L'arthrite rhumatoïde (RA), l'arthrite psoriasique (PsA) et le lupus érythémateux disséminé(SLE) sont trois maladies rhumatismales courantes avec des manifestations articulaires et cutanées. Les synoviocytes de type fibroblaste (FLSs) sont les principaux composants de la synoviale et contribuent directement à l'inflammation synoviale et à la destruction du cartilage. Une augmentation de la phospholipase A1 membre A (PLA1A) dans le sérum a été détectée chez des patients atteints de SLE et était liée à l'activité de la maladie. PLA1A hydrolyse spécifiquement l'acide gras sn-1 sur la phosphatidylsérine (PS) pour produire de la lysophosphatidylsérine, qui a de multiples effets immunomodulateurs. Normalement, la PLA1A sécrétée a une accessibilité limitée à son substrat. Lorsque les cellules subissent une apoptose ou une activation ou forment des microparticules (MPs), la PS peut être exposée sur le feuillet externe de la membrane plasmique des cellules ou des MPs. Les MPs sont des vésicules extracellulaires hétérogènes et peuvent fournir diverses cargaisons pour la communication intercellulaire locale ou longue distance au cours de l'inflammation. Dans la circulation et le liquide synovial des patients atteints de RA, une augmentation des MPs dérivées de cellules sanguines a été détectée, parmi lesquelles les MPs dérivées des plaquettes(PMPs) étaient les plus abondantes, suivi par les MPs de globules rouges (RMPs). Une étude précédente a également rapporté que les PMPs stimulaient le phénotype inflammatoire des FLSs. L'acide lysophosphatidique (LPA) est un médiateur lipidique bioactif qui peut être synthétisé par différentes voies nécessitant des phospholipases A1 ou A2 (PLA1/2) et l'autotaxine (ATX). L'axe de l'ATX-LPA récepteurs est étroitement lié à la pathogenèse de la RA en modifiant la motilité, la migration et la production de cytokines/chimiokines des synoviocytes. Cependant, le mécanisme par lequel la PLA1A et les MPs contribuent au développement des maladies rhumatismales n'est toujours pas bien compris. Dans cette thèse, nous avons exploré le rôle de la PLA1A et des MPs dans les processus de maladies rhumatismales en utilisant des FLSs humains primaires. Nos résultats ont mis en évidence que la PLA1A était élevée dans le plasma et les liquides synoviaux des patients arthritiques, et qu'il y avait une proportion accrue des RMPs et des PMPs PS positives dans le plasma des patients atteints de SLE et d'arthrite précoce. Nous avons découvert que l'incubation des MPs dérivés de cellules sanguines avec de l'ATX recombinant produisait des quantités considérables de LPA, y compris des espèces saturées et insaturées. La PLA1A recombinante pourrait hydrolyser la PS exposée à la surface des FLSs activés ou des MPs, stimulant la sécrétion d'IL-8 par les FLSs via l'axe ATX-LPA récepteur. Ensuite, nous avons exploré l'impact de PLA1A dans la pathogenèse de l'arthrite psoriasique induite en utilisant des souris Pla1a[exposant -/-]. Nous avons découvert que le déficit en PLA1A réduisait la susceptibilité à l'inflammation articulaire et cutanée induite dans le modèle murin. Les symptômes réduits étaient associés au niveau inférieur de cytokines/chimiokines pro-inflammatoires dans les tissus synoviaux, tels que l'IL-17. Le déficit en PLA1A a peut-être modifié l'activation et la polarisation des lymphocytes qui produisent IL-17. Les travaux présentés dans cette thèse ont défini les implications de la PLA1A et des MPs dérivées des cellules sanguines dans le processus inflammatoire in vitro et in vivo des maladies rhumatismales. Il a également souligné que la PLA1A pourrait être utilisée comme biomarqueur potentiel pour surveiller l'activité des maladies rhumatismales et même cible potentiel pour le traitement de l'arthrite psoriasique. / Rheumatoid arthritis (RA), psoriatic arthritis (PsA), and systemic lupus erythematosus (SLE) are three common rheumatic diseases with articular and cutaneous manifestations. Fibroblast-like synoviocytes (FLSs) are the primary components of the synovium and contribute directly to synovial inflammation and cartilage destruction. Elevated serum phospholipase A1 member A (PLA1A) was reported in SLE patients and was related to disease activity. PLA1A specifically hydrolyzes the sn-1 fatty acid on phosphatidylserine(PS) to produce lysophosphatidylserine, which has multi-immunomodulatory effects. Normally, secreted PLA1A has limited access to its substrate. When cells undergo apoptosis, activation or form microparticles (MPs), the outer leaflet of the plasma membrane of cells or MPs can expose PS. MPs are heterogeneous extracellular vesicles and can supply various cargos for local or long-distance intercellular communication during inflammation. In circulation and synovial fluid from RA patients, increased MPs derived from various cells were detected, among which the platelet-derived MPs (PMPs) were the most abundant and followed by the red blood cell (RBC)-derived MPs (RMPs). A previous study also reported that PMPs stimulated the inflammatory phenotype of FLSs. Extracellular lysophosphatidic acid (LPA) is a bioactive lipid mediator which can be synthesized through different pathways requiring PLA1/2 and autotaxin (ATX). The ATX-LPA receptor axis is closely related to RA pathogenesis by modifying synoviocytes motility and migration and stimulating cytokine/chemokine production. However, the underlying mechanism by which PLA1A and MPs contribute to the development of rheumatic disease is still not well understood. In this thesis, we explored the pro-inflammatory effects of PLA1A and MPs in rheumatic disease processes using primary human FLSs. Our results highlighted a high PLA1A level in the plasma and synovial fluids from rheumatoid arthritis patients, and there was an increased proportion of PS-positive RMPs and PMPs in the plasma from SLE and RA patients. We found that incubation of blood cell-derived MPs with recombinant ATX produced considerable amounts of LPA, including saturated and unsaturated species. Recombinant PLA1A could hydrolyze the PS surface exposed by activated FLSs or MPs, stimulating the secretion of IL-8 by FLSs through the ATX-LPA receptor axis. Then we explored the impact of PLA1A in the pathogenesis of induced psoriatic arthritis using Pla1a[superscript -/-] mice. We found out that PLA1A deficiency reduced the susceptibility to induced articular and cutaneous inflammation in the murine model. The reduced symptoms were associated with a low pro-inflammatory cytokine/chemokine level, including IL-17, in synovial tissues. PLA1A deficiency possibly impacts lymphocyte activation and polarization of the lymphocytes that produce IL-17. The work presented in this thesis defined the involvements of PLA1A and blood cell-derived MPs in in vitro and in vivo inflammatory processes of rheumatic diseases. It also highlighted that PLA1A could be used as a potential biomarker for monitoring rheumatic disease activity and even a putative target for psoriatic arthritis treatments.

Le processus de cicatrisation est complexe et hautement régulé par de nombreux facteurs. La différenciation des fibroblastes (Fb) du derme en myofibroblastes (Wmyo) est très importante pour la guérison des plaies. Les Wmyo accélérent la fermeture des plaies par leur contraction, et jouent un rôle central dans la reconstitution de la MEC. Notre équipe a déjà montré que les Wmyo stimulent l’angiogénèse de façon plus importante que les Fb. De plus, les Wmyo produisent des microvésicules (MV) : des vésicules produites par bourgeonnement de la membrane plasmique des cellules qui jouent un rôle dans la communication intercellulaire. En analysant le protéome de ces MV, l’équipe a démontré que les MV contiennent des protéines impliquées dans l’angiogénèse. Mon hypothèse est que les MV produites par les Wmyo pouvaient influencer l’angiogenèse. Mes objectifs étaient d’évaluer le rôle des MV produites par les Wmyo sur l’angiogenèse en évaluant la réponse des cellules endothéliales (CE) selon les trois mécanismes fondamentaux de la formation des capillaires sanguins : la prolifération et la migration des CE, ainsi que la formation de structures tubulaires. Pour finir, les mécanismes d’interaction et d’action des MV sur les CE cibles ont été étudiés. Mes résultats ont prouvé que la présence de MV isolées à partir de Wmyo induit une augmentation significative et dose-dépendante de la prolifération et de la migration des cellules endothéliales microvasculaires de peau (CEMV) tout en favorisant la formation de structures tubulaires sur Matrigel®. Finalement, l’internalisation des MV dans les CEMV par la voie de l’endocytose est probable, et l’action des MV sur la migration des CE semble être dépendante d’une traduction protéique. En conclusion, nous avons démontré que les MV produites par les Wmyo sont favorables au développement angiogénique, élargissant le rôle des Wmyo pendant la guérison de plaie. Nous avons également prouvé que les mécanismes d’action des MV sont liés à l’endocytose des MV et de la traduction protéique. / The healing process is complex and highly regulated by many factors. The differentiation of dermal fibroblasts (Fb) into myofibroblasts (Wmyo) is very important for wound healing. The Wmyo accelerates wound closure by their contraction. Also, these cells play a central role in the reconstruction of the extracellular matrix. Our team has already shown that Wmyo strongly stimulate angiogenesis, more than Fb and that Wmyo produce microvesicles (MVs). In literature, MVs produced by budding of the plasma membrane of the cells play a role in intercellular communication. By analyzing the proteome of these MVs, I have demonstrated that MVs contain proteins capable of stimulating angiogenesis. Our hypothesis was that MVs produced by Wmyo could influence angiogenesis. Our objectives were to evaluate the role of MV produced by Wmyo on angiogenesis by evaluating the response of endothelial cells (EC) according to the three fundamental mechanisms of blood capillary formation: proliferation and migration of endothelial cells, as well as the formation of tubular structures. Finally, we have studied their mechanism of interaction and action on the target EC. Our results showed that the presence of MVs isolated from Wmyo induces a significant and dose-dependent increase of the proliferation and migration of microvascular endothelial cells of the skin (MVEC) while promoting the formation of tubular structures on Matrigel ®. Also, the internalization of MVs is through endocytosis, and MVs action on EC migration seems to be dependent on protein translation. In conclusion, we have shown that MVs produced by Wmyo are favorable to an angiogenic development, widening the role of Wmyo during wound healing. We have also shown that the interaction of MVs with EC seems to include the pathway of endocytosis and their role seems to pass via protein translation.

L'arthrite rhumatoïde (RA), l'arthrite psoriasique (PsA) et le lupus érythémateux disséminé(SLE) sont trois maladies rhumatismales courantes avec des manifestations articulaires et cutanées. Les synoviocytes de type fibroblaste (FLSs) sont les principaux composants de la synoviale et contribuent directement à l'inflammation synoviale et à la destruction du cartilage. Une augmentation de la phospholipase A1 membre A (PLA1A) dans le sérum a été détectée chez des patients atteints de SLE et était liée à l'activité de la maladie. PLA1A hydrolyse spécifiquement l'acide gras sn-1 sur la phosphatidylsérine (PS) pour produire de la lysophosphatidylsérine, qui a de multiples effets immunomodulateurs. Normalement, la PLA1A sécrétée a une accessibilité limitée à son substrat. Lorsque les cellules subissent une apoptose ou une activation ou forment des microparticules (MPs), la PS peut être exposée sur le feuillet externe de la membrane plasmique des cellules ou des MPs. Les MPs sont des vésicules extracellulaires hétérogènes et peuvent fournir diverses cargaisons pour la communication intercellulaire locale ou longue distance au cours de l'inflammation. Dans la circulation et le liquide synovial des patients atteints de RA, une augmentation des MPs dérivées de cellules sanguines a été détectée, parmi lesquelles les MPs dérivées des plaquettes(PMPs) étaient les plus abondantes, suivi par les MPs de globules rouges (RMPs). Une étude précédente a également rapporté que les PMPs stimulaient le phénotype inflammatoire des FLSs. L'acide lysophosphatidique (LPA) est un médiateur lipidique bioactif qui peut être synthétisé par différentes voies nécessitant des phospholipases A1 ou A2 (PLA1/2) et l'autotaxine (ATX). L'axe de l'ATX-LPA récepteurs est étroitement lié à la pathogenèse de la RA en modifiant la motilité, la migration et la production de cytokines/chimiokines des synoviocytes. Cependant, le mécanisme par lequel la PLA1A et les MPs contribuent au développement des maladies rhumatismales n'est toujours pas bien compris. Dans cette thèse, nous avons exploré le rôle de la PLA1A et des MPs dans les processus de maladies rhumatismales en utilisant des FLSs humains primaires. Nos résultats ont mis en évidence que la PLA1A était élevée dans le plasma et les liquides synoviaux des patients arthritiques, et qu'il y avait une proportion accrue des RMPs et des PMPs PS positives dans le plasma des patients atteints de SLE et d'arthrite précoce. Nous avons découvert que l'incubation des MPs dérivés de cellules sanguines avec de l'ATX recombinant produisait des quantités considérables de LPA, y compris des espèces saturées et insaturées. La PLA1A recombinante pourrait hydrolyser la PS exposée à la surface des FLSs activés ou des MPs, stimulant la sécrétion d'IL-8 par les FLSs via l'axe ATX-LPA récepteur. Ensuite, nous avons exploré l'impact de PLA1A dans la pathogenèse de l'arthrite psoriasique induite en utilisant des souris Pla1a[exposant -/-]. Nous avons découvert que le déficit en PLA1A réduisait la susceptibilité à l'inflammation articulaire et cutanée induite dans le modèle murin. Les symptômes réduits étaient associés au niveau inférieur de cytokines/chimiokines pro-inflammatoires dans les tissus synoviaux, tels que l'IL-17. Le déficit en PLA1A a peut-être modifié l'activation et la polarisation des lymphocytes qui produisent IL-17. Les travaux présentés dans cette thèse ont défini les implications de la PLA1A et des MPs dérivées des cellules sanguines dans le processus inflammatoire in vitro et in vivo des maladies rhumatismales. Il a également souligné que la PLA1A pourrait être utilisée comme biomarqueur potentiel pour surveiller l'activité des maladies rhumatismales et même cible potentiel pour le traitement de l'arthrite psoriasique. / Rheumatoid arthritis (RA), psoriatic arthritis (PsA), and systemic lupus erythematosus (SLE) are three common rheumatic diseases with articular and cutaneous manifestations. Fibroblast-like synoviocytes (FLSs) are the primary components of the synovium and contribute directly to synovial inflammation and cartilage destruction. Elevated serum phospholipase A1 member A (PLA1A) was reported in SLE patients and was related to disease activity. PLA1A specifically hydrolyzes the sn-1 fatty acid on phosphatidylserine(PS) to produce lysophosphatidylserine, which has multi-immunomodulatory effects. Normally, secreted PLA1A has limited access to its substrate. When cells undergo apoptosis, activation or form microparticles (MPs), the outer leaflet of the plasma membrane of cells or MPs can expose PS. MPs are heterogeneous extracellular vesicles and can supply various cargos for local or long-distance intercellular communication during inflammation. In circulation and synovial fluid from RA patients, increased MPs derived from various cells were detected, among which the platelet-derived MPs (PMPs) were the most abundant and followed by the red blood cell (RBC)-derived MPs (RMPs). A previous study also reported that PMPs stimulated the inflammatory phenotype of FLSs. Extracellular lysophosphatidic acid (LPA) is a bioactive lipid mediator which can be synthesized through different pathways requiring PLA1/2 and autotaxin (ATX). The ATX-LPA receptor axis is closely related to RA pathogenesis by modifying synoviocytes motility and migration and stimulating cytokine/chemokine production. However, the underlying mechanism by which PLA1A and MPs contribute to the development of rheumatic disease is still not well understood. In this thesis, we explored the pro-inflammatory effects of PLA1A and MPs in rheumatic disease processes using primary human FLSs. Our results highlighted a high PLA1A level in the plasma and synovial fluids from rheumatoid arthritis patients, and there was an increased proportion of PS-positive RMPs and PMPs in the plasma from SLE and RA patients. We found that incubation of blood cell-derived MPs with recombinant ATX produced considerable amounts of LPA, including saturated and unsaturated species. Recombinant PLA1A could hydrolyze the PS surface exposed by activated FLSs or MPs, stimulating the secretion of IL-8 by FLSs through the ATX-LPA receptor axis. Then we explored the impact of PLA1A in the pathogenesis of induced psoriatic arthritis using Pla1a[superscript -/-] mice. We found out that PLA1A deficiency reduced the susceptibility to induced articular and cutaneous inflammation in the murine model. The reduced symptoms were associated with a low pro-inflammatory cytokine/chemokine level, including IL-17, in synovial tissues. PLA1A deficiency possibly impacts lymphocyte activation and polarization of the lymphocytes that produce IL-17. The work presented in this thesis defined the involvements of PLA1A and blood cell-derived MPs in in vitro and in vivo inflammatory processes of rheumatic diseases. It also highlighted that PLA1A could be used as a potential biomarker for monitoring rheumatic disease activity and even a putative target for psoriatic arthritis treatments.

Helicobacter pylori is a gram-negative bacterium that infects half the world population and is the etiological cause of numerous gastric pathologies. H. pylori possess numerous mechanisms to promote its survival and modulate host immunity. We propose that H. pylori can modulate intercellular communication by manipulating the host exosome pathway. Exosomes are secreted nanovesicles that contain different proteins and microRNAs that can be transferred between cells to alter cell signaling and gene expression. We demonstrate that H. pylori infection increases host exosome secretion. Furthermore, infection can alter exosome composition as VacA, a bacterial virulence factor, can be exported in exosomes and Argonaute 5, a miRNA effector protein, is upregulated in exosomes during infection. Lastly, we show preliminary evidence that infection-modulated exosomes can modulate immune-regulatory signaling in dendritic cells by activating STAT3. Together, these studies elucidate a novel mechanism by which H. pylori can modulate the host environment and promote its continued survival.

CD23, the natural negative regulator of IgE, has been shown to be involved in asthma progression through its regulation of IgE. To investigate if its sheddase, ADAM10, is also involved in asthma progression, three mouse models were utilized; an IgE/mast cell dependent model, an IgE dependent, mast cell independent model and a mast cell and IgE independent model. Experimental asthma was then induced in mice which were selectively deficient for ADAM10 in B cells (ADAM10-/-) and compared to WT controls. The ADAM-/- mice had decreased signs of asthma, including eosinophilia, AHR and IgE synthesis in the IgE dependent model compared to LM controls, while with the IgE independent model there was no significant difference. Thus, CD23Tg and ADAM10-/- B cell mice have reduced IgE dependent lung inflammation in mouse models compared to WT controls. As a follow up, ADAM10 was inhibited in WT mice by intranasal administration of an ADAM10 inhibitor, compared to carrier (DMSO) treated mice. As with ADAM10-/- mice, inhibition of ADAM10 was only able to control IgE dependent models. These results thus show that ADAM10 is a possible target in controlling IgE dependent allergic disease, possibly as blocking ADAM10 would cause an increase in CD23 membrane expression. To better understand how ADAM10 cleaves CD23 we first sought to confirm previous studies that CD23 is internalized, with the hypothesis that shedding takes place intracellularly, rather than at the cell surface as previously assumed. Indeed, ADAM10 is more highly expressed intracellularly than at the cell surface. At 37 ºC, crosslinking CD23, especially with the anti-stalk mAb 19G5, resulted in extensive CD23 internalization. In addition, the expected increase in soluble CD23 (sCD23) production when 19G5 was added was blocked by the addition of NH4Cl. NH4Cl is known to block the progression of the endosomal pathway. These findings thus confirmed our hypothesis that cleavage of CD23 requires internalization and progression through the endosomal pathway before it is released into the extracellular space. We further demonstrated that ADAM10 is not only involved in cleaving CD23, but also in sorting CD23 into exosomes, as B cells lacking ADAM10 do not incorporate CD23 into exosomes. In addition, we found that exosomes secreted from the cell contain full length CD23, thus showing that they could bind IgE/antigen complex and be involved in the known CD23 dependent enhancement of antigen presentation by the injection of IgE/antigen complexes compared to antigen alone. These results also show that the change in ADAM10 expression specifically in a B cell could be involved in enhancement of IgE dependent inflammation. To determine what signals change ADAM10 expression, ADAM10 promoter studies were initiated. We found that both IL-21 and anti-CD40 increased ADAM10 promoter activity, while IL-4 and IL-13 had no effect. Overall our data show that increasing ADAM10 activity and expression leads to increased inflammation and IgE and is a possible target in controlling IgE dependent diseases.

For many years it has been known that the injection of antigen bound to an antibody leads to more than a 1000-fold increase in antigen specific antibody response. This observation holds true for IgE, which is dependent upon CD23 expression, as this enhancement is not present in mice deficient in CD23. It also has been shown that when mice are injected with IgE-antigen complexes also display an increase in antigen specific T cell proliferation. While there are published studies that demonstrate a role for B cell derived exosomes in the activation and proliferation of T cells, none have focused upon the potential role of CD23 as a molecular basis for this phenomenon, at least in the context of allergy and asthma. This thesis provides direct evidence that B cell-derived exosomes possess co-stimulatory molecules, including CD80 and CD86, which act in concert with CD23 to induce T cell proliferation, at least in vitro. This is due to, or enhanced by, the exosomal transfer of the antigen or peptide to T cells. Importantly, the antigen transfer is dependent upon the availability of IgE and the expression of CD23.

Le carcinome du nasopharynx (CNP) est associé à la latence II d’EBV et serait une cible préférentielle de peptides vaccinaux, dérivés des antigènes de latence II d’EBV, au sein d’une approche d’immunothérapie ciblant une réponse de type Th1. Cependant, les cellules de CNP sécrétaient des exosomes immunosuppresseurs qui induisent la mort des cellules T CD4+ Th1. En outre, cet environnement immunosuppressif est aggravé par un recrutement important de lymphocytes T régulateurs (Treg) qui sont associés à un mauvais pronostic dans le CNP. Ainsi, les objectifs de ma thèse ont consisté à (i) étudier l’impact des exosomes tumoraux de CNP (Exo-CNP) sur le phénotype et la fonctionnalité des Treg (ii) explorer les moyens de favoriser l’expansion et l’efficacité des effecteurs anti-tumoraux, notamment des lymphocytes T CD4+ Th1 anti-EBV, en proposant une stratégie d’immunothérapie peptidique. Dans la première partie, nous avons montré in vivo que la chimiokine CCL-20 était responsable du recrutement des Treg au sein de la tumeur. Par ailleurs, nous avons montré que les exosomes de CNP expriment la CCL-20 et sont capables de favoriser in vitro l’attraction des Treg via cette chimiokine. En parallèle, nous avons montré que les Exo-CNP (i) augmentent significativement l’expansion des Treg, (ii) augmentent significativement le niveau d’expression du CD25 et du FoxP3 sur les Treg, (iv) conduisent à la conversion des cellules T CD4+CD25neg en Treg CD4+CD25high. L’ensemble de ces résultats a été corrélé à une augmentation significative de l’activité suppressive des Treg en présence des exosomes de CNP. Dans la deuxième partie, nous avons validé ex vivo l’immunogénicité des peptides sur des cellules immunitaires humaines. Les résultats obtenus montrent également que des lignées T CD4+ humaines spécifiques d’EBV induisent une lyse des cellules de CNP EBV+. Et, de façon inattendue, la présence des Exo-CNP ne semble pas altérer les capacités de lyse des lignées. Enfin, nous avons pu valider l’efficacité des peptides dans un modèle in vivo. En effet, nous avons évalué l’effet anti-tumoral de la vaccination par les peptides dérivés d’EBV en mesurant l’évolution des masses tumorales. Nous avons pu montrer que la reconstitution immunitaire des souris SCID-CNP couplée à la vaccination peptidique permet la stabilisation de la croissance tumorale au cours du temps. En conclusion, la mise en évidence d’une coopération entre les Exo-CNP et les Treg est très importante et pourrait représenter ainsi un nouveau mécanisme d’échappement du CNP au système immunitaire. Par ailleurs, nos résultats consolident l’efficacité des peptides EBV qui pourraient être utilisés, à terme, dans une stratégie de vaccination peptidique ou de thérapie cellulaire en complément des traitements de référence chez les patients atteints d’un CNP. / Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is associated to the EBV latency II and should be a preferential target for our previously selected peptides derived from EBV latency II antigens. However, previous studies performed showed that NPC cells release exosomes which are able to induce apoptosis in mature Th1 lymphocytes. Furthermore, the NPC immunosuppressive environment is compounded by significant recruitment of natural regulatory T cells (Treg) associated with a poor prognosis in NPC. Thereby, this immunosuppressive environment could potentially be an obstacle to the use of this promiscious peptide coktail as a future vaccine in EBV associated nasopharyngeal carcinoma. In this context, the main objectives of my thesis consisted of (i) investigating the impact of NPc-derived-exosomes and Treg and (ii) exploring ways to promote expansion and efficiency of anti-tumoral effectors, notably anti-EBV Th1 CD4+ lymphocytes. First, we showed for the first time that NPC exosomes contain CCL-20 chemokine and are able to facilitate the recruitment of Treg cells in a CCL-20 dependent manner. This finding was confirmed by in vivo experiments in immunodeficient (SCID) and humanized mouse model xenografted with human NPC. NPC exosomes significantly increase the expansion, significantly increase the expression level of CD25 and FoxP3 on Treg and lead to the conversion of CD4+CD25neg T cells into CD4+CD25high Treg. These converted cells showed an effective immunosuppressive activity on autologous PBMCs. Moreover, NPC exosomes induce Treg suppressive activity and recruitment. In the second part, we validated peptides immunogenicity ex vivo. Then, we showed efficient EBV specific T CD4+ cytotoxicity in NPC cells. Furthermore, tumor exosomes do not affect the lysis capacity of our generated EBV specific T CD4+ cell lines. Finally, the efficiency of the EBV peptides coktail was evaluated in vivo by injecting EBV peptides into SCID mice xenografted with human NPC cells and reconstituted with human PBMCs. Here we showed that immune reconstitution coupled to peptide vaccination could stabilize tumor growth. In conclusion, our findings give new insights about NPC-derived exosomesimmunoregulatory properties and we showed that interactions of NPC-exosomes with Treg cells support immune evasion of human NPC. Our results also confirm that EBV peptides coktail could eventually be used in a vaccination strategy in combination with standard treatments in NPC patients to minimize relapse and control residual disease.

He, Mian. / Thesis Ph.D. Chinese University of Hong Kong 2015. / Includes bibliographical references (leaves 165-188). / Abstracts also in Chinese. / Title from PDF title page (viewed on 24, October, 2016).

No description available.

Helicobacter pylori is a gram-negative bacterium that infects half the world population and is the etiological cause of numerous gastric pathologies. H. pylori possess numerous mechanisms to promote its survival and modulate host immunity. We propose that H. pylori can modulate intercellular communication by manipulating the host exosome pathway. Exosomes are secreted nanovesicles that contain different proteins and microRNAs that can be transferred between cells to alter cell signaling and gene expression. We demonstrate that H. pylori infection increases host exosome secretion. Furthermore, infection can alter exosome composition as VacA, a bacterial virulence factor, can be exported in exosomes and Argonaute 5, a miRNA effector protein, is upregulated in exosomes during infection. Lastly, we show preliminary evidence that infection-modulated exosomes can modulate immune-regulatory signaling in dendritic cells by activating STAT3. Together, these studies elucidate a novel mechanism by which H. pylori can modulate the host environment and promote its continued survival.