Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2017-06-29T13:18:42Z No. of bitstreams: 1 MARIA JOSÉ BATISTA DE SOUSA.pdf: 2843064 bytes, checksum: f400a0df10a20e086f4f74a5b6cf9480 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T13:18:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIA JOSÉ BATISTA DE SOUSA.pdf: 2843064 bytes, checksum: f400a0df10a20e086f4f74a5b6cf9480 (MD5) Previous issue date: 2017-03-28 / The species Brosimum gaudichaudii (family Moraceae) and Caesalpinia ferrea (family Fabaceae) are widely distributed throughout Brazil and are considered medicinal plants. The extract of Brosimum gaudichaudii bark has been indicated for the treatment of skin blemishes and vitiligo. On the other hand, the extract of Caesalpinia ferrea fruit has been used due to its therapeutic properties as antibacterial, anti-inflammatory and analgesic action. Much of the medicinal plant extracts constituents are unknown and may be toxic to human and animal health, so it is necessary to study the qualitative phytochemical of secondary metabolites and to evaluate the cytotoxic, genotoxic and mutagenic potential of the extracts of these species. In this study, in order to evaluate the mutagenic and / or genotoxic effects, different concentrations of the extractive solutions of B. gaudichaudii and C. ferrea were evaluated in vivo in Astyanax sp and Allium cepa, and ex vivo, by the micronucleus test in T lymphocytes humans. Data were submitted to Kruskall-Wallis a non-parametric test and then to simple linear regression with a significance level of 5%. The Allium cepa test, micronucleus test for human T lymphocytes and erythrocytes of Astyanax sp did not indicate mutagenic and / or genotoxic potential of phytochemicals (p> 0.05) when compared to the non-exposed controls, except the concentration of 5 mg/L of B. gaudichaudii that showed cytotoxicity. On the other hand, the comet assay revealed genotoxic action for all concentrations evaluated for the tail length parameter of the comet. For the moment parameter of Olive's tail only the 20mg /L concentration of Caesalpinia ferrea extract was genotoxic. Therefore, apical meristematic cells from the roots of Allium cepa and human T lymphocytes did not present genotoxic and / or mutagenic changes induced by exposure to both plant extracts detectable by micronuclei tests or mitotic index reduction. Genotoxic effect was evidenced by the tail length and tail moment parameter of Olive in the Comet Assay only for C. ferrea extract in the erythrocytes of Astyanax sp. In order to understand the genotoxic and mutagenic activities of B. gaudichaudii and C. ferrea it is important to increase the number of studies to establish safer doses for human consumption. / As espécies Brosimum gaudichaudii (família Moraceae) e Caesalpinia ferrea da família Fabaceae são amplamente distribuídas pelo território brasileiro e são consideradas plantas medicinais. O extrato das cascas de Brosimum gaudichaudii tem sido indicado para tratamento de mancha de pele e vitiligo. Por outro lado, o extrato dos frutos de Caesalpinia ferrea tem sido usado devido suas propriedades terapêuticas como ação antibacteriana, antiinflamatória e analgésica. A maioria dos fitoquímicos presentes nos extratos de plantas medicinais ainda não foram completamente estudados e podem ser tóxicos para a saúde humana e animal. Nesse sentido, é necessário estudos fitoquímicos qualitativos de metabólitos secundários e avaliação do potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico dos extratos destas espécies. Nesse estudo, visando avaliar os efeitos mutagênico e/ou genotóxico, diferentes concentrações das soluções extrativas de B. gaudichaudii e C. ferrea foram avaliadas in vivo em Astyanax sp e em Allium cepa, e em ex vivo, pelo teste de micronúcleos em linfócitos T humanos. Os resultados observados das análises foram submetidos ao teste não paramétrico Kruskall-Wallis e posteriormente a regressão linear simples com nível de significância 5%. O teste em Allium cepa, teste de micronúcleo em linfócitos T humanos e em eritrócitos de Astyanax sp não indicaram potencial mutagênico e/ou genotóxico dos fitoconstituintes (p>0,05) quando comparado aos controles não expostos, exceto a concentração de 5g/L de B. gaudichaudii que apresentou citotoxicidade (p=0,038). Por outro lado, o ensaio cometa, revelou ação genotóxica para todas as concentrações avaliadas no parâmetro comprimento da cauda do cometa, para o parâmetro momento da cauda de Olive, apenas a concentração de 20mg/L do extrato de Caesalpinia ferrea mostrou-se genotóxica. Nenhum dos parâmetros avaliados evidenciou danos genéticos resultantes da exposição aos extratos das cascas do caule de B. gaudichaudii. Portanto, as células meristemáticas apicais das raízes de Allium cepa e os linfócitos T humanos não apresentaram alterações genotóxicas e/ou mutagênicas induzidas pela exposição a ambos extratos vegetais que pudesse ser detectadas pelos testes do micronúcleos ou redução do índice mitóticos. Enquanto, nos eritrócitos de Astyanax sp foi evidenciado ação genotóxica pelo parâmetro comprimento da cauda do cometa e momento de da cauda de Olive somente para o extrato de C. ferrea. Diante do exposto, há necessidade de ampliar os estudos para melhor compreensão das atividades genotóxicas e/ou mutagênicas dos extratos de B. gaudichaudii e C. ferrea visando o estabelecimento de doses mais seguras para o consumo humano.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The present work reports the development of new methodologies to evaluate the in vitro and in vivo antioxidant capacity against peroxyl and hydroxyl radicals in five medicinal plant samples (Matricaria chamomilla L., Psidium guajava, Achyrocline satureoides, Baccharis genistelloides and Cymbopogon citratus) and seven phenolic compounds (rutin, quercetin, resveratrol, gallic acid, ferulic acid, caffeic acid and rosmarinic acid). The antioxidant capacity of the samples was analyzed by two independent methods. In the first one, a new approach was used to detect hydroxyl radicals indirectly using an electrochemical procedure, in which the radicals destroy a thiol self-assembled monolayer (SAM) on a gold electrode. This monolayer can block the electrochemical signal of a dissolved redox probe. When such an electrode with a SAM is exposed to free radicals, these radicals destroy the SAM and the electrochemical signal of a redox probe recovers to a degree proportional to the extent of dissolution of the SAM. In the second method, the evaluation of antioxidant capacity against peroxyl and hydroxyl radicals is based on the indirect detection of these reactive oxygen species (ROS) by fluorimetry (ex/em: 485/520 nm) employing 2 -7 -dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA) as a fluorescent probe. After the deacetilation reaction of DCFH-DA, it can be oxidized by ROS to the fluorescent compound DCF. The peroxyl radicals were produced at 37ºC by thermal decomposition of 2,2 -azobis (2 methylpropianamidine) dihydrochloride (ABAP), while hydroxyl radicals were generated by the Fenton reaction. In vivo assays were evaluated using zebrafish (Danio rerio) hepatocytes exposed to P. guajava and C. citratus extracts (better and worst in vitro results, respectively). The results obtained by the electrochemical and fluorimetric methods show that it is difficult to classify the tested plants according to their antioxidant capacity, since the results depended strongly on the extract concentration and composition as well as on the principle of the analytical method. However, there was a good correlation between the in vitro and in vivo assays for P. guajava and C. citratus extracts, since these results showed a reduction in the intracellular ROS concentration in the hepatocytes exposed to P. guajava extract. Furthermore, no antioxidant effect was observed in the assay with C. citrates extract, what is in agreement with the in vitro assays for this plant species. At last, the thesis intended to proof and to highlight the discrepant results obtained by independent methods for the same antioxidant species. Additionally, it aimed to compare the different methods according to the differences among the experimental procedures by using different ROS. Furthermore, the stability, reactivity and the half-life time of the free radicals are discussed. / O presente trabalho visa ao desenvolvimento de novas metodologias para a determinação da capacidade antioxidante in vitro e in vivo contra radicais peroxila e hidroxila em amostras de 5 plantas medicinais (Matricaria chamomilla L., Psidium guajava, Achyrocline satureoides, Baccharis genistelloides e Cymbopogon citratus) e sete compostos fenólicos (rutina, quercetina, resveratrol, ácido cafeico, ácido ferúlico, ácido gálico e ácido rosmarínico). A capacidade antioxidante das amostras foi determinada por dois métodos independentes. No primeiro, testou-se uma nova forma para a detecção de radicais hidroxila, usando-se um procedimento eletroquímico no qual os radicais destroem uma monocamada auto-organizada de hexanotiol sob um eletrodo de ouro. Esta monocamada consegue inibir o sinal eletroquímico de um par redox dissolvido, e, ao ser atacada por radicais livres, estes a destroem, e a recuperação do sinal eletroquímico do par redox se dá de forma proporcional à extensão de dissolução da monocamada. No segundo método, a determinação da capacidade antioxidante contra radicais peroxila e hidroxila ocorre através da detecção indireta destes radicais por fluorimetria (ex/em: 485/520 nm), empregando diacetato de 2 ,7 -diclorofluoresceína (DCFH-DA) como substrato. O DCFH-DA, após sofrer desacetilação, pode ser oxidado por espécies reativas de oxigênio (ERO), gerando fluorescência. Os radicais peroxila foram gerados através da termodegradação do reagente cloreto de 2,2 -azobis (2-metilamidinopropano) (ABAP) a 37ºC, enquanto os radicais hidroxila foram gerados pela reação de Fenton. Ensaios in vivo foram avaliados utilizando-se hepatócitos do peixe zebra (Danio rerio), expostos aos extratos das plantas P. guajava e C. citratus (melhor e pior desempenho in vitro, respectivamente). Os resultados obtidos pelos métodos eletroquímico e fluorimétrico demonstram que é extremamente difícil classificar as plantas de acordo com sua capacidade antioxidante, uma vez que o resultado obtido depende fortemente da concentração e da composição química dos extratos, além do princípio do método analítico empregado. Entretanto, obteve-se uma boa correlação entre os ensaios in vitro e in vivo feitos para os extratos das plantas P. guajava e C. citratus, já que os resultados obtidos mostraram uma redução da concentração de ERO intracelular em forma dose-dependete nos hepatócitos expostos a P. guajava, sem se observar efeito antioxidante no ensaio com C. citratus, a exemplo dos ensaios in vitro realizados. O presente trabalho pretende chamar a atenção para esses diferentes resultados obtidos, e compara os diferentes métodos levando em consideração as diferenças existentes entre as metodologias, assim como as diferenças existentes entre os radicais testados. Além disso, discute-se a estabilidade, a reatividade e tempo de meia-vida destas espécies.