A obturação do canal radicular é uma etapa fundamental para o sucesso do tratamento endodôntico. É desejável que os materiais empregados nesta fase não interferiram negativamente com o reparo tecidual, mas preferencialmente estimulem a regeneração dos tecidos periapicais. Recentemente, cones de guta-percha combinados com material biocerâmico foram desenvolvidos com esta finalidade. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi investigar o potencial citotóxico e biomodulador de cones de guta-percha convencionais, de cones de guta-percha contendo biocerâmica e de cones de polímero sobre células de ligamento periodontal in vitro. Cultura de fibroblastos de ligamento periodontal foi estabelecida a partir de terceiro molar humano. As células foram estimuladas com extratos de cones de guta-percha convencional, de cones de guta-percha contendo biocerâmica e de cones de polímero em diluição seriada para teste de viabilidade celular por meio do método MTT (Brometo de Difeniltetrazólio 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-yl) após 72 h. Em seguida, a diluição de 1/5 foi empregada para estimulação das células por 72 h para detecção da expressão gênica de colágeno tipo I e proteína cementária 1 (CEMP-1) por RT-qPCR. Os dados foram estatisticamente analizados por meio de ANOVA sendo considerados significativos valores de p < 0,05. Os resultados observados de forma que, em extrato puro em extrato puro 1:1, houve comprometimento da viabilidade celular tanto para o extrato de cone de guta-percha quanto para o extrato do cone Cpoint podendo ser considerados citotóxicos. Nas outras diluições não houve diferença significativa neste parâmetro. Em relação à expressão gênica de colágeno, não foram observadas diferenças significativas quando da presença dos extratos. Para CEMP-1, significativa indução da expressão gênica foi observada para o cone de guta-percha. Conclui-se, através da análise dos resultados, que o cone de guta-percha e o cone de polímero são os mais citotóxicos em extrato puro, porém a guta-percha foi o único material que induziu uma expressão significativa de CEMP-1 que auxilia no reparo tecidual. O Col1 não foi induzido em nenhuma das amostras, porém também não foi inibido que indica que nenhum dos 3 tipos de cone interfere no reparo tecidual. / Root canal obturation is a fundamental step for successful endodontic treatment. It is desirable that the materials employed at this stage did not adversely interfere with tissue repair but rather stimulate the regeneration of the periapical tissues. Recently, gutta-percha points combined with bioceramic materials were developed for this purpose. Thus, the objective of this study was to investigate the cytotoxic and biomodulatory potential of conventional gutta-percha points, gutta-percha points containing bioceramics and polymer points on periodontal ligament cells in vitro. Culture of periodontal ligament fibroblasts was established from one human third molar. The cells were stimulated with extracts of cones of conventional gutta-percha points, gutta-percha containing bioceramics and polymer points in serial dilution for cell viability test using the MTT assay [Diphenyltetrazolium Bromide 3- (4,5)]. Next, the 1/5 dilution was used to stimulate the cells for 72 h to detect the gene expression of type I collagen and cement protein 1 (CEMP-1) by RT-qPCR. Data were statistically analyzed by means of ANOVA being considered significant values of p <0.05. The results observed was that in a pure 1: 1 extract, there was impairment of cell viability for both the guta-percha cone extract and the Cpoint cone extract and could be considered cytotoxic. At the other dilutions, no significant difference on this parameter was observed. Regarding the gene expression of collagen, no significant differences were observed at the presence of extracts. For CEMP-1, significant induction of gene expression was observed for gutta-percha points. In conclusion, the analysis of the results showed that the gutta-percha and polymer points are the most cytotoxic at pure extract, however gutta-percha was the only material that induced a significant expression of CEMP-1 which assists the tissue repair. Col1 was not induced in any of the samples but was also not inhibited indicating that none of the 3 cone types interfere in tissue repair.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:48:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 09151.pdf: 3898995 bytes, checksum: c6107a524057a95f300eee8a635c6f1e (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:06:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Por mais de 30 anos, a utilização do meio de cultura, enriquecido com soro bovino, e de fibroblastos murinos, com a taxa de proliferação controlada por irradiação ou por ação de drogas anti-cancerígenas, vem desempenhando com sucesso o seu papel de auxiliar no desenvolvimento dos queratinócitos em cultura, para fins clínicos. Porém, atualmente há uma preocupação crescente acerca da possibilidade de transmissão de príons e virose animais, aos pacientes transplantados. Levando em conta esta preocupação, o presente trabalho tem como objetivo cultivar fibroblastos humanos em meio enriquecido com lisado de plaquetas humanas e determinar a dose de irradiação dessas células, para obtenção da camada de sustentação na cultura de células da epiderme. Para realização do objetivo proposto, padronizamos a lise das plaquetas, utilizamos este lisado para cultivar os fibroblastos humanos e verificamos a dose de irradiação suficiente para inibir sua duplicação. Queratinócitos humanos foram cultivados nestas camadas de sustentação, em meio de cultura suplementado com o lisado. Com os resultados obtidos concluímos que o lisado de plaquetas a 10% promoveu uma melhor adesão e proliferação dos fibroblastos humanos e em todas as doses testadas (60 a 300 Gy), estes tiveram as suas atividades mitóticas inativadas pela radiação ionizante, sendo que as camadas de sustentação obtidas com doses de 70 a 150 Gy foram as que proporcionaram o melhor desenvolvimento dos queratinócitos em meio contendo 2,5% de lisado de plaquetas humanas. Portanto, foi possível padronizar, tanto o cultivo dos fibroblastos humanos, quanto sua inativação para utilização como camada de sustentação na cultura de queratinócitos, de maneira a eliminar os componentes xenobióticos. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:43:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:10:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06785.pdf: 2811813 bytes, checksum: 898347d218a069ca43adfe992a27cd19 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

O objetivo deste estudo foi estabelecer cultura primária de células derivadas da granulação óssea (GO) de seres humanos para determinar seu padrão de crescimento in vitro e determinar os efeitos biológicos de três membranas reabsorvíveis feitas de colágeno (BioGide®, GenDerm®, CollaTape®) em culturas de fibroblastos gengivais humanos (FGH) e células da granulação óssea (GO). Foram coletadas amostras de tecido ósseo presente no alvéolo de cicatrização de dois pacientes adultos saudáveis sistemicamente com indicação de cirurgia periodontal regenerativa pela técnica do enxerto ósseo em neoformação. Imediatamente após a coleta, as amostras foram transportadas ao laboratório de cultura de células para estabelecimento da cultura primária. As células foram cultivadas em atmosfera úmida, contendo 5% CO2 a 37oC. A curva de crescimento das células foi determinada por meio de contagem de células viáveis. Após a caracterização da curva de crescimento, foram realizadas a caracterização da amostra por meio de determinação da atividade de fosfatase alcalina e de mineralização. Posteriormente, os efeitos de três diferentes tipos de membranas colágenas sobre a proliferação de células GO e FGH foram investigados por meio do teste MTT. As amostras foram divididas em oito grupos: (1) células FGH em meio DMEM (C-FGH); (2) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana GenDerm (GD-FGH); (3) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana BioGide (BG-FGH); (4) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana ColaTape (CT-FGH); (5) células GO em meio DMEM (C-GO); (6) células GO em meio DMEM condicionado com membrana GenDerm (GD-GO); (7) células GO em meio DMEM condicionado com membrana BioGide (BG-GO); (8) células GO em meio DMEM condicionado com membrana CollaTape (CT-GO). O teste de proliferação celular mostrou que houve aumento significativo (p< 0.05; ANOVA para medidas repetidas) do número de células vitais presentes na cultura nos dias 3 (90,8%), 5 (132,50%), 7 (137,50%) e 10 (227,50%) em relação ao controle (dia 0). Foram observadas atividade de fosfatase alcalina e de mineralização in vitro. Houve aumento do número de células FGH e GO viáveis em todos os grupos (p< 0.05; ANOVA para medidas repetidas). Houve maior efeito proliferativo nas células FGH e GO nos grupos GD e CT, com diferenças estatisticamente significantes entre os grupos (p< 0.05; Mann Whitney) apenas no período de 96 horas. Esses achados sugerem que as células GO apresentam alta atividade de proliferação e síntese, sendo compatíveis com células de linhagem osteoblástica. Duas membranas colágenas testadas exerceram maior ação proliferativa tardia sobre osteoblastos, indicando sua eficácia na regeneração dos tecidos periodontais. / The aim of this study was to establish primary culture of cells derived from human bone granulation tissue (GO) in order to determine its growth pattern in vitro and the biological effects of three absorbable collagen membranes (BioGide®, GenDerm®, CollaTape®) in human gingival fibroblasts (FGH) and human bone granulation (GO) cell cultures. Samples of bone tissue present at healing sockets of two systemically healthy adults with indication of periodontal regenerative therapy by the newly forming bone were collected. Immediately after, samples were transported to the laboratory of cell culture to the establishment of primary cultures. Cells were cultivated in humid atmosphere with 95% CO2 at 37oC. Cells growth pattern were determined by counting of viable cells. After characterization of growth pattern, samples were characterized according to alkaline phosphatase activity and mineralization detected by alizarin red. Afterwards, the effects of three different types of collagen membranes on GO and FGH cells were investigated by MTT test. Samples were divided into eight groups: (1) FGH cells in DMEM (C-FGH); (2) FGH in DMEM conditioned by GenDerm® membrane (GD-FGH); (3) FGH in DMEM conditioned with BioGide® (BG-FGH); (4) FGH in DMEM conditioned by CollaTape® (CT-FGH); (5) GO cells in DMEM (C-GO); (6) GO cells in DMEM conditioned by GenDerm® (GD-GO); (7) GO cells in DMEM conditioned by BioGide® (BG-GO); (8) GO cells in DMEM conditioned by CollaTape® (CT-GO). Cell proliferation test showed a significant (p< 0.05; ANOVA for repeated measures) increase in the number of vital cells present in the culture at days 3 (90.8%), 5 (132.50%), 7 (137.50%) and 10 (227.50%) compared to control (dia 0). It was observed alkaline phosphatase activity and mineralization in vitro. There was an increase in the number of FGH and GO viable cells at all groups (p< 0.05; ANOVA for repeated measures). Greater proliferative effect at FGH and GO cells at GD and CT groups, with significant differences between groups (p< 0.05; Mann Whitney) only at 96 hs. Two of the collagen membranes tested exerted greater late proliferative effects on osteoblasts, suggesting its efficacy in the regeneration of periodontal tissues.

Enxertos gengivais livres são importantes para garantir condições necessárias para o estabelecimento da homeostasia do periodonto de proteção. O processo de inflamação não ocorre por igual em todos os tecidos conjuntivos do organismo e os fibroblastos têm a capacidade de reagir a estímulos agressivos por meio de liberação de diversas citocinas, que desempenham importante função na formação do infiltrado inflamatório. Até o presente trabalho, não há relatos na literatura acerca da comparação do comportamento dos fibroblastos que compõem a mucosa palatina não marginal e dos fibroblastos provenientes de enxerto gengival livre (EGL) marginal em resistir aos estímulos agressores que ocorrem na doença periodontal. Dessa forma, a proposta do presente trabalho foi investigar se os fibroblastos da mucosa palatina não marginal mudariam seu perfil de secreção de citocinas quando enxertados na margem gengival. Foram coletadas biópsias da mucosa palatina no momento da cirurgia de EGL (período inicial) e após 4 meses (período final) no momento da cirurgia para recobrimento radicular. Os fibroblastos foram cultivados e estimulados com LPS de Porphyromonas gingivalis (Pg) e de Escherichia coli (Ec) por 24h e 48h para avaliação comparativa da expressão de citocinas e mediadores do reparo tecidual, como: IL-6, IL-8/CXCL8, MIP-1&#x3B1;/CCL3, TGF-&#x3B2;, VEGF e CXCL16. As citocinas foram quantificadas no sobrenadante das células por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA). Para a citocina IL-6, os fibroblastos da mucosa palatina não marginal mantiveram o mesmo perfil de secreção quando enxertados na área gengival marginal; para MIP-1&#x3B1; a secreção se mostrou aumentada de forma estatisticamente significativa pelos fibroblastos obtidos do enxerto gengival marginal após 48h de estímulo por Pg em comparação com os fibroblastos da área palatina não marginal; a secreção de IL-8 pelos fibroblastos da mucosa palatina não marginal foi maior em resposta ao desafio por LPS de Pg e os fibroblastos obtidos do enxerto gengival marginal exibiram secreção até mesmo sem o estímulo de LPS; apenas os fibroblastos do enxerto gengival marginal apresentaram secreção de TGF-&#x3B2;, mesmo na ausência de estímulo por LPS; a secreção de VEGF e CXCL16 não foi detectada pelos fibroblastos analisados. Conclui-se que os fibroblastos provenientes de uma mucosa palatina não marginal parecem se adaptar às condições locais quando enxertados na área gengival marginal, oferecendo evidência de sua participação efetiva na produção de mediadores inflamatórios importantes para o processo de homeostasia do periodonto marginal. / Free gingival grafts are important to ensure conditions for the establishment of homeostasis of the periodontal soft tissues. The process of inflammation does not occur the same way in all connective tissues and fibroblasts have the ability to respond to aggressive stimuli through the release of various cytokines, which play an important role in the inflammatory infiltrate formation. In literature, there are no studies comparing the behavior of fibroblasts from palatal mucosa (not marginal) and fibroblasts from marginal free gingival graft (FGG) regarding their resistance towards periodontal disease aggressive stimuli. Thus, the purpose of this study was to investigate whether fibroblasts from the palatal mucosa behave differently when grafted to the gingival margin considering their mechanism of cytokine secretion. Biopsies from the palatal mucosa were collected at the time of FGG surgery (initial period) and after 4 months (final period) when surgery for root coverage was performed. The fibroblasts were cultured and stimulated with LPS of Porphyromonas gingivalis (Pg) and Escherichia coli (Ec) for 24 and 48 hours in order to make a comparative evaluation of cytokines and mediators of tissue repair expression, such as IL-6, IL-8/CXCL8, MIP-1&#x3B1;/CCL3, TGF-&#x3B2;, VEGF and CXCL16. Cytokines were measured in the cell supernatant by enzyme immunoassay (ELISA). For cytokine IL- 6, fibroblasts from palatal mucosa maintained the same secretion pattern when grafted to the gingival margin; for MIP-1&#x3B1; the secretion was significantly increased by fibroblasts from the marginal gingival graft after 48 hours of stimulation with Pg when compared to palatal mucosa fibroblasts; IL-8 secretion by palatal mucosa fibroblasts did not increase in response to Pg LPS challenge and fibroblasts from marginal gingival graft showed secretion even without the stimulus of LPS; only fibroblasts from marginal gingival graft showed secretion of TGF-&#x3B2;, even in the absence of LPS stimulation; VEGF and CXCL16 secretion by fibroblasts was not detected. It was concluded that fibroblasts from palatal mucosa seem to adapt to local conditions when grafted to the gingival margin area, providing evidence of its effective participation in the homeostasis of marginal periodontium through the production of important inflammatory mediators.

O objetivo deste estudo foi investigar in vitro a influência do tratamento de superfícies radiculares na adesão e proliferação de fibroblastos gengivais e de ligamento periodontal humano em fragmentos radiculares de dentes humanos extraídos por razões periodontais. Todos os fragmentos receberam raspagem e alisamento radicular (RAR), e em seguida aleatoriamente divididos em grupos, de acordo com a substância utilizada no tratamento de superfície (n= 15/grupo): ácido fosfórico 37% aplicado por 90s (AF90) ou 180s (AF180) (RAR); EDTA 24% aplicado por 90s (EDTA90) ou 180s (EDTA180); ácido cítrico pH 1.0 a 10% aplicado por 90s (AC90) ou 180s (AC180); ácido cítrico pH 1.0 a 10% associado à tetraciclina 50% por 90s (ACTC90) ou 180s (ACTC180); tetraciclina hidroclorídrica (50mg/ml) aplicada por 90s (TC90) ou 180s (TC180). O grupo controle foi composto por fragmentos tratados por meio de RAR seguido de lavagem em soro fisiológico. Após a realização dos tratamentos, os espécimes (n=3/grupo) foram preparados para análise em MEV com o objetivo de avaliar a descontaminação das superfícies radiculares por meio dos índices de rugosidade superficial (IRS), cálculo residual (ICR), perda de substância dentária (IPSD), presença de restos teciduais (IPRT), remoção de smear layer (IRSL), abertura dos túbulos dentinário (ATD) e smear layer remanescente (SLR) em fotomicrografias em aumentos de 500x e 1000x. Em 6 espécimes de cada grupo, foram plaqueados 104 fibroblastos gengivais (FGH-1), e em outros 6, 104 fibroblastos de ligamento periodontal humano (FLP-1). Após 24h foram fixados 6 espécimes por grupo (n=3/grupo) e após 48h os outros 6 espécimes (n=3/grupo), para análise em microscópio eletrônico de varredura. Para determinar a adesão e proliferação celular, o número de células aderidas à superfície nos dois períodos de avaliação foi determinado em triplicatas por um examinador independente A comparação entre os grupos foi realizada pelo método Kruskal-Wallis complementado pelo teste de Dunn para variáveis não lineares, e por meio de análise de variância múltipla (ANOVA) complementado pelo teste de Tukey para as variáveis lineares. A comparação entre os pares nos períodos de 24 e 48 horas foi realizada por meio do método ANOVA pósteste Sidak para variáveis lineares, e Kruskal Wallis pós-teste Dunn para variáveis não lineares. Foi adotado nível de significância de 5% em todos os testes. Não houve diferença estatisticamente significante para IRS, IPSD, IPRT, IRSL, ATD e SLR. Houve maior quantidade de cálculo residual nos grupos TC90 (3,66 ± 0,57; mediana = 4) e AF180 (3,66 ± 0,57; mediana = 4), enquanto que o grupo AC90 (1,33 ± 0,57; mediana = 1) mostrou quantidade significativamente menor de cálculo residual. Encontrou-se uma adesão significativamente maior de células FGH-1, no grupo EDTA180 (170 ± 77,99) no período de 24 horas, e maior efeito proliferativo (48 horas) no grupo TC90 (172,90 ± 65,38). Para células FLP-1, observou-se uma adesão significativamente maior no grupo ACTC90 (74,67 ± 98,84) no período de 24 horas e maior efeito proliferativo (48 horas) no grupo AC90 (173,8 ± 139,6). A partir dos resultados obtidos, sugere-se que a substância a ser utilizada para o condicionamento das superfícies radiculares seja escolhida de acordo com os objetivos do tratamento periodontal: quando se objetiva a formação de nova inserção conjuntiva o uso do EDTA ou AF por 180s ou da tetraciclina por 90s; para regeneração dos tecidos periodontais, sugere-se o uso de AC por 90s. / The aim of this study was to evaluate in vitro the influence of root surface conditioning on adhesion and proliferation of gingival and periodontal ligament fibroblasts on human root fragments of teeth extracted for periodontal reasons. Fragments received scaling and root planning (SRP), and were then randomly allocated into groups according to the substance used for root surface treatment (n= 15/grupo): phosphoric acid 37% applied for 90s (PA90) or 180s (PA180); EDTA 24% applied for 90s (EDTA90) or 180s (EDTA180); 10% citric acid pH 1.0 applied for 90s (CA90) or 180s (CA180); 10% citric acid pH 1.0 associated to tetracycline HCL 50% applied for 90s (CATC90) or 180s (CATC180); tetracycline hydrocloride (50mg/ml) applied for 90s (TC90) or 180s (TC180). Control group was composed by SRP treated root fragments, followed by saline solution washing. After treatment completion, specimens (n=3/grupo) were prepared for scanning electronmicroscopy (SEM) analysis, aiming at evaluation of its surfaces according to the following indexes: superficial roughness (SR); residual calculus (RC); loss of tooth substance (LT); tissue residual (TS), smear layer removal (SLR), dentin tubules opening (DTO) and smear layer residual (SLR) in photomicrographs on 500x and 1000x magnifications. In 6 specimens of each group 104 gingival fibroblasts (HGF-1) were plated; and over another 6 specimens, 104 periodontal ligament fibroblasts (PLF-1). After MEV evaluation, the number of cells adhered to the root surfaces over 24h and 48h were assessed by a calibrated examiner in triplicates. Groups comparison were analyzed through Kruskal-Wallis post-test Dunn for comparisons for non-linear variables, and ANOVA post-test Tuckey for linear variables. Comparison between pairs over 24 and 48 hours was accessed through Kruskal-Wallis post-test Dunn for non-linear variables, and ANOVA post-test Sidak for linear variables. Significance level of 5% was adopted in all tests. There was no statistical difference for SR, LT, TS, SLR, DTO and SLR. Although there was higher amounts of residual calculus on groups TC90 (3,66 ± 0,57; median = 4) and FA180 (3,66 ± 0,57; median = 4) while group CA90 (1,33 ± 0,57; median = 1) showed statistically less residual calculus. A singnificantlly higher HGF-1 cell count was found on EDTA180 (170 ± 77,99) on 24-hour period and a higher proliferative effect (48 hours) on group TTC90 (172,90 ± 65,38). A significantly higher cell adhesion for (PLF-1) was found on group ACTC90 (74,67 ± 98,84) at 24-hour assessment, and higher proliferative effect (48 hours) for AC90 (173,8 ± 139,6). From the data here exposed, it is suggested that the substance election for root surface conditioning should be based on the treatment primary goal: when a new connective tissue adhesion is aimed, EDTA or PA for 180s or TTC for 90s should be chosen; on the other hand, for periodontal regeneration, CA for 90s should be the best option.

A biomodificação radicular empregando ácido cítrico tem sido utilizada visando à reinserção dos tecidos periodontais a raízes expostas à doença periodontal. Entretanto, a grande diversidade metodológica entre os estudos ainda não possibilitou o estabelecimento de um protocolo amplamente aceito quanto à concentração e tempo de aplicação do ácido. Assim, 32 dentes extraídos por doença periodontal avançada forneceram 63 fragmentos radiculares que, após raspagem manual, foram divididos nos seguintes grupos de tratamento: Grupo AC-10-90: desmineralização com ácido cítrico a 10% em pH 1, durante 90 segundos; Grupo AC-10-120: desmineralização com ácido cítrico a 10% em pH 1, durante 120 segundos; Grupo AC-10-180: desmineralização com ácido cítrico a 10% em pH 1, durante 180 segundos; Grupo AC-50-90: desmineralização com ácido cítrico a 50% em pH 1, durante 90 segundos; Grupo AC-50-120: desmineralização com ácido cítrico a 50% em pH 1, durante 120 segundos; Grupo AC-50-180: desmineralização com ácido cítrico a 50% em pH 1, durante 180 segundos; Grupo C (controle): lavagem com soro fisiológico. Sobre as superfícies tratadas foram cultivados fibroblastos do ligamento periodontal humano por 24, 48 e 72 horas. A ampliação dos túbulos dentinários, morfologia celular e a porcentagem das superfícies radiculares recobertas por células foram avaliadas em microscopia eletrônica de varredura. As imagens microscópicas das superfícies recobertas por células foram comparadas pelo teste não paramétrico de Kruskal-Wallis seguido pelo teste de Dunn e na ampliação dos túbulos pelo teste de variância a dois critérios (ANOVA) complementado pelo teste de Tukey, em 5% de significância, ambos realizados por um programa computadorizado comparando os resultados entre os grupos. A Com exceção do grupo C, em todos os grupos houve aumento crescente da cobertura da superfície radicular por fibroblastos com o tempo. A maior área de cobertura foi apresentada pelo grupo AC-10-90 (98,82±2,57%) às 24 horas e essa diferença foi significante (p<0,001) em comparação aos grupos AC-50-90 (64,94±20,60%), AC-50-180 (56,59±35,42%) e C (0,06±0,24%). Nas demais comparações de tempo de aplicação e tempo de cultura, predominou a superioridade dos grupos tratados por ácido cítrico a 10% sobre os de 50%, porém, sem significância estatística. Todos os grupos teste foram significantemente superiores aos controle em todos os tempos de cultura. O menor valor médio para o diâmetro dos túbulos dentinários expostos pelos tratamentos foi apresentado pelo grupo AC-10-90 (4,55±0,69 &#x3BC;m) que diferiu significantemente (p<0,001) dos grupos AC-10-120 (5,33±0,95 &#x3BC;m), AC-10-180 (5,54±1,56 &#x3BC;m) e AC-50-180 (5,56±1,22 &#x3BC;m). Esse último apresentou a maior ampliação, porém sem diferença significante em relação aos demais grupos. Os fibroblastos apresentaram-se mais espalhados, achatados e com menor definição de limites nos grupos tratados com ácido cítrico a 10% do que nos de 50%, cujas células apresentavamse fusiformes e arredondadas. Concluiu-se que o ácido cítrico a 10% por 90 segundos produziu superfície mais favorável à proliferação celular com características morfológicas de estágios mais avançados de diferenciação e área de cobertura superficial por fibroblastos mais extensa no período inicial de cultura do que na concentração de 50%. A ampliação dos túbulos dentinários pareceu não influenciar a cobertura superficial por fibroblastos. Estudos subsequentes devem investigar a influência das propriedades químicas do agente biomodificador radicular para contribuir para a elucidação das diferenças produzidas no comportamento celular. / The root biomodification employing citric acid has been used in order to reattach periodontal tissues to root surface exposed to periodontal disease. However, the methodological diversity among studies has not allowed the establishment of a widely accepted protocol as the concentration and time of acid application. Thus, 32 teeth were extracted due to advanced periodontal disease, so that 63 root fragments were provided. After scaling and root planning, the fragments were divided into the following treatment groups : AC-10-90 group: demineralization with 10% citric acid at pH 1 for 90 seconds; AC-10-120 group: demineralization with 10% citric acid at pH 1 for 120 seconds; AC-10-180 group: demineralization with 10% citric acid at pH 1 for 180 seconds; AC-50-90 group: demineralization with 50% citric acid at pH 1 for 90 seconds; AC-50-120 group: demineralization with 50% citric acid at pH 1 for 120 seconds; AC-50-180 group: demineralization with 50% citric acid at pH 1 for 180 seconds; group C (control) : rinsing with saline solution. On the treated surfaces, fibroblasts from human periodontal ligament were cultured by 24, 48 and 72 hours. The enlargement of the dentinal tubules, cell morphology and the percentage of root surface covered by cells were evaluated by scanning electron microscopy. Those microscopic images from the root surfaces covered by cells were compared by the nonparametric Kruskal-Wallis test followed by Dunn\'s test and the enlargement of tubules by two variance (ANOVA) complemented by the Tukey test, both performed by a computer program comparing the results between the groups, at 5% significance. With the exception of group C, all groups showed increasing coverage of the root surface by fibroblasts over time. The largest area of coverage was presented by AC-10-90 (98.82±2.57%) at 24 hours and this difference was significant (p <0.001) compared to AC-50-90 (64.94±20.60%), AC-50-180 (56.59±35.42%) and C (0.06±0.24%). In other comparisons the application time and culture time groups treated with citric acid at 10% were superior to groups of 50%, without statistical significance. All test groups were significantly better than the control ones at all times of culture. The shortest average diameter of dentinal tubules exposed by the treatments was presented by AC-10-90 (4.55±0.69 &#x3BC;m) group that differed significantly (p<0,001) from AC-10-120 (5 groups 33±0.95 &#x3BC;m), AC-10-180 (5.54±1.56 &#x3BC;m) and AC-50-180 (5.56±1.22 &#x3BC;m). This last showed the highest enlargement, but without significant difference compared to the other groups. The fibroblasts were more spread, flattened and had less identifiable limits in the groups treated with citric acid 10% than those in 50% which cells had become rounded and spindle. It was concluded that the demineralization with 10% citric acid for 90 seconds produced more favorable surface to cell proliferation, more morphological characteristics of later stages of differentiation and larger surface area coverage by fibroblasts in the initial periods of culture than any of the groups treated with 50% citric acid. The enlargement of dentinal tubules did not seem to influence the surface coverage by fibroblasts. Subsequent studies should investigate the influence of the chemical properties of the root conditioner agent on the root surfaces in order to contribute to the elucidation of the differences produced in the cell behavior.

O ligamento periodontal e o tecido gengival são formados por tecido conjuntivo frouxo, sendo constituídos por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório, e com a produção de componentes da matriz extracelular fundamentais para o reparo, como por exemplo, o colágeno. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo: Avaliar e comparar a expressão e a produção de prócolágeno tipo I, IL6, MIP1 e SDF1 por fibroblastos humanos, cultivados de ligamento periodontal e de tecido gengival, estimulados por lipopolissacarídeo (LPS) de Porphyromonas gingivalis. Foram coletados ligamentos periodontais de terceiros molares não irrompidos e biópsias de gengiva de um mesmo indivíduo (n=3). Estes tecidos foram picotados e mantidos em meio de cultura adequado para fibroblastos, que foram utilizados na quarta passagem. Após adesão dos fibroblastos a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo 0,1 10 g/mL de LPS de P. gingivalis foi adicionado às placas em duplicata. O sobrenadante e as células foram coletados após 1, 6 e 24 horas e analisados por ELISA e PCR em tempo real, respectivamente. A análise estatística foi realizada por meio do programa GraphPad Prism, aplicandose o teste ANOVA a 1 critério com nível de significância de 5%. A expressão de prócolágeno tipo I mostrouse - ligeiramente diferente entre fibroblastos de ligamento periodontal e de gengiva. A produção de IL6, MIP1 e SDF1 foi significativamente maior em fibroblastos gengivais. A citocina IL6 foi produzida de maneira tempodependente com LPS de P gingivalis, principalmente por fibroblastos gengivais. Para MIP1, os fibroblastos gengivais mostraram maior produção com a menor concentração de estímulo (0,1g/ml). Para SDF1, foi detectada produção constitutiva que foi inibida com o aumento da concentração de LPS ao longo do tempo nestas mesmas células. Já para fibroblastos de ligamento periodontal, não foi observado um padrão homogêneo e linear, apesar de a produção basal de SDF1 também existir, porém em níveis bem mais discretos, como aquele observado para a produção de MIP1. A capacidade dos fibroblastos modificarem o padrão de produção dessas citocinas frente ao estímulo com LPS de P. gingivalis reforça a importância dessas células no contexto da resposta imune do indivíduo frente à doença periodontal. / The fibroblast is considered an important cell in periodontitis because it is the predominant cell type in the periodontal connective tissue. When challenged by different agents, fibroblasts respond through the release of substances, such as cytokines and chemokines that participate in an active way in the inflammatory process as well as the production of basic components of the extracellular matrix for repair, like collagen. The aim of this study was to: to evaluate and to compare the expression and production of type I procollagen, IL6, MIP1 and SDF1 by cultured human periodontal ligament and gingival fibroblasts challenged with lipopolyssacharide from Porphyromonas gingivalis. Human periodontal ligament and gingival fibroblasts were cultured from biopsies of the same donor and were used on the fourth passage. After confluence in 24well plates, the culture medium alone (control) or with 0,1 10 ug/mL of LPS from P. gingivalis were added and after 1, 6 and 24 hours, the supernatant and the cells were collected and analysed by ELISA and Real time PCR, respectively. Data were analysed by GraphPad Prism Program (1 way ANOVA test) and a significance level of 5% was adopted. Procollagen type I expression by Real Time PCR differ between periodontal ligament and gingival fibroblasts. In vitro experiments revealed that IL6, MIP 1 and SDF1 production were significantly greater in gingival fibroblasts when compared to periodontal ligament. In addition, IL6 was upregulated in a timedependent manner, mainly by the gingival fibroblasts. On one hand, MIP1 was stimulated with a low concentration (0,1ugml) of LPS by gingival fibroblasts. On the other hand, SDF1 was constitutively secreted by the same cells but its production was inhibited when challenged by a higher concentration of LPS from P gingivalis. In general, periodontal ligament fibroblasts did not show a pattern of production of these cytokines under the challenge with LPS, despite of the basal production of SDF1 in lower levels than gingival cells and the low production of MIP1 over time. The differential ability of the gingival and periodontal ligament fibroblasts to secrete these cytokines emphasizes their crucial role in the inflammatory microenvironment and in the host immune response to periodontal disease.

Equinodermos são bem conhecidos pelas suas grandes capacidades regenerativas, principalmente em processos mais complexos como a reposição de membros e órgãos. Porém pouco se sabe sobre processos aparentemente mais simples como a cicatrização. Tem sido descrito que um dos principais mecanismos envolvidos neste evento é o remodelamento da matriz extracelular e que existem células responsáveis por isto. Entretanto, vários detalhes do processo e do exato papel destas células ainda não são muito claros. Neste trabalho, foram estudados os estágios do processo de cicatrização em Holothuria grisea Selenka, 1867 (Holothuriidae). A lesão foi induzida através de uma incisão perfurando a parede do corpo do animal até alcançar a cavidade celomática. Através de análises histológicas, foram acompanhadas as mudanças estruturais e os mecanismos celulares que ocorrem no intervalo de doze horas a trinta dias após a injúria. Foi observado que houve um rápido fechamento da ferida através da síntese de novas fibras de colágeno, e que fibroblastos e duas populações de esferulócitos estão envolvidos neste processo. São discutidas as prováveis funções destes tipos celulares e possíveis diferenças funcionais entre os esferulócitos. / Echinoderms are well known by their regenerative capabilities, mostly in complex events such as the reconstruction of internal organs or entire body parts. However, the knowledge on apparently simpler processes such as wound healing is relatively scarce. It has been described that extracellular matrix remodeling is the main mechanism, and it involves participation of different cells populations. However, the specific function of these cell types is still under debate. In this work, the wound healing process in Holothuria grisea Selenka, 1867 (Holothuriidae) was studied. The lesion was made by an incision through the body wall up to the coelomic cavity. The local changes in cell types and the reorganization of the extracellular matrix were accompanied from 12 hours to 30 days after the injury. Soon after the wound, the organism responded with a localized contraction, followed by cell migration and synthesis of new collagen fibers. Four different cell types were observed, including two different types of spherulocytes. The probable functions of these cells are discussed.