Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Luiza Silva Almeida (luizaalmeida@bce.unb.br) on 2013-07-17T19:09:59Z No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaGonzalesdaSilva.pdf: 1871143 bytes, checksum: 939e8e78e70378e8fbfbf273f00b5582 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-07-17T19:53:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaGonzalesdaSilva.pdf: 1871143 bytes, checksum: 939e8e78e70378e8fbfbf273f00b5582 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-17T19:53:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaGonzalesdaSilva.pdf: 1871143 bytes, checksum: 939e8e78e70378e8fbfbf273f00b5582 (MD5) / A clonagem por transferência nuclear (TN) ainda é uma técnica com baixa eficiência em bovinos. Um dos fatores que deve ser melhorado é a fonte de células doadoras de núcleo. Quanto menos diferenciadas forem estas células, mais facilmente elas serão reprogramadas pelo citoplasma receptor, a fim de originarem embriões e bezerros a termo de uma forma saudável. Células do fluido amniótico (CFA), da geleia de Wharton do cordão umbilical (CGW) e do tecido adiposo (CTA) são fontes de células multipotentes com potencial para uma melhor reprogramação e que ainda não haviam sido testadas para a produção de embriões bovinos por meio de TN. O objetivo deste trabalho foi isolar, cultivar, criopreservar e utilizar no procedimento de TN as CFA, CGW e CTA de bovinos. Primeiramente, foram isoladas CFA de úteros de abatedouro para testar o melhor meio de cultivo (DMEM vs Amniomax Complete II), e o melhor agente crioprotetor (glicerol vs DMSO vs DMF) quanto a preservação de viabilidade celular avaliada por azul de Trypan 0,4%. Posteriormente, testou-se a possibilidade de isolamento in vivo dos tipos celulares. O cultivo foi feito por centrifugação das CFA e explante das CGW e CTA. Para comparação morfológica foi realizada a Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) das células em cultivo. Para avaliação de integridade de DNA realizou-se a metodologia de TUNEL. Para a análise estatística foi realizada ANOVA seguida de teste de Tukey (p<0,05). O meio Amniomax Complete II apresentou crescimento e confluência das CFA em todos os materiais isolados de quatro animais. O DMSO e o glicerol preservaram uma maior porcentagem de células (84,50±9,53% e 63,00±18,18%, respectivamente), e foram superiores ao meio com DMF (42,00±13,92%). Obteve-se êxito no isolamento in vivo dos tipos celulares, por meio de aspiração intravaginal guiada por ultrassom no caso das CFA, coleta do cordão umbilical no momento do parto para as CGW e coleta de biópsia de animal jovem para as CTA. A avaliação de TUNEL revelou 100% de células com DNA íntegro para os três tipos celulares em primeira passagem. As micrografias em MEV revelaram CTA em padrão fusiforme de crescimento e CFA e CGW sem forma definida sob cultivo. Houve diferença significativa nas taxas de eletrofusão, com resultados superiores para CFA e CGW (85,89±9,93% e 69,64±11,72%, respectivamente), em relação às CTA (50,07±10,64%). A produção embrionária não diferiu estatisticamente entre os três tipos celulares (46,47±7,92%, 45,46±13,03% e 62,67±15,15%, para CTA, CFA e CGW, respectivamente), entretanto observou-se uma superioridade de aproximadamente 17% na produção de blastocistos para CGW em relação a CTA e CFA. Foram obtidas gestações de todos os tipos celulares, mas somente uma gestação veio a termo, proveniente de TN com CFA, e uma gestação encontra-se aos 200 dias, proveniente de CTA. O animal nascido por secção cesariana veio a óbito logo após o parto por insuficiência respiratória. Demonstrou-se ser possível isolar, cultivar e criopreservar CFA, CGW e CTA de bovinos vivos sem prejudicá-los e produzir embriões por meio de TN com eficiência utilizando esses tipos celulares. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cloning by nuclear transfer (NT) is still a technique with low efficiency in cattle. One of the factors that should be improved is the source of nucleus donor cells. The less differentiated are the cells, the easier is to reprogram their nuclei by cytoplasm receiver in order to originate healthy embryos and calves. Cells from amniotic fluid (CAF), Wharton's jelly of the umbilical cord (CWJ) and adipose tissue (CAT) are sources of multipotent cells with potential for improve reprogramming and that had not been tested for the production of bovine embryos by NT. The aim of this study was to isolate, cultivate, cryopreserve and utilize in the NT procedure, the CAF, CWJ and CAT of bovine. Firstly, CAF of uteri obtained from slaughterhouse were isolated to test what is the best medium for in vitro culture (DMEM vs Amniomax Complete II), and the best cryoprotectant agent (glycerol vs DMSO vs DMF), as the preservation of the cell viability assessed by Trypan Blue 0,4%. Subsequently, the possibility of isolating in vivo the described cell types was tested. The culture was done by centrifugation of CAF and explantation of CWJ and CAT. For morphological comparison, scanning electron microscopy (SEM) of the cells in culture was performed. For evaluating DNA integrity, the TUNEL method was carried out. For the statistical analysis was performed ANOVA followed by Tukey test (p<0,05). The medium Amniomax Complete II presented growth and confluence of the CAF in all material isolated from four animals. The DMSO and glycerol preserved a higher percentage of cells (84.50±9.53% and 63.00±18.18%, respectively), and were superior to medium with DMF (42.00±13.92%). Success was obtained in the isolation of cell types in vivo through use intravaginal ultrasound- guided aspiration for CAF, collection from the umbilical cord at birth for CWJ and by collecting biopsy from young animal for CAT. The evaluation of TUNEL revealed 100% of cells with intact DNA for the three cell types in the first passage. The SEM micrographs revealed a fusiform growth of CAT, and CAF and CGW without defined form under culture. There were significant differences in the rates of electrofusion, with results superior for CAF and CWJ (85.89±9.93% and 69.64±11.72%, respectively), relative to CAT (50.07±10.64%). The embryo production did not differ significantly among the three cell types (46.47±7.92%, 45.46±13.03% and 62.67±15.15% for CAT, CAF and CWJ, respectively), however a superiority of 17% in blastocyst production of CWJ in relation to the CAT and CAF was observed. Pregnancies were obtained for all cell types, but only one pregnancy has come to term, from TN with CAF and one gestation is on day 200 from the CAT. The born calf died soon after birth by cesarean section, due respiratory insufficiency. This study proved it is possible to isolate, cultivate and cryopreserve CAF, CAT and CWJ from live animals without harming them and to produce bovine embryos by TN efficiently using these cell types.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-11-01T15:41:16Z No. of bitstreams: 1 2013_ElisaRibeiroCunha.pdf: 46352581 bytes, checksum: f7df57fc98ce9a6fb4373fe126a86276 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-04T10:59:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_ElisaRibeiroCunha.pdf: 46352581 bytes, checksum: f7df57fc98ce9a6fb4373fe126a86276 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-04T10:59:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_ElisaRibeiroCunha.pdf: 46352581 bytes, checksum: f7df57fc98ce9a6fb4373fe126a86276 (MD5) / Apesar de todo o potencial para o uso da transferência nuclear (TN) em bovinos, vários parâmetros continuam limitantes para a melhor eficiência da técnica. Considerando essas limitações, este trabalho propõe o uso de modelos celulares que não passaram pela gastrulação, sob influência do cultivo in vitro por longos períodos e diferentes formas de criopreservação. Em seguida, o melhor tipo celular para a produção de embriões por TN e foi avaliado sob o efeito de tratamentos que otimizem reprogramação nuclear. Células do fluido amniótico (CFA) e do cordão umbilical (CCU) foram utilizadas em comparação aos fibroblastos da orelha (CFO) e foram submetidos ao cultivo celular por 20 passagens e criopreservação em diferentes soluções contendo 10% de dimetilsulfóxido (DMSO), 5% de dimetilformamida e 7% de glicerol. A viabilidade celular, ultraestrutura, fragmentação do DNA e estabilidade cromossomal foram avaliadas para determinar o tipo celular mais resistente. Em todos os animais, foi possível avaliar as CFA e CCU por 20 passagens com diferentes tempos de crescimento celular para atingir a fase de confluência. As soluções com 10% de DMSO garantiram a viabilidade de 90,33±5,58%, 90,56±4,40% e 81,90±3,31%, respectivamente para CFO, CCU e CFA, sendo significativamente mais eficiente e com menor variação para preservação que as outras soluções crioprotetoras. Não houve alterações no cariótipo e houve baixa fragmentação nuclear ao longo das passagens estudadas. Na avaliação ultraestrutural, as CFA se mostraram mais sensíveis à criopreservação em relação às CCU e CFO, e apresentaram uma baixa viabilidade em P20 (17,2± 8,87%). A partir deste experimento, as CCU foram usadas na TN e submetidas a três atamentos: (T1) CCU foram tratadas com 1,5 mM de procaína por dois ciclos de crescimento; (T2) tratadas com 50 nM de tricostatina A (TSA) por 4h na ativação e 20 h no cultivo embrionário; (T3) tratadas com 50 nM de TSA por 4 h na ativação e 16 h no cultivo embrionário. Todos os tratamentos foram comparados com o grupo sem tratamento (controle). O tratamento com procaína provocou alterações na morfologia e teve baixa produção de blastocistos (4,4%). O tratamento com TSA por 24 h teve baixa produção de blastocistos (4,5%) e foi significativamente diferente da TSA 20 h e do controle. O tratamento por 20 h (17,19%) viabilizou o uso da TSA, mas não foi superior ao controle (21,73%). Os resultados demonstram que, em bovinos as CFA e CCU podem ser isoladas, cultivadas in vitro e criopreservadas em 10% de DMSO, apresentando estabilidade cromossomal e baixa fragmentação nuclear, sendo que as CCU são mais resistentes que as CFA. O uso de 1,5 mM de procaína e de 50 nM de TSA por 24 h não foram viáveis na produção de embriões por TN. Porém, o uso de 50 nM TSA por 20 h não comprometeu a produção de blastocistos produzidos por TN. No entanto, concentrações e tempo de exposição ao TSA diferentes devem ser testados para aumentar a produção embrionária e o nascimento de bezerros saudáveis. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Despite all the potential of animal cloning by nuclear transfer (NT), some parameters still limit the efficiency of this technique. Considering these limitations, the objective of this work was to study the cellular types that did not participated in the gastrulation process, in conditions of long-term culture and cryopreservation with different solutions. We also studied the potential of these cell types to produce embryos by NT when recontructed zygotes were treated with substances to optimize nuclear reprogramming. Amniotic fluid cells (AFCs) and umbilical cord cells (UCCs) were used in a comparative study with ear fibroblast cells (EFCs) that were cultured in vitro until 20 passages and cryopreserved in 10% Dimethyl sulfoxide (DMSO), 5% Dimethyl formamide and 7% Glycerol solutions. The cellular viability, ultrastructure, DNA fragmentation and chromosome stability were evaluated to determine the most resistant cellular type. In all animals, it was possible to evaluate the AFCs and UCCs until 20 passages with different periods of cellular growth to reach the confluence phase. Solutions containing 10% DMSO ensured viability of 90.33±5.58%, 90.56 ±4.40% and 81.90±3.31%, respectively for EFCs, AFCs and UCCs, being significantly more efficient and with less variation than other cryoprotectant solutions. There was no changes in karyotype and nuclear fragmentation was low at the cellular passages studied. In the ultrastructural evaluation, AFCs were more sensitive to cryopreservation than UCCs and EFCs and presented low viability rate at P20 (17.2±8.87%). From these results, the UCCs were used in the NT and submitted to three treatments: (T1) UCCs were treated with 1.5 mM procaine in two growth cycles; (2) reconstructed oocytes treated with 50 nM of trichostatin A (TSA) for 4 h in the activation phase and for 20 h in embryo development; (3) reconstructed oocytes treated with 50 nM TSA for 4 h in the activation phase and for 16 h during initial embryo culture. All treatments were compared with the untreated group (control). Treatment with procaine caused changes in cellular morphology and resulted in low blastocysts rate (4.4%). Treatment with TSA for 24 hours had low blastocyst production (4.5%) and was significantly different from the control and TSA 20 h treatment. The treatment for 20 hours made feasible the use of TSA (17.19% of blastocysts), but was not superior to the control group (21.73%). The results demonstrate that in bovine, AFCs and UCCs can be isolated, cultured in vitro and cryopreserved in 10% DMSO, not causing damage to DNA and chromosomes. The UCCs were more resistant than AFCs in all aspects. The use of 1.5 mM procaine and 50 nM TSA for 24 hours was not viable for NT embryos production. However, the use of 50 nM TSA for 20 hours did not compromise the blastocysts production, but different concentrations and times of exposure to TSA should be tested to enhance bovine NT embryo production and birth of healthy calves.

Realizou-se um experimento convencional de digestibilidade e consumo com o objetivo de avaliar o efeito do nível de inclusão de nitrogênio não protéico em suplementos fornecidos a tourinhos Hereford de 17 meses e 220 kg de peso vivo, consumindo feno de tifton (Cynodon dactylon) fornecido ad libitum. Os tratamentos avaliados foram: T1 - Feno + suplemento sem uréia; T2 - Feno + suplemento com 0,28 g de uréia/UTM; T3 - Feno + suplemento com 0,55 g de uréia/UTM; T4 - Feno + suplemento com 0,83 g de uréia/UTM e T5 - Feno + suplemento com 1,11 g de uréia/UTM. O feno apresentou, na média, 3,86% de proteína bruta e 84,66% de fibra em detergente neutro (FDN). Não foram constatados efeitos da suplementação sobre a digestibilidade da matéria orgânica, da matéria orgânica do feno, da FDN, da celulose e da hemicelulose (P>0,05). O consumo de matéria orgânica total, de matéria orgânica do feno e de FDN responderam de forma quadrática a suplementação com NNP (P<0,05). A excreção fecal metabólica de matéria orgânica não foi afetada pela suplementação sugerindo um aumento simultâneo na taxa de passagem (variação no consumo) e na taxa de digestão (digestibilidade constante). O CMO digestível apresentou comportamento quadrático com o aumento dos níveis de uréia na dieta. A relação entre o consumo de proteína degradável no rúmen (PDR) e o CMOD apresentou-se maximizada quando o nível de proteína degradável no rúmen foi equivalente a 8,1% da MOD, valor este coerente com dados encontrados na literatura.

A Brucelose é uma zoonose de ampla distribuição que causa grandes perdas econômicas nas criações animais, bem como risco à saúde pública. Em bovinos leiteiros, as principais manifestações como abortos e baixa produção de leite, contribuem para uma queda na produção de alimentos, além da possibilidade de transmissão através do leite contaminado. Tendo em vista que o método mais preciso de diagnóstico da brucelose é a identificação do agente etiológico, o isolamento bacteriológico assume grande importância. Os objetivos do presente trabalho foram: identificar rebanhos leiteiros com brucelose no estado do Rio Grande do Sul utilizando técnicas imunológicas preconizadas pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose e isolar Brucella sp. dos rebanhos positivos nestes testes. Foram analisadas 476 amostras de soro bovino através do Teste do Antígeno Acidificado Tamponado, sendo detectadas 137 amostras reagentes. Estas foram submetidas à Prova do 2-Mercaptoetanol, na qual foram confirmadas 117 amostras. Foram analisadas 205 amostras de leite através do Teste do Anel em Leite e do isolamento bacteriológico onde foram detectadas 48 positivas e obteve-se 15 isolados de Brucella sp. Os 15 isolados foram caracterizados e confirmados através da Reação em Cadeia da Polimerase, utilizando oligonucleotídeos específicos para o gênero Brucella (gene BCSP31 e IS6501/711). A brucelose ainda faz parte do contexto sanitário de muitas propriedades do Rio Grande do Sul. Além das perdas sanitárias e econômicas, destaca-se a importância do leite na transmissão desta enfermidade para o homem. / Brucellosis is a zoonosis of large distribution that cause great economic losses in the animal farms, as well as risk to the public health. In dairy cattles, the main clinical signs such as abortions and low milk yield, contribute for a reduction in the food production, besides the possibility of transmission through contaminated milk. The most precise method for diagnostic of brucellosis is the identification of the etiologic agent so the bacteriological isolation assumes great importance. The aim of the present work was to identify the positive animals using serologic tests recommended by the National Program of Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis and to isolate Brucella sp. from dairy cattle of different regions the state of the Rio Grande do Sul. Four hundred and seventy six samples of bovine serum were also analyzed by the Buffered Antigen Plate Agglutination Test and 2-Mercaptoetanol Test, with 137 reacting samples. Two hundred and five milk samples from dairy cattle were submitted to the Milk Ring Test and 48 were positive. The 205 milk samples were also analyzed by through bacteriological isolation and Brucella sp. was isolated in 15 samples. These isolates were characterized and confirmed by through the Polymerase Chain Reaction, using specific primers for the genus Brucella (gene BCSP31 and IS6501/711). Brucellosis still is part of the sanitary context in many farms of our state. Besides the sanitary and economic losses, importance of milk in the transmission of this disease to humans must be emphasized.

O presente trabalho analisou o comportamento do abate de bovinos a partir de dados de 32.307 lotes, totalizando 348.739 animais, oriundos do maior Frigorífico do Estado do Rio Grande do Sul, comparando o período de setembro de 2003 a agosto de 2004, buscando identificar mercados, tendências e propor orientações para os atuais sistemas de produção. Foram analisadas as informações referentes ao mês de abate, lote, microrregiões geográficas, sistema de compra, classificação comercial, número de animais, peso de carcaça e sexo. Os resultados demonstraram um abate homogêneo ao longo do ano, com diferentes picos em março (9,9%) e agosto (11,7%), constituído por um alto contingente de fêmeas (38%) e baixos preços por quilo vivo (US$ 0,60) comparado aos dados históricos. O sistema de compra predominante foi a rendimento de carcaça (82,3%) demonstrando uma mudança significativa na forma de aquisição da matéria prima por parte dos frigoríficos, sendo que destes, 28% corresponderam a classe Premium e 19,6% a classe exportação, o que totaliza a 47,6% de carcaças oriundas de animais que reúnem características de idade, peso e cobertura de gordura de melhor qualidade. Do total 16,5% representam carcaças de menor valor comercial demonstrando ainda uma parcela significativa de animais de baixa qualidade. Três microrregiões geográficas, Campanha Meridional, Ocidental e Central, forneceram 62% dos animais para o abate do Estado. Os resultados permitem concluir que a adoção de novas tecnologias de processos diminuíram os picos de safra entressafra com menor flutuação nos pesos. É observada, também, a segmentação de mercados, confirmada pelas diferentes classes comerciais e uma grande diversidade de sistemas de produção presente em todos as microrregiões estudadas. De todos os assuntos analisados, o baixo preço pode ser considerado o principal limitante à manutenção e evolução da bovinocultura de corte do RS. / The present work analyzed the beef cattle slaughtering trends based on the data of 32,307 allotments, in a total of 348,739 animals, from the largest beef processor in the State of Rio Grande do Sul. Compared the period from September, 2003 to August, 2004, aimed tendencies of the market proposing orientations to the actual production systems. Information analyzed was reacted to the month of slaughter, allotment, geographic micro regions, purchase systems, commercial classification, number of animals, carcass weight and sex. Results showed an homogeneous number of slaughterers throughout the year with peaks in March (9,9%) and August (11,7%), constituted by a high contingent of female animals (38%) and low prices per kg of live animals (US$ 0,60), compared to historical data. The predominant purchase system was based revenue system (82,3%) demonstrating a significant change in the way the slaughter houses purchase raw material. From these 82,3%, 28% corresponded to the Premium class and 19.6% to the export class, what sums up a total of 47.6% of carcasses from animals which feature characteristics of age, weight and fat coverage of the best quality. The classes which representing carcasses of low commercial value corresponded to 16.5% of the total, demonstrating that a significant amount of low quality animals is still to slaughter. Three geographic micro regions , Campanha Meridional, Ocidental and Central, supply 62% of the animals for slaughter in the State. The results allow to conclude that the adoption of new process technologies led to a decrease in the peaks of harvesting, the weight fluctuation and market segmentation, confirmed by the different commercial classed and a great diversity of production systems which are present in all the micro regions studied. From all the subjects analyzed, the low price can be considered the main constraint to the maintenance and development of the beef cattle breeding in the State of Rio Grande do Sul.

O objetivo desse estudo foi avaliar diferentes modelos estatísticos com diferentes pressuposições para definir o melhor modelo que descreva a presença de interação genótipo x ambiente no ganho de peso pós-desmama ajustado (GPD345) de bovinos Hereford, mediante o estudo de normas de reação ao ambiente, obtidas por regressão aleatória, usando uma abordagem bayesiana. Quatro modelos hierárquicos de normas de reação (MHNR) e um modelo animal padrão (MA) foram empregados por meio do programa INTERGEN. O MHNRk utiliza as soluções de grupos contemporâneos estimadas previamente pelo modelo animal padrão (MA) e as considera como nível ambiental e o de uma única análise, MHNRS, que estima simultaneamente esses dois conjuntos de incógnitas considerando nas duas metodologias a variância residual homogênea (hm) e heterogênea (ht). Pelo critério de informação da "deviance", o MHRNshm foi que apresentou melhor ajuste aos dados, seguido pelo MHNRsht, MHNRKhm, MHNRkht e o pior ajuste foi obtido pelo MA, já pelo Fator de Bayes os MHNR homoscedásticos foram os que melhor ajustaram-se aos dados. Pela ordenada preditiva condicional o MA, foi melhor em relação aos MHNR. As herdabilidades nos MHNR foram crescentes nos gradientes ambientais em GPD345 de -60; 0 e +60 kg. As correlações genéticas entre o nível e inclinação das normas de reação foram de alta magnitude caracterizando efeito de escala em interação GxE. Os modelos hierárquicos de normas de reação são eficientes para descrever as alterações nos componentes de variância em função do ambiente ao qual o genótipo está exposto bem como para descrever a presença de interação genótipo x ambiente na característica GPD345 em bovinos Hereford. / The objective of that study was to evaluate different statistical models with different presuppositions to define the best model than it describes the presence of genotype by environment interaction in the characteristic weight post weaning gain (GPD345) of Hereford cattle, by the study of reaction norms to the environment, obtained by aleatory regression, using an bayesian approach. Four hierarchical models of reaction norms (MHNR) and one animal model (MA) they were used through the program INTERGEN. MHNRk uses the solutions of contemporary groups previously esteemed by the standard animal model (MA) and it considers them as environmental level and the one of an only analysis, MHNRS, that esteems those two groups simultaneously of incognito considering in the two methodologies the homogeneous residual variance (hm) and heterogeneous (ht). For the criterion of information of the "deviance", MHRNshm was that it presented better adjustment to the data, followed for MHNRsht, MHNRKhm, MHNRkht and the worst adjustment was obtained by MA, already for the Factor of Bayes the MHNR homoscedastic the ones that best was adjusted to the data were. For the conditional predictive ordinate MA, was better in relation to MHNR. The heritability in MHNR were growing in the environmental gradients in GPD345 -60 Kg; 0 Kg and +60 Kg. The genetic correlations between the level and inclination of the reaction norms were of high magnitude characterizing scale effect in interaction GxE. The hierarchical models of reaction norms are efficient to describe the alterations in the variance components in function of the environment to which the genotipe is exposed and to describe the presence of genotype by environment interaction in the characteristic GPD345 in Hereford catlle.

O nosso objetivo foi avaliar sistematicamente a produção de leite bovino enriquecido naturalmente com ácido linoléico conjugado (CLA) em condições brasileiras, uma vez que há um mercado promissor para este tipo de alimento, visto que os consumidores têm buscado alimentos com menos calorias e que apresentem propriedades funcionais como é o caso do CLA. O trabalho foi dividido em três artigos: 1º) foi realizada uma sistematização científica apenas com dados brasileiros; 2º) foi realizada uma metanálise com dados brasileiros e estrangeiros; e 3º) foram desenvolvidos dois modelos teóricos sobre parâmetros ruminais que podem repercutir no perfil de ácidos graxos do leite. No primeiro trabalho verificou-se que a adição de fontes lipídicas às dietas per se não garantem aumento nos teores de ácido graxo vaccênico, rumênico e do C18:2 trans-10 cis-12 nas condições brasileiras. No segundo trabalho verificou-se que fontes lipídicas de origem vegetal alteram significativamente o perfil de ácidos graxos de cadeia curta e média, mas não os de cadeia longa, inclusive os ácidos graxos vaccênico e rumênico. O Brasil necessita de maior número de pesquisas para determinar os fatores que alteram o perfil de ácidos graxos do leite bovino a fim de oferecer aos mercados, interno e externo, leite e derivados lácteos diferenciados pelo maior teor de CLA e seus precursores. / Our objective was to systematically evaluate the production of cattle milk naturally enriched with conjugated linoleic acid (CLA) in Brazilian conditions, since there is a promising market for this type of food, as consumers have sought food with fewer calories and which are functional properties such as the CLA. The work was divided into three articles: 1) was a systematic science only with Brazilian data, 2) a meta-analysis was performed with data from Brazil and abroad, and 3) have developed two theoretical models on ruminal parameters that can affect the profile of fatty milk. In the first study found that the addition of the dietary lipid sources per se does not guarantee an increase in levels of fatty acid vaccenic, rumenic and C18:2 trans-10 cis-12 in Brazilian conditions. In the second study found that lipid sources of plant origin significantly change the profile of short-chain fatty acids and medium, but not long chain, including fatty acids vaccenic and rumenic. Brazil needs more research to determine the factors that alter the fatty acid profile of bovine milk to offer to markets, internal and external, milk and milk products differentiated by higher content of CLA and its precursors.

?rea de concentra??o: Produ??o Animal. / Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-11-16T13:54:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) diogo_anastacio_garcia.pdf: 241254 bytes, checksum: 3f5025c7cbe992519b20507c5901711c (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-11-16T13:55:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) diogo_anastacio_garcia.pdf: 241254 bytes, checksum: 3f5025c7cbe992519b20507c5901711c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T13:55:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) diogo_anastacio_garcia.pdf: 241254 bytes, checksum: 3f5025c7cbe992519b20507c5901711c (MD5) Previous issue date: 2010 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Objetivou-se avaliar a aplica??o dos modelos lineares generalizados mistos na avalia??o gen?tica da prenhez precoce, comparando as fun??es de liga??o probit e logit, utilizando dados simulados e reais, al?m de avaliar os efeitos na variabilidade gen?tica e na sele??o de reprodutores quando diferentes defini??es desta caracter?stica s?o adotadas. O processo de simula??o foi determinado pela transforma??o aplicada para se obterem as probabilidades de prenhez das novilhas e da fun??o de liga??o utilizada na an?lise dos dados, sendo constru?das as estruturas de simula??o: logit-logit (LL), logit-probit (LP), probit-logit (PL) e probit-probit (PP). Foram adotadas distintas porcentagens de f?meas precoces (%FP): 5, 10, 15, 20, 25 e 30%. Para cada cen?rio de simula??o, constru?dos pela combina??o das estruturas e %FP, foram realizadas 100 repeti??es, sendo o valor param?trico da herdabilidade (h2) igual a 0,40. Nos dados reais, a prenhez precoce foi definida aos 15, 17, 19 e 21 meses, representadas por PP15, PP17, PP19 e PP21. A implementa??o da simula??o e a estima??o dos par?metros e predi??o dos valores gen?ticos foram realizadas no software R. No estudo de simula??o, as estimativas obtidas para a herdabilidade ( ) foram comparadas com o valor param?trico por meio do Erro Quadr?tico M?dio (EQM). Correla??es de Pearson (CP), entre os valores gen?ticos preditos e reais, e a porcentagem de touros em comum, entre a classifica??o real e predita, considerando apenas 10% dos touros com maiores valores gen?ticos (TOP10) foram calculadas. Para os dados reais, correla??es de Pearson, entre os valores gen?ticos preditos pelas fun??es de liga??o, e a TOP10, entre a classifica??o predita pela logit e probit e em cada fun??o entre PP15, PP17, PP19 e PP21 foram mensuradas. Al?m disso, para comparar o ajuste dos modelos, foram calculados os crit?rios de informa??o Bayesiano de Schwarz (BIC) e de Akaike (AIC). Considerando a simula??o, as estruturas LP e PL apresentaram resultados inferiores a LL e PP. Os valores de , EQM, correla??es de Pearson e TOP10, para as estruturas LL e PP, foram muito pr?ximos. Para os dados reais, as para PP15, PP17, PP19 e PP21, foram pr?ximas entre logit e probit, com exce??o da PP15. As CP e a TOP10 entre as fun??es foram altas. O AIC e BIC apresentaram-se semelhantes entre as fun??es, independente da classe de prenhez estudada. A TOP10, considerando a predi??o da mesma fun??o de liga??o, entre PP17-PP19, PP17-PP21 e PP19-PP21 foram de moderadas a alta. Entretanto, a TOP10 entre PP15-PP17, PP15-PP19 e PP15-PP21 podem ser consideradas baixas, independente da fun??o utilizada. ? necess?rio comparar o ajuste das fun??es de liga??o, uma vez que ao simular dados na escala logit e alis?-los por probit, e vice-versa, os resultados nas estimativas dos par?metros e predi??o n?o foram satisfat?rios como aqueles apresentados quando se gerou e analisou os dados por meio da mesma escala e fun??o de liga??o. Para as classes de precocidade estudadas, os modelos apresentaram estimativas de par?metros gen?ticos, predi??es dos efeitos aleat?rios e ajuste dos modelos muito semelhantes. A classifica??o dos touros foi consideravelmente diferente entre PP15-PP17, PP15-PP19 e PP15-PP21. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Zootecnia, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2010. / ABSTRACT This study aimed to evaluate the application of generalized linear mixed models on genetic evaluation of early pregnancy, by comparing probit and logit functions and using simulated and real data. Besides this, effects on genetic variability and on selection of sires under different definition are adopted. Simulation process was determined by the transformation applied to obtain probabilities of heifer pregnancy and the function used to analyze data, being simulation structures: logit-logit (LL), logit-probit (LP), probit-logit (PL) and probit-probit (PP). Different percentages of early female (%EF) were adopted: 5, 10, 15, 20, 25 and 30%. To each simulation, formed according to structures and %EP combination, there were 100 repetitions, being 0.40 the parametric value of heritability (h2). At real data, early pregnancy was determined at 15, 17, 19 and 21 months, represented by EP15, EP17, EP19 and EP21. To implement simulation, estimate parameters and predict genetic values, software R was used. In simulation study, estimative obtained to heritability ( ) were compared to parametric value through mean-square error (MSE). Pearson correlations (PC) were calculated between genetic real or predicted values and percentage of bulls in common, between real and predicted classification, considering only 10% of bulls with higher genetic values (TOP 10). To real data, there was Pearson Correlation between genetic values predicted by functions and the TOP10, between classification predicted by logit and probit and in each function between EP15, EP17, EP19 and EP21. In order to compare models adjustment, information criteria of Bayesiano of Schwarz (BIC) and Akaike (AIC) were calculated. Considering the simulation, LP and PL structures showed results inferior to LL and PP. Values of , MSEEQM, Pearson correlation and TOP10, to as LL and PP, were near. To real data, to EP15, EP17, EP19 and EP21, were near between logit and probit, except to EP15. AIC and BIC were similar among functions, independently of pregnancy class studied. Considering prediction of same function between EP17-EP19, EP17-EP21 and EP19-EP21 was from moderated to high. However, TOP10 between EP15-EP17, EP15-EP19 and EP15-EP21 can be considered low in any function. It is necessary to compare function adjustment because when data is simulated in logit and analyzed by probit, and vice-versa, results on estimated and predicted parameters were not satisfactory as the one shown when data were created and analyzed by the same scale and function. In precocity classes studied, the models showed estimative of genetic parameters, random effect prediction and models adjustment very similar. Bulls? classification was very different EP15-EP17, EP15-EP19 and EP15-EP21.

A lactação é um processo fisiológico complexo que ainda não foi compreendido na sua totalidade. Inúmeros fatores intervêm na síntese e secreção do leite, sendo os mais importantes a nutrição e o metabolismo endógeno dos nutrientes. A qualidade do leite é valorizada tanto pela sua composição química, como pelo conteúdo de células somáticas. No entanto, visando a comercialização do leite, as maiores mudanças e melhoras na qualidade podem ser atingidas através da manipulação da dieta dos animais, em especial em vacas leiteiras de alta produção. Avaliar os processos de absorção de alimentos, bem como o metabolismo catabólico e anabólico direcionado para a síntese do leite, têm sido uma grande preocupação na pesquisa de nutrição e bioquímica da produção animal. O principal objetivo da presente pesquisa foi gerar modelos matemáticos que pudessem explicar a participação de diferentes metabólitos sobre a composição química do leite. Neste intuito foram coletadas amostras de fluído ruminal, sangue, urina e leite de 140 vacas da raça Holandesa nas primeiras semanas de lactação e mantidas sob sistema semi-intensivo de produção e dieta controlada. Os animais foram selecionados de sistemas de produção no ecossistema do Planalto Médio de Rio Grande do Sul e foram amostrados em dois períodos climáticos críticos. No fluido ruminal foram avaliados o pH e o tempo de redução do azul de metileno. No sangue foram determinados os metabólitos: glicose, colesterol, β-hidroxibutirato (BHB), triglicerídeos, fructosamina, ácidos graxos não esterificados (NEFA), proteínas totais, albumina, globulina, uréia, creatinina, cálcio, fósforo e magnésio. As enzimas: aspartato amino transferase (AST), gama glutamil transferase (GGT) e creatina kinase (CK). Os hormônios: cortisol, insulina, triiodotironina (T3), tiroxina (T4), e leptina. Foi efetuado hemograma, para conhecer: hematócrito, hemoglobina, e contagem total e diferencial de células brancas. Na urina foram dosados: corpos cetônicos, pH e densidade. No leite foi determinada: proteína, gordura, lactose, sólidos totais, sólidos não gordurosos, contagem de células somáticas e uréia. Para a determinação de cada um dos metabólitos ou compostos foram usadas técnicas específicas validadas internacionalmente. Os diferentes valores obtidos constituíram os parâmetros básicos de entrada para a construção dos diversos modelos matemáticos executados para predizer a composição do leite. Mediante procedimentos de regressão linear múltipla algoritmo Stepwise, procedimentos de correlação linear simples de Pearson e procedimentos de análise computacional através de redes neurais, foram gerados diferentes modelos para identificar os parâmetros endógenos de maior relevância na predição dos diferentes componentes do leite. A parametrização das principais rotas bioquímicas, do controle endócrino, do estado de funcionamento hepático, da dinâmica ruminal e da excreção de corpos cetônicos aportou informação suficiente para predizer com diferente grau de precisão o conteúdo dos diferentes sólidos no leite. O presente trabalho é apresentado na forma de quatro artigos correspondentes aos parâmetros energéticos, de controle endócrino, modelagem matemática linear múltipla e predição através de Artificial Neural Networks (ANN).

A pecuária leiteira tem uma importante participação na economia do setor primário do Sul do Brasil, porém, custos de produção elevados, impacto ambiental e qualidade dos produtos tem limitado sua viabilidade econômica. Entretanto, na busca por sistemas sustentáveis de produção depara-se com uma grande escassez de informações. Este trabalho pretendeu contribuir com a geração de conhecimentos que possam ser facilmente adotados pelos produtores da Região do Planalto Riograndense, através da condução da pesquisa em duas etapas: inicialmente foi desenvolvido um estudo baseado em procedimentos de pesquisa diagnóstica aplicados em 46 propriedades que incluiu características infra-estruturais, ambientais, sociais e técnico-econômicas. Em um segundo momento, realizou-se a comparação de dois sistemas de condução dos animais em pastagens, propostos a partir de características apontadas como relevantes no diagnóstico realizado, definindo os seguintes tratamentos: T 1: onde os animais tiveram acesso à pastagem por um período de 3 h/dia, e, T 2: onde os animais tiveram livre acesso à pastagem, ambos, mantidos em pastejo sobre sorgo forrageiro (Sorghum vulgare) e trevo branco (Trifolium repens L.) em pastejo rotativo, recebendo suplementação protéica e energética Os resultados do diagnóstico indicaram uma elevada importância das características de infraestrutura e de questões técnicas relativas à exploração leiteira, onde destacam-se variáveis relacionadas à questões de manejo e alimentação do rebanho. Os sistemas de pastejo apresentaram diferença significativa (p<0,01), na produção de leite, produzindo 16,6 e 18,9 L/dia, para T1 e T2, respectivamente. Com a obtenção desses resultados, fica evidenciado que animais de bom potencial genético, proporcionam respostas positivas de produtividade a medida que lhes é permitido maior tempo de permanência em pastagens de qualidade, ofertadas em quantidade suficiente possibilitando a expressão do potencial do animal em selecionar a sua dieta.