Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-20T13:59:34Z No. of bitstreams: 1 DissAIR.pdf: 2674916 bytes, checksum: ce7235eb0ec52019719941436fc35728 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T12:34:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissAIR.pdf: 2674916 bytes, checksum: ce7235eb0ec52019719941436fc35728 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T12:34:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissAIR.pdf: 2674916 bytes, checksum: ce7235eb0ec52019719941436fc35728 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-21T12:34:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissAIR.pdf: 2674916 bytes, checksum: ce7235eb0ec52019719941436fc35728 (MD5) Previous issue date: 2015-03-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Among the various diseases which attack citrus worldwide, the gummosis is caused by species of the genus Phytophthora. The various species present in the literature, the most severe in Brazil is P. nicotianae. This pathogen produces resistance’s structures in the soil, thus the best control method is the exclusion. There are other ways to preventive, as is the case of the use of synthetic fungicides which help in the combat, however , the widespread use thereof, can favor the emergence of resistant strains to the active ingredient , as well as being damaging to the environment. In this context, one of saprobes fungi (Memnoniella levispora) found in the Brazilian semi -arid region, has received special attention as a biological control agent that proves to be an alternative and effective method. Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of the growth of this fungus in solid and liquid, through five different culture media (PD, PDY, PDM, CZA, CC), perform isolation and identification of metabolites from the most suitable means and then submit them to the mycelial growth tests of the P. nicotianae. After a comparative by HPLC-DAD, HPLC-UV and NMR of this media, the CC proved to be the most productive. For showing good results this medium was reproduced on a large scale in liquid medium. After partitioning and fragmentation of the material, the extracts were analyzed and biologically tested against mycelial growth of P. nicotianae, in order to realize a biomonitored study. The fraction of ethyl acetate liquid of the carrot and corn medium, was considerably inhibited the pathogen growth. Therefore, by the technique LC-SPE-NMR along with the other techniques mentioned, it was possible to identify and isolate eight structures of this fraction, which griseofulvina and analogues, 3 of which purports to be unpublished yet. The Griseofulvin was tested and showed about 72% of the inhibition of mycelial growth of Phythophtora, which leads us to research on the antifungal activity of this and other secondary metabolites in the fight against P. nicotianae and other pathogens. / Dentre as várias doenças que atacam os citros em todo o mundo, a gomose, causada por espécies do gênero Phytophthora se encontra entre as mais importantes. Dentre as espécies, a que se destaca é a Phytophtora nicotianae, mais severa aqui no Brasil. Devido ao fato do patógeno produzir estruturas resistentes no solo, a exclusão é o melhor método de controle. Existem outras maneiras preventivas, como é o exemplo do uso de fungicidas sintéticos que auxiliam nesse combate, no entanto, o uso indiscriminado do mesmo, pode favorecer o surgimento de linhagens resistentes ao principio ativo, além de ser prejudicial ao meio ambiente. Neste contexto, um dos fungos sapróbios (Memnoniella levispora) encontrado no semi-árido brasileiro tem recebido atenção especial como agente de controle biológico que demonstra ser um método alternativo e eficaz. Sendo assim, o objetivo deste trabalho consistiu em avaliar o efeito do crescimento do fungo em meio sólido e líquido em cinco diferentes meios de cultivo, realizar isolamento e identificação de metabólitos provenientes do meio mais propício e posteriormente submetê-los a testes do crescimento micelial da P. nicotianae. Para isso, foi feito o crescimento de M. levispora no meios de Batata Dextrose (BD), BD suplementada com 1% de extrato de levedura (BDL), BD suplementado com 1% de extrato de malte (BDM), Czapeck (CZA), e cenoura e milho (CM). Após um comparativo por HPLC-DAD, HPLC-UV e RMN desses extratos, o CM demonstrou ser o mais produtivo. Por apresentar bons resultados este extrato foi reproduzido em escala ampliada em meio líquido. Após partição e fracionamento desse material, os extratos foram analisados e testados biologicamente frente ao crescimento micelial da Phytophtora, afim de se realizar um estudo biomonitorado. O fração acetato de etila do meio líquido de cenoura e milho, foi o que inibiu consideravelmente o crescimento do patógeno. Assim, através da técnica LC-SPE-NMR em conjunto com as demais técnicas citadas, foi possível identificar e isolar 8 metabólitos secundários dessa fração, sendo eles griseofulvina e análogos, dos quais 3 propõe-se ser inéditas. O teste de inibição do crescimento micelial da Phythophtora nicotianae foi refeito e a griseofulvina apresentou resultado satisfatório de 72% de inibição que nos leva à pesquisar sobre a atividade antifúngica desta e dos outros metabólitos secundários no combate à P. nicotianae e a outros patógenos.

Orientador: Fabio Augusto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-26T15:52:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_PaulaFelicianode_M.pdf: 3864135 bytes, checksum: c42784d53cede985603b04a4490ab760 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O uso de compostos voláteis produzidos por fungos como parte das estratégias de biocontrole na prevenção de doenças ocasionadas por fitopatógenos vem impulsionando o mercado de biofungicidas. Neste cenário, a análise do metaboloma utilizando apenas uma técnica analítica é por vezes inviável devido à magnitude química dos compostos bem como de sua faixa de concentração. Desta forma, o trabalho utilizou a combinação de HS-SPME (Microextração em Fase Sólida) aliada à técnica GC×GC-qMS (Cromatografia Gasosa Bidimensional Abrangente acoplada à Espectrometria de Massas Quadrupolar) para a obtenção do perfil metabólico volátil inédito de duas espécies de fungos com potencial ação para biocontrole e indução de resistência a fitopatógenos na agricultura, Curvularia sp e Memnoniella sp. Através de modelagem MPCA e HCA foi possível a obtenção de um perfil cinético característico da produção de compostos voláteis das espécies que delimitou o processo de identificação tentativa destes metabólitos. Hidrocarbonetos e álcoois foram responsáveis pela maior produção volátil de ambas as espécies avaliadas, com destaque para a produção de lactonas como y-octalactona, y-hexalactona e y-hexalactona por Curvularia sp e sesquiterpenos como acoradieno, ß-chamigreno, a-chamigreno, ß-elemeno e valenceno por Memnoniella sp. A partir do perfil volátil das espécies, os estudos poderão ser direcionados à ação biocontrole e indução de resistência na agricultura / Abstract: Volatile compounds produced by fungi as part of biocontrol strategies in preventing diseases caused by pathogens has been stimulating the market of biofungicides. So, the analysis of the metabolome using only one analytic technique is sometimes not feasible due to chemical compounds as well as the magnitude of its concentration range. Thus, the study used a combination of HS-SPME technique (Solid-Phase Microextraction) coupled with GC×GC-qMS (Comprehensive Two-Dimensional Gas Chromatography coupled to Quadrupole Mass Spectrometry) to obtain volatile metabolic profiles of two species of fungi with potential for biocontrol activity and induction of resistance to plant pathogens in agriculture, Curvularia sp and Memnoniella sp. Through modeling MPCA and HCA was possible to obtain a typical kinetic profile of volatile compounds from the production of species which delimited the process of identification of these metabolites. Hydrocarbons and alcohols were responsible for most volatile production of both studied species, with emphasis on the production of lactones such as y-octalactona, y-hexalactona e y-hexalactona by Curvularia sp and sesquiterpenes as acoradiene, ß-chamigrene, a-chamigrene, ß-elemene and valencene by Memnoniella sp. From the profile of volatile species, the studies may be related to the biocontrol activity and induction of resistance in agriculture / Mestrado / Quimica Analitica / Mestra em Química