Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T15:29:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 OliveiraeSilva_SaraguaciHernandezde_M.pdf: 16002051 bytes, checksum: 69aaf9e7548d45f0055550ca8af3b69d (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As espécies Crotalus durissus, popularmente conhecidas como cascaveis, são serpentesde grande importância médica na Américado Sul, principalmente no Brasil.A peçonhadessa serpentetem sido objetode estudos por maisde um século,como mostrado pelos estudos realizadospor BRAZIL,1903, SLOTTA & FRAENKEL CONRAT, 1938, VITAL BRAZIL, 1966 e muitos outros. A peçonha crotalica isolada através de gel filtração do veneno bruto em coluna de SephadexG 75, mostraa presença de quatropicos, (pico I) convulxina, (pico II)giroxina, (pico III) crotoxina e (pico IV) crotamina. O pico III foi testado, mostrou seu característico bloqueio neuromuscular em preparação nervo-frênico diafragma de camundongo. Na purificação do veneno bruto crotálico em HPLC de exclusão molecular, usando uma coluna Protein Pack SW 300, obteve-se além dos picos principais três novos componentes do complexo crotoxina picos: cdty III; cdty V e cdty VI, sendo a crotoxina identificada como pico cdty IV. O uso desta cromatografia determinou a dissociação dos efeitos facilitadores e bloqueadores neuromusculares característicos da crotoxina .Assim, o pico cdty III e cdty V exibiram praticamente somente o efeito facilitador da crotoxina (pico cdty IV) nos 120 min de observação. A repurificação da crotoxina em HPLC de fase reversa em coluna µ- Bondapack c 18, resultou em duas isoformas de crotapotina (F 5 e F 7) e três de fosfolipase A2 (F15, F16 e F17). Foram escolhidas as isoformas F7 (crotapotina) e as F16 e F17 (PLA2), as quais foram recombinadas em três diferentes proporções: 1: 1; 1:2 e 2: 1. Ao associarmosa crotapotina(F7) com a PLA2(F16), obtivemos o efeito "chaperone' descrito na literatura ou seja, a inibição da resposta contrátil, o efeito bloqueador irreversível. O mesmo não ocorreu ao recombinarmos crotapotina (F7) com PLA2(F17), o qual não determinou qualquer alteração na resposta contrátil, isto é, mostrou-se destituída de atividade biológica. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The species Crotalus durissus, popularly known as rattle snakes,includis serpents of great medical importance in South America. The poison of that serpent has been object of studies for more than a century, as shown by the studies accomplished by BRAZIL, 1903, SLOTTA & FRAENKELCONRAT, 1938 and VITAL BRAZIL, 1966 and so many others. Through gel filtration of the crude poison in a column SephadexG 75, shows the presence of four picks, (pick I) convulxin, (pick 11)gyroxin, (pick III) crotoxin and (pick IV) crotamine were obtained. Whem the (pick III)crotoxin was tested, in the phrenic nerve-diaphragm preparation it showed the characteristic block neuromuscular effect. Whem Crotalus durissus terrificus (cdty) was subjected to the molecular exclusion chomatograpy (protein pack SW 300) at isocratic conditions, besides the main picks three new components were obtained pick: III V; and VI. Crotoxin was there identified, as pick IV. Able of inducing initial facilitation followed by an irreversible block. Peak cdty III showed a facilitation effect that dures at least 120 mino The Pick V presented a light facilitation and a decrease of the contradile response during the course time of experiments. The use of this chomatograpy determined the dissociation of the facilitatory effects and blocking characteristic neuromuscular of the crotoxin. Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T23:34:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barros_JosianeCristina_M.pdf: 4378084 bytes, checksum: 410e7a4f1b02b18191d0a4be7945310c (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O veneno total de Botrhops alternatus (10 mg) foi fracionado por meio de coluna m-Bondapack C18 e HPLC de fase reversa resultando em um pico ativo denominado BT II 2. Em SDS-PAGE, a toxina originou uma banda única, isolada de 14 KDa. A fração BT II 2 (0,1, 0,5, 1,0, 5,0, 10,0 e 20,0 mg/mL n=7) induziu um bloqueio irreversível da resposta contrátil, em preparações músculo biventer cervicis de pintainho, sendo esse dose-dependente. As respostas contraturantes a adição exógena de acetilcolina e cloreto de potássio não foram significativamente diferentes do controle.Os tempos necessários para se obter bloqueio neuromuscular de 50 e 90% foram de 66 _+10 para 0,1mg/mL,44_+3 para 0,5mg/mL ,para 1 mg/mL foi de 38 _+4, 54_+5 para 5mg/mL o tempo foi de 24_+1, 34_+1, para 10mg/mL foi de 22_+2, 35_+2 e para 20mg/mL foi de 24_+5,33_+6 respectivamente. Fig. 9. Alterações morfológicas foram observadas nas fibras musculares. Entretanto, a concentração da fração BTII2, 1 µg/mL, foi mais potente para induzir a hipercontração e desorganização fibrilar que o veneno bruto (100 mg/ml). Isto se deve provavelmente ao fato de que a fração está totalmente desprovida de algumas impurezas ( elementos) que pudessem eventualmente inibir este efeito no veneno total. Estes resultados sugerem que a fração BT II 2 do veneno de B. altenatus tem um importante fator neurotóxico e uma ação predominantemente pré-sináptica / Abstract: Crude venom from Bothrops alternatus (10 mg) was fractionated by reverse-phase HPLC by a C-18 m-bondapack column resulting in an active peak called BT II 2. In SDS-PAGE, the toxin migrates as a single band with a 14 kDa. In the chick biventer cervicis preparation, BT II 2 (0.1, 0.5, 1.0, 5.0, 10.0 and 20.0 mg/mL, n=7) induced a concentration-dependent and irreversible twitch-tension blockade without causing any effect on the muscle responses to ACh and KCl. The time (in min) required for producing 50% neuromuscular blockade was 65 ± 0.9; 41 ± 0.4; 35 ± 0.6; 24 ± 0.3; 22 ± 0.4 and 20 ± 0.8 respectively after a 120 min incubation. Morphological alterations was seen in muscle fibers. However, BT II 2 ( 1 mg/ml) was more potent in inducing hyprecontraction and myofibril desorganization than was the crude venom (100 mg/ml) in the same experimental conditions. Taking together, these results suggest that BT II 2 is a neurotoxic factor of the venom of B. alternatus with a preponderant presynaptic action / Mestrado / Mestre em Farmacologia