La intensificación de la producción agrícola en los últimos cuarenta años ha provocado un notable aumento de la cantidad de alimento producido, a costa de provocar un elevado coste medio ambiental. Como problemas comunes asociados a las prácticas agrarias implantadas con el modelo actual de agricultura intensiva se encuentran la eutrofización y pérdidas de biodiversidad, lixiviación de nitratos y contaminación de las aguas subterráneas, degradación de la estructura del suelo, enfermedades incontroladas y contaminación por pesticidas, etc. Además, este modelo de producción generalmente genera desequilibrios nutricionales, lo cual no es sostenible a largo plazo.Por ello, es conveniente adaptar la agronomía a unas prácticas que sean compatibles con el uso sostenible de los recursos naturales. Como respuesta a esta necesidad de formas más sostenibles de producción agrícola ha surgido la agricultura ecológica y más recientemente, la producción integrada. El principal objetivo de estos modelos de producción es desarrollar sistemas agrícolas que sean más sostenibles en términos agronómicos, ambientales y económicos, así como asegurar la producción de alimentos de elevada calidad de forma respetuosa con el medio ambiente.El presente trabajo está enmarcado en el seno de un proyecto europeo denominado VEGINECO, cuyo propósito es el desarrollo, ensayo, evaluación y comparación de prototipos agrarios de hortícolas basados en técnicas de manejo de producción integrada y ecológica.El objetivo fundamental de este estudio ha sido el cálculo de los balances simplificados de nutrientes y de materia orgánica a lo largo de una rotación de cultivos hortícolas en sistemas de producción integrada y ecológica durante tres años, con la finalidad de aportar una información útil que permita ajustar el abonado a las necesidades nutritivas reales de los cultivos, evitando así los excesos que se suelen cometer en la agricultura intensiva, que suponen un gasto innecesario para el agricultor y que son una importante fuente de contaminación ambiental. Por ello, se ha evaluado la idoneidad de los balances de nutrientes (N, P, K y Mg) y de materia orgánica para su empleo como indicadores de sostenibilidad de los agrosistemas y posibles herramientas para el cálculo de la fertilización.A su vez, se ha comparado la evolución de éstos balances teóricos con la de los contenidos de nutrientes asimilables en el suelo, con el fin de comprobar si existe una relación directa entre ellos.Este estudio podrá servir de orientación para futuras reconversiones a sistemas de agricultura más sostenibles, ya que con el rendimiento de la cosecha obtenida también incluido en el presente trabajo, además de evaluar el efecto del manejo sobre la producción, se podrá tener una idea aproximada de la cuantía de las extracciones de nutrientes que ocasionan los cultivos en diferentes zonas de la Comunidad Valenciana, permitiendo así cuantificar las necesidades de fertilización de los cultivos hortícolas en estos sistemas de producción integrada y ecológica. / The intensification of agricultural production over the last forty years has strongly increased the amount of food obtained, although it has also had as a consequence a high environmental cost. Eutrophication and biodiversity losses, nitrate leaching and groundwater pollution, degradation of soil structure, uncontrolled diseases and pesticides contamination are common problems associated with conventional cropping systems. For this reason, it is important to consider the convenience of using management practices compatibles with the sustainable use of resources. Two more sustainable ways of production are organic farming and more recently integrated production organic. This work was included in the large-scale EU project VEGINECO, which focused on research into horticultural systems to develop, test, evaluate and compare prototypes of integrated and ecological vegetable farming systems.The main objective of this study was to calculate simplify macronutrients (N, P, K, Mg) and organic matter balances for integrated and organic systems during three years in a crop rotation. These results could give an important information to improve fertilization programmes, adjusting the inputs to the real nutrient requirements and avoiding the common surpluses in intensive agriculture. Furthermore, these additionally inputs increase unnecessary costs to the farmers and they are an important focus of environmental pollution. For this reason, it has been consider the convenience of using nutrient balances as environmental indicators and as tools for nutrient management.Additionally, these theoretic balances were compared to the evolution of available nutrient reserves in soil systems to prove if there is any direct relation between them.This study could be very useful to get further information about patterns of respectful agriculture, due to with the results of crop production included in this experience, moreover we can evaluate the effects of the management in production, we can determinate the absorption of nutrients on some species of vegetables in different areas of Valencian Community, as advisory criteria for the nutrient necessities in crops in integrated and organic systems.

La vitamina E es un nutriente esencial que actualmente está recibiendo una considerable atención pública. Sus potentes propiedades antioxidantes -principalmente como inhibidor de la peroxidación lipídica- han puesto de manifiesto su importancia en la prevención y tratamiento de enfermedades en las que el estrés oxidativo interviene como componente destacado en su etiología o desarrollo; entre estas enfermedades se encuentran alteraciones tan importantes en la actualidad como son los trastornos cardiovasculares, el cáncer, la inflamación crónica y los trastornos neurodegenerativos. La deficiencia severa en vitamina E raramente ocurre en humanos como consecuencia de una deficiencia dietética. Sin embargo, esta deficiencia puede producirse como resultados de anormalidades genéticas en la -TTP y como resultado de determinados síndromes de malabsorción. Además de estas alteraciones, conviene destacar que el incremento de población envejecida, cuyos requerimientos antioxidantes son más elevados, así como la tendencia actual a consumir dietas bajas en grasas conlleva que gran parte de la población no llegue a consumir los requerimientos mínimos de vitamina E. A pesar de que numerosos trastornos hepáticos tales como fibrosis y cirrosis, entre otros, cursan con deficiencia en vitamina E, la mayoría de modelos de deficiencia in vivo han basado su estudio en tejidos como el sistema nervioso central y el músculo, cuya afectación es aparentemente la responsable de gran parte de la sintomatología de la deficiencia, mientras que el hígado ha sido relativamente poco estudiado, desconociéndose en gran medida los procesos moleculares que tienen lugar en este tejido como consecuencia de la depleción de vitamina E. En este contexto de alteraciones hepáticas, el factor de transcripción sensible al estado redox NF-kappaB (NF-B) ha sido implicado como mediador en procesos de daño hepático inducido por el estrés oxidativo. El propósito de este estudio es determinar la actividad de unión de NF-B al DNA hepático y la respuesta de genes diana sensibles al estado redox y genes moduladores del ciclo celular en un modelo in vivo de deficiencia crónica en vitamina E. Para ello, se alimentaron ratas Wistar con una dieta control o deficiente en vitamina E hasta los 60 o 90 días tras el nacimiento. Las ratas deficientes en vitamina E mostraron un incremento progresivo en los niveles de malondialdehído y un descenso en la concentracion de glutatión tanto en hígado total como en mitocondria aisladas de hígado. La deficiencia en vitamina E incrementó la actividad de unión de NF-B al DNA en el hígado (determinada mediante análisis por EMSA) y provocó un incremento de la expresión de los genes -glutamilcisteina sintetasa subunidad catalitica(-GCSC), -glutamilcisteina sintetasa subunidad reguladora (-GCSM), ciclina D1, ciclina E y un descenso de la transcripción de p21. Mediante el ensayo de inmunoprecipitación de fragmentos de cromatina (ChIP assay) observamos que NF-B está directamente regulando la transcripcion de -GCSC , -GCSM y ciclina D1, a través de la unión de NF-B a sus respectivos promotores, que se produce en animales deficientes en vitamina E. Estos hallazgos sugieren que la deficiencia crónica de vitamina E induce importantes procesos moleculares relacionados con el daño celular hepático, con una alteración de la expresión de genes marcadores de estrés oxidativo y genes que controlan el ciclo celular y demuestran que NF-B está implicado en esta respuesta. Los resultados obtenidos enfatizan la importancia de mantener un adecuado consumo de vitamina E, no sólo para prevenir el daño oxidativo hepático sino también para modular la correcta transducción de señales. / Vitamin E is an essential antioxidant nutrient that is receiving considerable public attention. Interest in vitamin E is high because new scientific data suggest optimal intake can help delay or prevent the onset of cancer, atherosclerosis, cataracts and other major diseases. Such degenerative diseases have been linked to damage from free radicals originated in body processes of oxidative stress. The redox-sensitive transcription factor Nuclear Factor-kappaB (NF-B) has been implicated as mediator in process of liver injury induced by oxidative stress. The purpose of this study was to determinate liver DNA-binding activity of NF-B and the response of target redox-sensitive genes and cell-cycle modulators in an in vivo model of oxidative stress induced by chronic vitamin E deficiency. Rats were fed either control diet or vitamin E free diet until 60 or 90 days after birth. Liver from 90 days vitamin E-deficient rats and isolated liver mitochondria from 60 or 90 days vitamin E deficient rats showed an increase in malondialdehyde (MDA) levels and a decrease in glutathione (GSH) concentration when compared with values found in its respective control rats. Vitamin E deficiency enhanced liver DNA-binding activity of NF-B (EMSA analysis) and up-regulated gamma-glutamylcysteine synthetase ( GCSC; GCSM), cyclin D1 and cyclin E. We also showed down-regulation of p21(Waf1/Cip1) transcription. Moreover, chromatin inmunoprecipitation (ChIP) assay demosntrated that NF-B directly regulates transcription of GCS (both subunits) and cyclin D1 through the binding of NF-B to the corresponding gene promotors, which was enhanced in vitamin E-deficiency. These findings show that vitamin E-deficiency induces significant molecular events related to liver cell damage with altered expression of either gene markers of oxidative stress and genes that control the cell cycle and demonstrate that liver NF-B is envolved in this response. Our results emphasize the importance of maintaining an adequate vitamin E consumption not only to prevent liver oxidative damage but also in modulating signal transduction.

En la glándula mamaria, al final de la lactancia, la acumulación de leche y el descenso de las hormonas lactogénicas inician una cascada de señalización que conduce a la muerte de las células secretoras por apoptosis y a la regresión de tejido mamario. Esta muerte celular se caracteriza por la liberación de citocromo c al citosol, donde activa las caspasas, responsables de los cambios observados en la apoptosis. Uno de ellos es la fragmentación del ADN internucleosomal, por activación de una endonucleasa. Además también existen cambios a nivel genético: el destete de 2 horas produce una inducción temprana de p53, mientras que otros genes como c-Jun o JNK no aumentan hasta 8 ó 24 horas de destete. La expresión y los niveles de proteína de p21cip1 y p27kip1, ambos inhibidores de las quinasas dependientes de ciclinas, que favorecen la detención del ciclo celular, también está significativamente aumentada tras el destete.Todos los cambios anteriores se reproducen en la glándula mamaria cuando disminuye la disponibilidad de GSH, bien con propargilglicina (PPG), un inhibidor de la transulfuración hepática con lo que disminuye la síntesis hepática de GSH y con ello su disponibilidad plasmática, o bien con butionina sulfoximina (BSO), inhibidor de la síntesis de GSH. Estos resultados sugieren que el flujo intertisular de GSH es un mecanismo muy importante para abastecer de L-cisteína a la glándula mamaria y resaltan la importancia de este proceso fisiológico en el mantenimiento de la lactancia.El óxido nítrico (NO) también está implicado en la apoptosis. A altas concentraciones forma derivados más reactivos que pueden inducir la apoptosis por: i) alteración mitocondrial; ii) activación de la vía de las MAP quinasas y iii) daño al ADN y acumulación de p53. En la glándula mamaria de rata lactante se expresan las tres isoformas de la enzima encargada de la síntesis de NO (NOS). No obstante, la expresión de la isoforma endotelial (eNOS) y de la inducible (iNOS) se modifican tras el destete o tras el tratamiento con BSO: los niveles de eNOS disminuyen tras un destete de 24 horas o tras el tratamiento con BSO, mientras que los de iNOS están aumentados con respecto al control y este incremento depende del tiempo de destete. Como consecuencia, la producción de NO en la glándula mamaria está aumentada durante la involución y este aumento induce la apoptosis y genera peroxinitrito, capaz de nitrar residuos de tirosina en las proteínas alterando su función. Podemos concluir que el NO juega un papel importante en la inducción de la apoptosis en la glándula mamaria.Por último, realizamos un estudio comparativo de los patrones de expresión génica en acini aislados del tejido mamario de ratas lactantes control, sometidas a un destete de 8 horas o tras el tratamiento con PPG mediante Microarray chip. De los, aproximadamente, 9000 genes comparados, sólo encontramos diferencias significativas en un 1-2% y establecimos dos patrones que se reproducían en ambas condiciones: el primero de ellos incluía genes implicados en la apoptosis celular: incrementaba la caspasa-6, la metaloproteinasa MMP-14, JunD o el antígeno CD14. El segundo patrón incluía enzimas implicados en el metabolismo glucídico y lipídico. Durante la lactancia la glándula mamaria es uno de los tejidos más activos en la captación de nutrientes; prácticamente el 50% de la glucosa captada será transformada en lípidos mediante la lipogénesis de novo. Sin embargo, en la involución se inhibe está síntesis de lípidos, por lo que los genes que codifican enzimas de esta vía disminuyen: piruvato deshidrogenasa, piruvato carboxilasa, acetil-CoA carboxilasa, ácido graso sintasa, etc. La disminución de GSH mimetiza los cambios encontrados durante el destete a nivel de la expresión génica. / In the lactating mammary gland, weaning produces mitochondrial cytochrome c release and nuclear DNA fragmentation. This is followed by a significant decrease in milk production and the decline of lactation. Weaning for 2h produces an early induction of p53, whereas c-Jun and JNK are elevated after 24h of weaning. The expression of p21cip1 and p27kip1, both cyclin-dependent kinase inhibitors, is significantly higher in weaned rats when compared to control lactating rats. All the changes mentioned above also happen in the lactating mammary gland when PPG, an inhibitor of the liver trans-sulfuration pathway, is administered. This effect is partially reversed by N-acetylcysteine (NAC) administration. The administration of buthionine sulfoximine (BSO), an irreversible inhibitor of -glutamyl cysteine synthetase, to lactating rats produces a decrease in GSH levels and changes in protein levels and gene transcripts similar to the rats with impaired trans-sulfuration pathway. These data suggest that the intertissue flux of glutathione is an important mechanism of L-cysteine delivery to the lactating mammary gland and emphasizes the importance of this physiological event to maintain gene expression required to keep lactation.Once characterized the apoptosis in the mammary gland we used this model to study "in vivo" the role of nitric oxide during cell death. The three isoforms of the nitric oxide synthase (NOS) are constitutively present in the acini of the lactating mammary gland. The amount of iNOS and NO production are increased during weaning when compared to control lactating glands, but the protein levels of the eNOS isoform are diminished. Western blot analysis demonstrated that protein nitration was increased in the weaned mammary gland, althought limited to a few specific tyrosine-nitrated proteins. A decrease of GSH in the mammary tissue at the peak of lactation partially mimics these findings and emphasizes the role of NO as a potential signal that triggers involution.

El norfloxacino es una fluorquinolona de uso frecuente en la descontaminación intestinal selectiva en pacientes con cirrosis hepática, como profilaxis secundaria de la peritonitis bacteriana espontánea. Su utilización prolongada se ha demostrado que favorece la aparición de cepas de E. coli resistentes a quinolonas en heces. Sin embargo, en estos pacientes se ha observado que el desarrollo de episodios infecciosos por este tipo de bacterias no es tan frecuente como cabría esperar, debido, probablemente, a la alteración de la capacidad de adherencia bacteriana a las células epiteliales intestinales inducida por el norfloxacino.El objetivo principal de nuestro proyecto fue estudiar in vitro la capacidad de adherencia bacteriana a células epiteliales de las cepas de E. coli aisladas en pacientes con cirrosis, tanto en presencia como en ausencia de concentraciones subinhibidoras de norfloxacino en el medio, y valorar así la utilidad del tratamiento prolongado con esta quinolona. Además se evaluó la presencia de tres de los factores de adherencia más importantes y su influencia en la adherencia al epitelio. Se estudiaron 59 cepas de E. coli (22 resistentes y 37 sensibles a quinolonas) obtenidas mediante escobillado rectal en pacientes con cirrosis, que se incubaron con células epiteliales bucales, con y sin concentraciones subinhibidoras de norfloxacino en el medio. La presencia de los tres factores de adherencia: fimbrias tipo I, adhesina afimbrial e intimina, se estudió mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Como resultado del ensayo de adherencia, se observó que ambos fenotipos bacterianos (sensibles y resistentes a quinolonas), mostraron una capacidad de adherencia similar. Esta capacidad de adherencia a su vez, disminuyó significativamente en todos los casos al añadir concentraciones subinhibidoras de norfloxacino al medio. La presencia de factores de adherencia bacteriana fue menos frecuente en las cepas resistentes a quinolonas que en las sensibles. El 18% de las cepas analizadas en su conjunto carecieron de los factores de adherencia estudiados. Aunque no encontramos diferencias significativas entre ambos fenotipos bacterianos, la presencia conjunta de varios factores de adherencia se correlaciona con un ligero aumento de la adherencia bacteriana.Por tanto, podemos concluir que la capacidad de adherencia bacteriana a células epiteliales de cepas de E. coli sensibles y resistentes a quinolonas es similar, y disminuye significativamente en ambos casos al añadir norfloxacino al medio de cultivo. Estos resultados apoyarían el uso continuado de norfloxacino en estos pacientes a pesar de la selección de cepas resistentes a quinolonas en heces.Por otro lado, las cepas resistentes a quinolonas muestran una menor presencia de factores de adherencia, lo que respaldaría la conclusión anterior y sugiere la existencia de una pérdida de factores al adquirir la resistencia. Asimismo, podría asociarse a una posible disminución de la capacidad infectiva, ya que el fitness de la bacteria se resiente al desarrollar mecanismos de resistencia.Estos datos, a su vez, sugieren que el desarrollo de cepas resistentes a quinolonas en la luz intestinal no es un factor determinante para inducir la traslocación bacteriana. Cabe considerar que otros factores tales como el sobrecrecimiento de estas cepas, pueda ser el factor que favorezca su traslocación. / Prolonged use of norfloxacin as secondary prophylaxis of spontaneous bacterial peritonitis entails an appearance of 40% of E.coli quinolone-resistant in stools. However, the development of infections caused by this resistant bacteria is not so frequent as expected. Our aim was to asses bacterial adherence of either quinolone-sensitive or resistant strains in presence/absence of subinhibitory concentrations of norfloxacin and to evaluate the influence of some relevant adherence factors presence on adherence to cells. Fifty-nine strains of E.coli obtained from rectal swabs of cirrhotic patients were incubated with oral epithelial cells in presence/absence of sub-MIC of norfloxacin. Bacterial adherence was measured by the percentage of epithelial cells with attached bacteria (marked with fluorescein). Adherence factors were determined by PCR of specific sequences for type I fimbriae, intimin and afimbrial adhesin. Type I fimbriae expression was also measured by agglutination inhibition with mannose. Twenty-two resistant and 37 quinolone-sensitive strains were isolated. Bacterial adherence was similar in both series (78.2% vs 80.6%), and these percentages were similarly and significantly reduced when norfloxacin was added (48.5% vs 45.0%). The most frequent factor was type I fimbriae (71%), which expression was shown in 52.3%. The 18% of the strains lacked the adherence factors studied. Adherence factors presence was less frequent in quinolone-resistant strains than in sensitive ones. Adherence observed is independent of the presence/absence of the adherence factor studied. The joint presence of various adherence factors is correlated with a slightly increase in bacterial adherence, independently of the sensitivity to quinolones. Therefore, bacterial adherence ability of E.coli is independent of its sensitivity to quinolones, and subminimal concentrations of norfloxacin decreases bacterial adherence in both bacterial phenotypes in the same degree. This results would support the continuous use of norfloxacin in this patients, in spite of the selection of resistant strains in stools.Quinolone-resistant strains showed a diminished adherence factors presence, which could be associated to a less infective ability, probably because of the bacterial fitness impairment produced by the resistance development.This results suggest that quinolone-resistant strains development is not as determinant factor in bacterial traslocation as the overgrowth of this bacterial phenotype.

Desde hace una década, el tratamiento farmacológico de la trombosis venosa profunda se realiza con heparinasde bajo peso molecular (HBPM) (3-9 kD).La administración transdérmica de fármacos presenta ventajas frente a las vías convencionales, como laeliminación del efecto de primer paso intestinal y hepático; la posibilidad de administrar a velocidad constantemedicamentos de forma no invasiva, etc. Pero esta vía de administración no es generalizable a todos los fármacos,puesto que deben reunir una serie de características para que las cantidades que penetran, proporcionenconcentraciones plasmáticas eficaces.Se ha seleccionado la Bemiparina (HBPM de PM medio=3.6 kD), porque a priori, se piensa que el estudiopuede proporcionar resultados útiles para la prevención de la enfermedad tromboembólica, con todas las ventajasque la nueva vía de administración aportaría en este campo terapéutico.Los objetivos son:- Determinación de la capacidad de penetración cutánea in vitro e in vivo de Bemiparina,- Valoración de las muestras a través del método que figura en la Farmacopea Española 2002 y búsqueda de dosmétodos alternativos.La metodología a seguir fue la siguiente:- "Ensayos in vitro": el sustrato biológico es piel humana. Los ensayos se realizan en células de difusiónestandarizadas, de dos compartimentos, dado y receptor, entre los cuales se dispone la membrana. En el dador sedispone la formulación de Bemiparina a analizar. En el compartimento receptor se dispone una solución al 0.9% deNaCl.- "Estudios in vivo": se aplicará una capa de aproximadamente 1 mm de espesor de la formulación seleccionadaen la fase 1 en una zona dorsal del animal (rata Wistar macho de 250-300 g de peso).A los animales se les implanta una cánula de silicona en la vena yugular, que permite la toma de muestras desangre.La valoración de las muestras se realizará mediante la determinación de la actividad anti-Xa (método que figuraen la Farmacopea Española 2002).Como alternativa se estudia la posibilidad de dos métodos de CLAE:1. Determinación de Bemiparina sódica por detección UV2. Determinación de Bemiparina sódica por fluorescencia, a través del disacárido producido por unadigestión enzimática. / For a decade, the pharmacologic treatment of deep vein thrombosis (DVT) consists inthe administration of low molecular weight heparin (LMWH) (3-9 kD).Transdermal administration of xenobiotics has some advantages in comparison to theconventional routes, althought this route isn´t generalizable for all xenobiotics.We have select the BEMIPARIN (3.6 kD) out of all LMWH, because at the beginning,we thik the study can get useful results for the prevention of thromboembolic disease,with all advantages that the new administration way could contribute at this therapeuticfield.The objectives of this study are:- Determination of the capacity of Bemipain´s cutaneous penetration in vitro e invivo.- Analyzation of the samples by the method of the King Spanish Pharmacopeia,2002, and search of two alternating methods.For the in vitro trials, we employ human skin as biologic membrane. The experimentscarry out in standarizaded diffusion cells. These cells have two compartiments, donorand receptor.For the in vivo trials, the animal employed is Wistar male rat (250-300 g of weight). Weapply on the back zone a cape of 1 mm of thickness, of the formulation selected in thein vitro trials. Previous the day of experiment, we implant a cannula of silicone in thejugular vein for the taking of blood samples.The samples are analyzated by the determination of anti-Xa activity (method of KingSpanish Pharmacopeia, 2002), and as alternative we study the possibility of employ twomethods of high performance liquid chromatography (HPLC):1. Determination of sodic Bemiparin by ultraviolet deteccion.2. Determination of sodic Bemiparin by fluorescence, through of dissaccharideproduced by an enzymatic digestion.

Tras una infección bacteriana se observan cambios agudos de la función gastrointestinal. En la presente Tesis hemos analizado en la rata los mecanismos involucrados en la alteración de la función motora gastrointestinal asociada a los estadios iniciales de la endotoxemia. En estas circunstancias se produce una inhibición de la motilidad gástrica caracterizada por hipocontractilidad del estómago proximal y enlentecimiento del vaciamiento gástrico; por el contrario, a nivel intestinal, se produce un incremento del tránsito acelerándose la excreción fecal. Este comportamiento dual podría interpretarse como un mecanismo puesto en marcha con la finalidad de disminuir la absorción de toxinas y facilitar su pronta expulsión. Estos cambios se producen rápidamente gracias a la actuación del sistema nervioso, tanto central como periférico. Así, los efectos de la endotoxina están mediados por la activación de las neuronas aferentes sensoriales, que envían la señal de "alerta" al sistema nervioso central donde rápidamente se procesa la información y posteriormente se activan fibras motoras eferentes vagales que están en íntimo contacto con el sistema nervioso entérico, modulando finalmente la motilidad gastrointestinal. Además, la regulación postraduccional de la enzima óxido nítrico sintasa neuronal tiene un papel protagonista en todo este proceso. Un incremento de la síntesis de óxido nítrico en el tronco del encéfalo y en neuronas postganglionares del plexo mientérico sucede en los primeros estadios de la endotoxemia. Pasado el efecto agudo de la endotoxina, empezaría a observarse lo que se considera parte de una respuesta inmune generalizada mediada por la expresión de las enzimas óxido nítrico sintasa inducible y ciclooxigenasa-2. En respuesta a una invasión bacteriana, parece que el organismo maximiza la actividad de sus recursos fisiológicos mientras se alcanza la plena actividad del sistema inmune. / After bacterial infection, the host reacts by signalling to the central nervous system where a cascade of physiologic, neuroendocrine and behavioural processes is orchestrated, collectively termed the acute phase response. Endotoxemia following Gram-negative bacterial infection induces a wide array of effects, including fever, loss of appetite and changes in gastrointestinal function that attempt to eliminate the challenge and restore homeostasis. Systemic administration of low doses of endotoxin (5-40 µg/kg) to rats is associated with changes in gastrointestinal motor function, inhibition of gastric acid secretion and increase in the gastric mucosal resistance to damage. These changes are rapid in onset (observed within one hour), not related to vascular dysfunction, and appear to be mediated by mechanisms that involve the peripheral and the central nervous system. Nitric oxide (NO) plays a central role in the physiology of the gastrointestinal tract and its response to illness. Accumulated evidence supports an increase of NO synthesis in the brainstem, as well as in the gastric myenteric plexus thirty minutes after endotoxin administration. Such a synthesis is due to constitutive nitric oxide synthase (NOS) and occurs before the induction of NOS takes place. In the present Thesis we provide experimental evidence supporting the hypothesis that activation of a physiologic mechanism, mediated by the autonomic and the central nervous systems as well as constitutive NOS isoforms, is involved in acute changes of gastrointestinal motor function during early endotoxemia.

El término diabetes mellitus engloba una serie de enfermedades caracterizadas por un déficit absoluto o relativo de insulina, resultante de defectos en la secreción o en la acción de la hormona o ambos. La diabetes es uno de los más importantes problemas de salud pública de la sociedad actual debido a su elevada prevalencia, a sus complicaciones a largo plazo, y a que comporta un importante gasto sanitario. Entre las complicaciones crónicas asociadas a esta enfermedad destaca la nefropatía diabética por ser una de las causas más importantes de morbilidad y mortalidad prematura en pacientes con diabetes mellitus, siendo además la causa individual más importante de insuficiencia renal en el mundo occidental. La hiperglucemia es una de las principales causas de daño vascular induciendo cambios en el metabolismo de las células de la pared vascular que conducen a un aumento del estrés oxidativo y como consecuencia un mal funcionamiento de las células endoteliales.Esta disfunción endotelial provocada por el estado diabético se traduciría en una alteración de los factores relajantes derivados del endotelio, ya sea en su producción, en la activación/inactivación, e incluso podría estar afectada la difusión de los mismos hacia las células musculares lisas. Por otra parte, también la producción y la actividad de los factores contráctiles derivados del endotelio se ven afectados por la diabetes.En el presente trabajo se estudia el efecto de la diabetes sobre la respuesta vascular de la arteria renal de conejo a tres sustancias vasoactivas, acetilcolina, 5-hidroxitriptamina (5-HT) y endotelina-1 (ET-1). Analizamos también el posible efecto que la diabetes pudiera tener sobre la función moduladora que ejerce el endotelio en estas respuestas, centrando el estudio en la acción del óxido nítrico y de los derivados del ácido araquidónico. Para ello utilizamos un modelo experimental de diabetes química en el conejo, empleando como agente diabetógeno el aloxano. Tras la inducción de la diabetes, los animales se mantienen estabulados durante seis semanas. Los experimentos se realizaron utilizando segmentos de arteria renal procedente de conejos control y de conejos diabéticos. La metodología utilizada consiste en un modelo experimental in vitro, que registra los cambios de tensión isométrica que se producen en la pared del vaso.Los principales resultados obtenidos en el presente trabajo son los siguientes:Acetilcolina: La diabetes potencia la respuesta relajante de la arteria renal de conejo a la acetilcolina. En animales control la respuesta relajante a la acetilcolina está mediada por oxido nítrico, por un prostanoide derivado de la ciclooxigenasa, probablemente prostaciclina, y por el factor hiperpolarizante derivado del endotelio. La diabetes modifica la participación de los factores que modulan dicha respuesta, aumentando la actividad moduladora del óxido nítrico y de la prostaciclina.5-Hidroxitriptamina: la diabetes aumenta la contractilidad de la arteria renal a la 5-HT. En animales control la respuesta contráctil a la 5-HT está regulada por la liberación de óxido nítrico endotelial y extraendotelial y por un prostanoide vasoconstrictor. La diabetes modifica los factores que modulan esta respuesta, alterando la liberación de óxido nítrico extraendotelial y la del prostanoide vasoconstrictor.Endotelina-1: La diabetes disminuye la potencia contráctil de la ET-1 en la arteria renal. En los animales control la respuesta contráctil a la ET-1 está modulada por la liberación de óxido nítrico endotelial y de un prostanoide vasoconstrictor de origen muscular. La diabetes modifica la participación de los factores que modulan dicha respuesta: se mantiene la producción del prostanoide vasoconstrictor muscular, no se evidencian cambios en la actividad moduladora del óxido nítrico, pero aparece un predominio de un prostanoide vasodilatador endotelial regulando esta respuesta. / The purpose of this work was to analyse the influence of experimental diabetes on vascular response of rabbit renal artery to three vasoactive substances, acetylcholine (vasodilator), 5-hydroxytryptamine and endothelin-1 (vasoconstrictors), including the study of the effects of the disease on the endothelial mechanisms that regulate the vascular response. To do this, we studied the influence of experimental diabetes on the modulatory role of endothelial-derived factors, in particular nitric oxide (NO), and some derivative from arachidonic acid (prostacyclin and thromboxane A2) in the response of rabbit renal artery.Diabetes was induced by injecting alloxan into the lateral ear vein. Thereafter, the animals were maintained on tap water and regular food ad libitum for 6 weeks. A second group of rabbits was maintained under the same conditions for the same time period to serve as age-matched controls. Six weeks after diabetes induction, the diabetic and the aged-matched control rabbits were anaesthetised and killed. The experiments were carried out by recording isometric tension of cylindrical segments of renal artery from control and diabetic rabbits.The main results obtained in the present work were the following:Acetylcholine: diabetes potentiates the acetylcholine-induced relaxation in rabbit renal arteries. In this vascular bed, the acetylcholine-induced relaxation is mediated by NO, a cyclooxygenase product, probably prostacyclin, and EDHF. The increased mediation of NO and prostacyclin observed in diabetes could be responsible for this enhanced relaxant potency of acetylcholine.5-Hydroxytryptamine: diabetes enhances contractile response of rabbit renal artery to 5-HT. In control animals, this response is regulated by both endothelial and non-endothelial (neuronal) NO and by a constrictor prostanoid. Diabetes impairs the release of non-endothelial NO and the vasoconstrictor prostanoid.Endothelin-1: diabetes reduced the contractile potency of ET-1 on rabbit renal artery. In control animals the arterial response to ET-1 is modulated by the release of endothelial NO and by muscular constrictor prostanoid. In diabetic animals the arterial response is modulated by endothelial NO, a muscular constrictor prostanoid and an endothelial vasodilator prostanoid.

Se ha utilizado la topología molecular para obtener la caracterización numérica de una serie de moléculas con actividad antibacteriana del grupo de las fluorquinolonas, utilizando un conjunto de índices topológicos que son descriptores de la estructura molecular. Tras la obtención de las relaciones Q.S.A.R. y de las funciones de conectividad, se realiza el análisis lineal discriminante, que permite obtener una función capaz de discernir, de entre un conjunto de compuestos químicos, aquellos que posean la actividad deseada, en nuestro caso la antibacteriana.Aquellos compuestos que muestran teórica actividad son sometidos a ensayos farmacológicos. En una primera fase, se les realizan pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, para poner de manifiesto su actividad y la capacidad predictiva del método propuesto, tras lo cual, aquellas estructuras que muestran actividad, son sometidas a ensayos de toxicidad aguda en animales de experimentación.Como resultado se encontró que la función discriminante obtenida, mediante el paquete informático BMDP, es capaz de discernir, con un elevado grado de acierto, las estructuras que poseen actividad antibacteriana de aquellas que no la presentan, alcanzándose porcentajes de acierto del 99.11 % y 97.16 % para las poblaciones activa e inactiva respectivamente del grupo de entrenamiento y del 100 % y 97 % para las mismas poblaciones de moléculas del grupo test.Mediante la función discriminante obtenida, se realiza una selección molecular, obteniéndose un total de quince compuestos con teórica actividad antibacteriana al presentar valores de P>5, los cuales son posteriormente sometidos a ensayos microbiológicos mostrando actividad siete de ellos.La determinación de la DL50 intraperitoneal en ratón para los siete productos que presentaron actividad antimicrobiana nos permite demostrar y comprobar la escasa toxicidad de dos de ellos, los productos N-[4-(2-Benzoxazolil)fenil]maleimida y 1,1'-(Metilene-di-4,1-fenilen) bismaleimida, los cuales presentan márgenes terapéuticos de considerable amplitud, pues el primero presenta valores de DL50 entre diez y veinte veces superior a los de CMI obtenidos frente a Enterococcus faecalis y Staphylococcus aureus respectivamente; mientras que el segundo posee valores de DL50 entre tres y seis veces superiores a sus valores de CMI frente a Enterococcus faecalis y Staphylococcus aureus respectivamente.Los resultados obtenidos confirman plenamente la validez del método topológico utilizado, en la predicción y discriminación de la actividad antimicrobiana, así como en la búsqueda y selección de nuevas estructuras con teórica actividad antimicrobiana. / The molecular topology has been used to obtain the numeric characterization of series of molecules with antibacterial activity of the fluorquinolones group, using a set of topologic index describers of the molecular structure. After the obtaining of the relationships Q.S.A.R. and the connectivity functions, the discriminante lineal analysis is carried out that allows to obtain a function able to discern, of among to group of chemical compounds, those that possess the wanted activity. Those compounds that show theoretical activity are subjected to pharmacological rehearsals. In a first phase, tests of antimicrobial susceptibility are carried out, to show their activity and the predictive capacity of the proposed method, after that which, those structures that show activity, are subjected to rehearsals of sharp toxicity in experimentation animals. As a result, it was found that the discriminant function obtained, by means of the computer package BMDP, is able to discern, with a high success degree, the structures that possess antibacterial activity of those that don't present it, being reached percentages of success of 99.11% and 97.16% for the active and inactive set respectively of the group of training and of 100% and 97% for the same set of molecules of the group test. By means the discriminant function obtained a molecular selection is carried out, being obtained a total of fifteen products with theoretical antibacteriana activity displaying values of ΔP>5, which are later on subjected to microbiológicos rehearsals showing activity seven of them. The determination of the intraperitoneal DL50 in mouse for the seven products that presented antimicrobial activity allows us to demonstrate and to check the scarce toxicity of two of them, the products N-[4-(2-Benzoxazolil)fenil]maleimide and 1,1'-(Metilene-di-4,1-fenilen) bismaleimide, which have therapeutic margins of considerable width, because the first one presents values of DL50 between ten and twenty times superior to those of IMC obtained respectively in front of Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus; while the second it have values of DL50 between three and six times superiors to its values of IMC in front of Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus respectively. The obtained results confirm completely the validity of the topologic method used, in the prediction and discrimination of the antimicrobial activity, as well as in the search and selection of new structures with theoretical antimicrobiana activity.

La Tesis Doctoral se divide en tres capítulos distribuidos en introducción, objetivos, antecedentes bibliográficos, resultados y parte experimental.Capítulo 1. Consta de dos partes bien diferenciadas:En la primera se aborda la síntesis de oxazolidinonas fluoradas; para ello se emplean cloruros de imidoílo fluorados como compuestos de partida, los cuales a través de los compuestos intermedios b-aminosulfóxido y b-aminoalcohol quiral, conducen a las oxazolidinonas fluoradas primer objetivo de este capítulo. 11En la segunda parte, se estudia la reactividad y diastereoselectividad de una de las oxazolidinonas fluoradas quirales como auxiliar quiral en comparación con la oxazolidinona descrita por Evans en 1981 (no fluorada), frente a reacciones de alquilación y de condensación aldólica.Capítulo 2. Se estudia la síntesis de derivados de uracilos y tiouracilos fluorados en disolución y en fase sólida, obtenidos en ambos casos a partir de b-enaminoésteres, que a su vez provienen de un precursor común: nitrilos fluorados. Además, se estudia la reactividad de los productos obtenidos frente a reacciones de alquilación del nitrógeno de la posición 1 y la síntesis de uracilos fluorados bicíclicos a través de reacciones de metátesis.Este capítulo se divide en tres apartados:1º.- Síntesis de los uracilos fluorados en disolución:En primer lugar, se obtendrán b-enaminoésteres fluorados a partir de enolatos de éster y nitrilos fluorados. A continuación, se harán reaccionar estos derivados con isocianatos e isotiocianatos para la obtención de los (tio)uracilos fluorados.2º.- Síntesis de los uracilos fluorados en fase sólida:La reacción de nitrilos fluorados con la resina de Wang previamente acetilada da lugar a b-enaminoésteres fluorados anclados a la resina de Wang, que de modo análogo al apartado anterior, se tratan con isocianatos e isotiocianatos para la obtención de los (tio)uracilos fluorados.3º.- Síntesis de uracilos fluorados bicíclicos.La reacción de metátesis de los uracilos fluorados obtenidos en los apartados anteriores convenientemente funcionalizados conducen a dos nuevas familias de uracilos fluorados bicíclicos.Capítulo 3: En este capítulo se estudia la síntesis de pirimidinonas fluoradas a partir de la reacción de diiminas con derivados del ácido carbónico. Las diiminas empleadas se obtienen a su vez a partir de iminas y nitrilos fluorados / The thesis is divided in three chapters distributed in introduction, objectives, background, results and experimental part.Chapter 1. It has two different parts:In the first part, the synthesis of chiral fluorinated oxazolidinones is described. The starting materials for the synthesis are fluorinated imidoyl chorides.In the second part, the reactivity and diastereoselectivity of the fluorinated oxazolidinones are studied in comparison with the non-fluorinated oxazolidinone in alquilation and aldolic reactions.Chapter 2. The chapter is divided in three parts.1º. An efficient and convenient two-step synthesis of new fluorinated uracils is described. The first step involves the condensation of an ester enolate with a fluorinated nitrile to furnish fluorinated b-enamino esters. In turn, these compounds react with organic isocyanates or isothiocyanates to give C-6 fluorinated uracils or thioruacils, respectively, in excellent yields.2º. This synthesis has been succesfully adapted to solid-phase conditions with high diversity, thereby facilitating the creation of small (thio)uracil libraries.3º.The synthesis of new bicyclic uracils is described. The key step is a metathesis reaction.Chapter 3: The synthesis of fluorinated 2-pyrimidinones is described in this chapter. The first step involves the condensation of an imine enolate with a fluorinated nitrile to furnish fluorinated b-diimines. The reaction of the last with triphosgene afford the objective compounds.

El presente trabajo tiene como objetivo la síntesis estereoselectiva de oxazinonas y oxazolidinonas quirales a partir del aminoácido natural L-Serina, estos heterociclos constituyen formas protegidas cuya posterior ruptura en condiciones suaves permite obtener aminodioles y aminoácidos con configuración definida. La obtención de oxazinonas y oxazolidinonas quirales se realizo por reacciones de ciclocarbamación de carbamatos alilicos y apertura de epoxidos de carbamatos alilicos. Como muestra de la viabilidad de estos substratos para la obtención de aminodioles y aminoácidos quirales. Se sintetizo los aminodioles quirales (2R,4S)-2-aminopentano-1,4-diol, (1S,3R)-3-amino-1-fenilbutano-1,4-diol y la 2R,4S-g-hidroxinorvalina en su forma de lactona (2R, 4S)--hidroxinorvalina a partir de la oxazinonas (4S,5S,6R) 4-Hidroximetil-5-iodo-6-fenil-1,3-oxazin-2-ona y (4S,5S,6S)-4-Hidroximetil-5-iodo-6-metil-1,3-oxazin-2-ona. Además, la configuración de los carbonos asimétricos en el compuesto Ácido (4R, 6S)-6-metil-2-oxo-1,3-oxazin-4-carboxílico fue confirmada mediante análisis cristalográfico de rayos X / The aim of the present work is the estereoselective synthesis of chiral oxazinones and oxazolidinones from the natural aminoacid L-Serine, these heterocicles constitute protected forms which posterior cleavage in soft conditions allows to obtain aminodiols and aminoacids with definite configuration. The obtaining of chiral oxazinones and oxazolidinones is realized for reactions of ciclocarbamation of allilic carbamates and opening of epoxides of allilic carbamates.As sample of the viability of these substrates for the obtaining of aminodioles and charal aminoacids. I synthesize the chiral aminodiols (2R, 4S)-2-aminopentane-1,4-diol, (1S, 3R)-3-amino-1-phenylbutane-1,4-diol and it 2R, 4S--hydroxinorvaline in its form of the lactone (2R, 4S) - -hydroxinorvaline from the oxazinones (4S, 5S, 6R) 4-Hydroximethyl-5-iodo-6-phenyl-1,3-oxazin-2-one and (4S, 5S, 6S)-4-Hydroximethyl-5-iode-6-methyl-1,3-oxazin-2-one. In addition, the configuration of the asymmetric carbons in the Acid compound (4R, 6S)-6-methyl-2-oxo-1,3-oxazin-4-carboxílic was confirmed by means of analysis cristalographic of RX.