The purpose of this study was to examine the time course and kinetics of L-type Ca2+ current (ICa,L) from pituitary GH3 cells in response to various action potential (AP) waveforms using the whole-cell configuration of the patch-clamp technique. The major findings in this study are: 1. ICa,L evoked during the AP waveform exhibited an early and a late component. The early component of ICa,L occurred on the rising phase of the AP, whereas the late component coincided with the falling phase. 2. A prolongation of the falling phase of APs led to an increase in Ca2+ charge carried by ICa,L, although the amplitude of the late ICa,L was reduced. 3. When the peak voltage of AP waveforms was prolonged without changing the rising and falling phases, the amplitude of the late components was significantly increased. 4. ICa,L was also found to inactivate during a train of AP waveforms. When Ba2+ ions were used as the charge carriers, current inactivation during a train of APs was decreased. 5. The amplitude of ICa,L evoked by the AP templates with irregular bursting pattern was inactivated. 6. When spontaneous APs with the depolarizing potentials were replayed to GH3 cells, Ca2+ entry was not only spread over the entire AP, but also occurred during the interspike voltage trajectory. 7. When cells were exposed to thyrotropin releasing hormone (TRH; 10

Un dispositif de stimulation électrique in vitro sur des lignées cellulaires a été optimisé afin de nous permettre d'étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires de la SHF. Deux lignées cellulaires (GH3 et PC12) ont été analysées au niveau transcriptomique, protéomique et de la sécrétion hormonale et de neurotransmetteurs.Nous avons comparé les niveaux de sécrétion de PRL des GH3 traitées par SHF, SBF ou par la dopamine; ainsi que les niveaux des catécholamines (DA, AD et NA) des PC12 traitées par SHF, SBF ou par la 6-OHDA. La synthèse protéique des cellules stimulées a été analysée par les techniques d'incorporation de 35S méthionine et de SELDI-TOF-MS. Enfin nous avons recherché les modifications d'expression génique des cellules stimulées en utilisant la technique des microarray à base d'oligonucléotides longs sur nylon et détection radioactive.Les premières expériences montrent une diminution significative de la quantité de prolactine à un niveau comparable à celui obtenu avec l'inhibiteur conventionnel, la dopamine. De la même façon, la production de catécholamines dans le milieu est inhibée. Les données transcriptomiques montrent l'existence des profils d'expression caractéristique de la neurostimulation à haute fréquence, avec environ 100 gènes discriminants impliqués dans la synthèse protéique, la signalisation calcique, l'énergétique cellulaire pour les principaux. Nous avons confirmé l'impact de la neurostimulation sur la synthèse protéique en SELDI-TOF comme en incorporation de méthionine. Un mécanisme original de SHF peut donc être proposé, impliquant la neutralisation de la synthèse protéique dans l'inactivation réactionnelle des structures neuronale