Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-30T21:26:19Z No. of bitstreams: 1 Mayara Ingrid Sousa Lima Seleção e caracterização de peptideos....pdf: 1915651 bytes, checksum: 4954d0969cc99ed5643d45ee27772173 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-30T21:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mayara Ingrid Sousa Lima Seleção e caracterização de peptideos....pdf: 1915651 bytes, checksum: 4954d0969cc99ed5643d45ee27772173 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia,Brasil / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica, causada pelo Mycobacterium leprae, que apresenta manifestações clínicas variadas. Essas variações refletem em diferenças que vão de uma forte resposta imune celular com controle do crescimento do bacilo, no pólo tuberculóide, a uma anergia em resposta celular, no pólo virchoviano. A caracterização do perfil antigênico do M. leprae frente a esse quadro de múltiplos aspectos clínicos representa uma ferramenta fundamental para o desenvolvimento de novas plataformas para um diagnóstico diferencial mais sensível e/ou desenvolvimento de unidades vacinais. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi selecionar e caracterizar peptídeos miméticos de antígenos do M. leprae reativos contra IgGs totais purificadas de pacientes com hanseníase. Para a seleção foi utilizada a tecnologia de phage display, usando bibliotecas randômicas de peptídeos expressos em fagos filamentosos. Foi realizada uma seleção com IgGs de pacientes Tuberculóides e outra com IgGs de pacientes Virchovianos. A validação dos peptídeos foi realizada utilizando o imunoensaio ELISA, o teste de redução de colônias e análise de bioinformática. Após a pré-validação e sequenciamento foram encontradas 17 mimotopos para o pólo Vichorviano e 12 no pólo Tuberculóide. Foram validados 4 peptídeos, sendo 2 do pólo Tuberculóide (T03, T04) e 2 do pólo Virchoviano (V06 e V13). Os peptídeos TALFPWL (T03) e YSTTLSY (T04) foram imunorreativos em soros de pacientes paucibacilares, bem como em pacientes Virchovianos, além de terem alinhado com proteínas de membrana do M. leprae com potencial antigênico. O peptídeo V06 apresentou especificidade de 100% e sensibilidade de 94,74%, o que se complementa com os dados do teste de redução da pIII, o qual obteve uma taxa de redução de 82% em soros Virchovianos. O peptídeo V13 também foi reativo e apresentou similaridades com chaperonas e proteínas de membrana. Este estudo aponta perspectivas para a identificação de novos antígenos, propiciando a descoberta de novos alvos biológicos com potencial diagnóstico e/ou terapêutico. / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, which has varied clinical manifestations. These variations reflect differences that spans from a strong cellular mediated immunity and bacili growth control the tuberculoid pole to a poor T cell immunity at the lepromatous pole. The antigenic profile characterization in both clinical forms represents a fundamental tool for the development of new platforms for a differential diagnosis more sensitive and/or development of vaccine units. Thus, the objective was to select and characterize mimetics peptides antigens of M. leprae reactive against total IgG purified from leprosy patients. The phage display technology was used for selection using random peptides libraries expressed on filamentous phages. A selection was performed with IgGs from tuberculoid patients and other IgGs of lepromatous patients. Peptides validation was performed using the ELISA immunoassay, the plaque reduction test and bioinformatics analysis. After the pre-validation and sequencing were found 17 valid sequences for the lepromatous pole and 12 tuberculoid pole. Four peptides were validated, two of tuberculoid pole (T03, T04) and two lepromatous pole (V06 and V13). The peptides TALFPWL (T03) and YSTTLSY (T04) were imunoreatives in sera from paucibacillary patients and in lepromatous patients. They had alignment with membrane proteins of M. leprae antigenic potential. The V06 peptide showed 100% specificity and 94.74% sensitivity, which is supplemented with the plaque reduction test, who obtained a reduction rate of 82% in lepromatous sera. The V13 peptide was also reactive and showed similarities with chaperones and membrane proteins. This study presents insights for new antigens identification, leading to discovery of new biological targets with potential diagnostic or therapeutic