Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La resistencia antimicrobiana es un fenómeno de gran importancia a nivel mundial, debido a sus consecuencias en la salud tanto humana como animal y también por las consecuencias económicas que genera. Entre las bacterias que presentan multirresistencia se encuentra Salmonella spp., patógeno distribuido mundialmente, generalmente transmitido por los alimentos, pero también por contacto directo o indirecto con su reservorios animales. Dentro de estos, adquieren relevancia los reptiles por ser portadores asintomáticos de la bacteria, constituyendo un reservorio que cada vez adquiere mayor importancia debido a la creciente popularidad que presentan como mascota en las familias actuales. En Chile existen escasos estudios sobre resistencia antimicrobiana en cepas de Salmonella spp. aisladas de reptiles que asocien genes a la resistencia fenotípica, razón por la cual, el objetivo del presente estudio apunta a la detección de genes de resistencia antimicrobiana en cepas de Salmonella spp. aisladas de reptiles en cautiverio, en la Región Metropolitana en Chile. Para ello, se realizó una prueba de susceptibilidad antimicrobiana por el método de Kirby-Bauer y posteriormente, mediante la técnica de PCR, se buscaron 11 genes de resistencia en las cepas en análisis, independiente de su fenotipo. Dentro de los genes a detectar, 3 de ellos están asociados a resistencia a beta-lactámicos (blaTEM, blaOXA y blaPSE-1), 4 a resistencia frente a estreptomicina (aadA1, aadA2, strA y strB), 3 para resistencia a tetraciclinas (tet(A), tet(B), tet(C)) y un gen que confiere resistencia a cloranfenicol (cmlA). Se observó una elevada sensibilidad fenotípica, donde el 23,5% de las cepas fue resistente a estreptomicina. De las 34 cepas analizadas, sólo se detectó el gen blaTEM en un 61,7%. El resto de las cepas resultaron negativas a la detección de los otros genes en análisis. La alta sensibilidad detectada puede deberse a fenómenos de curación plasmidial, mutaciones cromosomales, regulación de la expresión génica, entre otros, como mecanismo de restauración del fitness bacteriano en cepas conservadas en un medio carente de presión selectiva. Se concluye que las cepas analizadas presentan elevada sensibilidad fenotípica frente a beta-lactámicos, tetraciclinas, cloranfenicol y estreptomicina, encontrando sólo cepas portadoras del gen blaTEM. / Antimicrobial resistance is a phenomenon of great importance worldwide because of its impact on both human and animal health and the economic consequences it generates. Among resistant bacteria is Salmonella spp., worldwide distributed pathogen, usually transmitted by food, but also by direct or indirect contact with animal reservoirs. Within these, reptile become relevant because they are asymptomatic carriers of the bacteria, forming a reservoir that increasingly becomes more important due to the growing popularity as pets in today's families. In Chile there are few studies on antimicrobial resistance in strains of Salmonella spp. isolated from reptiles that associated genes to phenotypic resistance, reason why the aim of this study points to the detection of antimicrobial resistance genes in strains of Salmonella spp. isolated from reptiles in captivity, in Región Metropolitana in Chile. For this, an antimicrobial susceptibility test, by Kirby-Bauer method was performed and subsequently, by PCR, 11 resistance genes were searched in strains tested, regardless of their phenotype. Among genes to detect, 3 of them are associated with resistance to beta-lactam (blaTEM, blaOXA and blaPSE-1), 4 to resistance to streptomycin (aadA1, aadA2, strA and strB), 3 for tetracycline resistance (tet(A), tet(B), tet(C)) and a gene conferring chloramphenicol resistance (cmlA). High phenotypic susceptibility was observed, where 23,5% of the strains were streptomycin resistant. Of the 34 strains tested, only blaTEM gene was detected in 61,7%. The remaining strains were negative for detection of the other genes analyzed. High sensitivity detected may be due to a phenomenon of plasmidial healing, chromosomal mutations, gene expression regulation, among others, as a mechanism for restoring the bacterial fitness of strains preserved in a medium lacking of selective pressure. It is concluded that strains tested possess high phenotypic sensitivity to beta-lactams, tetracyclines, chloramphenicol and streptomycin, finding strains carrying only the blaTEM gene.

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Medicina Preventiva Animal. / Listeria monocytogenes es una bacteria ubicua, ampliamente distribuida en la naturaleza. Agente etiológico de la enfermedad llamada listeriosis, que puede transmitirse a tráves del consumo de alimentos contaminados o por el contacto directo con animales enfermos. La listeriosis presenta una alta tasa de letalidad en grupos susceptibles como mujeres embarazadas, niños y ancianos. En Chile, no existen antecedentes de resistencia antimicrobiana en aislamientos de Listeria monocytogenes obtenidos desde alimentos. Por lo anterior, es relevante analizar cepas aisladas desde esta matriz y casos clínicos, contemporáneos a los brotes ocurridos entre los años 2008 y 2009 en Chile. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la resistencia antimicrobiana fenotípica en cepas de L. monocytogenes, analizar sus perfiles de resistencia y evaluar la posible asociación entre resistencia antimicrobiana, matriz alimentaria, origen y serotipo. Fueron analizadas 222 cepas de L. monocytogenes, 182 aisladas desde alimentos y 40, desde casos clínicos. Como screening, se utilizó la metodologia cualitativa de Kirby Bauer (KB) para evaluar la sensibilidad a distintos antibióticos, y luego la metodología cuantitativa, concentración inhibitoria mínima (CIM). Por ambas metodologías se analizaron 8 antimicrobianos: ciprofloxacino, gentamicina, sulfametoxazol-trimetoprim, eritromicina, cefalotina, ampicilina, penicilina-G y tetraciclina. Se obtuvieron 45 cepas resistentes que correspondieron al 20,3% del total de cepas analizadas. El tipo de resistencia más frecuente, fue a un sólo antimicrobiano, correspondiendo a un 58% de las cepas resistentes. El antimicrobiano que presentó mayor resistencia fue ciprofloxacino con un 51%. Se realizó un análisis multivariado de conglomerados mediante el cual se obtuvieron 5 grupos o cluster. El cluster que agrupó mayor número de cepas presentó un perfil de resistencia a: gentamicina, eritromicina, sulfametoxazol-trimetroprim, y se encontró asociación entre el fenotipo de resistencia antimicrobiana y la matriz alimentaria. Estos resultados contribuirán al conocimiento de resistencia antimicrobiana de L. monocytogenes en Chile, información fundamental a la hora de diseñar políticas públicas en cuanto a la prevención de la resistencia antimicrobiana. / Listeria monocytogenes is an ubiquitous bacteria widely distributed in nature, being the etiological agent of the listeriosis, which can be transmitted through consumption of contaminated food or by direct contact with sick animals. Listeriosis occurs with a high lethality rate in susceptible groups, such as pregnant women, children and the elderly. There are not previous reports of antimicrobial resistance in L. monocytogenes isolated from food in Chile. Therefore, is relevant to analyze strains obtained from these food types and isolates from contemporary clinical cases outbreaks reported in 2008 and 2009 in Chile. The aim of this study was to characterize the phenotypic antimicrobial resistance in L. monocytogenes strains, analyze their resistance profiles and evaluate the possible association between antimicrobial resistance and food types, origin of strains and serotype. Two hundred and twenty two L. monocytogenes strains were analyzed (182 obtained from food and 40 from clinical cases). Kirby Bauer (KB) test was used as qualitative screening, and minimum inhibitory concentration (MIC) as quantitative test to evaluate antimicrobial resistance. Eight antibiotics were tested: ciprofloxacin, gentamicin, trimethoprim/sulfamethoxazole, erythromycin, cephalothin, ampicillin, penicillin-G, tetracycline. Forty-five (20.3%) strains were resistant, and 58% of them were resistant to just one antibiotic, being these the most common resistance profile. The antibiotic associated with the highest resistance was ciprofloxacin (51% of resistant strains). A multivariate cluster analysis identified 5 clusters, the main cluster grouped strains resistant to gentamicin, erythromycin and trimethoprim/sulfamethoxazole. Association was found just between antimicrobial resistance and food types. Results of this study will contribute to the knowledge of antimicrobial resistance of L. monocytogenes in Chile, information that is needed for the development of public health policies to prevent antimicrobial resistance. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11110200.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Actualmente la importancia en salud pública de las bacterias del género Salmonella es ocasionada por el aumento de resistencia antimicrobiana que ha tenido en los últimos años, debido al inadecuado uso de antimicrobianos. La infección se asocia al consumo de alimentos contaminados, sin embargo, cobra importancia el rol de las aves silvestres como reservorios y agentes diseminadores de genes de resistencia a antimicrobianos en seres humanos y animales. A pesar de que la mayor cantidad de casos clínicos en seres humanos ocurren durante verano, pocos estudios reportan si existe estacionalidad en el aislamiento de cepas de Salmonella desde aves silvestres. El objetivo de esta Memoria fue determinar la existencia de variación estacional en la detección de cepas de S. enterica aisladas desde heces de Larus dominicanus de la Región de Valparaíso y caracterizar fenotípica y genotípicamente aquellas cepas con resistencia antimicrobiana. Se analizó un total de 608 muestras obtenidas mediante torulado de heces frescas tomadas directamente desde el ambiente. Las cepas aisladas fueron confirmadas mediantes la Reacción de la Polimerasa en Cadena (PCR) para el gen invA. Para determinar la asociación entre el aislamiento de cepas de Salmonella y la estación del año se utilizó el programa Infostat®. La determinación de fenotipos de resistencia se realizó mediante el método de difusión en placa (Kirby Bauer). Los perfiles genéticos fueron evaluados mediante un PCR para los genes: tet(A), tet(B), tet(G), blaPSE-1, blaTEM, blaCMY, aadB, aacC e integrones clase 1. Se aislaron 7 cepas de Salmonella que no fueron asociadas estadísticamente a la estación del año en que fueron obtenidas. Se encontró un total de 5 perfiles fenotípicos, y 2 perfiles genotípicos de resistencia antimicrobiana, siendo blaTEM el único gen encontrado en las cepas estudiadas. Aunque genotípicamente no coinciden los resultados, probablemente porque la resistencia encontrada a nivel fenotípico es codificada por otros genes no estudiados en esta Memoria, se evidencia el impacto que tienen las aves silvestres en la mantención y diseminación de bacterias resistentes a agentes antimicrobianos. / Nowadays, the importance in public health regarding the Salmonella genus bacteria is caused by the increase of the antimicrobial resistance in the last few years, given the injudicious use of antimicrobials. The infection is associated with the consumption of contaminated food, however, the role of wild birds takes an important place, for they behave as natural reservoirs and dissemination agents of resistance genes to antimicrobials in humans and animals. Despite that most of clinical cases in humans occur during the summer, little research has reported if there exists seasonality in the isolation of Salmonella strains from wild birds. The objective of this research was to determine the existence of seasonal variation in the detection of strains of S. enterica from faeces of Larus dominicanus in the Valparaíso Region, and, to characterise both phenotypically and genotypically those strains with antimicrobial resistance. A total of 608 fresh faecal samples were taken with swabs directly from the environment. The isolated strains were confirmed by the polymerase chain reaction (PCR) for the invA gene. To determine the association between the isolation of Salmonella strains and the season, the software Infostat® was used. The determination of resistance phenotypes was carried out by the agar diffusion test (Kirby Bauer). The genetic profiles were evaluated through PCR for the genes tet(A), tet(B), tet(G), blaPSE-1, blaTEM, blaCMY, aadB, aacC and class 1 integrons. Seven Salmonella strains were isolated, because they were not statistically associated with the season when they were taken. A total of 5 phenotypic profiles were found, as well as 2 genotypic profiles of antimicrobial resistance, being blaTEM the only gene found in the researched strains. Although the results do not match genotypically –probably perhaps the resistance found at a phenotypic level is codified by other genes which were not studied for this Project, the impact that wild birds have in the storage and spreading of bacteria resistant to antimicrobial agents is evident. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11110398.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La resistencia antimicrobiana es actualmente una problemática de salud pública, debido a que compromete la efectividad de los tratamientos realizados tanto en medicina humana como veterinaria. Este fenómeno tuvo un rápido surgimiento, casi tan pronto como la aparición de los primeros antimicrobianos y se ha diseminado globalmente debido a los mecanismos de transmisión de los determinantes genéticos de resistencia, que facilitan su propagación entre bacterias pertenecientes incluso a distintos géneros. En las últimas décadas, una de las mayores preocupaciones al respecto ha sido la utilización masiva de antimicrobianos en animales productores de alimentos para consumo humano, debido a que esta situación ejerce una presión de selección de microorganismos resistentes y acelera los procesos de mutación genética, así como la transmisión de genes de resistencia hacia la población humana. Este último proceso está favorecido en gran parte por elementos genéticos móviles, entre los que destacan los integrones, estructuras capaces de adquirir casetes génicos y transferirlos en bloque de una bacteria a otra. Dentro de ellos, las clases 1 y 2 son las que se han encontrado con mayor frecuencia en investigaciones realizadas en el ámbito de la producción animal. En este estudio se detectó la presencia de integrones clase 1 y clase 2 en cepas de Escherichia coli aisladas desde la microbiota intestinal de gallinas de postura tratadas previamente con antimicrobianos. La identificación de los integrones se hizo mediante la técnica de PCR convencional y dio como resultado la presencia de tres integrones, los que a su vez no presentaron asociación con la multi-resistencia de las cepas analizadas. Los resultados indican por tanto, que los integrones no se encuentran implicados en la transmisión de resistencia antimicrobiana en las bacterias estudiadas. Esta información difiere de la presentada en estudios similares, donde si bien la prevalencia de integrones clase 2 es variable, la clase 1 tiende a estar presente con prevalencias superiores al 40% y asociados a la transmisión de multi-resistencia, en ambos casos.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La información y la comunicación hacia los consumidores a fin de sensibilizarlos respecto a los riesgos asociados a la resistencia antimicrobiana y los beneficios relacionados con la racionalización del uso de estos fármacos, constituye una de las áreas prioritarias en el control y mitigación de la emergencia de la resistencia, considerada como una amenaza a la salud pública. Estos esfuerzos a nivel global son liderados por OMS, FAO y OIE, mediante el enfoque colaborativo “Una Salud”. Este estudio utilizó la técnica cualitativa de focus group para evaluar la percepción de un grupo de 72 consumidores de la Región Metropolitana, realizando 9 grupos focales de entre 5 a 12 personas y diferenciando a los consumidores según rango etario, estableciendo 3 segmentos: 25 a 35 años, 36 a 50 y mayores de 51 años.En general, consideran el uso de antibióticos en animales de producción como una práctica relevante y necesaria, siempre y cuando su uso sea adecuado y ejecutado por Médicos Veterinarios, ya que permite tanto asegurar la productividad y garantizar la calidad e inocuidad de sus alimentos. Si bien la mayoría de los consumidores identifica el uso de antibióticos como un riesgo potencial para su salud, sólo casos aislados reconocen la posibilidad de difusión de resistencia antimicrobiana desde los animales hacia humanos a través del consumo. Determinan que existe poca información respecto a alimentos de origen animal, plasmando como una necesidad que tanto la industria como entidades normativas transparenten los procesos productivos y eduquen a la población en el consumo consciente. Este es el primer estudio en Chile en este tema y sus conclusiones pueden ser utilizadas en el desarrollo de futuras investigaciones a nivel nacional. / Information and communication to consumers in order to sensitize them to the risks associated with antimicrobial resistance and benefits related to the rational use of these drugs, is one of the priority areas in the control and mitigation of emergency resistance considered a threat to public health. These efforts globally are led by WHO, FAO, OIE and Codex Alimentarius, through collaborative approach "One Health". This study used the qualitative technique of focus group to evaluate the perception of a group of 72 consumers in the metropolitan area, making 9 groups of 5 to 12 people and differentiating consumers by age range, setting 3 segments: 25-35 years, 36-50 years and over 51 years. In general, the consumers consider the use of antibiotics in food-producing animals as a relevant and necessary practice, as long as you use it correctly and executed by veterinarians because it allows both ensure productivity and ensure the quality and safety of their food. While most consumers identify the use of antibiotics as a potential health risk, only isolated cases recognize the possibility of spread of antimicrobial resistance from animals to humans through consumption. Determine that there is limited information regarding food-producing animals, reflecting a need for both the industry and regulatory agencies show through production processes and educate the population in conscious consumption. This is the first study in Chile on this issue and their findings can be used in the development of further research in the community.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Durante las últimas décadas, Salmonella spp. se ha convertido en uno de los principales patógenos productores de enfermedades transmitidas por los alimentos, en Chile y el mundo, afectando no sólo la salud de las personas, sino también generando un importante problema en el comercio internacional. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de Salmonella spp. en 5 Planteles Porcinos Bajo Certificación Oficial que faenan sus animales en la Región Metropolitana. Se identificaron como plantel “A”, “B”, “C”, “D” y “E” y en ellos se muestrearon 55, 58, 59, 59 y 59 cerdos respectivamente (290 animales en total). De cada cerdo a su vez, se extrajeron dos muestras, una de contenido de intestino grueso y la otra de linfonódulos mesentéricos, para detectar la presencia de Salmonella spp. mediante cultivo convencional, considerando enriquecimiento en caldo tetrationato a 42°C por 48 – 72 horas y siembra en agar XLD a 42°C por 24 horas. Adicionalmente, a sólo una cepa de Salmonella spp. por cerdo, se le realizó una prueba de susceptibilidad antimicrobiana, mediante el método de difusión en placa Kirby-Bauer, frente a un panel de nueve antimicrobianos. En los cinco planteles analizados fue posible aislar Salmonella spp.; en el plantel “A” se obtuvo 13 (23,6%) cerdos positivos, en el “B” 7 (12,1%), en el “C” 5 (8,5%), en el “D” 27 (45,8%) y, en el “E” 15 (25,4%) cerdos positivos. Respecto a la frecuencia de aislamiento según tipo de muestra, se obtuvo 29 (35%) cepas desde heces, 23 (28%) desde linfonódulos y 30 (37%) desde heces y linfonódulos a la vez. El porcentaje de aislamiento sólo desde heces y sólo desde linfonódulos no fue diferente (P=0,4808), presentando una concordancia moderada (kappa=0,4860). En relación a la prueba de susceptibilidad antimicrobiana, de las 67 cepas aisladas, 65 (97%) fueron resistentes al menos a un antimicrobiano y 30 (46,2%) de ellas presentaron resistencia a dos o más antimicrobianos. Los mayores niveles de resistencia se observaron frente a Oxitetraciclina, Amoxicilina y la asociación Amoxicilina + Ácido Clavulánico, con rangos de resistencia entre 100 y 34%. Se detectaron 7 perfiles de resistencia, siendo el más frecuente la resistencia simple frente a Oxitetraciclina. De acuerdo a estos resultados, se puede concluir que Salmonella spp. está presente en los planteles analizados y que para detectar a un cerdo positivo a Salmonella spp., es mejor analizar muestras de heces y linfonódulos en conjunto. También es posible concluir que existe un alto porcentaje de resistencia y multiresistencia a los antimicrobianos, en las cepas de origen porcino / proyecto Fondecyt N° 1060569 y por la Planta Faenadora Agrícola Industrial Lo Valledor AASA S.A.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Durante el año 1928 Alexander Fleming descubre la penicilina, capaz de inhibir el crecimiento bacteriano. Sin embargo, poco tiempo después se descubren bacterias capaces de resistir a la penicilina y a los nuevos antimicrobianos. Esto último, hasta hoy suscita gran preocupación entre la comunidad científica, especialmente en el ámbito de la Salud Pública, pues el uso indiscriminado de antimicrobianos, subdosificación, errores en el ritmo horario y el consumo de pequeñas cantidades de antimicrobianos desde alimentos producidos por animales de abasto, son algunos de los factores que influencian la aparición de cepas resistentes, debido al aumento en la presión de selección sobre estas poblaciones bacterianas. Esta capacidad de resistencia a la acción de un antimicrobiano está determinada por genes presentes en el genoma bacteriano, los cuales pueden ser constitutivos o hábilmente incorporados mediante diferentes mecanismos. Así, en esta Memoria de Título se detectó -mediante PCR convencional- y secuenció un fragmento del gen de resistencia a β-lactámicos denominado blaTEM, en tres cepas bacterianas resistentes, encontrándose altos valores de identidad nucleotídica con las secuencias de la base de datos de GenBank®, lo cual permitió obtener 3 controles positivos nativos de origen veterinario para futuras investigaciones / Programa AUCAI, Universidad de Chile

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Salmonella enterica es rutinariamente encontrada en el tracto gastrointestinal de una amplia variedad de animales y generalmente no causa enfermedad en ellos. Sin embargo, cuando causa enfermedad, las manifestaciones comunes de salmonelosis en el ganado incluyen diarrea, neumonía, abortos y muerte. En humanos, normalmente se presenta como gastroenteritis autolimitada; no obstante, en niños, pacientes inmunodeprimidos o ancianos, puede llevar a la muerte, si no es tratada apropiadamente. Esta investigación busca detectar y caracterizar la resistencia antimicrobiana de S. enterica en muestras de heces de bovinos de comunas rurales de la Región Metropolitana, Chile. Para ello se obtuvieron 670 muestras de heces ambientales de bovinos de lechería, en un total de 14 muestreos en 4 localidades: María Pinto, Peñaflor, Melipilla e Isla Maipo. Las muestras fueron procesadas en el Laboratorio de Enfermedades Infecciosas, de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile, donde se realizó el aislamiento y confirmación por PCR, y posteriormente se analizaron en cuanto a su resistencia a antimicrobianos. Se registró un 6,7% de detección, de las cuales un 54% correspondió a S. enterica ser. Livingstone, 39% a S. enterica ser. Typhimurium y 7% a S. enterica ser. Infantis; con una detección de 6,7% en Isla Maipo, 9,2% en Peñaflor y 0% para Melipilla y María Pinto. Los mayores índices de resistencia antimicrobiana se presentaron contra ciprofloxacino, tetraciclina y cefotaxima, expresados en 8 perfiles distintos. Se encontró asociación estadísticamente significativa entre las variables lugar de detección, perfiles de resistencia y serotipos detectados. Si bien los valores de resistencia y multiresistencia a antimicrobianos encontrados no son excepcionalmente altos, es importante destacar que esto no debe ser motivo de disminución de la atención a esta bacteria, debido a los índices y alertas internacionales / Salmonella enterica is routinely found in the gastrointestinal tract of a wide variety of animals and generally does not cause disease. However, when it causes, common manifestations of salmonellosis in cattle include diarrhea, pneumonia, abortions and death. In humans, it usually presents as self-limited gastroenteritis; but, in children, immunosuppressed or elderly patients, it can lead to death, it can lead to death, if not treated properly. This research seeks to detect and characterize the antimicrobial resistance of S. enterica in stool samples of bovines from rural communes of the Metropolitan Region, Chile. For this, 670 samples of environmental feces of dairy cattle were obtained, in a total of 14 samplings from dairies located in 4 localities: María Pinto, Peñaflor, Melipilla and Isla Maipo. The samples were processed in the Laboratory of Infectious Diseases, in the Faculty of Veterinary and Animal Sciences of the University of Chile, where the isolation and confirmation was carried out by PCR, and later they were analyzed in terms of their antimicrobial resistance. There was a 6.7% detection, of which 54% corresponded to S. enterica ser. Livingstone, 39% to S. enterica ser. Typhimurium and 7% to S. enterica ser. Infantis; obtaining a detection of 6.7% in Isla Maipo, 9.2% in Peñaflor and 0% for Melipilla and María Pinto. The highest resistance indices were presented to ciprofloxacin, tetracycline and cefotaxime, expressed in 8 different profiles. A statistically significant association was found between the variables detection site, resistance profiles, and serotypes detected. Although the values of resistance and multiresistance to antimicrobials found are not exceptionally high, it is important to emphasize that this should not be the reason for diminishing attention to this bacterium, in response to international indicators and alerts / Proyecto FONIS SA15110094

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al grado de Magíster en Ciencias Animales, mención Medicina Preventiva Animal. / La salmonelosis es una de las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) más importante a nivel mundial, y una de las enfermedades zoonóticas más frecuentes y de alto impacto económico. En el presente estudio, se exponen los resultados sobre la prevalencia, resistencia antimicrobiana y factores de riesgo de Salmonella spp realizado en el Humedal Nacional “El Yali”, ubicado en la comuna de Santo Domingo, Región de Valparaíso, Chile. Este humedal es considerado una zona de alto riesgo para el ingreso de agentes zoonóticos, debido a la gran cantidad de especies de avifauna residentes y migratorias, además de que, en torno al humedal, habita un alto porcentaje de sistemas productivos de traspatio (SPT) que se caracterizan por criar aves y cerdos con escasas medidas de bioseguridad. La población objetivo del estudio, se conformó por los SPT que se encontraban localizados dentro de un radio de 3 km desde el límite de la reserva. A su vez, se realizaron dos períodos de muestreo, el primero fue en invierno en donde se muestrearon 39 SPT (205 muestras) y el segundo fue en verano con 40 SPT (236 muestras). Las muestras fecales fueron incubadas en APT + novobiocina por 24 horas a 37°C. Posteriormente fueron transferidas a MSRV + Novobiocina por 24/48 horas a 41,5°C. Para el diagnóstico selectivo, las muestras fueron incubadas en agar XLD a 37°C por 18-20h. Finalmente, las cepas fueron confirmadas mediante PCR. En la susceptibilidad antimicrobiana, las cepas aisladas fueron testeadas frente a nueve antibióticos usando el método de difusión en disco de Kirby –Bauer. La prueba fue realizada de acuerdo a los estándares del CLSI, y como control de calidad se utilizó la cepa E.coli ATCC 25922. Para caracterizar las medidas de bioseguridad que realizaban los SPT, para prevenir el ingreso de agentes zoonóticos, se realizó una encuesta epidemiológica a todos los productores que decidieron participar en el estudio. Sólo se encontraron muestras positivas en el segundo período (verano), presentando una prevalencia animal de un 1,27% (3/236) y una prevalencia a nivel predial de un 5% (2/40). Todas las cepas fueron sensibles a los nueve antibióticos testeados. De acuerdo a la encuesta epidemiológica, se comprobó que los SPT tenían deficientes o nulas medidas de bioseguridad. Se sugiere realizar nuevos estudios utilizando en conjunto la técnica de PCR y cultivo bacteriológico, con el fin de obtener una mejor sensibilidad en los resultados. Asimismo, se propone fortalecer programas de vigilancia epidemiológica y capacitación constante a los productores, con el objetivo de mejorar las condiciones de bioseguridad y en consecuencia evitar la presencia de agentes patógenos zoonóticos. / Salmonellosis is one of the most important food transmitted diseases and one of the most frequent zoonotic illnesses, which has a high economic impact on a worldwide scale. In the present study, you will find the results on prevalence, antimicrobial resistance and risk factors for Salmonella spp conducted at the National Wetland "The Yali" located in the district of Santo Domingo, Region of Valparaíso, Chile. This wetland is considered a high risk area for the entry of zoonotic agents due to the large number of resident and migratory bird species, in addition to that, around the wetland, there is a high percentage of backyard production systems (BPS) characterized by raising poultry and pigs with poor biosecurity measures. The target population of this study was composed by BPS located within 3 km radius from the borders of the wetland. Two sampling periods were conducted, (i) winter, where 39 BPS were sampled (205 samples) and (ii) summer with 40 BPS sampled (236 samples). Samples were incubated in “Buffered Peptone Water + novobiocin" for 24 h/37°C. One hundred μl of the incubated BPW were transferred to Modified Semisolid Rappaport-Vassilliadis (MSRV) + novobiocin and incubated 24/48 h/41.5 °C. For the selective diagnosis, samples were incubated in XLD agar for 18–20 h/37°C. Finally, the strains were confirmed by PCR. For antimicrobial susceptibility, isolates strains were tested to 9 antimicrobials using the Kirby–Bauer disk diffusion method. The test was performed using the CLSI, and as quality control, the strain ATCC 25922 was used. To characterize the biosecurity measures being taken by BPS, to prevent the entry of zoonotic agents, an epidemiological survey was conducted to all producers who chose to participate in the study. Positive samples were only found in the second period (summer), presenting an animal prevalence of 1.27% (3/236) and farm prevalence of 5% (2/236). All strains were sensitive to the nine tested antibiotics. According to the epidemiologic survey, it was found that the BPS had poor or no biosecurity measures. It is suggested to make further studies using both techniques, PCR and bacterial crop, in order to get a better sensitivity of the results. Furthermore, it is suggested to strengthen epidemiological surveillance programs and ongoing training for producers in order to improve biosafety conditions and consequently prevent the presence of zoonotic pathogenic agents. / Financiamiento: proyecto Fondecyt 11121389 y FIV 12101401.9102.011.

Memoria para optar al título de Ingeniero Civil en Biotecnología / La resistencia a antibióticos generada en las bacterias es un fenómeno natural que se ve acelerado por el uso excesivo e inadecuado de los antibióticos, lo que genera una necesidad por descubrir nuevos compuestos bioactivos que puedan suplir esa función. Streptomyces leeuwenhoekii C34 es una bacteria del desierto de Atacama que produce metabolitos llamados chaxamicinas y chaxalactinas, los cuales poseen bioactividad contra Staphylococcus aureus y E. coli. En este proyecto se buscan las condiciones óptimas para la producción de metabolitos especializados mediante la optimización de las condiciones de temperatura y pH, y concentración de glicerol en el medio de cultivo. Para ello, se estudia la diferencia en el nivel de producción de chaxamicinas mediante la medición del diámetro de los halos de inhibición de crecimiento producidos en placas de Petri inoculadas con S. aureus y expuestas al medio de cultivo de S. leeuwenhoekii C34. Adicionalmente, se realizan simulaciones en el modelo de escala genómica iVR1007 de S. leeuwenhoekii C34 para realizar predicciones y comparar con los resultados experimentales. Se obtuvo las condiciones óptimas de los parámetros, que corresponden a 33 [°C], pH 6 y 65 [g/L] de glicerol para crecimiento, y 37 [°C], pH 6,5-7 y 5 [g/L] de glicerol para producción de metabolitos especializados. A partir de la optimización de la concentración de glicerol, se obtuvo un valor máximo para la producción de metabolitos especializados de 5,428 [cm gDW-1 L-1], que es 135 veces más alto que el caso no optimizado. Las condiciones óptimas obtenidas se encuentran dentro de los rangos entregados por estudios previos para el caso de producción y para el caso de crecimiento, salvo para pH. Se determinó que la mejor alternativa para producción industrial era separar el proceso en una fase de crecimiento y otra de producción. Dicho proceso tentativo utiliza menor cantidad de insumos que las alternativas de síntesis química (representados por la ciprofloxacina en este estudio) presentes en el mercado, insumos que, en contraste, no son tóxicos. Las tendencias para crecimiento y producción de metabolitos predichas por las simulaciones coinciden en términos generales con las de los resultados experimentales. Sin embargo, se aprecian ciertas diferencias causadas en parte porque el modelo no incluye restricciones relacionadas con elementos regulatorios.