE and GI transit. Blood volume was greatly increased after bilateral kidney removal as well as plasmatic urea and creatinine levels. We also evaluated whether this phenomenon was caused by azotemia. In a separate group of animals, we observed that urea and creatinine infusions had no effect on GE and GI transit in intact animals. In addition, bleeding up to 30% of blood volume reversed GE and GI transit inhibitions in animals submitted to bilateral kidney removal. In summary, bilateral nephrectomy leads to GI motility inhibition, which seems to be due to hypervolemia and not to post nephrectomy azotemia.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / We evaluated the effect of sildenafil citrate (ViagraÂ) a vasodilator largely used for the treatment of male erectile dysfunction, on the gastrointestinal motility in rats. Experiments were performed on 175 male, Wistar rats, weighing 200-350g. Four groups of study were done: the sildenafil effects on the: i) Gastric emptying (GE) and gastrointestinal (GI) transit and ii) Intestinal transit (IT) of liquid in awake rats; iii) Gastric compliance in anesthetized rats and iv) Contractility of rat duodenal isolated strips. i) In 64 rats fasted for 24h with previous vascular access (right jugular vein and left carotid artery), we studied the effect of an i.v. injection (0.2mL) of sildenafil (4mg/Kg) or vehicle (0.01N HCl) on GE and GI transit of a liquid meal, as well as on arterial pressure (AP) in a separated group of rats. Animals were gavage-fed with 1.5mL of a test meal (0.5mg/mL of phenol red in 5% glucose). After 10, 20 or 30min, animals were sacrificed and submitted to a laparotomy to obstruct the pylorus, cardia and terminal ileus. The gut was removed and then divided into: stomach and consecutive three small intestine segments (40% proximal; 30% medial and 30% terminal). After processing these segments, the dye retention was determined at 560nm. The percentage of dye retention in each segment permitted to evaluate GE and GI transit. Arterial pressure was continuously monitored by a digital acquisition system during 20min before and 30min after sildenafil injection. We observed a significant increase of gastric retention in sildenafil treated rats at 10, 20, or 30min after the test meal (44,2Â2,0 vs 53,2Â2,1; 25,4Â1,3 vs 37,3Â1,6; 20,9Â2,5 vs 32,5Â2,9%, respectively), as well as a significant GI transit delay. Despite of sildenafil inducing hypotension, AP returned to basal levels 10min afterwards. Acid gastic secretion blocking pre-treatment with omeprazol did not modify the sildenafil effect on gastric retention, GI transit or AP. ii) In another group we evaluated the sildenafil (4mg/Kg) or diluente (0.01N HCl, 0.2mL) effects on the IT in awake rats, fasted for 24h. Animals were studied 3d after the insertion of a silastic cannula (0.6cm ID) into the duodenal bulb. We evaluated the progression of a radioactive liquid test meal fed (10MBq of 99mTc â 1mL of saline 0,9%) administered through the inserted cannula into the small intestine. After 20, 30 or 40min, animals were sacrificed by anesthetic overdose. After laparotomy, we removed and divided the gut in: stomach, five congruent and consecutive segments of the small intestine and the large intestine. Radioactivity counting was obtained in a gamma-chamber collimator. Sildenafil promoted an IT delay (p<0.05), indicated by shifting the center of mass to the proximal portions of the TGI (2.8Â0.2 vs 3.3Â0.1; 3.0Â0.2 vs 3.7Â0.1 and 3.4Â0.1 vs 4.2Â0.2) in relation to control group. iii) Gastric compliance study was performed on 39 anesthetized rats after 24h of fasting. Gastric volume (GV) variations were measured by plethysmography while AP was continuously monitored. We have also observed that GV increased (p<0.05) after sildenafil treatment (3mg/Kg - e.v) (3.08Â0.18; 3.10Â0.17 and 3.09Â0.17mL vs 2.91Â0.19mL) at 10, 20 and 30min after drug administation, respectively. Basal AP (105.8Â2.28mmHg) dropped by the sildenafil injection (59.8Â3.2; 64.8Â3.7 and 59.3Â4.6mmHg-p<0.05) while vehicule (0.01N HCl) did not change either GV or AP. After splanchnotomy or pre-treatments (e.v.) with methylene blue (3mg/Kg-guanilate cyclase blocker), L-NNA (3mg/Kg - NO synthase blocker) or propranolol (2mg/Kg - Ã-blocker) prevented GV increase due to sildenafil; while post-treatment with sodium nitroprusside (1mg/Kg - NO donor) raised it. iv) The in vitro contractility studies were performed on isolated duodenal strips obtained from rats (n=28) killed by cervical dislocation. Duodenal strips were suspended longitudinally in a glass chamber (10mL), filled with Tyrode solution (37oC and pH 7.4). After 1h of stabilization under 1g of initial tension, the spontaneous or induced contractility were continuously recorded by a digital acquisition system. Increasing and cummulative doses of sildenafil (0.1 to 300Âmol/L) relaxed (9.6Âmol/L of EC50) the duodenal strips. This effect was more intense than those displayed by zaprinast or papaverine (PDEs blockers) (91.6 and 78.5Âmol/L of EC50, in this order). Sildenafil showed significant antispasmodic and myorelaxant effects on the duodenal contractions induced by acetylcholine or carbamylcholine (IC50 26.7 and 16.2Âmol/L, respectively). Pre-treatment with methylene blue, ODQ (guanilato cyclase blocker) or L-NAME (NO synthase blocker) also prevented these sildenafil effects, but D-NAME (an inactive substrate for NO synthase) did not. Myorelaxant sildenafil effect was reverted by L-arginine (substrate for NO synthase) and contrarily it was largely increased by sodium nitroprusside. Forskolin adenylate cyclase activation pre-treatment also increased the myorelaxant effect of sildenafil. In summary, we have observed that sildenafil slowed down the gastrointestinal motility, delaying GE, GI and intestinal transits of a liquid meal in awake rats; Gastric compliance was also increased in anesthetized rats treated with sildenafil. Sildenafil also exhibited both antispasmodic and myorelaxant effects on isolated strips of duodenum of ex vivo rats. Besides central or peripheral sympathetic nervous system activation, sildenafil possibly acts at the gastrointestinal myocite level by activating the NO/GMPc system. / Estudamos o efeito do citrato de sildenafil (ViagraÂ), vasodilatador largamente utilizado na terapÃutica da disfunÃÃo erÃtil, sobre o comportamento motor do trato gastrintestinal (TGI) de ratos Wistar. Para tanto, utilizamos 175 animais machos, pesando entre 200 a 350g, distribuÃdos nos quatro seguintes grupos de estudo: efeitos do citrato de sildenafil sobre o i) esvaziamento gÃstrico (EG) e os trÃnsitos gastrintestinal (GI) e ii) intestinal de lÃquido em ratos acordados; iii) a complacÃncia gÃstrica de ratos anestesiados e iv) a contratilidade de tiras isoladas do duodeno de ratos ex vivo. i) Avaliamos, em 64 ratos acordados sob jejum e livre acesso à Ãgua por 24h, o efeito da injeÃÃo (0,2mL; e.v.) de sildenafil (4mg/Kg) ou veÃculo (HCl 0,01N) sobre o EG e o trÃnsito GI de lÃquido, bem como sobre a pressÃo arterial (PA). Mediante gavagem, 1,5mL da refeiÃÃo-teste (vermelho de fenol - 0,5mg/mL em glicose a 5%) foi injetada no estÃmago. Depois de 10, 20 ou 30min, sacrificamos os animais e, apÃs laparotomia, obstruÃmos o piloro, o cÃrdia e o Ãleo terminal. Removemos e dividimos o TGI em: estÃmago e segmentos consecutivos do intestino delgado (40% iniciais; 30% mediais e 30% terminais). ApÃs o processamento destas porÃÃes viscerais, determinamos as absorbÃncias das amostras a 560nm. A retenÃÃo fracional de vermelho fenol em cada segmento permitiu o cÃlculo do EG e trÃnsito GI. Em um grupo separado de animais, a PA foi monitorada continuamente por meio de um sistema digital de aquisiÃÃo de dados durante 20min antes e 30min apÃs o tratamento com sildenafil ou diluente. Comparado ao grupo controle, houve aumento significativo da retenÃÃo gÃstrica (44,2Â2,0 vs 53,2Â2,1; 25,4Â1,3 vs 37,3Â1,6; 20,9Â2,5 vs 32,5Â2,9%) nos animais tratados com sildenafil e sacrificados aos 10, 20, ou 30min, respectivamente, bem como retarde significativo no trÃnsito GI. Embora o sildenafil tenha provocado hipotensÃo, a PA retoma nÃveis basais logo apÃs 10min. O prÃ-tratamento com omeprazol (bloqueador da secreÃÃo Ãcida estomacal) nÃo modificou o efeito do sildenafil sobre os valores de retenÃÃo gÃstrica e intestinal nem nos nÃveis de PA. ii) Noutros animais (n=44), sob jejum de 24h e dotados previamente (3d) de uma cÃnula crÃnica no bulbo duodenal, estudamos o efeito do sildenafil sobre a progressÃo ao longo do intestino delgado de uma refeiÃÃo teste (10MBq de TecnÃcio ligado a fitato e diluÃdo em 1mL de salina 0,9%). Decorridos 20, 30 ou 40min da injeÃÃo (0,2mL e.v.) de sildenafil (4mg/Kg) ou diluente (HCL 0,01N), sacrificamos os animais e, apÃs laparotomia e remoÃÃo do TGI, dividimo-o em: estÃmago, cinco segmentos congruentes e consecutivos de intestino delgado e o intestino grosso. A contagem da radiatividade foi determinada num colimador de gama-cÃmara. O sildenafil promoveu retarde (p<0,05) do TI, indicado pelos retardes dos centros geomÃtricos da refeiÃÃo de 2,8 0,2 vs 3,3 0,1; 3,0 0,2 vs 3,7 0,1 e 3,4 0,1 vs 4,2 0,2 em relaÃÃo ao grupo controle, aos 20, 30 ou 40min. iii) Os estudos de complacÃncia gÃstrica foram conduzidos em 39 ratos anestesiados, sob jejum de 24h. As variaÃÃes do volume gÃstrico (VG), foram medidas por pletismografia, enquanto a PA foi monitorada continuamente por um sistema digital de aquisiÃÃo de dados. Em relaÃÃo aos valores basais (2,91Â0,19mL) o sildenafil (3mg/Kg â e.v.) aumentou (p<0,05) o VG apÃs 10, 20 e 30min (3,08Â0,18; 3,10Â0,17 e 3,09Â0,17mL). A PA basal (105,8Â2,28mmHg) caiu significativamente com o sildenafil (59,8Â3,2; 64,8Â3,7 e 59,3Â4,6mmHg) enquanto o diluente (HCl 0,01N) nÃo modificou seja o VG ou a PA. O prÃ-tratamento mediante esplancnotomia ou injeÃÃo e.v. com azul de metileno (3mg/Kg-bloqueador da guanilato ciclase), L-NNA (3mg/Kg-bloqueador da NO sintetase) ou propranolol (2mg/Kg-Ã-bloqueador) preveniram o aumento do VG pelo sildenafil; jà o pÃs-tratamento com nitroprussiato de sÃdio (1mg/Kg - e.v.) o ampliou significativamente. iv) Avaliamos ainda o efeito do sildenafil sobre a contratilidade de tiras isoladas do duodeno de ratos ex vivo (n=28), sacrificados por deslocamento cervical. Tiras dissecadas do duodeno foram suspensas longitudinalmente em cuba de vidro (10mL), plena de soluÃÃo de Tyrode (37oC e pH 7,4), e submetidas a uma tensÃo inicial de 1g. ApÃs 1h de estabilizaÃÃo, a contratilidade espontÃnea ou induzida das tiras foi registrada continuamente por um sistema digital de aquisiÃÃo de dados. O sildenafil em doses crescentes e cumulativas (0,1 a 300Âmol/L) relaxou (EC50 de 9,6Âmol/L) o duodeno, mais atà que o zaprinaste ou a papaverina (bloqueadores de FDEs) (EC50 91,6 e 78,5Âmol/L, nesta ordem). Observamos ademais que o sildenafil inibiu as contraÃÃes induzidas por acetilcolina ou carbacol (IC50 26,7 e 16,2Âmol/L, respectivamente). Jà o prÃ-tratamento com azul de metileno, ODQ (bloqueador da guanilato ciclase) ou L-NAME (bloquedor da NO sintetase), mas nÃo o D-NAME (isÃmero inativo da NO sintetase) preveniram o efeito do sildenafil. O efeito mio-relaxante do sildenafil foi ampliado pela L-arginina (substrato do NO sintetase) ou nitroprussiato de sÃdio (doador de NO). O prÃ-tratamento com forskolina (estimulador da adenilato ciclase) tambÃm aumentou o efeito mio-relaxante do sildenafil. Em resumo, observamos que o sildenafil diminui a motilidade gastrintestinal, retardando o EG, os trÃnsitos GI e intestinal de lÃquido em ratos acordados; aumenta a complacÃncia gÃstrica em ratos anestesiados alÃm de apresentar efeitos antiespasmÃdico e mio-relaxante sobre tiras isoladas de duodeno de ratos ex vivo; por estimulaÃÃo do sistema nervoso simpÃtico e tendo como provÃvel mecanismo de aÃÃo ao nÃvel do miÃcito gastrintestinal a via do NO/GMP cÃclico.