Thèse numérisée par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

Thèse numérisée par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

G-protein coupled receptors (GPCRs) have been shown to act as part of GPCR associated protein complexes (GAPCs) which are required to appropriately transduce downstream signaling pathways leading to specific cellular actions. I hypothesize that there are distinct molecular effectors that couple to the glucagon superfamily of B-class GPCRs (glucagon, GLP-1, GLP-2, GIP receptors) to effect the myriad of reported actions in numerous target cells including regulation of insulin secretion, intestinal growth and appetite suppression. GLP-1R, GIPR, GLP-2R and GCGR were screened using a newly developed membrane-based split-ubiquitin yeast two-hybrid (MYTH) system to reveal 181 novel candidate protein interactors associated with signal transduction, transport, metabolism and cell survival. Each candidate was validated using yeast two-hybrid prey retransformation tests and by co-purification to confirm coupling to each receptors. The present work is the first demonstration of a split-ubiquitin interaction screen using in situ membrane expressed GPCRs of the secretin-like B class.

G-protein coupled receptors (GPCRs) have been shown to act as part of GPCR associated protein complexes (GAPCs) which are required to appropriately transduce downstream signaling pathways leading to specific cellular actions. I hypothesize that there are distinct molecular effectors that couple to the glucagon superfamily of B-class GPCRs (glucagon, GLP-1, GLP-2, GIP receptors) to effect the myriad of reported actions in numerous target cells including regulation of insulin secretion, intestinal growth and appetite suppression. GLP-1R, GIPR, GLP-2R and GCGR were screened using a newly developed membrane-based split-ubiquitin yeast two-hybrid (MYTH) system to reveal 181 novel candidate protein interactors associated with signal transduction, transport, metabolism and cell survival. Each candidate was validated using yeast two-hybrid prey retransformation tests and by co-purification to confirm coupling to each receptors. The present work is the first demonstration of a split-ubiquitin interaction screen using in situ membrane expressed GPCRs of the secretin-like B class.

L'expression anormale de récepteurs hormonaux couplés aux protéines Gs (RCPG) a été mise en évidence dans des tumeurs cortico-surrénaliennes. Ces récepteurs contrôlent la sécrétion du cortisol, mais leur rôle dans la formation tumorale n'a pas été démontré. Nous avons utilisé un modèle de tumorigenèse cortico-surrénalienne permettant l'expression des gènes de deux récepteurs, le GIPR et le LHR, dont l'implication dans les manifestations cliniques d'hypercortisolisme a été bien établie. La formation de tissus hyperprolifératifs et hyperfonctionnels, d'aspect tumoral bénin, démontre pour la première fois que l'expression ectopique d'un seul gène de RCPGs (le GIPR ou le LHR) a un rôle initiateur de la tumorigenèse cortico-surrénalienne. Nous avons également caractérisé in vivo et in vitro un cas clinique de syndrome de Cushing sensible aux catécholamines, secondaire à une hyperplasie surrénalienne où nous avons démontré la surexpression du récepteur β2-adrénergique. La sécrétion de cortisol était aussi dépendante d'autres médiateurs tels que la 5-HT, l'AVP et l'ACTH sécrété localement de façon ectopique. En conclusion, l'expression d'un RCPG suffit pour induire la formation d'une tumeur bénigne cortico-surrénalienne. Des anormalités mixtes peuvent être présentes dans ce type de tumeur. Ce modèle permettra d'étudier les étapes de progression tumorale cortico-surrénalienne ainsi que l'effet d'autres types de GPCR et les alternatives thérapeutiques dans ce type de pathologie.