No presente trabalho foram avaliadas as reações de quarenta e sete plantas, englobando 39 espécies vegetais, em relação a Meloidogyne graminicola, uma espécie nematóide das galhas recentemente encontrada no Brasil. O estudo constou de dois ensaios semelhantes entre si, onde foram mantidas duas plantas de cada material testado em sacos pretos de polietileno contendo aproximadamente 7 litros de solo esterilizado, com quatro repetições. Como testemunha foram usadas plantas de capim-arroz. Após 15 dias da germinação, efetuou-se a inoculação depositando-se aproximadamente 10000 ovos/vaso no solo da rizosfera das plantas. As plantas foram mantidas a céu aberto. As reações das plantas foram avaliadas após 50-60 dias da inoculação, baseando-se nos índices de massas de ovos nos sistemas radiculares, de TAYLOR e SASSER (1978). Predominaram plantas classificadas como resistentes (72,5%) ou de comportamento intermediário, moderadamente resistentes (6,5%) ou moderadamente suscetíveis (10,5%), além da testemunha, foram: alface lisa baba; alface crespa grand rapids nacional; berinjela embu e cebola baia piriforme. Variações nas reações entre cultivares de berinjela, alface e arroz foram observadas, sugerindo que generalizações na preferência de Maloidogne graminícola por hospedeiros, a nível de família, gênero e até mesmo de espécie, devem ser evitadas / The reactions (resistance/suscetibility) of forty seven different plants, including crop and weed species, in relation to Meloidogyne graminicola, a root-knot nematode recently found in Brazil, were evaluated. For each tested material, two plants were kept into black polyethylene bags containing approximately 7 liters os fetrtilized soil, with four repplications. As a suscetible check, the barnyard grass (Echinochloa colonum) was used. Nematode inoculations were carried out 15 days after the germination of the plants, with approximately 10000 eggs/pot being applied to the soil around the roots. The plant grew under natural environmental condition, preventive control measures against insect pests being adopted when necessary. The reactions were evaluated at 50 - 60 days after the nematode inoculation, with basis on the egg-mass index determined in the root system, according to teh well-known method proposed by TAYLOR & SASSER (1978). The gall index was also used, but only as an auxiliary parameter, a mere indicative of the root celular hypertrophy in the different tested plants. A large prevalence of resistant plants (72,5%) was observed, followed by an intermediate reaction (moderately resistant = 6,5%; moderately suscetible = 10,5%. The suscetible plants (10,5%), besides the narnyard grass, were: eggplant 'Embú"; onion"Baia Piriforme"; lettuce"Babá"and Grand Rapids Nacionaol". Variation in the reactionss between cultivars of eggplant, lettuce and rice were|observedm suggesting that generalizations on host preference of Meloidogyne graminicola at the level of plant family or genus should be avoided

No presente trabalho foram avaliadas as reações de quarenta e sete plantas, englobando 39 espécies vegetais, em relação a Meloidogyne graminicola, uma espécie nematóide das galhas recentemente encontrada no Brasil. O estudo constou de dois ensaios semelhantes entre si, onde foram mantidas duas plantas de cada material testado em sacos pretos de polietileno contendo aproximadamente 7 litros de solo esterilizado, com quatro repetições. Como testemunha foram usadas plantas de capim-arroz. Após 15 dias da germinação, efetuou-se a inoculação depositando-se aproximadamente 10000 ovos/vaso no solo da rizosfera das plantas. As plantas foram mantidas a céu aberto. As reações das plantas foram avaliadas após 50-60 dias da inoculação, baseando-se nos índices de massas de ovos nos sistemas radiculares, de TAYLOR e SASSER (1978). Predominaram plantas classificadas como resistentes (72,5%) ou de comportamento intermediário, moderadamente resistentes (6,5%) ou moderadamente suscetíveis (10,5%), além da testemunha, foram: alface lisa baba; alface crespa grand rapids nacional; berinjela embu e cebola baia piriforme. Variações nas reações entre cultivares de berinjela, alface e arroz foram observadas, sugerindo que generalizações na preferência de Maloidogne graminícola por hospedeiros, a nível de família, gênero e até mesmo de espécie, devem ser evitadas / The reactions (resistance/suscetibility) of forty seven different plants, including crop and weed species, in relation to Meloidogyne graminicola, a root-knot nematode recently found in Brazil, were evaluated. For each tested material, two plants were kept into black polyethylene bags containing approximately 7 liters os fetrtilized soil, with four repplications. As a suscetible check, the barnyard grass (Echinochloa colonum) was used. Nematode inoculations were carried out 15 days after the germination of the plants, with approximately 10000 eggs/pot being applied to the soil around the roots. The plant grew under natural environmental condition, preventive control measures against insect pests being adopted when necessary. The reactions were evaluated at 50 - 60 days after the nematode inoculation, with basis on the egg-mass index determined in the root system, according to teh well-known method proposed by TAYLOR & SASSER (1978). The gall index was also used, but only as an auxiliary parameter, a mere indicative of the root celular hypertrophy in the different tested plants. A large prevalence of resistant plants (72,5%) was observed, followed by an intermediate reaction (moderately resistant = 6,5%; moderately suscetible = 10,5%. The suscetible plants (10,5%), besides the narnyard grass, were: eggplant 'Embú"; onion"Baia Piriforme"; lettuce"Babá"and Grand Rapids Nacionaol". Variation in the reactionss between cultivars of eggplant, lettuce and rice were|observedm suggesting that generalizations on host preference of Meloidogyne graminicola at the level of plant family or genus should be avoided

Ureases são tradicionalmente conhecidas por catalisar a hidrólise da ureia em amônia e dióxido de carbono. Em soja, três isoformas de urease foram descritas: 1) urease ubíqua, codificada pelo gene Eu4; 2) urease embrião específica, codificada pelo gene Eu1; 3) urease SBU-III, codificada por Eu5. O nitrogênio (N) é o nutriente mais limitante para o crescimento e desenvolvimento da planta. Portanto, mecanismos eficientes para capturar o N nas suas diversas formas, e realocá-lo, são necessários para otimizar o uso do nutriente pela planta. O produto N da atividade da urease - a amônia é incorporada em compostos orgânicos, principalmente, pela atividade da glutamina sintetase. Assim, a urease está envolvida na remobilização do N, bem como na assimilação do N primário. Um estudo anterior foi realizado por nossa equipe com o objetivo de superexpressar o gene Eu4 em plantas de soja. Inesperadamente, as plantas transgênicas exibiram cosupressão do transgene Eu4 e de todos os genes endógenos que codificam as isoformas de urease. Foi verificada também, uma diminuição da atividade ureolítica. Visando determinar o papel das ureases no desenvolvimento da soja, foram comparadas plantas transgênicas co-suprimidas, plantas mutantes e seus respectivos controles. O desenvolvimento das plantas foi avaliado 7, 14, 21 e 30 dias após a semeadura. As plantas co-suprimidas apresentaram um atraso no desenvolvimento durante o primeiro mês após a germinação. Um desenvolvimento mais lento foi observado para o duplo mutante eu1- a/eu4- e o mutante simples eu3-a (este gene codifica uma proteína acessória inativa). A absorção de N nas plantas transgênicas foi significativamente menor do que a das plantas não transgênicas. Entre os mutantes, eu3-a apresentou o menor e eu1-a o maior conteúdo de N. Um número significativamente menor de sementes foi obtido para as plantas transgênicas. Em conjunto estes resultados indicam que o aconteúdo da urease ou da atividade ureolítica desempenham um papel importante no desenvolvimento da planta. A soja (Glycine max) é afetada por vários estresses bióticos e abióticos, que limitam a distribuição geográfica das culturas e levam a reduções significativas de crescimento e produtividade. No Brasil, as doenças causadas por nematoides são um dos estresses bióticos mais prejudiciais para a soja. As principais espécies encontradas no Brasil são Meloidogyne spp. (formadores de galhas), Heterodera glycines (cisto), Pratylenchus brachyurus (lesões radiculares) e Rotylenchulus reniformis (reniforme). Nematoides formadores de galhas e de cisto (nematóides sedentários), os patógenos mais prejudiciais à soja, são muito difíceis de controlar. Neste estudo, foi identificado um peptídeo derivado da urease de soja (nomeado Soyuretox), que exerce efeito tóxico contra fitonematoides formadores de galhas (M. javanica). Soyuretox foi expresso em raízes de plantas compostas plantas transgênicas estáveis de soja. Raízes de plantas compostas e plantas transgênicas estáveis superexpressando Soyuretox exibiram uma redução significativa (50% e 37.5%, respectivamente) no número médio de nematoides e ovos, quando comparado com raízes não transformadas, 45 dias após a inoculação. Este é o primeiro relato de resistência a nematóides causada por um peptideo derivado de uma urease. Soyuretox pode representar uma ferramenta útil bem como uma nova e eficiente alternativa para o controle de pragas e doenças em culturas economicamente importantes. / Ureases are traditionally known for catalyzing the hydrolysis of urea to ammonia and carbon dioxide. In soybean, three urease isoforms have been described: 1) ubiquitous urease, encoded by the Eu4 gene; 2) embryo-specific urease, encoded by Eu1gene; 3) SBU-III urease, encoded by Eu5. Nitrogen (N) is the most limiting nutrient for plant growth and development. Therefore efficient mechanisms both to take up N in its various forms, and to reallocate it, are necessary for optimal N use efficiency. The N product of urease activity- ammonia- is incorporated into organic compounds mainly by glutamine synthase activity. Thus, urease is involved in N remobilization, as well as in primary N assimilation. A previous study was performed by our team aiming to overexpress Eu4 gene in soybean plants. Unexpectedly, the transgenic plants exhibited endogenous (for all three genes) and introduced Eu4 transgene co-suppression and decreased ureolytic activity. Here, we sought to determine urease roles in soybean development by silencing all urease isoforms. Analyses were performed using transgenic co-suppressed and mutant plants. Plant development was evaluated 7, 14, 21 and 30 days after sowing. The cosuppressed plants presented a developmental delay during the first month after germination when compared with control. A slower development was observed for the double eu1-a/eu4-a mutant and the eu3-a (this gene codify an inactive accessory protein) single mutant. The N uptake in transgenic plants was significantly lower than that captured by non-transgenic plants. Among mutants, eu3-a presented the lowest and eu1- a the highest N content. A significantly lower number of seeds was obtained for transgenic plants. Altogether, these results indicate that the urease content and/or ureolytic activity play an important role in plant development. Soybeans (Glycine max) are affected by several abiotic and biotic stresses that limit the geographical distribution of cultures and lead to significant reductions in growth and productivity. In Brazil, the diseases caused by nematodes are one of the most damaging biotic stresses for soybeans.. The main species found in Brazil are Meloidogyne spp. (root-knot), Heterodera glycines (cyst), Pratylenchus brachyurus (root lesion) and Rotylenchulus reniformis (reniform). Root-knot and cyst nematodes (sedentary nematodes), the most damaging soybean pathogens, are very difficult to control. In this study, we identified a soybean urease-derived peptide (named Soyuretox) that exerts toxic effects against the root-knot phytonematode (M. javanica). Soyuretox was expressed in soybean roots of composite plants and complete stable transgenic plants. Roots of composite plants and stable transgenic plants overexpressing Soyuretox exhibited a significant reduction (50% and 37.5%, respectively) in the average number of nematodes and eggs when compared with non-transformed roots, 45 days after inoculation. This is the first report of nematode resistance caused by a urease-derived peptide. Soyuretox may represent a useful tool as a new and efficient alternative to control pests and diseases in economically important crops.

Ureases são tradicionalmente conhecidas por catalisar a hidrólise da ureia em amônia e dióxido de carbono. Em soja, três isoformas de urease foram descritas: 1) urease ubíqua, codificada pelo gene Eu4; 2) urease embrião específica, codificada pelo gene Eu1; 3) urease SBU-III, codificada por Eu5. O nitrogênio (N) é o nutriente mais limitante para o crescimento e desenvolvimento da planta. Portanto, mecanismos eficientes para capturar o N nas suas diversas formas, e realocá-lo, são necessários para otimizar o uso do nutriente pela planta. O produto N da atividade da urease - a amônia é incorporada em compostos orgânicos, principalmente, pela atividade da glutamina sintetase. Assim, a urease está envolvida na remobilização do N, bem como na assimilação do N primário. Um estudo anterior foi realizado por nossa equipe com o objetivo de superexpressar o gene Eu4 em plantas de soja. Inesperadamente, as plantas transgênicas exibiram cosupressão do transgene Eu4 e de todos os genes endógenos que codificam as isoformas de urease. Foi verificada também, uma diminuição da atividade ureolítica. Visando determinar o papel das ureases no desenvolvimento da soja, foram comparadas plantas transgênicas co-suprimidas, plantas mutantes e seus respectivos controles. O desenvolvimento das plantas foi avaliado 7, 14, 21 e 30 dias após a semeadura. As plantas co-suprimidas apresentaram um atraso no desenvolvimento durante o primeiro mês após a germinação. Um desenvolvimento mais lento foi observado para o duplo mutante eu1- a/eu4- e o mutante simples eu3-a (este gene codifica uma proteína acessória inativa). A absorção de N nas plantas transgênicas foi significativamente menor do que a das plantas não transgênicas. Entre os mutantes, eu3-a apresentou o menor e eu1-a o maior conteúdo de N. Um número significativamente menor de sementes foi obtido para as plantas transgênicas. Em conjunto estes resultados indicam que o aconteúdo da urease ou da atividade ureolítica desempenham um papel importante no desenvolvimento da planta. A soja (Glycine max) é afetada por vários estresses bióticos e abióticos, que limitam a distribuição geográfica das culturas e levam a reduções significativas de crescimento e produtividade. No Brasil, as doenças causadas por nematoides são um dos estresses bióticos mais prejudiciais para a soja. As principais espécies encontradas no Brasil são Meloidogyne spp. (formadores de galhas), Heterodera glycines (cisto), Pratylenchus brachyurus (lesões radiculares) e Rotylenchulus reniformis (reniforme). Nematoides formadores de galhas e de cisto (nematóides sedentários), os patógenos mais prejudiciais à soja, são muito difíceis de controlar. Neste estudo, foi identificado um peptídeo derivado da urease de soja (nomeado Soyuretox), que exerce efeito tóxico contra fitonematoides formadores de galhas (M. javanica). Soyuretox foi expresso em raízes de plantas compostas plantas transgênicas estáveis de soja. Raízes de plantas compostas e plantas transgênicas estáveis superexpressando Soyuretox exibiram uma redução significativa (50% e 37.5%, respectivamente) no número médio de nematoides e ovos, quando comparado com raízes não transformadas, 45 dias após a inoculação. Este é o primeiro relato de resistência a nematóides causada por um peptideo derivado de uma urease. Soyuretox pode representar uma ferramenta útil bem como uma nova e eficiente alternativa para o controle de pragas e doenças em culturas economicamente importantes. / Ureases are traditionally known for catalyzing the hydrolysis of urea to ammonia and carbon dioxide. In soybean, three urease isoforms have been described: 1) ubiquitous urease, encoded by the Eu4 gene; 2) embryo-specific urease, encoded by Eu1gene; 3) SBU-III urease, encoded by Eu5. Nitrogen (N) is the most limiting nutrient for plant growth and development. Therefore efficient mechanisms both to take up N in its various forms, and to reallocate it, are necessary for optimal N use efficiency. The N product of urease activity- ammonia- is incorporated into organic compounds mainly by glutamine synthase activity. Thus, urease is involved in N remobilization, as well as in primary N assimilation. A previous study was performed by our team aiming to overexpress Eu4 gene in soybean plants. Unexpectedly, the transgenic plants exhibited endogenous (for all three genes) and introduced Eu4 transgene co-suppression and decreased ureolytic activity. Here, we sought to determine urease roles in soybean development by silencing all urease isoforms. Analyses were performed using transgenic co-suppressed and mutant plants. Plant development was evaluated 7, 14, 21 and 30 days after sowing. The cosuppressed plants presented a developmental delay during the first month after germination when compared with control. A slower development was observed for the double eu1-a/eu4-a mutant and the eu3-a (this gene codify an inactive accessory protein) single mutant. The N uptake in transgenic plants was significantly lower than that captured by non-transgenic plants. Among mutants, eu3-a presented the lowest and eu1- a the highest N content. A significantly lower number of seeds was obtained for transgenic plants. Altogether, these results indicate that the urease content and/or ureolytic activity play an important role in plant development. Soybeans (Glycine max) are affected by several abiotic and biotic stresses that limit the geographical distribution of cultures and lead to significant reductions in growth and productivity. In Brazil, the diseases caused by nematodes are one of the most damaging biotic stresses for soybeans.. The main species found in Brazil are Meloidogyne spp. (root-knot), Heterodera glycines (cyst), Pratylenchus brachyurus (root lesion) and Rotylenchulus reniformis (reniform). Root-knot and cyst nematodes (sedentary nematodes), the most damaging soybean pathogens, are very difficult to control. In this study, we identified a soybean urease-derived peptide (named Soyuretox) that exerts toxic effects against the root-knot phytonematode (M. javanica). Soyuretox was expressed in soybean roots of composite plants and complete stable transgenic plants. Roots of composite plants and stable transgenic plants overexpressing Soyuretox exhibited a significant reduction (50% and 37.5%, respectively) in the average number of nematodes and eggs when compared with non-transformed roots, 45 days after inoculation. This is the first report of nematode resistance caused by a urease-derived peptide. Soyuretox may represent a useful tool as a new and efficient alternative to control pests and diseases in economically important crops.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7191_Fernando Domingo Zinger.pdf: 1370182 bytes, checksum: e878329dd507e00efabd8ec2ed1d8b38 (MD5) Previous issue date: 2015-02-09 / A exploração comercial da cultura do café é uma das atividades mais importantes do setor agropecuário mundial, brasileiro e do Espírito Santo, segundo Estado brasileiro em produção de café e o primeiro em produção de café conilon. Um dos principais problemas fitossanitários da cultura do cafeeiro é a presença do nematoide Meloidogyne incognita, que pode reduzir drasticamente a produção acarretando perdas aos cafeicultores. Várias medidas têm sido testadas para o manejo desse patógeno, inclusive o controle químico, porém, com baixa eficiência. Dentre os microrganismos empregados no controle biológico de Meloidogyne spp., os fungos são os mais estudados e, juntamente com as bactérias, são os que apresentam maior potencial de uso na agricultura. O objetivo deste trabalho foi manejar o nematoide em questão, com uso dos fungos P. chlamydosporia e T. harzianum, aplicados isolados e em associação, comparando-os a um nematicida químico, em plantas cultivadas em uma área. O experimento foi conduzido em uma área naturalmente infestada pelo nematoide e cultivada com a variedade de café conilon Vitória INCAPER 8142, clone 2, com 24 meses de idade. O delineamento foi em blocos casualizados em esquema de parcela subdividida. Foram testados os seguintes tratamentos: nematicida Carbofurano 50 g/Kg com dose de 30,00 g por planta (89,34 kg/ha); nematicida biológico com Pochonia chlamydosporia Pc-10, com dosagem de 2,0 Kg/ha; nematicida biológico contendo Trichoderma harzianum ESALQ 1306, com dosagem recomendada de 1,0 L/ha, sendo os produtos biológicos aplicados isolados ou associados. Cada produto foi aplicado 1, 2 ou 3 vezes em intervalos de 60 dias (15/09/2013, 15/11/2013 e 15/01/2014) e as avaliações realizadas em três épocas após cada aplicação (15/11/2013, 15/01/2014 e 15/03/2014). As características avaliadas foram: população de nematoides nas raízes e no solo; número de grãos por roseta; peso total de grãos por roseta; peso de 100 grãos beneficiados; rendimento (maduro/beneficiado); produtividade em sacas/ha; valor de produção; ganho de produção e custo de cada método de manejo. P. chlamydosporia e T. harzianum, diminuíram a população de M. incognita. As maiores populações de M. incognita raça 1 foram encontradas em plantas que não receberam nenhum tratamento. As menores populações do patógeno ocorreram em plantas tratadas com o fungo P. chlamydosporia e o nematicida. P. chlamydosporia foi o agente biológico mais eficaz no manejo de M. incognita. Houve redução de produtividade com aumento da população do nematoide. Os métodos de manejo proporcionaram redução da população nas raízes e no solo de M. incognita raça 1, acarretando aumento da produtividade de café conilon por hectare. Palavras-chave: cafeicultura; nematoide-das-galhas; controle biológico; danos e perdas.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2017. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Capítulos , II e III. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-02-21T20:18:13Z No. of bitstreams: 1 2017_VanessaDaSilvaMattos_PARCIAL.pdf: 812542 bytes, checksum: fba40fb1b5f82d65d6e4c2d387e9818c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-03-09T21:07:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_VanessaDaSilvaMattos_PARCIAL.pdf: 812542 bytes, checksum: fba40fb1b5f82d65d6e4c2d387e9818c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-09T21:07:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_VanessaDaSilvaMattos_PARCIAL.pdf: 812542 bytes, checksum: fba40fb1b5f82d65d6e4c2d387e9818c (MD5) Previous issue date: 2018-03-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / O arroz é um dos cereais mais produzidos no mundo, e o Brasil destaca-se no mercado orizícola como nono maior produtor e oitavo exportador mundial. Recentemente, um complexo de espécies do nematoide das galhas (NG), do gênero Meloidogyne, foi detectado nos estados de Santa Catarina e Rio Grande do Sul, causando danos às plantações de arroz irrigado. Dentre as espécies destacam-se M. graminicola, M. javanica e outras três espécies com perfil de esterase atípico. A correta identificação e caracterização dessas espécies de Meloidogyne são imprescindíveis para estudos futuros visando o manejo adequado em áreas de arroz irrigado. As espécies desse gênero relatadas no arroz são de difícil identificação, especialmente pelas semelhanças morfológicas. O uso de cultivares resistentes ainda é o método de controle mais eficiente para os nematoides das galhas e, infelizmente, as fontes de resistência na espécie Oryza sativa são muito restritas. Neste estudo, foi relatado pela primeira vez no Brasil a presença da espécie M. oryzae, no estado de Santa Catarina, parasitando o arroz irrigado. Estudos morfológicos mostraram características típicas da espécie como a morfologia do estilete de machos e fêmeas e o formato e comprimento da cauda do juvenil de segundo estádio e o perfil de esterase espécie-específico (O1, Rm: 1,2), caracterizado para a espécie. Também foram conduzidos estudos citogenéticos e moleculares que ajudaram a esclarecer a posição filogenética dessa espécie de reprodução partenogenética mitótica, diferindo completamente de M. graminicola, por exemplo, uma espécie com reprodução partenogenética meiótica facultativa. Foram apresentados dados sobre a variabilidade genética das populações de Meloidogyne encontradas em arroz, através dos marcadores neutros AFLP e RAPD. Meloidogyne graminicola apresentou uma alta percentagem de polimorfismo (75,2%) e M. oryzae apresentou uma menor variabilidade (12,9%), resultados esperados, considerando os modos de reprodução diferentes para as duas espécies. Nas análises filogenéticas, todas as espécies analisadas agruparam-se com 100% de bootstrap e M. salasi, uma importante espécie do arroz na Costa Rica e Venezuela, mostrou-se geneticamente distante das demais espécies. Fragmentos de RAPD-PCR específicos foram utilizados para a construção de primers SCAR espécie-específicos para as principais espécies do arroz detectadas nas Américas: M. graminicola, M. oryzae e M. salasi. A amplificação dos primers desenvolvidos produziram fragmentos específicos de 230 pb, 130 pb e 190 pb para M. graminicola, M. oryzae e M. salasi, respectivamente. A reação de cinco espécies selvagens de Oryza a uma mistura de populações de M. graminicola foram avaliados em casa de vegetação. Diferentes níveis de resistência foram encontrados nas espécies O. alta e O. grandiglumis. A espécie silvestre O. glumaepatula mostrou-se resistente ao NG. Essa espécie pertence ao complexo de genoma AA do arroz, o mesmo da espécie cultivada O. sativa, portanto, com o potencial de ser incorporada em programas de melhoramento genético. / Rice is one of the most produced cereals, and Brazil is the ninth largest producer and the eighth exporter in the world. Recently, a complex of root-knot nematodes (RKN) (Genus: Meloidogyne) species was detected in the states of Santa Catarina and Rio Grande do Sul, causing damages to irrigated rice plantations. Among the species found, M. graminicola, M. javanica and three others unknown species were detected. The correct identification and characterization of these Meloidogyne species of rice are essential for future studies and their management. Meloidogyne spp. reported in rice are difficult to identify, especially due to the morphological similarities. The use of resistant cultivars is still the most efficient control measure for RKN nematodes, but unfortunately, the sources of resistance in Oryza sativa are still extremely restricted. In this study, M. oryzae was detected for the first time in Brazil, in the state of Santa Catarina, parasitizing irrigated rice. Morphological studies showed typical characteristics for the species. The species-specific esterase profile (O1, Rm: 1.2) was characterized for the species, and cytological and molecular studies helped to clarify the phylogenetic position of this mitotic parthenogenetic species, differing from M. graminicola, a species with facultative parthenogenetic reproduction. In adittion, the genetic variability of the populations of Meloidogyne populations found in rice was investigated with neutral markers AFLP and RAPD. Meloidogyne graminicola showed a high percentage of polymorphism (75.2%), while M. oryzae showed a lower variability (12.9%); these results were expected, considering the different modes of reproduction for both species. Phylogenetic analyzes showed that all species were grouped with 100% bootstrap, and M. salasi, an important rice nematode in Costa Rica and Venezuela, was genetically distant from the other species. Specific RAPD-PCR fragments were used for the design of species-specific SCAR primers for the main rice species detected in the American continent: M. graminicola, M. oryzae and M. salasi. PCR amplification with SCAR primers produced specific fragments of 230 bp, 130 bp and 190 bp for M. graminicola, M. oryzae and M. salasi, respectively. Finally, the reaction of five wild species of Oryza to a pool of M. graminicola populations was evaluated in greenhouse conditions. Different levels of resistance were found in the wild species O. alta and O. grandiglumis. The wild species O. glumaepatula was resistant to M. graminicola. This species belongs to the same complex of the domesticated species O. sativa (genome AA), therefore with the potential to be incorporated into breeding programs.

Ureases são tradicionalmente conhecidas por catalisar a hidrólise da ureia em amônia e dióxido de carbono. Em soja, três isoformas de urease foram descritas: 1) urease ubíqua, codificada pelo gene Eu4; 2) urease embrião específica, codificada pelo gene Eu1; 3) urease SBU-III, codificada por Eu5. O nitrogênio (N) é o nutriente mais limitante para o crescimento e desenvolvimento da planta. Portanto, mecanismos eficientes para capturar o N nas suas diversas formas, e realocá-lo, são necessários para otimizar o uso do nutriente pela planta. O produto N da atividade da urease - a amônia é incorporada em compostos orgânicos, principalmente, pela atividade da glutamina sintetase. Assim, a urease está envolvida na remobilização do N, bem como na assimilação do N primário. Um estudo anterior foi realizado por nossa equipe com o objetivo de superexpressar o gene Eu4 em plantas de soja. Inesperadamente, as plantas transgênicas exibiram cosupressão do transgene Eu4 e de todos os genes endógenos que codificam as isoformas de urease. Foi verificada também, uma diminuição da atividade ureolítica. Visando determinar o papel das ureases no desenvolvimento da soja, foram comparadas plantas transgênicas co-suprimidas, plantas mutantes e seus respectivos controles. O desenvolvimento das plantas foi avaliado 7, 14, 21 e 30 dias após a semeadura. As plantas co-suprimidas apresentaram um atraso no desenvolvimento durante o primeiro mês após a germinação. Um desenvolvimento mais lento foi observado para o duplo mutante eu1- a/eu4- e o mutante simples eu3-a (este gene codifica uma proteína acessória inativa). A absorção de N nas plantas transgênicas foi significativamente menor do que a das plantas não transgênicas. Entre os mutantes, eu3-a apresentou o menor e eu1-a o maior conteúdo de N. Um número significativamente menor de sementes foi obtido para as plantas transgênicas. Em conjunto estes resultados indicam que o aconteúdo da urease ou da atividade ureolítica desempenham um papel importante no desenvolvimento da planta. A soja (Glycine max) é afetada por vários estresses bióticos e abióticos, que limitam a distribuição geográfica das culturas e levam a reduções significativas de crescimento e produtividade. No Brasil, as doenças causadas por nematoides são um dos estresses bióticos mais prejudiciais para a soja. As principais espécies encontradas no Brasil são Meloidogyne spp. (formadores de galhas), Heterodera glycines (cisto), Pratylenchus brachyurus (lesões radiculares) e Rotylenchulus reniformis (reniforme). Nematoides formadores de galhas e de cisto (nematóides sedentários), os patógenos mais prejudiciais à soja, são muito difíceis de controlar. Neste estudo, foi identificado um peptídeo derivado da urease de soja (nomeado Soyuretox), que exerce efeito tóxico contra fitonematoides formadores de galhas (M. javanica). Soyuretox foi expresso em raízes de plantas compostas plantas transgênicas estáveis de soja. Raízes de plantas compostas e plantas transgênicas estáveis superexpressando Soyuretox exibiram uma redução significativa (50% e 37.5%, respectivamente) no número médio de nematoides e ovos, quando comparado com raízes não transformadas, 45 dias após a inoculação. Este é o primeiro relato de resistência a nematóides causada por um peptideo derivado de uma urease. Soyuretox pode representar uma ferramenta útil bem como uma nova e eficiente alternativa para o controle de pragas e doenças em culturas economicamente importantes. / Ureases are traditionally known for catalyzing the hydrolysis of urea to ammonia and carbon dioxide. In soybean, three urease isoforms have been described: 1) ubiquitous urease, encoded by the Eu4 gene; 2) embryo-specific urease, encoded by Eu1gene; 3) SBU-III urease, encoded by Eu5. Nitrogen (N) is the most limiting nutrient for plant growth and development. Therefore efficient mechanisms both to take up N in its various forms, and to reallocate it, are necessary for optimal N use efficiency. The N product of urease activity- ammonia- is incorporated into organic compounds mainly by glutamine synthase activity. Thus, urease is involved in N remobilization, as well as in primary N assimilation. A previous study was performed by our team aiming to overexpress Eu4 gene in soybean plants. Unexpectedly, the transgenic plants exhibited endogenous (for all three genes) and introduced Eu4 transgene co-suppression and decreased ureolytic activity. Here, we sought to determine urease roles in soybean development by silencing all urease isoforms. Analyses were performed using transgenic co-suppressed and mutant plants. Plant development was evaluated 7, 14, 21 and 30 days after sowing. The cosuppressed plants presented a developmental delay during the first month after germination when compared with control. A slower development was observed for the double eu1-a/eu4-a mutant and the eu3-a (this gene codify an inactive accessory protein) single mutant. The N uptake in transgenic plants was significantly lower than that captured by non-transgenic plants. Among mutants, eu3-a presented the lowest and eu1- a the highest N content. A significantly lower number of seeds was obtained for transgenic plants. Altogether, these results indicate that the urease content and/or ureolytic activity play an important role in plant development. Soybeans (Glycine max) are affected by several abiotic and biotic stresses that limit the geographical distribution of cultures and lead to significant reductions in growth and productivity. In Brazil, the diseases caused by nematodes are one of the most damaging biotic stresses for soybeans.. The main species found in Brazil are Meloidogyne spp. (root-knot), Heterodera glycines (cyst), Pratylenchus brachyurus (root lesion) and Rotylenchulus reniformis (reniform). Root-knot and cyst nematodes (sedentary nematodes), the most damaging soybean pathogens, are very difficult to control. In this study, we identified a soybean urease-derived peptide (named Soyuretox) that exerts toxic effects against the root-knot phytonematode (M. javanica). Soyuretox was expressed in soybean roots of composite plants and complete stable transgenic plants. Roots of composite plants and stable transgenic plants overexpressing Soyuretox exhibited a significant reduction (50% and 37.5%, respectively) in the average number of nematodes and eggs when compared with non-transformed roots, 45 days after inoculation. This is the first report of nematode resistance caused by a urease-derived peptide. Soyuretox may represent a useful tool as a new and efficient alternative to control pests and diseases in economically important crops.

Submitted by PATRÍCIA MEIRIELE MARINI (patriciammarini@hotmail.com) on 2018-06-29T15:59:28Z No. of bitstreams: 1 Tese final corrigida - PATRICIA MARINI.pdf: 1142550 bytes, checksum: 8e23ed997e8946466b46bae255b83ff0 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Lucia Martins Frederico null (mlucia@fca.unesp.br) on 2018-06-29T16:26:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marini_pm_dr_botfca.pdf: 1108735 bytes, checksum: 23be36414c43cb43b2759ee94836f5a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-29T16:26:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marini_pm_dr_botfca.pdf: 1108735 bytes, checksum: 23be36414c43cb43b2759ee94836f5a3 (MD5) Previous issue date: 2018-05-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Meloidogyne incognita é considerado um dos nematoides de maior importância econômica em termos mundiais. Para seu adequado manejo, uma das estratégias mais eficientes é o uso de cultivares resistentes. Portanto, estratégias para otimizar os programas de melhoramento genético são necessárias. A análise de expressão gênica tem ampliado a compreensão dos mecanismos de interação planta-nematoide e acelerado o desenvolvimento de genótipos resistentes. A cultivar de aveia branca IPR Afrodite, resistente a M. incognita, e cultivares suscetíveis foram avaliadas em relação à sua tolerância a este nematoide, além de ter sido estudado o comportamentode genes candidatos que regulam sua resistência, desafiados com densidades populacionais iniciais crescentes de M. incognita, durante o seu estabelecimento e manutenção do parasitismo. Para a avaliação da tolerância, plantas cultivadas em vasos de 3.600 cm3 foram inoculadas com 0,0625 (187,5); 0,125 (375); 0,25 (750); 0,5 (1500); 1 (3000); 2 (6000); 4 (12000); 8 (24000); 16 (48000) e 32 (96000) exemplares por cm3 de solo e avaliadas aos 67 dias após a inoculação (DAI), através da mensuração do desenvolvimento das plantas, além da multiplicação do nematoide. Os resultados mostraram que, em densidades menores, IPR Afrodite apresentou fator de reprodução próximo a 1,0, sugerindo menor expressão da resistência. Em função desses resultados, experimento semelhante foi conduzido para análise da expressão gênica dessa cultivar ao nematoide, com avaliações aos 0 (imediatamente antes da inoculação), 2 e 9 DAI. A partir de reações de RT-qPCR, verificou-se que dois genes (Lrk 14 e LOX) apresentaram regulação em resposta ao nematoide e padrões de regulação diferenciados entre as cultivares. IPR Afrodite apresentou estratégias moleculares contrastantes às observadas em URS Torena, sugerindo-se que há regulação tardia e negativa em URS Torena, enquanto que, em IPR Afrodite, Lrk14 atuou como amplificador de respostas de defesa inicial, prolongando o sinal de ameaça após a detecção inicial do patógeno. O gene que codifica LOX foi desencadeado, como resposta induzida por efetores, o que geralmente resulta em reação de hipersensibilidade, como já observado em trabalhos anteriores envolvendo tal interação. / Meloidogyne incognita is considered one of the main economic important nematodes worldwide. For its management, the use of resistant cultivars is amongst the more efficient strategy. Therefore, strategies to optimize the genetic breeding programs are necessary. The gene expression analysis has amplified the comprehension about the mechanisms involved in the plant-nematode interaction and accelerated the development of resistant genotypes. The oat cultivar IPR Afrodite, resistant to M. incognita, and cultivars suscetibles was evaluated in relation to its tolerance to this nematode and, besides, the behavior of candidate genes regulating the resistance reaction was studied, challenged with crescent initial population densities of M. incognita, during its establishment and parasitism maintenance. To tolerance evaluation, plants cropped in 3,600 cm3-pots were inoculated with 0,0625 (187,5); 0,125 (375); 0,25 (750); 0,5 (1500); 1 (3000); 2 (6000); 4 (12000); 8 (24000); 16 (48000) e 32 (96000) exemplars.cm-3 of soil and evaluated at 67 days after inoculation (DAI), through the mensuration of the plant development and nematode multiplication. Results showed that, in lower densities, IPR Afrodite showed reproduction factor values closed to 1.0, suggesting a lower resistance expression. In face of these results, a similar experiment was conducted to gene expression analysis of this cultivar to nematode, with evaluations at 0 (immediately before inoculation), 2 and 9 DAI. From RT-qPCR reactions, we could verify that two genes (Lrk and LOX) were regulated in response to nematode and that different regulatory patterns were observed between cultivars. IPR Afrodite showed molecular strategies contrasting to those observed in URS Torena, suggesting a late and negative regulation in URS Torena, while to IPR Afrodite, Lrk14 acted as an amplifier of initial defense responses, prolonging the threat signal after the initial detection of the pathogen. The gene that codifies to LOX was unleashed, as a response induced by effectors, which usually results in a hypersensitive reaction, as observed previously.

O efeito de borda em florestas é bastante estudado, porém pouco se sabe sobre as respostas das interações entre espécies a este efeito. O mesmo acontece quando se trata de distúrbios antrópicos, muitas vezes presentes após o processo de fragmentação. Apesar de não terem sido originadas por tal processo, as transições floresta-campo existentes nas florestas com Araucaria do sul do Brasil são submetidas aos distúrbios causados pelo pastejo e manejo por fogo, possuindo características semelhantes às bordas florestais mantidas no seu ponto de criação. No Capítulo 1, o efeito de borda e de distúrbios antrópicos sobre a fauna de insetos galhadores foi testado em transições floresta-campo, em termos de riqueza e composição destes organismos, comparando-se tanto bordas e interiores florestais quanto graus de distúrbio (com distúrbio e em regeneração), e adicionalmente foram feitas comparações entre manchas florestais naturais e a floresta contínua. Considerando as hipóteses propostas para os padrões de distribuição dos insetos galhadores, espera-se que existam mais espécies nas bordas de florestas comparadas ao interior, e que os distúrbios afetem estas respostas. Apesar das bordas em geral não terem apresentado maior riqueza de espécies que o interior, o padrão foi oposto ao esperado em locais com presença de distúrbio, com interiores mais ricos que bordas. A composição de espécies foi diferente entre os habitats e entre graus de distúrbio, e as porções de floresta contínua amostradas foram mais ricas que manchas florestais. Além disso, a fauna de insetos galhadores das manchas florestais foi um subconjunto da floresta contínua. Os resultados reforçam a relação dos padrões de distribuição da vegetação com os insetos galhadores, que indiretamente responderam ao efeito de borda e de distúrbios antrópicos atuando sobre suas plantas hospedeiras. No Capítulo 2 é apresentado de forma pioneira um inventário das galhas de insetos da Floresta com Araucária, referente às galhas coletadas para o estudo apresentado no primeiro capítulo. São listadas as espécies de insetos galhadores e suas plantas hospedeiras, com informações sobre a morfologia das galhas e a ocorrência nos locais amostrados. Foram encontradas 57 espécies de insetos galhadores (a maioria Diptera: Cecidomyiidae), em 43 espécies de plantas pertencentes a 18 famílias botânicas. As galhas foram predominantemente caulinares ou em gemas, glabras, isoladas, fusiformes e de coloração verde. Myrtaceae, Asteraceae e Melastomataceae foram as famílias de plantas mais representativas. Os valores brutos totais de galhas por habitat ou local mostraram-se semelhantes entre borda e interior, porém foram relativamente maiores na área sem distúrbio e na floresta contínua, esta última abarcando um grande número de galhas que ocorreram nas manchas. A existência de áreas sem distúrbio do pastejo e manejo por fogo se mostrou relevante para a conservação da fauna de insetos galhadores, que podem se estabelecer e manter suas populações. O conhecimento da diversidade destes organismos é um fator chave para o desenvolvimento de ações mais claras visando sua preservação. / The edge effect on forests is widely studied, however little is known about species interactions responses to this effect. The same is true for anthropogenic disturbances, many times present after the fragmentation process. Despite not originated by this process, forest-grassland boundaries of Araucaria forests in southern Brazil are under disturbance by cattle grazing and fire, presenting characteristics similar to forest edges maintained at their point of creation. In Chapter 1, edge and anthropogenic disturbance effects on the galling insect fauna were tested in forest-grassland boundaries, in terms of richness and composition of this organisms, comparing both forest edges and interiors as degrees of disturbance (disturbed and recovering), and additional comparisons were performed between natural forest patches and a continuous forest. Considering hypotheses proposed to distribution patterns of the galling insects, it is expected that forest edges would harbor more species compared to forest interior, and that disturbances would affect the outcome. Although edges in general did not present higher species richness than forest interiors, the pattern was opposite to the expected in disturbed sites, with forest interiors richer than edges. Species composition differed between habitats and disturbance degrees, and portions of continuous forest were richer than forest patches. Furthermore, the galling fauna of forest patches was a subset of the continuous forest. Results strengthen the relation between vegetation distribution patterns and galling insects, which indirectly responded to edge and disturbance effects acting on their host plants. In Chapter 2 it is pioneering presented an inventory of insect galls from Araucaria forest, referring to the galls collected to the study presented in first chapter. Galling insect species and their host plants are listed, with information about gall morphology and occurrence in sites sampled. Fifty seven galling insect species were found (mostly Diptera: Cecidomyiidae), in 43 host plants belonging to 18 plant families. Galls were predominantly induced on stem or buds, glabrous, isolated, fusiform and green. Myrtaceae, Asteraceae e Melastomataceae were the most representative plant families. Total raw values of galls per habitat or site were similar between forest edge and interior, but were relatively higher in the recovering area and in continuous forests, the latter embracing a great number of galls occurring on forest patches. The existence of areas without disturbance by cattle grazing and fire management was important to the conservation of galling insect fauna, which can establish and keep their populations. Knowledge of the diversity of these organisms is a key factor to the development of clearer actions seeking its preservation.

COSTA, Natalia de Jesus Ferreira. Efeito de Calotropis procera no controle de Meloidogyne incognita e aspectos biológicos do nematoide em tomateiro. 2017. 85 f. Dissertação (Mestrado em Fitotecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Deocleciano Xavier (dixavier.ufc@gmail.com) on 2017-08-30T14:01:01Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Natalia de Jesus.pdf: 1888890 bytes, checksum: 78a675706e97e1c868b7e0b8584cd5ce (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-04T21:58:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Natalia de Jesus.pdf: 1888890 bytes, checksum: 78a675706e97e1c868b7e0b8584cd5ce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-04T21:58:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Natalia de Jesus.pdf: 1888890 bytes, checksum: 78a675706e97e1c868b7e0b8584cd5ce (MD5) Previous issue date: 2017 / The root-knot nematodes, belonging to the genus Meloidogyne, constitute the one of the most important group of nematodes in agriculture. The search for methods of control of these phytopathogens, without the use of nematicides, has induced ways to manage these pathogens using vegetal extracts. The objectives of the current study were to to investigate the potential of use leaves of Calotropis procera in the control of M. incognita race 2 in tomato (Solanum lycopersicum) cv. Carolina and to study biological aspects of the phytonematoid by means of six assays: (1) to evaluate the susceptibility of C. procera to M. incognita; (2) to verify the in vitro effect of aqueous extracts of C. procera leaves at 5 and 10% on the hatching of juveniles of M. incognita; (3) to investigate the in vitro effect of 5 and 10% C. procera leaves aqueous extracts on the mortality of second stage juveniles (J2) considering the length of time (24 and 48 hours) of the J2 in the extract and the time of storage of the leaves used in the preparation of the extract (1 day and 62 days after drying the leaves); (4) to evaluate the application of the aqueous extract of leaves 5 and 10% of C. procera by irrigation in soil infested with M. incognita; (5) to investigate the effect of the incorporation of fresh leaves of C. procera in soil infested with M. (6) to evaluate the population of males in comparison to the population of females and the number of eggs of M. incognita in tomato roots at 30, 60, 90 and 120 days after inoculation. Were evaluated:weight fresh of shoot (WFS), dry weight of shoot (DWS), plant height (PH), fresh weight of root (FWR), galls numbers (GN), egg masses numbers (EMN), eggs numbers ( EN), gall index (GI), egg masses index (EMI), reproduction factor (RF), reduction in the reproduction factor (RFR), parasitism reduction (PR), number of males (NM) and number of females (NF). The experimental design was the completely randomized design, with 7 to 10 replicates, according to the assay and the results of the variables analyzed by the Tukey test at 5%.Based on GI (3.8), EMI (3.0) and RF (0.52) obtained, C. procera was considered resistant to the pathogen.The in vitro test results demonstrated that the 10% aqueous extract caused the greatest inhibition of hatching of the juveniles of M. incognita, with an average of only 13.2% of juvenile hatched was recorded. This same dilution caused the mortality of 92.2% of the J2 after stay for 24h in the extract, being considered the best combination of dilution and time. The extract prepared with leaves stored for 1 day after drying caused 92.7% killing of juveniles. However, the extract obtained from leaves stored at 62 days, the J2 mortality percentage was 11.0%.The application of the aqueous extract to the infested soil was effective in reducing the nematodes parasitism in tomato, with a PR of 80.05 and 78.14% with extracts at 5 and 10%, respectively.The incorporation of both doses (50 and 100 g) of fresh leaves of C. procera promoted the eradication of M. incognita from soil.Males were observed only 60 days after inoculation. The NF:NM relation was 2:1 at 60 days, 3:1 at 90 days and 1.4:1 at 120 days, and the highest average NM (770 males/root) was observed at 90 days after inoculation, at which time an average of 88,956 eggs/root were recorded. The use of aqueous extracts and the incorporation of C. procera leaves are promising alternatives for the control of M. incognita race 2 in infested soil and despite being considered rare, males were abundant in roots of tomato plants cv. Carolina / Os nematoides das galhas, pertencentes ao gênero Meloidogyne, constituem o grupo de fitonematoides com maior importância econômica na agricultura. A constante busca por métodos de controle desses fitopatógenos, sem o uso de nematicidas, tem provocado um aumento das pesquisas utilizando extratos vegetais. O objetivo do presente trabalho foi investigar o potencial do uso de folhas de Calotropis procera no controle de M. incognita raça 2 em tomateiro (Solanum lycopersicum) cv. Carolina e estudar aspectos biológicos do fitonematoide por meio de seis ensaios: (1) avaliar a suscetibilidade de C. procera a M. incognita; (2) verificar o efeito in vitro do extrato aquoso de folhas de C. procera a 5 e 10 % sobre a eclosão de juvenis de M. incognita; (3) investigar o efeito in vitro do extrato aquoso de folhas de C. procera a 5 e 10 % sobre a mortalidade de juvenis de segundo estádio (J2) considerando o tempo de permanência (24 e 48h) dos J2 no extrato e o tempo de armazenamento das folhas utilizadas no preparo do extrato (1 dia e 62 dias após secagem das folhas); (4) avaliar a aplicação do extrato aquoso de folhas de C. procera a 5 e 10% , por meio de rega, em solo infestado com M. incognita; (5) investigar o efeito da incorporação de folhas frescas de C. procera em solo infestado com M. incognita, nas dosagens 50 e 100 g de folhas/kg de solo e (6) avaliar a população de machos em relação à população de fêmeas e do número de ovos de M. incognita em raízes de tomateiro aos 30, 60, 90 e 120 dias após o inoculação. A avaliação dos ensaios considerou: massa fresca da parte aérea (MFPA), massa seca da parte aérea (MSPA), altura da planta (AP), massa fresca da raiz (MFR), número de galhas (NG), número de massas ovos (NMO), número de ovos (NO), índice de galhas (IG),índice de massa de ovos (IMO), fator de reprodução (FR), redução do fator de reprodução (RFR), redução do parasitismo (RP), número de machos (NM) e de fêmeas (NF). O delineamento experimental adotado foi o inteiramente casualizado, com 7 a 10 repetições, conforme o ensaio, e os resultados das variáveis analisados pelo teste de Tukey a 5%. Com base no IG (3,8), no IMO (3,0) e no FR (0,52) obtidos, a espécie C. procera foi considerada resistente ao patógeno. Os resultados dos testes in vitro demonstraram que o extrato aquoso a 10 % provocou a maior inibição da eclosão dos juvenis de M. incognita, registrando-se uma média de apenas 13,2 % de juvenis eclodidos. Essa mesma diluição provocou a mortalidade de 92,2 % dos J2 após a permanência por 24h no extrato, sendo considerada a melhor combinação de diluição e tempo. O extrato preparado com folhas armazenadas por 1 dia após secagem ocasionou 92,7 % de morte de juvenis contra 11,0 % de mortalidade de J2 com o extrato obtido de folhas com 62 dias de armazenamento. A aplicação do extrato aquoso ao solo infestado foi eficaz na redução do parasitismo do fitonematoide em tomateiro, tendo sido observado uma RP de 80,05 e 78,14% com extratos a 5 e a 10 %, respectivamente. A incorporação de ambas as doses (50 e 100 g) de folhas frescas de C. procera promoveram a erradicação do M. incognita do solo. Machos foram observados somente a partir de 60 dias após a inoculação. A relação NF:NM foi de 2:1 aos 60 dias, 3:1 aos 90 dias e 1,4:1 aos 120 dias, tendo sido a maior média de NM (770 machos/raiz) constatada aos 90 dias após a inoculação do nematoide, ocasião em que foi registrada uma média de 88.956 ovos/raiz. Concluiu-se, neste trabalho, que o uso de extratos aquosos e a incorporação de folhas de C. procera são alternativas promissoras para o controle de M. incognita raça 2 em solo infestado e que, apesar de serem considerados raros, machos foram abundantes em raízes de plantas de tomateiro cv. Carolina.