O estômago de ruminantes é um órgão complexo subdividido em quatro compartimentos: o rúmen, o retículo, o omaso e o abomaso, sendo os três primeiros os pré-estômagos ou pró-ventrículos. Cada um possui sua própria característica, responsável por mecanismos de ruminação essenciais. Junções gap são as únicas especializações na membrana celular que permitem a comunicação direta entre células adjacentes, enquanto que as junções de adesão são especializações que mantém a integridade tecidual. Sabe-se que elas contribuem para a homeostase tissular e são compostas por proteínas transmembrânicas chamadas conexinas (junções gap) e caderinas (junções de adesão). Além disso, essas junções estão também envolvidas no controle da proliferação celular, no controle de crescimento e diferenciação, apoptose, e a sincronização de funções eletrotônicas e metabólicas. Assim, o rúmen de bovinos pode ser um modelo para compreender a contribuição das conexinas e caderinas durante a diferenciação do epitélio ruminal a um estado funcional, que o transforma de epitélio de revestimento para um epitélio absortivo com funções de metabolização de substâncias, em especial o ácido lático e ácidos graxos. Dessa maneira, nossa hipótese é que as diferentes conexinas mudem sua dinâmica de expressão quanto ao tipo e localização, com repercussões na morfologia epitelial. Os objetivos do presente estudo foram a avaliação da expressão e localização das Conexinas 26, 32, 40 e 43 e da E-caderina no rúmen de fetos bovinos, bezerros recém-nascidos e bovinos adultos, além da avaliação morfológica do epitélio ruminal de através da microscopia óptica e eletrônica. Também possui como objetivo a avaliação da expressão gênica dessas proteínas no rúmen desses animais. Para isso, foi realizada a coleta de amostras do saco dorsal e do saco ventral do rúmen de fetos bovinos, bezerros recém-nascidos e bovinos adultos. Nos materiais coletados foram realizadas as técnicas de coloração com Hematoxilina-Eosina e morfometria, imunofluorescência, microscopia eletrônica de transmissão, extração de RNA total e sequenciamento genético. Na coleta do material as posições anatômicas observadas foram exatas às já descritas na literatura. O tecido ruminal apresentou diferenças morfométricas em relação às mensurações realizadas no tecido epitelial e na camada basal, nas idades estudadas. Além disso, foram observadas modificações teciduais ao longo do desenvolvimento ruminal na microscopia eletrônica de transmissão e na expressão das conexinas no tecido ruminal na imunofluorescência. A respeito da expressão das conexinas estudadas, ela difere em relação à idade dos animais e à localização no tecido ruminal, tornando evidente a necessidade de cada uma das conexinas em relação à idade, desenvolvimento e manutenção do tecido ruminal. A expressão tecidual da E-caderina apresentou-se semelhante nas idades estudadas. Em relação à expressão gênica e sequenciamento genético dessas proteínas, suas mudanças acompanharam as diferenças observadas na expressão tecidual através da imunofluorescência. Desse modo, pode-se concluir que ocorrem mudanças tanto na expressão tecidual quanto na expressão gênica dessas proteínas durante o desenvolvimento ruminal e sua manutenção enquanto adulto. / The stomach of ruminants is a complex organ subdivided into four compartments: the rumen, the reticulum, the omasum and the abomasum, the first three being the prestomachs or pro-ventricles. Each one has its own characteristic, responsible for essential rumination mechanisms. Gap junctions are the only cell membrane specializations that allow direct communication between adjacent cells, whereas adhesion junctions are specializations that maintain tissue integrity. It is known that they contribute to tissue homeostasis and are composed of transmembrane proteins called connexins (gap junctions) and cadherins (adhesion junctions). In addition, these junctions are also involved in the control of cell proliferation, growth and differentiation, apoptosis, and the synchronization of electrotonomic and metabolic functions. Thus, the bovine rumen may be a model for understanding the contribution of connexins and cadherins during the differentiation of the ruminal epithelium into a functional state, which transforms it from coating epithelium to an absorptive epithelium with metabolizing functions of substances, especially the lactic acid and fatty acids. Therefore, our hypothesis is that the different connexins change their expression dynamics regarding type and location, with repercussions on epithelial morphology. The objective of the present study was to evaluate the expression and location of Connexins 26, 32, 40 and 43 and E-cadherin in the rumen of bovine fetuses, newborn calves and adult bovines, as well as the morphological evaluation of ruminal epithelium through optical and electronic microscopy. It also aims to evaluate the gene expression of these proteins in the rumen of these animals. For that, samples were collected from the dorsal and the ventral sac from the rumen of bovine fetuses, newborn calves and adult bovines. Hematoxylin-Eosin staining techniques and morphometry, immunofluorescence, transmission electron microscopy, total RNA extraction and genetic sequencing were performed in the collected materials. During the collection of the material it was observed that anatomical positions were exact to those already described in the literature. The ruminal tissue presented morphometric differences in relation to the measurements made in the epithelial tissue and the basal layer, in the studied ages. In addition, tissue changes were observed along ruminal development in transmission electron microscopy and in the expression of connexins in ruminal tissue in immunofluorescence. Regarding the expression of the connexins studied, it differs in relation to the age of the animals and the location in the ruminal tissue, making evident the necessity of each of the connexins in relation to the age, development and maintenance of ruminal tissue. The tissue expression of E-cadherin was similar in the studied ages. In relation to the gene expression and genetic sequencing of these proteins, their changes accompanied the observed differences in tissue expression through immunofluorescence. Thus, it can be concluded that changes occur in both the tissue expression and the gene expression of these proteins during ruminal development and its maintenance as an adult.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neosporosis is a parasitic disease of wide distribution and great importance to the cattle industry, mainly due to its associated reproductive losses. The life cycle of Neospora caninum typified by the tree know infectious stages: tachyzoites, tissue cysts with bradyzoites, and oocysts. Transmission routes can be horizontal and/or vertical. The vertical transmission or transplacentally is the most frequent form of infection, and an important form of maintain the agent in herds. With aim of to determine the occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in serum samples of 260 bovine fetuses, collected in a slaughter in the municipality of Santa Maria, in Rio Grande do Sul, Brazil. For detection antibodies anti-N. caninum indirect fluorescent antibody test was used and immunoglobulin G and M were detected, using a cut-off 1:25. Of the 260 serum samples tested, 15% (39/260) were positive for the presence of anti-N. caninum. Of these, in 38 the presence of IgG where detected (97.4%) and in six IgM were present (10.3%). Five samples (15.4%) tested were positive for both IgG and IgM. The results reaffirming the ability of N. caninum in determine fetal infection. The results presented on the first chapter indicated that the search of IgM anti-N. caninum is of very limited help in the detection of the transplacental infection in cattle. In second chapter, was evaluated the susceptibility to infection by N. caninum in different cell cultures, for the purpose of observe the ability in vitro multiplication this agent. For this, eight cell cultures were tested, among the cell cultures tested, four presented good susceptibility to agent: cell lines VERO (yield of 21.2 tachyzoites/cell) and MA-104 (17.1); primary bovine testicle (16.3) and lung cells (13.6). Primary bovine kidney (8.2 tachyzoites/cell), MDBK (5.1) and RK-13 cell lines (0.4) presented moderate to low sensitivity. No viable tachyzoites were detected in the culture of MDCK cells. These results demonstrate that MA-104 cells present adequate susceptibility to N. caninum compared to VERO cells, which have been largely used to multiply the parasite in vitro. Due to the easy manipulation, quick multiplication and relatively low nutritional equirements, these results indicate that MA-104 cells are adequate for multiplication of N. caninum in vitro. / A neosporose é uma doença parasitária de ampla distribuição e com grande importância para a bovinocultura, principalmente pelas perdas reprodutivas que determina. O ciclo do Neospora caninum caracteriza-se por apresentar três estágios infecciosos: os taquizoítos, os cistos teciduais contendo bradizoítos e os oocistos. Suas rotas de transmissão podem ser horizontal e/ou vertical. A infecção vertical ou transplacentária é a forma mais freqüente de infecção, sendo uma importante forma de manutenção do agente nos rebanhos. Com o objetivo de determinar a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em fetos bovinos, foram coletadas 260 amostras de soro em abatedouro localizado no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil. Para detecção de anticorpos anti-N. caninum, utilizou-se a técnica de imunofluorescência indireta com a presença de imunoglobulinas G e M (IgG e IgM), sendo analisada com ponto de corte de 1:25. Do número total de amostras testadas, 15% (39/260) foram positivas para anticorpos anti-N. caninum. Destas, em 38 (97,4%) foi detectada a presença de IgG anti-N. caninum e em seis (15,4%) de IgM. Em cinco amostras (12,8%) detectaram-se ambos, IgG e IgM. Os resultados reafirmam a capacidade do N. caninum determinar infecção fetal. Os resultados obtidos no primeiro capítulo desta dissertação permitiram demonstrar que a pesquisa de IgM foi de limitada importância na detecção da infecção via transplacentária em soro fetal bovino. No segundo capítulo, foi avaliada a susceptibilidade à infecção pelo N. caninum em diferentes cultivos celulares, com a finalidade de observar a capacidade de multiplicação deste agente in vitro. Para isto, foram testados oito cultivos, sendo que quatro apresentaram boa susceptibilidade a multiplicação pelo N. caninum: células VERO (produção de 21,2 taquizoítos/célula), MA-104 (17,1), cultivo primário de testículo (16,3) e pulmão bovino (13,6). O cultivo primário de rim bovino (8,2), células MDBK (5,1) e RK-13 (0,4) apresentaram baixa sensibilidade, enquanto células MDCK não produziram taquizoítos viáveis. Os resultados obtidos demonstram que as células MA-104 apresentaram susceptibilidade semelhante a das células VERO linhagem tradicionalmente utilizada para o cultivo deste protozoário. Pela facilidade de cultivo e rápida multiplicação, menor exigência nutricional e produção de taquizoítos em níveis semelhantes às células VERO, as células MA-104 demonstraram ser adequadas para a manutenção e multiplicação do N. caninum in vitro.