• Refine Query
  • Source
  • Publication year
  • to
  • Language
  • 6
  • 3
  • Tagged with
  • 9
  • 5
  • 3
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • About
  • The Global ETD Search service is a free service for researchers to find electronic theses and dissertations. This service is provided by the Networked Digital Library of Theses and Dissertations.
    Our metadata is collected from universities around the world. If you manage a university/consortium/country archive and want to be added, details can be found on the NDLTD website.
1

Žmogaus virusų paviršiaus glikoproteinų ekspresijos tyrimas mielėse Pichia pastoris / Expression of human virus surface glycoproteins in yeast pichia pastoris

Čiplys, Evaldas 25 November 2010 (has links)
Vienas pagrindinių biomedicininės paskirties baltymų gamybos iššūkių yra pigių ir saugių ekspresijos sistemų, tinkamų glikoproteinų sintezei, paieška bei esamų sistemų tobulinimas. Vaistai, sukurti baltymų pagrindu, sudaro apie ketvirtadalį naujai patvirtinamų vaistų rinkos, o apie 60% jų sudaryti iš glikoproteinų. Dabar glikoproteinų sintezei naudojamos žinduolių kultūros turi keletą trūkumų. Jose gaunamų rekombinantinių baltymų kaina yra didelė, ribotas tūrinis našumas, ląstelės lėtai dauginasi ir auga, būna užkrėstos retrovirusais, gaunamas heterogeniškas produktas ir užima daug laiko sukurti stabilią ląstelių liniją. Itin intensyviai vykstantis tinkamų ekspresijos sistemų kūrimas kol kas nedavė norimų rezultatų. Mielių, kaip ir augalų bei vabzdžių, ekspresijos sistemos, dėl keletos priežasčių yra įvardijamos kaip vienos pagrindinių kandidatų užimti šią vietą. Visų pirma, mielės yra pripažintos kaip saugus organzimas, jų gentika, biochemija ir fiziologija yra gerai ištirta, be to, sėkmingai pradėti kurti rekombinantiniai mielių kamienai su sudėtingu žinduolių tipo N-glikozilinimu. Vis tik mielėse susintetintų glikoproteinų, tinkamų farmacijos pramonei, skaičius yra labai nedidelis, dažniausiai glikoproteinai nebūna tinkamai suvynioti ir modifikuoti, o esmininės priežastys, paaiškinančios mielių trūkumus sintetinant tokio tipo baltymus, nėra išaiškintos. Eukariotų genų inžinerijos laboratorijoje jau yra sukaupta nemaža patirties sintetinant mielėse virusinius glikoproteinus... [toliau žr. visą tekstą] / Growing market of the glycoprotein based drugs increases demands of safe, cheap and effective expression systems for production of glycoproteins. Mammalian cell cultures, which are being used for this purpose, are very expensive and ineffective. Yeasts are rising as one of the best alternatives. Well known genetics, biochemistry and physiology are only few advantages. Yeasts are also considered to be safe and easy to manipulate organism. Still, despite introducing humanized glycosylation pathways, yeast based expression systems are not able to produce glycoproteins for pharmaceutics, with a very few exceptions. So, further researches in adapting yeast for glycoproteins synthesis must be made. This work is directed for this purpose. In this work mumps, measles and influenza virus surface glycoproteins were expressed in yeast Pichia pastoris. Results show, that mumps virus hemagliutinin-neuraminidase is not synthesized in P.pastoris. Synthesis of measles virus (MeV) hemagliutinin (H) glycoprotein was not effective, with recombinant protein not possessing characteristics of native analogue. MeV-H was found in two forms: unglycosylated polypeptide precursor and glycosylated form, both aggregated and insoluble in non-ionic detergent. Increase in MeV-H expression level resulted in extensive accumulation of unglycosylated MeV-H protein precursors in the cytoplasm of yeast cells. Addition of S.cerevisiae α-factor secretion signal sequence to globular part of MeV-H made... [to full text]
2

Cirkadiniai ritmai ir melatoninas reguliuoja nuoT-ląstelių priklausomą ir nuo T-ląstelių nepriklausomą antikūnų produkciją / Regulation of t-cell-independent and t-cell-dependent antibody production by circadian rhythm and melatonin

Černyšiov, Vitalij 25 June 2014 (has links)
Melatoninas – hormonas, kurį produkuoja kankorėžinė liauka, buvo atrastas 1959 metais ir vadinamas “tamsos hormonu“, kadangi jis gaminamas tamsiu paros metu. Maksimalus melatonino kiekis būna vidurnaktį ir iki ryto mažėja, be to šviesa silpnina jo sintezę. Melatoninas reguliuoja biologinį laikrodį, pagerina miegą, stimuliuoja imuninę sistemą bei apsaugo nervų sistemą. Literatūriniai duomenys apie melatonino įtaką imuninei sistemai daugiausia yra apie jo poveikį T ląstelėms. Melatoninas padidina čiobrialaukės dydį bei citokinų produkciją, stimuliuoja T ląsteles pagalbininkes (TH1) bei aktyvuoja NK ląsteles ir makrofagus. Tačiau, šio hormono įtaka B ląstelių funkcijoms nėra ištirta. Mūsų darbo tikslas buvo ištirti melatonino įtaką B ląstelių funkcijoms, t.y. antikūnų susidarymui. Kadangi antikūnų produkcija būna nepriklausoma ir priklausoma nuo T ląstelių, buvo nuspręsta imunizuoti BALB/c peles nuo T ląstelių nepriklausomu ir priklausomu antigenais, bei stebimas specifinių antikūnų susidarymas. Imunizuojamos pelės eksperimento metu buvo laikomos trijose skirtingose sąlygose: esant normalioms šviesos tamsos ciklo sąlygoms; esant pastoviam apšvietimui ir esant pastoviam apšvietimui, ir papildomai kasdien leidžiant melatoniną. Buvo nustatyta kad, esant melatonino sintezės sutrikimams (gyvūnams esant pastovaus apšvietimo sąlygoms) padidėja nuo T ląstelių nepriklausomų antikūnų sintezė. Padidėja visų izotipų (IgM, IgG1, IgG2b ir IgG3) antikūnų kiekis. Melatonino sintezės sutrikimai... [toliau žr. visą tekstą] / Melatonin is a hormone produced by the pineal gland that is secreted during the night in response to the darkness. It reaches a maximum level in the middle of the night, then decrease until the morning. The light inhibits the melatonin synthesis: it is the hormone of the circadian rate/rhythm. When people are exposed to frequent artificial light and they do not get enough sleep, melatonin level is suppressed. The production of melatonin decreases with age. Melatonin regulates and controls biological clock: it improves sleep, stimulates the immune system, and protects the central nervous system. This hormone is an extremely powerful antioxidant. The literature data about melatonin effect on immune system are mostly about the T cells and macrophages. Melatonin increases the thymus weight. It stimulates the function of TH1 T cells, increases cytokine production by T cells. Melatonin also activates NK cells and macrophages. However, the role of melatonin on the function of B cells is not investigated very well. We have investigated the role of melatonin on the function of B cells, e.g. production of specific antibodies. For this purpose, BALB/c mice were immunized with T independent and T dependent antigen. We looked for production of specific antibodies in animals living at three different conditions. The first group of mice was kept on the normal light/night cycle conditions. The second group of mice was exposed all the time to artificial light, which causes decreased synthesis... [to full text]
3

Paauglių, gyvenančių skirtingos sudėties šeimose, suvokiamų santykių su tėvais ir psichologinio prisitaikymo ryšys / Relations between psychological adaptation and perceived relationships with parents in adolescents from families of different structure

Daniūnaitė, Ieva 23 June 2014 (has links)
Šio darbo tikslas – išsiaiškinti paauglių, gyvenančių skirtingos sudėties šeimose, suvokiamo tėvų emocinio atsako, suvokiamos kontrolės ir elgesio, emocinių sunkumų išreikštumo lygį bei nustatyti, kaip šie matmenys yra susiję tarpusavyje. Tyrime dalyvavo 147 12-15 metų vaikai, kurie buvo suskirstyti į 3 grupes: 101 vaikas gyvena kartu su abiem savo tėvais, 31 vaikas gyvena tik su mama, 15 vaikų gyvena su mama ir nauju jos partneriu. Naudoti tyrimo metodai: Vaikų elgesio klausimyno CBCL 6/18 ir YSR 11/18 formos, šeimos sudėties anketa, klausimynai, padedantys įvertinti suvokiamą tėvų emocinį atsaką ir kontrolę. Nustatyta, kad paauglių, gyvenančių su abiem savo tėvais, suvokiamo mamos emocinio atsako lygis yra aukštesnis nei paauglių, gyvenančių tik su mama arba su mama ir jos partneriu. Paauglių, gyvenančių skirtingos sudėties šeimose, tėčio arba jį pakeičiančio asmens suvokiamo emocinio atsako lygis nesiskiria. Paauglių, gyvenančių su mama ir jos partneriu suvokiamos mamos ir tėčio (arba jį pakeičiančio asmens) kontrolės lygis yra aukštesnis nei kitų dviejų grupių vaikų. Paauglių, gyvenančių skirtingos sudėties šeimose, elgesio ir emocinių sunkumų lygis nesiskiria. Nustatytas teigiamas statistiškai reikšmingas ryšys tarp suvokiamo mamos ir tėčio emocinio atsako. Toks pats ryšys rastas tarp suvokiamos mamos ir tėčio kontrolės lygio (vaikų, gyvenančių su abiem tėvais arba su mama grupėse.) Remiantis šio tyrimo rezultatais, paauglių suvokiamo emocinio mamos atsako lygis yra... [toliau žr. visą tekstą] / The objective of this study was to examine the level of perceived parents‘ emotional response and control and the level of emotional and behavioral difficulties of adolescents and to determine the associations among all these dimensions. 147, ages 12 to 15 years, participated in this study, they were divided to three groups according the structure of the family they live in: 101 adolescent lives with his both parents, 31 adolescent lives only with his mother, 15 adolescents live with their mother and her partner. Assessment tools used: Children Behavior Checklist CBCL 6/18 and YSR 11/818 forms, questionnaire on family structure, questionnaire on perceived parents’ emotional response and control (forms for perceived mother’s and father’s behaviour). It was found, that adolescents, living with their both parents, perceive emotional mother’s response of higher level than adolescents, living with their mother or mother and her partner. Adolescents’, living in different structure families, perceived father’s or other caretaker’s emotional response is of the same level. Adolescents, living with their mother and her partner, perceive their caregivers’ control of higher level than adolescents’ from two other groups. The emotional and behavioral difficulties level of adolescents from different structure families is of the same level. The negative significant relationship was found between perceived mother’s and father’s or other caregiver’s instead of the father emotional response... [to full text]
4

Genetic characteristics of diversity of apple resistance to apple scab / Obels atsparumo rauplėgrybiui įvairovės genetinė charakteristika

Sikorskaitė-Gudžiūnienė, Sidona 08 December 2014 (has links)
The aim of the research. To identify genes involved in V. inaequalis induced resistance response in Malus sp. and to develop apple hybrids with pyramidic resistance. Specific aims: 1. To characterize the genetic diversity and resistance to apple scab in the collection of apple genetic resources; 2. To develop apple hybrids of pyramidic resistance for apple breeding; 3. To characterize apple nuclear proteome and to perform a comparative genomic analysis of V. inaequalis induced Malus response; 4. To identify apple resistance genes involved in response to apple scab and to develop functional markers. / Tyrimų tikslas: identifikuoti V. inaequalis indukuojamo Malus sp. apsauginio atsako reikšmingus genus ir sukurti piramidinio atsparumo rauplėgrybiui donorus obels selekcijai. Tyrimų uždaviniai: 1. Charakterizuoti obels genetinių išteklių įvairovę bei nustatyti jų atsparumą rauplėgrybiui; 2. Sukurti ir atrinkti superjautrumo atsaku pagrįsto piramidinio atsparumo donorus obels selekcijai; 3. Charakterizuoti naminės obels ląstelės branduolio proteomą ir atlikti V. inaequalis indukuojamo atsako lyginamosios genomikos analizę; 4. Identifikuoti obels atsparumo rauplėgrybiui reikšmingus genus ir sukurti obels atsparumo ligoms funkcinius žymeklius.
5

Comparison of general and combined anesthesia during laparoscopic colorectal surgery / Bendrosios ir kombinuotos anestezijos metodų palyginimas pacientams, kuriems atliekamos storosios žarnos laparoskopinės operacijos

Gasiūnaitė, Diana 30 September 2013 (has links)
The doctoral dissertation analyses and compares general endotracheal and combined endotracheal epidural anesthesia’s impact on organ systems and describes the systems parameters in laparoscopic colorectal surgery. Comparing two perioperative analgesia techniques used in laparoscopic colorectal surgery the hemodynamic and respiratory parameters trends; the impact of anesthesia and postoperative analgesia methods on patients’ tracheal extubation time, intestinal motility recovery rate, duration of hospitalization and inflammatory response have been determined. Laparoscopic colorectal resection, even being a minimally invasive technique for laparoscopic surgery, stimulates the body's response to stress and pro-inflammatory mediator’s secretion. Perioperative pain management may also influence the immune response. The doctoral dissertation analyses the impact of epidural analgesia method on the body stress response, investigating variations of cortisol and interleukin-6 levels. The results showed that analgesia and patient satisfaction using epidural analgesia method for perioperative pain management were better. Tracheal extubation time was significantly shorter. Recovery of intestinal motility using epidural analgesia was significant and much prior than using intravenous analgesia. The use of epidural analgesia in laparoscopic colorectal surgery caused less stress response – less cortisol levels increase. It has not showed the increase in number of complications. / Disertacijoje analizuojama ir lyginama bendrosios endotrachėjinės ir kombinuotos endotrachėjinės epiduralinės anestezijos įtaka atskiroms organų sistemoms ir tas sistemas apibūdinantiems rodikliams laparoskopinių kolorektalinių operacijų metu. Darbe nagrinėjama dviejų perioperacinių skausmo malšinimo būdų įtaka hemodinamikos ir kvėpavimo sistemos parametrų kitimo tendencijoms, pacientų trachėjos ekstubacijos laikui, žarnyno motorikos atsinaujinimo greičiui, hospitalizacijos trukmei bei organizmo uždegiminiam atsakui. Laparoskopinės storosios žarnos rezekcinės operacijos, net ir būdamos minimaliai invazinės dėl laparoskopinės operacijos technikos, sužadina stresinį organizmo atsaką bei uždegimo mediatorių išskyrimą. Perioperacinis skausmo valdymas taip pat gali daryti įtaką imuniniam atsakui. Disertacijoje nagrinėjama epiduralinės analgezijos metodo įtaka organizmo stresiniam atsakui tiriant kortizolio kiekio kitimus ir interleukino-6, kaip vieno pagrindinių uždegimą skatinančių citokinų, koncentracijos kitimą taikant epiduralinę analgezijos metodiką. Gauti rezultatai parodė, kad analgezijai pasitelkiant epiduralinį skausmo malšinimo metodą, perioperacinis pacientų skausmo valdymas ir pasitenkinimas yra geresnis, trachėjos ekstubacijos laikas patikimai trumpesnis, žarnyno peristaltikos atsitaisymas ankstyvesnis, sukeliamas stresinis organizmo atsakas mažesnis (mažesnis kortizolio koncentracijos padidėjimas) ir nenustatyta komplikacijų padaugėjimo.
6

Bendrosios ir kombinuotos anestezijos metodų palyginimas pacientams, kuriems atliekamos storosios žarnos laparoskopinės operacijos / Comparison of general and combined anesthesia during laparoscopic colorectal surgery

Gasiūnaitė, Diana 30 September 2013 (has links)
Disertacijoje analizuojama ir lyginama bendrosios endotrachėjinės ir kombinuotos endotrachėjinės epiduralinės anestezijos įtaka atskiroms organų sistemoms ir tas sistemas apibūdinantiems rodikliams laparoskopinių kolorektalinių operacijų metu. Darbe nagrinėjama dviejų perioperacinių skausmo malšinimo būdų įtaka hemodinamikos ir kvėpavimo sistemos parametrų kitimo tendencijoms, pacientų trachėjos ekstubacijos laikui, žarnyno motorikos atsinaujinimo greičiui, hospitalizacijos trukmei bei organizmo uždegiminiam atsakui. Laparoskopinės storosios žarnos rezekcinės operacijos, net ir būdamos minimaliai invazinės dėl laparoskopinės operacijos technikos, sužadina stresinį organizmo atsaką bei uždegimo mediatorių išskyrimą. Perioperacinis skausmo valdymas taip pat gali daryti įtaką imuniniam atsakui. Disertacijoje nagrinėjama epiduralinės analgezijos metodo įtaka organizmo stresiniam atsakui tiriant kortizolio kiekio kitimus ir interleukino-6, kaip vieno pagrindinių uždegimą skatinančių citokinų, koncentracijos kitimą taikant epiduralinę analgezijos metodiką. Gauti rezultatai parodė, kad analgezijai pasitelkiant epiduralinį skausmo malšinimo metodą, perioperacinis pacientų skausmo valdymas ir pasitenkinimas yra geresnis, trachėjos ekstubacijos laikas patikimai trumpesnis, žarnyno peristaltikos atsitaisymas ankstyvesnis, sukeliamas stresinis organizmo atsakas mažesnis (mažesnis kortizolio koncentracijos padidėjimas) ir nenustatyta komplikacijų padaugėjimo. / The doctoral dissertation analyses and compares general endotracheal and combined endotracheal epidural anesthesia’s impact on organ systems and describes the systems parameters in laparoscopic colorectal surgery. Comparing two perioperative analgesia techniques used in laparoscopic colorectal surgery the hemodynamic and respiratory parameters trends; the impact of anesthesia and postoperative analgesia methods on patients’ tracheal extubation time, intestinal motility recovery rate, duration of hospitalization and inflammatory response have been determined. Laparoscopic colorectal resection, even being a minimally invasive technique for laparoscopic surgery, stimulates the body's response to stress and pro-inflammatory mediator’s secretion. Perioperative pain management may also influence the immune response. The doctoral dissertation analyses the impact of epidural analgesia method on the body stress response, investigating variations of cortisol and interleukin-6 levels. The results showed that analgesia and patient satisfaction using epidural analgesia method for perioperative pain management were better. Tracheal extubation time was significantly shorter. Recovery of intestinal motility using epidural analgesia was significant and much prior than using intravenous analgesia. The use of epidural analgesia in laparoscopic colorectal surgery caused less stress response – less cortisol levels increase. It has not showed the increase in number of complications.
7

Moralės normatyvumo problema Ch. Korsgaard koncepcijoje / Problem of moral normativity in the conception of ch. korsgaard

Vasilionytė, Ieva 23 June 2014 (has links)
Moralės normatyvumo problema yra klausimas, kas pagrindžia moralės mums keliamus reikalavimus ir iš kur jie kyla. Šiame darbe teigiama, jog Christinos Korsgaard neokantiškas atsakas į normatyvumo klausimą yra sėkmingas: kantiškos prielaidos leido Korsgaard produktyviai suformuluoti normatyvumo klausimą, o šių prielaidų sintezė su psichologine praktinės tapatybės koncepcija leidžia vertinti Korsgaard normatyvumo problemos sprendimą kaip novatorišką ir bene sėkmingiausią neokantišką atsaką. Pirma, Korsgaard koncepcija sėkminga būtent dėl neokantiškų prielaidų – tai išryškėja internalizmo / eksternalizmo kontroversijos kontekste. Eksternalistai padalija pagrindimo bei motyvavimo funkcijas atitinkamai įsitikinimui ir troškimui, todėl teorinio reikalavimų pagrindimo sėkmė nelemia motyvacinės sėkmės: ryšys tarp jų atsitiktinis. Didžioji dalis internalistų (intuityvistai, ekspresyvistai, neohiumininkai) moralinių sprendinių pagrindimą laiko neįmanomu iš principo. Neokantiškos pozicijos pamatinė orientacija į pagrindimo užduotį ir proto funkcijų samprata, įgalinanti būtiną ryšį tarp diskursyvaus pagrindimo bei motyvacijos veiksmui, leidžia jiems bene vieninteliams iš kontroversijos dalyvių matyti normatyvumo klausimą kaip prasmingą ir į jį atsakyti. Antra, Korsgaard neokantiškas atsakas sėkmingas dėl to, kad susidoroja su Kanto etikos trūkumais: neredukuoja normatyvumo į formalųjį jo aspektą. Kantiškoje tradicijoje pamatinis veikėjo autonomijos normatyvumas perkeliamas tam tikriems... [toliau žr. visą tekstą] / Problem of moral normativity is a question of what justifies the claims that morality makes on us and of their source. In this thesis we claim that the answer to this problem proposed by Ch. Korsgaard is a success as a Kantian account. First, the analysis of the internalism / externalism controversy lets us to conclude, that the success of Korsgaard’s conception of normativity was granted, first of all, by its Neo-Kantian premisses. Externalists split justificatory and motivational functions between resp. belief and desire therefore, theoretical success of justifying moral claims does not by itself lead to motivational success: the relation between the two is purely contingent. The majority on the internalist side though (intuitionists, expressivists, the neo-Humeans) consider moral judgements impossible to justify in principle. Therefore, only the Neo-Kantians are able to treat the problem of normativity as a meaningful question and to give an adequate account of it. What enables them is the Neo-Kantian orientation to the task of justification and their conception of the functions of reason, which assures the necessary relation between the discursive justification and the motivation to act. Second, the Neo-Kantian reply by Korsgaard is successful as a solution to the difficulties which the Kantian ethics meets: she does not reduce normativity to its formal aspect only. In the Neo-Kantian tradition the essential autonomy of the agent is transferred to certain fundamental... [to full text]
8

Analysis of maturation of measles virus hemaglutinin in yeast S. cerevisiae and P. pastoris secretory pathway and humanization of yeast cells / Tymų viruso hemagliutinino baltymo brendimo procesų mielių S. cerevisiae ir P. pastoris ląstelių sekreciniame kelyje tyrimas ir mielių humanizavimas

Čiplys, Evaldas 27 December 2011 (has links)
The aims of the study were to determine the reasons for unsuccessful expression of measles virus hemaglutinin (MeH) in the yeast cells and to generate a stable yeast strains with integrated genes of protein secretory pathway of human cells and to examine influence of coded human proteins on MeH maturation. For the firs time, overexpression of MeH in yeast S. cerevisiae and P. pastoris was described. It was demonstrated that mechanisms of cotranslational translocation into the endoplasmic reticulum (ER) and protein maturation in the ER of yeast cells are not adapted to deal with for such complex virus glycoproteins. Proteomic analysis revealed, that overexpression of human virus surface protein precursors induces cytosolic unfolded protein response (UPR-cyto) in the yeast S. cerevisiae. A key feature of this response is the formation of extremely large aggregates involving macromolecular structures of eEF1A. Efficient mammalian like cotranslational translocation pathway was attempted to reconstitute in yeast cells by transferring human SRP, Sec61 complexes and TRAM1 protein. Human chaperones BiP, clanexin, calreticulin, ERp57 and PDI were transferred to the yeast cells to create suitable environment for maturation of MeH in the ER. Even though yeast strains, able to produce biologically active MeH protein, were not generated during this study, results show, that humanization of yeast secretory pathway, designed for producing active virus glycoproteins, is possible. / Baigiamojo darbo tikslai – nustatyti neefektyvios žmogaus virusų glikobaltymų raiškos mielėse priežastis ir sukurti mielių kamienus su integruotais žmogaus ląstelių sekrecinio kelio genais bei ištirti jų įtaką glikobaltymų sintezei ir brendimui mielėse. Darbo eigoje pirmą kartą buvo aprašytos tymų viruso hemagliutinino (TVH) sintezės galimybės mielėse Saccharomyces cerevisiae ir Pichia pastoris. Parodyta, kad mielių ko-transliacinio baltymų perkėlimo į endoplazminį tinklą (ET) ir ET baltymų sulankstymo mechanizmai nėra pritaikyti sudėtingų virusinių baltymų brendimui, todėl klasikinės mielių rūšys ir standartiniai rekombinantinių baltymų raiškos ir gryninimo protokolai nėra tinkami diagnostikai ir vakcinų kūrimui reikalingo TVH baltymo gavimui. Proteominė S. cerevisiae ląstelių, sintetinančių TVH baltymą, analizė leido nustatyti kad, TVH sintezė mielėse sukelia neseniai literatūroje aprašytą citoplazminį nesusivyniojusių baltymų atsaką (UPR-cyto). Pagrindinis šiame darbe aprašyto atsako į stresą požymis yra ypatingai didelių baltymų agregatų, kurių šerdį sudaro TVH ir mielių eEF1A baltymai, susidarymas. Žmogaus tipo ko-transliacinį baltymų pernešimą į ET mielių ląstelėse bandyta atkurti perkeliant žmogaus SRP, Sec61 kompleksų ir TRAM1 baltymus, o siekiant sukurti tinkamas TVH baltymo brendimui sąlygas, mielių ląstelių ET buvo sintetinami pagrindiniai žmogaus ląstelių ET šaperonai – BiP, kalretikulinas, kalneksinas, PDI ir ERp57. Nors šiame darbe nepavyko sukurti mielių... [toliau žr. visą tekstą]
9

Tymų viruso hemagliutinino baltymo brendimo procesų mielių S. cerevisiae ir P. pastoris ląstelių sekreciniame kelyje tyrimas ir mielių humanizavimas / Analysis of maturation of measles virus hemaglutinin in yeast S. cerevisiae and P. pastoris secretory pathway and humanization of yeast cells

Čiplys, Evaldas 27 December 2011 (has links)
Baigiamojo darbo tikslai – nustatyti neefektyvios žmogaus virusų glikobaltymų raiškos mielėse priežastis ir sukurti mielių kamienus su integruotais žmogaus ląstelių sekrecinio kelio genais bei ištirti jų įtaką glikobaltymų sintezei ir brendimui mielėse. Darbo eigoje pirmą kartą buvo aprašytos tymų viruso hemagliutinino (TVH) sintezės galimybės mielėse Saccharomyces cerevisiae ir Pichia pastoris. Parodyta, kad mielių ko-transliacinio baltymų perkėlimo į endoplazminį tinklą (ET) ir ET baltymų sulankstymo mechanizmai nėra pritaikyti sudėtingų virusinių baltymų brendimui, todėl klasikinės mielių rūšys ir standartiniai rekombinantinių baltymų raiškos ir gryninimo protokolai nėra tinkami diagnostikai ir vakcinų kūrimui reikalingo TVH baltymo gavimui. Proteominė S. cerevisiae ląstelių, sintetinančių TVH baltymą, analizė leido nustatyti kad, TVH sintezė mielėse sukelia neseniai literatūroje aprašytą citoplazminį nesusivyniojusių baltymų atsaką (UPR-cyto). Pagrindinis šiame darbe aprašyto atsako į stresą požymis yra ypatingai didelių baltymų agregatų, kurių šerdį sudaro TVH ir mielių eEF1A baltymai, susidarymas. Žmogaus tipo ko-transliacinį baltymų pernešimą į ET mielių ląstelėse bandyta atkurti perkeliant žmogaus SRP, Sec61 kompleksų ir TRAM1 baltymus, o siekiant sukurti tinkamas TVH baltymo brendimui sąlygas, mielių ląstelių ET buvo sintetinami pagrindiniai žmogaus ląstelių ET šaperonai – BiP, kalretikulinas, kalneksinas, PDI ir ERp57. Nors šiame darbe nepavyko sukurti mielių... [toliau žr. visą tekstą] / The aims of the study were to determine the reasons for unsuccessful expression of measles virus hemaglutinin (MeH) in the yeast cells and to generate a stable yeast strains with integrated genes of protein secretory pathway of human cells and to examine influence of coded human proteins on MeH maturation. For the firs time, overexpression of MeH in yeast S. cerevisiae and P. pastoris was described. It was demonstrated that mechanisms of cotranslational translocation into the endoplasmic reticulum (ER) and protein maturation in the ER of yeast cells are not adapted to deal with for such complex virus glycoproteins. Proteomic analysis revealed, that overexpression of human virus surface protein precursors induces cytosolic unfolded protein response (UPR-cyto) in the yeast S. cerevisiae. A key feature of this response is the formation of extremely large aggregates involving macromolecular structures of eEF1A. Efficient mammalian like cotranslational translocation pathway was attempted to reconstitute in yeast cells by transferring human SRP, Sec61 complexes and TRAM1 protein. Human chaperones BiP, clanexin, calreticulin, ERp57 and PDI were transferred to the yeast cells to create suitable environment for maturation of MeH in the ER. Even though yeast strains, able to produce biologically active MeH protein, were not generated during this study, results show, that humanization of yeast secretory pathway, designed for producing active virus glycoproteins, is possible.

Page generated in 0.0199 seconds