Orientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: João Manuel Grisi Candeias / Banca: Marcelo de Souza Zanutto / Resumo: O vírus da peritonite infecciosa felina (FIPV) causa uma doença fatal, sistêmica e imunomediada. O FIPV contem mutações do coronavírus entérico felino (FECoV) e o diagnóstico antemortem da PIF é desafiador pois a maioria dos gatos são positivos para FCoV nos testes sorológicos e de amplificação de DNA. A diferenciação entre a infecção pelo FIPV e pelo FECoV é difícil, sendo conclusivo post-mortem pelo exame histopatológico. A RT-PCR para detecção do RNAm de coronavírus felino em sangue periférico é um teste diagnóstico que evidencia a infecção e replicação do vírus. Entretanto, esses ensaios não conseguem distinguir entre cepas produtoras de PIF e do FECoV. Na patogenia da infecção, as células imunes infectadas induzem uma produção exacerbada de citocinas. Assim, nosso objetivo foi o de verificar se gatos com PIF expressam RNAM codificante de citocinas de forma alterada quando comparadas com animais saudáveis. Para tanto, amostras de sangue de 44 gatos provenientes de gatis de SP e RJ foram coletadas em 4 momentos, num intervalo de 4 meses. A partir do RNA total extraído, foi realizada a RT-qPCR para RNAm codificante de citocinas felinas (IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, IFN-γ) normalizadas pelo GAPDH. Observou-se que, para as citocinas IL-1, IL-2, IL-6 e IL-10, foram obtidos resultados elevados na maioria dos animais. Entretanto, IL-12, TNF-α e IFN-γ estavam aumentadas em apenas alguns grupos, que pode estar associado à infecção por FIPV. Os animais que apresentaram valores elevados para essas citocinas, tinham sinais clínicos compatíveis com a doença e contato com animais que desenvolveram a PIF / Abstract: The feline infectious peritonitis virus (FIPV) causes a fatal disease, and systemic immune mediated. The FIPV contains mutations of feline enteric coronavirus (FECoV) and antemortem diagnosis of FIP is challenging because most cats are positive for FCoV in serological and DNA amplification. The differentiation between infection the FIPV and FECoV is hard being conclusive post-mortem by histopathological examination. RT-PCR for detection of feline coronavirus mRNA in peripheral blood is a diagnostic test which shows the infection and replication of the virus. However, these tests can't distinguish between strains producing FIP and FECoV. In the pathogenesis of infection, the infected cells induce an immune exacerbated production of cytokines. Thus, our goal was to determine whether cats with FIP express mRNA encoding cytokines altered form compared to healthy animals. Therefore, blood samples from 44 cats from catteries of SP and RJ were collected at 4 times within 4 months. From the total RNA, we performed RT-qPCR mRNA coding for feline cytokine (IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, IFN-γ) normalized by GAPDH. It was observed that, for the cytokines IL-1, IL-2, IL-6 and IL-10 high scores were obtained in most animals. However, IL-12, TNF-α and IFN-γ were increased only in some groups, which may be associated with FIPV infection. The animals with high values for these cytokines had clinical signs consistent with the disease and contact with animals that developed FIP / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-21Bitstream added on 2014-08-13T18:00:45Z : No. of bitstreams: 1 000754075.pdf: 1053902 bytes, checksum: bc9c8bcad96f2ac9a99f7275a15b0258 (MD5) / O vírus da peritonite infecciosa felina (FIPV) causa uma doença fatal, sistêmica e imunomediada. O FIPV contem mutações do coronavírus entérico felino (FECoV) e o diagnóstico antemortem da PIF é desafiador pois a maioria dos gatos são positivos para FCoV nos testes sorológicos e de amplificação de DNA. A diferenciação entre a infecção pelo FIPV e pelo FECoV é difícil, sendo conclusivo post-mortem pelo exame histopatológico. A RT-PCR para detecção do RNAm de coronavírus felino em sangue periférico é um teste diagnóstico que evidencia a infecção e replicação do vírus. Entretanto, esses ensaios não conseguem distinguir entre cepas produtoras de PIF e do FECoV. Na patogenia da infecção, as células imunes infectadas induzem uma produção exacerbada de citocinas. Assim, nosso objetivo foi o de verificar se gatos com PIF expressam RNAM codificante de citocinas de forma alterada quando comparadas com animais saudáveis. Para tanto, amostras de sangue de 44 gatos provenientes de gatis de SP e RJ foram coletadas em 4 momentos, num intervalo de 4 meses. A partir do RNA total extraído, foi realizada a RT-qPCR para RNAm codificante de citocinas felinas (IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, IFN-γ) normalizadas pelo GAPDH. Observou-se que, para as citocinas IL-1, IL-2, IL-6 e IL-10, foram obtidos resultados elevados na maioria dos animais. Entretanto, IL-12, TNF-α e IFN-γ estavam aumentadas em apenas alguns grupos, que pode estar associado à infecção por FIPV. Os animais que apresentaram valores elevados para essas citocinas, tinham sinais clínicos compatíveis com a doença e contato com animais que desenvolveram a PIF / The feline infectious peritonitis virus (FIPV) causes a fatal disease, and systemic immune mediated. The FIPV contains mutations of feline enteric coronavirus (FECoV) and antemortem diagnosis of FIP is challenging because most cats are positive for FCoV in serological and DNA amplification. The differentiation between infection the FIPV and FECoV is hard being conclusive post-mortem by histopathological examination. RT-PCR for detection of feline coronavirus mRNA in peripheral blood is a diagnostic test which shows the infection and replication of the virus. However, these tests can’t distinguish between strains producing FIP and FECoV. In the pathogenesis of infection, the infected cells induce an immune exacerbated production of cytokines. Thus, our goal was to determine whether cats with FIP express mRNA encoding cytokines altered form compared to healthy animals. Therefore, blood samples from 44 cats from catteries of SP and RJ were collected at 4 times within 4 months. From the total RNA, we performed RT-qPCR mRNA coding for feline cytokine (IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, IFN-γ) normalized by GAPDH. It was observed that, for the cytokines IL-1, IL-2, IL-6 and IL-10 high scores were obtained in most animals. However, IL-12, TNF-α and IFN-γ were increased only in some groups, which may be associated with FIPV infection. The animals with high values for these cytokines had clinical signs consistent with the disease and contact with animals that developed FIP

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-08Bitstream added on 2014-08-13T18:01:34Z : No. of bitstreams: 1 000745596.pdf: 1468919 bytes, checksum: 9e749f402de55d2ef3dbe568017cfcc2 (MD5) / O gato do mato (Leopardus tigrinus) é considerado uma espécie ameaçada de extinção no território brasileiro, sendo mais vulnerável em algumas regiões. A coleta de informações desta espécie é fundamental para originar conhecimentos sobre peculiaridades da mesma e assim, contribuir para reverter esse quadro atual. Pesquisas relacionadas ao diagnóstico por imagem no gato do mato são raras assim como o conhecimento de sua anatomia e enfermidades. Portanto, o estudo pela ultrassonográfica abdominal desta espécie irá proporcionar uma fonte de dados de normalidade, os quais poderão ser utilizados para diagnosticar enfermidades, colaborando para a preservação e manutenção da espécie. O grupo foi composto por 20 Leopardus tigrinus clinicamente sadios que foram submetidos ao exame ultrassonográfico abdominal com a finalidade de obtenção de parâmetros de normalidade de bexiga, baço, adrenal, rins, estômago, fígado e vesícula biliar, bem como parâmetros dopplerfluxométricos de vasos hepáticos e renais. Desse grupo dois gatos do mato tiveram intercorrências anestésicas e foram excluídos do projeto. O objetivo do presente estudo foi descrever a anatomia ultrassonográfica abdominal em gatos do mato criados em cativeiro, para que essa informação possa ser utilizada como referência no diagnóstico de enfermidades que tenham envolvimento abdominal e, como consequência, possam ajudar na manutenção e preservação da espécie. A hipótese foi que a anatomia ultrassonográfica abdominal do gato do mato é similar ao gato doméstico / The oncilla (Leopardus tigrinus) is considered an endangered species in the Brazilian territory, being more vulnerable in some regions. Collecting information of this specie is essential to provide knowledge about its peculiaritie and help to reverse the current frame. Studies related to diagnostic imaging in the oncillas are rare as well as knowledge of their anatomy and diseases. Therefore, the abdominal ultrasound study of this species will provide a source of normality parameters, which may be used to diagnose diseases, contributing to the preservation and maintenance of the species. Twenty clinically healthy oncilla were selected for the abdominal ultrasound examination in order to obtain normal parameters of bladder, spleen, adrenal, kidney, stomach, liver and gallbladder, and Doppler parameters of liver and kidneys vessels. Two oncillas had anesthesia issues and were no included in the study. The aim of this study was to describe the normal abdominal echoanatomy of the oncilla. This study provides information of normal abdominal anatomical structures which can be basis for the study of diseases that cause abdominal involvement and to assist in the routine of centers of veterinary medicine in wild animals and/or cats. The hipothesis was that the echoanatomy of the oncilla was similar to the domestic cat

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-21Bitstream added on 2014-08-13T18:00:42Z : No. of bitstreams: 1 000756392.pdf: 1529746 bytes, checksum: c695f204ec592597ec7f94c736d1b9ff (MD5) / O Coronavírus felino (FCoV) é um membro da ordem Nidovirales, família Coronaviridae, gênero Alphacoronavírus, que é responsável por causar a peritonite infecciosa felina (PIF). Dentre os testes sorológicos utilizados no auxílio ao diagnóstico da doença, o método mais sensível e recomendado é o ELISA. O FCoV apresenta características que dificultam seu cultivo celular, sendo necessário o uso de antígenos recombinantes no ELISA. A proteína de nucleocapsídeo (N) do FCoV apresenta vantagens no seu uso como antígeno recombinante em testes sorológicos, por ser conservada, altamente imunogênica, e ser uma das mais produzidas durante a infecção viral. O objetivo deste trabalho foi padronizar e aplicar o ELISA indireto com uso de proteína N recombinante para detectar anticorpos anti-FCoV em soros de gatos naturalmente infectados. Um fragmento de rim de um felino que veio a óbito com PIF foi utilizado para extração de RNA viral, amplificação pela RT-PCR e sequenciamento da proteína N. A sequência da proteína N foi sintetizada com códons otimizados para expressão em Escherichia coli e inserida no plasmídeo pGS21a. Após sua produção, a proteína foi purificada. Foi realizado o Western blott com soro de gato naturalmente infectado para a confirmação da reatividade da proteína. Na padronização do ELISA indireto foi determinada o tipo de bloqueio, concentração de antígeno e diluição dos soros. Trezentos e oitenta e duas amostras de soros felinos foram testadas. Os resultados obtidos mostraram que a proteína produzida apresentou ótima reatividade no ELISA indireto. Foram encontradas diferenças de A450 entre os soros testados, onde se demonstrou uma alta capacidade de discriminação com A450 de 0,1 a 1,8, mostrando que o teste é quantitativo. O ELISA indireto padronizado para detecção de anticorpos anti-FCoV utilizando a proteína N recombinante é um método eficiente e pode ser aplicado em amostras de campo / The Feline Coronavírus (FCoV) is a member of the Nidovirales order, Coronaviridae family, Alphacoronavírus genus, which is responsible for causing Feline Infectious Peritonitis (FIP). Among the serological tests used in the disease diagnosis, ELISA is the most sensitive and recommended assay. FCoV has characteristics that difficult their cell culture growing, requiring the use of recombinant antigens in the ELISA. The FCoV nucleocapsid protein (N) is conserved, highly immunogenic and is the most protein produced during viral infection, being a great recombinant antigen in serological tests. The aim of this study was to standardize and apply the indirect ELISA using recombinant N protein to detect anti-FCoV antibodies in sera from naturally infected cats. A kidney fragment of died feline FIP positive was used for extraction of viral RNA, amplification by RT-PCR and sequencing of the protein N. The N protein sequence was synthesized with optimized codons for expression in Escherichia coli and inserted into pGS21a plasmid. The protein was produced, purified and the Western blotting was performed with sera from naturally infected cat to confirm the reactivity of the protein. To indirect ELISA standardization, the antigen concentration, serum dilution and the blocking reagent were determined. Three hundred eighty-two cat’s sera were tested. The obtained results showed that the protein presented good reactivity in indirect ELISA. The A450 differences from 0.1 to 1.8 showed the quantitative feature of the assay. The standardized indirect ELISA for detection of anti-FCoV using recombinant N protein is efficient and can be applied in field samples

Orientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Luciane Alarcão Dias Melício / Banca: Marcelo de Souza Zanutto / Resumo: O Coronavírus felino (FCoV) é um membro da ordem Nidovirales, família Coronaviridae, gênero Alphacoronavírus, que é responsável por causar a peritonite infecciosa felina (PIF). Dentre os testes sorológicos utilizados no auxílio ao diagnóstico da doença, o método mais sensível e recomendado é o ELISA. O FCoV apresenta características que dificultam seu cultivo celular, sendo necessário o uso de antígenos recombinantes no ELISA. A proteína de nucleocapsídeo (N) do FCoV apresenta vantagens no seu uso como antígeno recombinante em testes sorológicos, por ser conservada, altamente imunogênica, e ser uma das mais produzidas durante a infecção viral. O objetivo deste trabalho foi padronizar e aplicar o ELISA indireto com uso de proteína N recombinante para detectar anticorpos anti-FCoV em soros de gatos naturalmente infectados. Um fragmento de rim de um felino que veio a óbito com PIF foi utilizado para extração de RNA viral, amplificação pela RT-PCR e sequenciamento da proteína N. A sequência da proteína N foi sintetizada com códons otimizados para expressão em Escherichia coli e inserida no plasmídeo pGS21a. Após sua produção, a proteína foi purificada. Foi realizado o Western blott com soro de gato naturalmente infectado para a confirmação da reatividade da proteína. Na padronização do ELISA indireto foi determinada o tipo de bloqueio, concentração de antígeno e diluição dos soros. Trezentos e oitenta e duas amostras de soros felinos foram testadas. Os resultados obtidos mostraram que a proteína produzida apresentou ótima reatividade no ELISA indireto. Foram encontradas diferenças de A450 entre os soros testados, onde se demonstrou uma alta capacidade de discriminação com A450 de 0,1 a 1,8, mostrando que o teste é quantitativo. O ELISA indireto padronizado para detecção de anticorpos anti-FCoV utilizando a proteína N recombinante é um método eficiente e pode ser aplicado em amostras de campo / Abstract: The Feline Coronavírus (FCoV) is a member of the Nidovirales order, Coronaviridae family, Alphacoronavírus genus, which is responsible for causing Feline Infectious Peritonitis (FIP). Among the serological tests used in the disease diagnosis, ELISA is the most sensitive and recommended assay. FCoV has characteristics that difficult their cell culture growing, requiring the use of recombinant antigens in the ELISA. The FCoV nucleocapsid protein (N) is conserved, highly immunogenic and is the most protein produced during viral infection, being a great recombinant antigen in serological tests. The aim of this study was to standardize and apply the indirect ELISA using recombinant N protein to detect anti-FCoV antibodies in sera from naturally infected cats. A kidney fragment of died feline FIP positive was used for extraction of viral RNA, amplification by RT-PCR and sequencing of the protein N. The N protein sequence was synthesized with optimized codons for expression in Escherichia coli and inserted into pGS21a plasmid. The protein was produced, purified and the Western blotting was performed with sera from naturally infected cat to confirm the reactivity of the protein. To indirect ELISA standardization, the antigen concentration, serum dilution and the blocking reagent were determined. Three hundred eighty-two cat's sera were tested. The obtained results showed that the protein presented good reactivity in indirect ELISA. The A450 differences from 0.1 to 1.8 showed the quantitative feature of the assay. The standardized indirect ELISA for detection of anti-FCoV using recombinant N protein is efficient and can be applied in field samples / Mestre