Apesar da capacidade regenerativa da dentina já ser bem estabelecida, este processo pode ser insuficiente no caso de injúrias decorrentes de traumas e/ou lesões cariosas extensas, podendo levar à exposição pulpar e perda de sua vitalidade. Assim, pesquisas recentes no campo da engenharia tecidual têm identificado materiais e substâncias que poderiam ser utilizadas como biomodificadores da dentina e auxiliares na regeneração do complexo dentina-polpa. Entre eles estão os extratos ricos em proantocianidina, um composto fenólico bioativo presente no extrato de semente de uva (GSE). Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial estimulatório de quatro concentrações crescentes do GSE na atividade funcional de células odontoblastoides. Foram utilizadas células de camundongo da linhagem MDPC-23, cultivadas em garrafas de cultura até a subconfluência. Em seguida, as células foram cultivadas em placas de 24 poços em uma concentração de 104/poço e divididas em cinco grupos: células sem adição do GSE, células + 0.1 µg/mL de GSE; células + 1 µg/mL de GSE; células + 10 µg/mL de GSE; células + 20 µg/mL de GSE. Após 3, 7 e 10 dias, foram analisados os seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, detecção e atividade de fosfatase alcalina, quantidade de proteína total, detecção e quantificação de nódulos mineralizados, expressão quantitativa dos genes Alp, Col1a1 e Dmp1 por meio de PCR em tempo real e sua expressão proteica correspondente por meio de imunolocalização. Os dados obtidos foram analisados quanto à normalidade e submetidos aos testes estatísticos ANOVA e Kruskal-Wallis, com nível de significância estabelecido em 5%. Os resultados mostraram proliferação e viabilidade celular com as concentrações mais baixas de GSE (0,1 e 1 µg/mL), assim como a atividade de síntese de proteínas totais e da fosfatase alcalina. A deposição de nódulos mineralizados foi significativamente maior com a concentração de 1 µg/mL do extrato. Esta mesma concentração favoreceu a expressão quantitativa dos genes Alp, Col1a1 e Dmp1 e a secreção das proteínas correspondentes vistas por imunolocalização. Conclui-se que baixas concentrações do extrato de semente de uva podem influenciar e favorecer a atividade de células odontoblastoides, contribuindo para a regeneração dentinária, devido à suas características antioxidantes e biomineralizadoras / The process of dentinogenesis generally involves several steps of cell differentiation, culminating with an extracellular matrix very similar to bone tissue. Dentin regeneration may be necessary in cases of pulp exposure, root resorption and carious lesions. Studies on functional regeneration of lost tissues are being carried on recently, based on the presence of cells, scaffolds and/or substances that induce cell proliferation and differentiation. Among the several substances which can interact with cell metabolism are the extracts rich in proanthocyanidin, bioactive phenolic compounds present in fruits, vegetables and seeds. The purpose of this project is to evaluate the stimulatory potential of four different concentrations of grape seed extract (GSE) in the functional activity of odontoblast-like cells. MDPC-23 cell line was seeded in culture flasks until subconfluence followed by cell seeding in 24-well culture plates in the concentration of 104/well and divided in five groups: 1) cells without GSE, 2) cells + 0,1 µg/mL of GSE; 3) cells + 1 µg/mL of GSE; cells + 10 µg/mL of GSE and cells + 20 µg/mL of GSE. After 3, 7 and 10 days, there were evaluated the following parameters: cell proliferation and differentiation, ALP detection and activity, total protein content, mineralization detection and quantification, as well as the expression of genes Alp, Col1a1 and Dmp1 through Real Time PCR and their corresponding proteins by means of immunolocalization. Data were analyzed by ANOVA and Kruskal-Wallis statistical tests, with significance level set at 5%. The results demonstrated cell proliferation and viability with low GSE concentrations (0,1 and 1 µg/mL), as well as total protein content and ALP activity. Deposition of mineralized nodules was significantly increased with the GSE concentration of 1 µg/mL. The same concentration favoured the expression of genes Alp, Col1a1 and Dmp1 as well as the corresponding proteins. It is concluded that low concentrations of grape seed extract may influence functional activity of odontoblast- like cells, contributing to dentin regeneration by means of its antioxidant and biomineralizing properties

Submitted by PPG Odontologia (odontologia-pg@pucrs.br) on 2018-03-19T17:50:17Z No. of bitstreams: 1 TAMARA_PALUDO_DIS.pdf: 786437 bytes, checksum: 24d142989a1f4e1aac8bb4a9d2a1548c (MD5) / Approved for entry into archive by Tatiana Lopes (tatiana.lopes@pucrs.br) on 2018-04-04T11:42:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TAMARA_PALUDO_DIS.pdf: 786437 bytes, checksum: 24d142989a1f4e1aac8bb4a9d2a1548c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-04T11:50:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TAMARA_PALUDO_DIS.pdf: 786437 bytes, checksum: 24d142989a1f4e1aac8bb4a9d2a1548c (MD5) Previous issue date: 2018-01-10 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / (Artigo 1 Effect of a collagen stabilizing acid conditioner on adhesion to enamel and dentin) The aim was to evaluate the effect of different concentrations of phosphoric acid with grape seed extract (GSE) on the enamel acid etching, on the immediate bond strength to enamel, and on the bond strength to dentin after 12 months storage. Three different phosphoric acid formulations with GSE were obtained: GSE5 - 5% phosphoric acid + 20% ethanol + 2% GSE; GSE10 -10% phosphoric acid + 20% ethanol + 2% GSE; GSE20 - 20% phosphoric acid + 20% ethanol + 2% GSE; GC (control) - 37% phosphoric acid. The enamel and dentin surfaces of third molars, extracted for therapeutic reasons, were etched with 37% phosphoric acid for 15 s, and with the modified acids for 30 s. The acid was rinsed, followed by application of Adper Scotchbond Multipurpose adhesive system, and a block of composite resin was built. In enamel, the etching pattern was evaluated by scanning electron microscopy (SEM) and the bond strength was evaluated by conventional tensile test. In dentin, the microtensile bond strength (?TBS) was evaluated after 24 h and 1 year of storage. SEM images showed that GSE5 caused a more superficial enamel etching. According to ANOVA and Tukey?s test, enamel bond strength did not differ significantly between GC (49.00 MPa), GSE5 (42.78 MPa), GSE10 (51.55 MPa) and GSE 20 (36.18 MPa) (p> 0.05).According to two-way ANOVA and Tukey?s test, the interaction of factors (treatment x storage time) was significant (p=0.0001). At the 24 h of storage, GC (28.43 MPa) obtained the highest ?TBS, and did not differ significantly from GSE20 (24.11 MPa). GC and GSE20 were significantly higher to the others (p<0.05).The GSE10 (17.53 MPa) and GSE5 (16.75 MPa) did not differ significantly from each other. At the 12 months of storage, there was no significant difference in ?TBS between GC (17.71 MPa), GSE5 (20.97 MPa), GSE10 (17.59 MPa) and GSE20 (18.52 MPa). Only GSE5 and GSE10 did not significantly decrease ?TBS after 12 months of storage. It was concluded that GSE5 caused a more superficial enamel etching pattern in relation to the acid concentrations at 37%, 20% and 10%. However, there was no significant difference in the bond strength to enamel among the four concentrations. GSE5 and GSE10 promoted stability of the bond strength to dentin after 12 months of storage. (Artigo 2 Effect of phosphoric acid with polyphenols on dentin collagen : Atomic force microscopy study) Objective: The aim was of this study to evaluate the effect of different concentrations of phosphoric acid with grape seed extract (GSE) on the structure of the collagen fibrils of dentin. Materials and methods: Samples (0.3 mm thickness and 8 mm diameter) of the middle third of the coronal dentin of sound human molars were obtained. Half of the dentin of each tooth was etched with phosphoric acid (5%, 10%, or 20%) for 30 s, and the other half was etched with its corresponding phosphoric acid with 2% GSE for 30 s. The dentin of each sample was observed using an Atomic Force Microscope (AFM). Results: AFM images showed that phosphoric acid at concentrations of 5%, 10% and 20% demineralized the dentin and exposed the collagen fibrils and their pattern of periodicity. Phosphoric acid at each concentration with 2% GSE changed the collagen fibril periodicity, and the collagen fibrils formed globular structures. This change was more significant in dentin treated with 5% phosphoric acid and less significant with 20% phosphoric acid. Conclusions: The use of 5% phosphoric acid with 2% GSE produced denser collagenous globular structures. This conformational change in the collagen can make it more mechanically and enzymatically resistant. / (Artigo 1 Efeito de um condicionador ?cido estabilizador de col?geno na ades?o ao esmalte e ? dentina) O objetivo foi avaliar o efeito de diferentes concentra??es de ?cido fosf?rico com extrato de semente de uva (GSE) no padr?o de condicionamento ?cido em esmalte, na resist?ncia de uni?o imediata ao esmalte e ap?s 12 meses de armazenamento em dentina. Tr?s diferentes formula??es de ?cido fosf?rico com GSE foram obtidas: GSE5 - 5% de ?cido fosf?rico + 20% de etanol + 2% de GSE; GSE10 -10% de ?cido fosf?rico + 20% de etanol + 2% de GSE; GSE20 - 20% de ?cido fosf?rico + 20% de etanol + 2% de GSE; GC (controle) - ?cido fosf?rico 37%. As superf?cies do esmalte e da dentina de dentes terceiros molares, extra?dos por raz?es terap?uticas, foram condicionadas com ?cido fosf?rico 37% por 15 s e com os ?cidos modificados por 30 s, seguido de lavagem e aplica??o do sistema adesivo Adper Scotchbond Multiuso (convencional de tr?s passos) e da constru??o de um bloco em resina composta. Em esmalte, o padr?o de condicionamento foi avaliado em microscopia eletr?nica de varredura (MEV) e a resist?ncia de uni?o foi avaliada pelo ensaio de tra??o convencional. Em dentina, a resist?ncia de uni?o ? microtra??o (R?T) foi avaliada ap?s 24 h e 12 meses de armazenamento. As imagens em MEV evidenciaram que o GSE5 causou um condicionamento mais superficial do esmalte. De acordo com ANOVA de 2 fatores e Tukey, a resist?ncia de uni?o ao esmalte n?o diferiu estatisticamente entre GC (49,00 MPa), GSE5 (42,78 MPa), GSE10 (51,55 MPa) e GSE20 (36,18 MPa) (p>0,05). De acordo com ANOVA de duas vias e Tukey, a intera??o tratamento x tempo de armazenamento foi significativa (p=0,0001). No tempo de armazenamento de 24 h, GC (28,43 MPa) obteve a maior R?T, n?o diferindo estatisticamente do grupo GSE20 (24,11 MPa), sendo ambos estatisticamente superiores aos demais (p<0,05). O grupo GSE10 (17,53 MPa) e o GSE5 (16,75 MPa) n?o diferiram estatisticamente entre si. No tempo de armazenamento de 12 meses, n?o houve diferen?a estat?stica na R?T entre o GC (17,71 MPa), GSE5 (20,97 MPa), GSE10 (17,59 MPa) e GSE20 (18,52 MPa). Apenas GSE5 e GSE10 n?o tiveram redu??o significativa da R?T ap?s 12 meses de armazenamento. Concluiu-se que o GSE5 causou um condicionamento mais superficial do esmalte em rela??o ?s concentra??es de 37%, 20% e 10%. No entanto, n?o houve diferen?a estat?stica nos valores de resist?ncia ? tra??o imediata ao esmalte entre as quatro concentra??es. GSE5 e GSE10 promoveram a estabilidade da resist?ncia de uni?o ? dentina ap?s 12 meses de armazenamento.

Visando à obtenção de biomateriais que atuem como suporte que direcione e auxilie o processo de regeneração tecidual, materiais poliméricos naturais como a quitosana e o colágeno têm sido estudados. A utilização da quitosana e do colágeno se baseia em propriedades como: biocompatibilidade, ação antimicrobiana, capacidade de ativar macrófagos, estimular a proliferação celular e baixa antigenicidade. Também se tem buscado a utilização de fitoterápicos como, por exemplo, o extrato de semente de uva que no processo de cicatrização tecidual, atua estimulando o fator de crescimento endotelial vascular (angiogênese) e proliferação de fibroblastos. Este trabalho teve como objetivo o preparo e caracterização de esponjas de quitosana/colágeno e quitosana/colágeno/glicerol (1:1) e (1:2) contendo extrato de semente de uva. A caracterização foi feita por calorimetria exploratória diferencial (DSC), espectroscopia de absorção no infravermelho (FTIR), microscopia eletrônica de varredura (MEV), absorção de tampão fosfato salino (PBS) e liberação in vitro do extrato de semente de uva. Estudos de DSC mostraram que ocorre um aumento na temperatura de desnaturação do colágeno com o aumento da concentração do extrato, indicando um efeito de reticulação que é mais pronunciado nas esponjas (1:2) e na presença de glicerol. Os espectros FTIR mostraram que ocorre um deslocamento das bandas de amida I e II devido à interferência do anel aromático presente no extrato. O aumento da proporção de colágeno, de extrato e a adição do glicerol contribuíram para o aumento no número e diâmetro dos poros das esponjas, observados por MEV. A presença do extrato aumenta a capacidade de absorção de PBS das esponjas, o aumento da concentração de extrato aumenta a velocidade de absorção, mas diminui sua capacidade de absorção. Ensaios de liberação in vitro mostraram que as quantidades de extrato liberado em meio PBS aumentaram até as primeiras 24 h. A maior porcentagem de liberação ocorreu para a esponja Q1C2E2 (44%). A presença do glicerol influiu na liberação do extrato, diminuindo-a. Os valores de n mostraram que a liberação do extrato ocorreu por difusão, no qual os valores estão próximos 0,5 caracterizando um mecanismo de transporte Fickiano, exceto para as esponjas Q1C1E05 e Q1C2GE05, sendo por transporte anômalo (0,5<n<0,89). / Aiming to obtain biomaterials that act as a support to direct and assist the process of tissue regeneration, natural polymeric materials such as collagen and chitosan have been used. The use of chitosan and collagen is based on properties such as biocompatibility, antimicrobial activity, low antigenicity, ability to activate macrophages and stimulate cell proliferation. The use of herbal medicines, for example, grape seed extract in the process of tissue healing, acts by stimulating vascular endothelial growth factor (angiogenesis) and fibroblast proliferation. This work aimed to the preparation and characterization of chitosan/collagen and chitosan/collagen/glycerol sponges (1:1) and (1:2) containing grape seed extract. The characterization was made by differential scanning calorimetry (DSC), infrared absorption spectroscopy (FTIR), scanning electron microscopy (SEM), absorption of phosphate buffered saline (PBS) and in vitro release of grape seed extract. DSC studies have shown that there is an increase in denaturation temperature of collagen with increasing extract concentration, indicating a crosslinking effect that is more pronounced in the sponges (1:2) in the presence of glycerol. The FTIR spectra show that there is a displacement of bands I and amide II due to interference of the aromatic ring present in the extract. Increasing the proportion of collagen, extract and addition of glycerol contributed to the increase in the number and diameter of the pores of the sponges, observed by SEM. The presence of the extract increases the absorption capacity of PBS in the sponges, the concentration of the extract increases the absorption rate, but decreases its absorbent capacity. In vitro release tests showed that the released amounts of extract increased up to 24 h. The highest percentage of release was observed for the sponge Q1C2E2 (44%). The presence of glycerol influenced the release of the extract, decreasing it. The values of n showed that the release occurred by diffusion of the extract, in which the values are close to 0.5 featuring a Fickian transport mechanism, except for the sponges Q1C1E05 and Q1C2GE05, that occurred by anomalous transport (0.5 <n<0.89).

Visando à obtenção de biomateriais que atuem como suporte que direcione e auxilie o processo de regeneração tecidual, materiais poliméricos naturais como a quitosana e o colágeno têm sido estudados. A utilização da quitosana e do colágeno se baseia em propriedades como: biocompatibilidade, ação antimicrobiana, capacidade de ativar macrófagos, estimular a proliferação celular e baixa antigenicidade. Também se tem buscado a utilização de fitoterápicos como, por exemplo, o extrato de semente de uva que no processo de cicatrização tecidual, atua estimulando o fator de crescimento endotelial vascular (angiogênese) e proliferação de fibroblastos. Este trabalho teve como objetivo o preparo e caracterização de esponjas de quitosana/colágeno e quitosana/colágeno/glicerol (1:1) e (1:2) contendo extrato de semente de uva. A caracterização foi feita por calorimetria exploratória diferencial (DSC), espectroscopia de absorção no infravermelho (FTIR), microscopia eletrônica de varredura (MEV), absorção de tampão fosfato salino (PBS) e liberação in vitro do extrato de semente de uva. Estudos de DSC mostraram que ocorre um aumento na temperatura de desnaturação do colágeno com o aumento da concentração do extrato, indicando um efeito de reticulação que é mais pronunciado nas esponjas (1:2) e na presença de glicerol. Os espectros FTIR mostraram que ocorre um deslocamento das bandas de amida I e II devido à interferência do anel aromático presente no extrato. O aumento da proporção de colágeno, de extrato e a adição do glicerol contribuíram para o aumento no número e diâmetro dos poros das esponjas, observados por MEV. A presença do extrato aumenta a capacidade de absorção de PBS das esponjas, o aumento da concentração de extrato aumenta a velocidade de absorção, mas diminui sua capacidade de absorção. Ensaios de liberação in vitro mostraram que as quantidades de extrato liberado em meio PBS aumentaram até as primeiras 24 h. A maior porcentagem de liberação ocorreu para a esponja Q1C2E2 (44%). A presença do glicerol influiu na liberação do extrato, diminuindo-a. Os valores de n mostraram que a liberação do extrato ocorreu por difusão, no qual os valores estão próximos 0,5 caracterizando um mecanismo de transporte Fickiano, exceto para as esponjas Q1C1E05 e Q1C2GE05, sendo por transporte anômalo (0,5<n<0,89). / Aiming to obtain biomaterials that act as a support to direct and assist the process of tissue regeneration, natural polymeric materials such as collagen and chitosan have been used. The use of chitosan and collagen is based on properties such as biocompatibility, antimicrobial activity, low antigenicity, ability to activate macrophages and stimulate cell proliferation. The use of herbal medicines, for example, grape seed extract in the process of tissue healing, acts by stimulating vascular endothelial growth factor (angiogenesis) and fibroblast proliferation. This work aimed to the preparation and characterization of chitosan/collagen and chitosan/collagen/glycerol sponges (1:1) and (1:2) containing grape seed extract. The characterization was made by differential scanning calorimetry (DSC), infrared absorption spectroscopy (FTIR), scanning electron microscopy (SEM), absorption of phosphate buffered saline (PBS) and in vitro release of grape seed extract. DSC studies have shown that there is an increase in denaturation temperature of collagen with increasing extract concentration, indicating a crosslinking effect that is more pronounced in the sponges (1:2) in the presence of glycerol. The FTIR spectra show that there is a displacement of bands I and amide II due to interference of the aromatic ring present in the extract. Increasing the proportion of collagen, extract and addition of glycerol contributed to the increase in the number and diameter of the pores of the sponges, observed by SEM. The presence of the extract increases the absorption capacity of PBS in the sponges, the concentration of the extract increases the absorption rate, but decreases its absorbent capacity. In vitro release tests showed that the released amounts of extract increased up to 24 h. The highest percentage of release was observed for the sponge Q1C2E2 (44%). The presence of glycerol influenced the release of the extract, decreasing it. The values of n showed that the release occurred by diffusion of the extract, in which the values are close to 0.5 featuring a Fickian transport mechanism, except for the sponges Q1C1E05 and Q1C2GE05, that occurred by anomalous transport (0.5 <n<0.89).