Vienas pagrindinių biomedicininės paskirties baltymų gamybos iššūkių yra pigių ir saugių ekspresijos sistemų, tinkamų glikoproteinų sintezei, paieška bei esamų sistemų tobulinimas. Vaistai, sukurti baltymų pagrindu, sudaro apie ketvirtadalį naujai patvirtinamų vaistų rinkos, o apie 60% jų sudaryti iš glikoproteinų. Dabar glikoproteinų sintezei naudojamos žinduolių kultūros turi keletą trūkumų. Jose gaunamų rekombinantinių baltymų kaina yra didelė, ribotas tūrinis našumas, ląstelės lėtai dauginasi ir auga, būna užkrėstos retrovirusais, gaunamas heterogeniškas produktas ir užima daug laiko sukurti stabilią ląstelių liniją. Itin intensyviai vykstantis tinkamų ekspresijos sistemų kūrimas kol kas nedavė norimų rezultatų. Mielių, kaip ir augalų bei vabzdžių, ekspresijos sistemos, dėl keletos priežasčių yra įvardijamos kaip vienos pagrindinių kandidatų užimti šią vietą. Visų pirma, mielės yra pripažintos kaip saugus organzimas, jų gentika, biochemija ir fiziologija yra gerai ištirta, be to, sėkmingai pradėti kurti rekombinantiniai mielių kamienai su sudėtingu žinduolių tipo N-glikozilinimu. Vis tik mielėse susintetintų glikoproteinų, tinkamų farmacijos pramonei, skaičius yra labai nedidelis, dažniausiai glikoproteinai nebūna tinkamai suvynioti ir modifikuoti, o esmininės priežastys, paaiškinančios mielių trūkumus sintetinant tokio tipo baltymus, nėra išaiškintos. Eukariotų genų inžinerijos laboratorijoje jau yra sukaupta nemaža patirties sintetinant mielėse virusinius glikoproteinus... [toliau žr. visą tekstą] / Growing market of the glycoprotein based drugs increases demands of safe, cheap and effective expression systems for production of glycoproteins. Mammalian cell cultures, which are being used for this purpose, are very expensive and ineffective. Yeasts are rising as one of the best alternatives. Well known genetics, biochemistry and physiology are only few advantages. Yeasts are also considered to be safe and easy to manipulate organism. Still, despite introducing humanized glycosylation pathways, yeast based expression systems are not able to produce glycoproteins for pharmaceutics, with a very few exceptions. So, further researches in adapting yeast for glycoproteins synthesis must be made. This work is directed for this purpose. In this work mumps, measles and influenza virus surface glycoproteins were expressed in yeast Pichia pastoris. Results show, that mumps virus hemagliutinin-neuraminidase is not synthesized in P.pastoris. Synthesis of measles virus (MeV) hemagliutinin (H) glycoprotein was not effective, with recombinant protein not possessing characteristics of native analogue. MeV-H was found in two forms: unglycosylated polypeptide precursor and glycosylated form, both aggregated and insoluble in non-ionic detergent. Increase in MeV-H expression level resulted in extensive accumulation of unglycosylated MeV-H protein precursors in the cytoplasm of yeast cells. Addition of S.cerevisiae α-factor secretion signal sequence to globular part of MeV-H made... [to full text]

Darbo tikslas: Kokybinė - kiekybinė baltymų frakcijų, praturtintų lektinais, iš Urtica dioica L. žolės, sausojo ekstrakto analizė ir antimikrobinio poveikio įvertinimas. Darbo uždaviniai: 1. Išskirti baltymų frakcijas, praturtintas lektinais, iš Urtica dioica L. šviežios ir džiovintos žolės bei sausojo ekstrakto; 2. Sausos Urtica dioica L. žolės frakcijose nustatyti baltymų dalelių dydį; 3. Įvertinti baltymų frakcijų, išskirtų iš Urtica dioica L. šviežios ir džiovintos žolės bei sausojo ekstrakto, hemagliutinacinį aktyvumą; 4. Kiekybiškai įvertinti baltymų kiekį gautose frakcijose; 5. Atlikti kiekybinę lektinų analizę pagal hemagliutinacijos titrą; 6. Įvertinti lektinais praturtintų frakcijų, išskirtų iš Urtica dioica L. džiovintos žolės bei sausojo ekstrakto, antimikrobinį aktyvumą. Darbo metodai: 1. Lektinais praturtintas baltymų frakcijas išskyrėme, taikydami tirpalų prisotinimą amonio sulfatu iki skirtingos procentinės koncentracijos; 2. Lektinai identifikuoti, pritaikius triušio eritrocitų hemagliutinacijos reakciją; 3. SDS – PAGE elektroforezės metodu nustatytas frakcijų dalelių dydis; 4. Bradfordo metodu kiekybiškai įvertinta baltymų sudėtis išskirtose frakcijose; 5. Lektinai kiekybiškai įvertinti pagal hemagliutinacinį aktyvumą; 6. Antibakterinis aktyvumas įvertintas standžiosiose Miulerio – Chintono agaro mitybos terpėse cilindriukų metodu. Tyrimo rezultatai: 1. Hemagliutinacinis aktyvumas nustatytas visose išskirtose baltymų frakcijose. 2. Didžiausiu... [toliau žr. visą tekstą] / Aim of experiment: The qualitative – quantitaive analysis and antibacterial activity evaluation of lectin enriched protein fractions from Urtica dioica L. fresh and dry herb and dry extract; Experiment tasks: 1. To extract the lectin enriched protein fractions from Urtica dioica L. fresh and dry herb and dry extract; 2. To assess the size of protein particles from Urtica dioica L. dry herb by SDS-PAGE assay; 3. To determine the hemagglutinating activity of lectin enriched fractions from Urtica dioica L. fresh and dry herb and dry extract; 4. To evaluate the protein amount in prepared fractions by Bradford assay; 5. To analyse the lectin amount by hemagglutination titre; 6. To evaluate the antibacterial activity of lectin enriched fractions from Urtica dioica L. fresh and dry herb and dry extract; Methods: 1. We used the precipitation with ammonium sulphate for the extraction of lectin enriched protein fractions; 2. Lectins were identified by hemagglutination assay; 3. We determined the size of protein particles using SDS-PAGE method. 4. We evaluated protein amount in fractions by Bradford assay; 5. Lectin quantity was evaluated by hemagglutination titer; 6. We evaluated the antibacterial activity on solid medium with Peni cylinders. Results: 1. The hemagglutinating activity was found in all protein fractions. 2. Maximum of hemagglutinating activity (2,95) was noticed in the first lectin enriched protein fraction from fresh Urtica dioica L. herb. 3. The particle size was... [to full text]